抗体マイクロアレイ:miRNA処理肺がん細胞のタンパク質発現を研究する技術

- まず、ビオチン溶液と標識緩衝液をタンパク質サンプルに加えます。インキュベートして、タンパク質へのビオチンの付着を促進します。ストップ試薬とボルテックスを追加します。次に、ブロッキング試薬を入れた皿に抗体マイクロアレイスライドをセットし、抗体の非特異的結合を防ぎます。スライドを二重蒸留水で洗浄して、ブロッキング溶液を取り除きます。マイクロアレイスライドをチャンバーに入れます。ビオチン化タンパク質サンプルをカップリング溶液と混合し、スライド上に添加して、標的タンパク質の対応する抗体への結合を促進します。スライドを洗浄バッファーの入った皿に移し、バッファーを二重蒸留水と交換します。次に、スライドを蛍光標識ストレプトアビジンを含む検出バッファーに入れて、ビオチン化タンパク質への結合を促進します。

暗所で皿をインキュベートして、蛍光強度を維持します。スライドを取り外し、マイクロアレイスキャナーに入れます。スキャナーは、標的タンパク質に結合したストレプトアビジンからの蛍光シグナルを探します。蛍光強度に基づいて、ソフトウェアはタンパク質の発現範囲を分析します。以下のプロトコールでは、細胞周期に関連する遺伝子発現の変化を解析するための抗体マイクロアレイを行います。

- この実験は、マイクロRNA処理により、細胞周期経路タンパク質の発現変化を全て明らかにするものです。トランスフェクションのセクションに記載されている手順に従ってタンパク質サンプルを採取し、BCAアッセイで定量します。実験の1時間前にスライドをマイナス4°Cから取り外して室温に戻して水分を取り除きます。70マイクログラムのタンパク質サンプルを採取し、テキストセクションにもステップバイステップで説明されている製造元の指示に従ってサンプルスライドを調製します。

ここで注意すべきは、超純脱イオン水でスライドを適切に洗浄することも重要なステップであり、スライドの背景を減らすのに役立ちます。さらに、この実験では、最終ステップまでサンプルスライドを乾燥させないことが非常に重要です。最後に、マイクロアレイマシンを使用してスライドをスキャンし、データを分析します。