産卵アッセイ:C.エレガンスの産卵行動を定量化する方法

- 産卵を定量化する実験により、この行動に影響を与える神経学的要素と環境的手がかりが明らかになりました。産卵行動の変化は、神経筋系または生殖器系への毒性作用を示している可能性があります。

毒性をテストするには、目的の化合物の有無にかかわらず、線虫成長培地プレート上で発生同期卵を育てます。これらの実験では、加熱死菌のワームフードを使用して、細菌が化合物を代謝するのを防ぎます。この世代が若年成人になるまで成長させてください。

次に、適切な制御または実験条件下で線虫を新しいプレートに移し、24時間産卵させます。毎日、成虫を新しい皿に移し、前の皿の卵を数えます。成虫が産卵をやめるまで、野生型のワームの場合は約5日間続けます。毎日成虫1匹あたりに産まれる卵の数を計算し、実験の最後に合計を合計します。

プロトコル例では、C. elegans 産卵アッセイを使用して、化学療法薬であるエトポシドの生殖毒性をテストします。

- DMSOまたはエトポシドを含むNGMプレート上で年齢同期卵を摂氏20度で64時間インキュベートし、若年成人期までインキュベートします。5匹の成虫を化学薬品を含まない新しいNGMプレート、または同じ化学前処理を含む新しいNGMプレートに移し、24時間インキュベートします。

先ほど示したように、成虫を新しいNGMプレートに移し、毎日卵の数を数えます。さらに、這いずり落ちた、死んだ、または内部で孵化したワームを数えます。テキストプロトコルに従って計算を実行します。