幼虫ロコモーションアッセイ:ゼブラフィッシュ幼生における化合物の神経行動毒性を研究するためのハイスループット法

- まず、3つのシャーレで胚を成長させます。1つ目は、ハンクの溶液、つまりバランスの取れた塩溶液が入ったコントロールプレートです。2枚目と3枚目のプレートには、異なる濃度の潜在的に神経毒性化合物を含むハンク溶液が含まれています。

ばく露液中の神経毒性化合物は、受動的拡散によって胚の外膜を貫通し、注意、協調、筋肉活動などの神経系のプロセスを変化させます。胚が適切な年齢の幼虫に成長したら、各幼虫を48ウェルプレートの個々のウェルに移します。各動物の治療状況を追跡します。

ウェルプレートを録音プラットフォームに移し、カバーを引き下げます。幼虫を10分間順応させます。ソフトウェアを使用して、明暗の周期を交互に設定します。

ゼブラフィッシュの幼生は通常、暗闇では動きが多く、光の中では動きが少なくなります。各期間に対照群と曝露群の幼虫が移動した合計距離を記録します。化合物が神経毒性である場合、幼虫は対照動物よりも暗闇や光の中でさらに多くの動きを示します。

次のプロトコルでは、神経毒性化合物に曝露されたゼブラフィッシュの幼生に対して行動試験を行います。

- 実験を行う少なくとも2時間前に、室温を摂氏28度に設定し、48ウェルマイクロプレートの各ウェルに800マイクロリットルの露光溶液を加えます。次に、先端を改良した1ミリリットルのピペットを使用して、200マイクロリットルの露光溶液中の1匹の幼虫をマイクロプレートの各ウェルに移し、移動および経路角の実験に備えます。

すべてのパラメータを設定したら、テストルームの照明を下げ、幼虫がシステム内に10分間順応するのを待ちます。順応期間の終了時に、[Experiment and Execute] をクリックし、実験ファイルを保存するフォルダーを作成します。次に、結果の名前を入力し、[背景] と [開始] をクリックします。

テストの最後に、[テストと停止] をクリックします。その後、48ウェルマイクロプレートをライトインキュベーターに戻し、その後の実験を行います。