Name: E15マウス胚の子宮内での脳室内注入とエレクトロポレーションで (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-07-19T00:00:00.000+00:00
Duration: 26 min 17 s
Description: 学ぶE15マウス胚の子宮内脳室内注入とエレクトロポレーション技術。プラスミドDNAを側脳室に注入し、神経細胞への遺伝子導入を実現する方法を解説。発生神経科学の研究に応用可能です。

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e15マウス胚の子宮内での脳室内注入とエレクトロポレーションで

In Utero Intraventricular Injection and Electroporation of E15 Mouse Embryos

- 子宮内でのin vivoマウス胎児の大脳皮質の注射とエレクトロポレーションは、側脳室の壁の内側を覆う個々の前駆細胞を操作するための強力なツールが用意されています。この手法は、今や広く過剰発現や遺伝子をノックダウンし、細胞増殖、遊走、分化への影響を観察することによってcorticogenesisに関与するプロセスを研究するために使用されます。伝統的なノックアウト戦略と比較して、子宮内エレクトロポレーションは、特定の時間ウィンドウの間に細胞の集団を操作する迅速な手段を提供します。このビデオプロトコルでは、手術のためにマウスを準備laporatomyを通して子宮角を露出、胚の側脳室内にDNAを注入し、横方向の壁を裏打ちする前駆細胞にDNAをelectroporating、および動物の手術後のケアのための実験手法を概説。このビデオに示されているように私たちの研究室では、E13 - E16マウスでの手術のためにこのプロトコルを使用して、しかし、それは最も一般的に、E15で実行されます。

E15マウス胚の子宮内での脳室内注入とエレクトロポレーションで

マウス胚の新生皮質における子宮内in-vivo注入および電極導入は、個々の前駆細胞を操作するための強力なツールとなります...

こんにちは、Krete LabのWilliam Tisです。今日は、私とチームのメンバーで、胎生15日（E 15）のマウス胚への子宮内注入の方法について説明します。こんにちは、Laura Eliasです。本日は、これから行う心室内注入およびエレクトロポレーションに使用する、マイクロインジェクション用ピペットの作成と充填方法について説明します。私はデビッド・カスタネーダです。本日は、マウス胚へのin vivo子宮内注入を補助します。発生中のマウス胚の側脳室にプラスミドDNAを注入します。これらの胚のCE皮質を標的にすることで、グリア細胞および、その後の発生過程でニューロンとなる細胞における異なる分子の発現を得ることができます。これらの子宮内注射を行う際、いくつか使用すべき重要な器具がありますので、今からご紹介します。ここでは、フリーザーと、数本の鑷子を使用します。1組は鋸歯状で、もう1組は先端に小さな突起があるものです。止血鉗子を使用します。こちらは鋏です。次に、これら2種類のステープラーを使用します。こちらが大きい方で、ラットに使用します。そして、こちらが小さい方で、マウスに使用します。サイズ7のステープルを使用し、こちらはサイズ9のステープルを使用しており、いずれもスプリングロード式です。手術を補助するためにここで使用している機器の一部として、ダブルヘッドを備えたシンプルなファイバー optic光源を使用しています。また、温水を循環させて保温するための加熱パッドを使用しています。作業台では、BTX社製のこのエレクトロポレーションシステムを使用します。胚の大きさに合わせて、いくつかの異なるサイズのパドルを使用しています。青い側が陽極側です。マウスの麻酔には、イソフルーラン気化器を使用します。これにより、母親マウスおよび胚の生存率が向上することがわかりました。また、動物の意識状態を非常に迅速かつ制御された方法で切り替えることができます。そのため、これは非常に有用であると考えられました。それでは、次に注入用ピペットのベベル加工（面取り）を行います。これは、DNAをロードするのに十分な開口部を確保しつつ、注入時に胚を損傷させないよう非常に鋭利に仕上げるために極めて重要な工程です。また、注入時に胚を傷つけてしまうと、死亡率が大幅に高まってしまいます。それは好ましくありません。したがって、この手術において、これは非常に重要な工程となります。まず、ここで回転しているベベリングストーンに水をかけます。次に、スティックを1本用意します。そして、今プルしたピペットをテープでこのスティックに固定します。そして、これらのマイクロマニピュレーターの1つを使用して、ピペットをベベル上に保持し、ここでベベルに合わせます。そこで、これを配置し、顕微鏡を用いてピペットの先端を視認します。そ

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E16ラット胚の子宮内での脳室内注入とエレクトロポレーションで

マウスの子宮内生存の手術では...

超音波ガイド下のマウスの前脳へのマイクロインジェクション子宮内で E9.5で

子宮内エレクトロポレーションでは発達中の中枢神経系（CNS）における空間的および時間的に制御された方法で迅速な遺伝子デリバリーを可能にする。ここでは、終脳、間脳や網膜など、複数の胚中枢神経系領域、中に発現構築物を提供するために使用することができる子宮内エレクトロポレーションプロトコルにおける適応性の高いを説明します。...

使用した複数のCNS準州への効率的な遺伝子送達子宮内でエレクトロポレーション

発展途上のマウス脳への遺伝子導入法は、ユニークな手術法と電極の特殊な形状を用いて記述されます。このユニークな手法は、脳の発達の研究に多くの神経科学者を支援する時間的および空間的にプラスミドDNAのトランスフェクションすることができます。...

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体性幹細胞の増殖を制御することは、彼らの研​​究と治療における使用を妨げる大きな要因となっている。ここでは、一時的にマウス脳で生成されたニューロンの数を増やすために使用することができます開発と成人期における神経幹細胞の膨張を制御するためのシステムを説明します。...

によって胚および成体神経幹細胞の拡大<em&gt;子宮内</em&gt;エレクトロポレーションまたはウイルス定位注射

このビデオは、マウス胚の小脳ニューロン細胞にプラスミドDNAを子宮内エレクトロポレーションを使用して送達する方法を示しています。この方法は、正常な脳の発達における遺伝子のin...

子宮内エレクトロポレーションに基づく遺伝子導入:マウス胚の胚性小脳細胞にプラスミドDNAを注入する技術

視床下部の機能や医療の重要性にもかかわらず、...

マウスの遺伝子操作は、視床下部を介して開発<em&gt;子宮内</em&gt;エレクトロポレーション

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Cortex-、Hippocampus-、Thalamus-、Hypothalamus-、横中隔Nucleus-と線条体固有<em&gt;子宮内</em&gt; C57BL / 6マウスでのエレクトロポレーション

子宮エレクトロポレーションの二重は、空間的および時間的に分離された細胞集団を標的にすることを可能にする。この技術は、通常の条件で蛍光タンパク質を使用して、また、目的の遺伝子を摂動する機能実験の後に、それらの細胞集団間の相互作用を視覚化するのに有用である。...

時間的および空間的に分離された細胞集団を標的とする子宮エレクトロポレーションの二重

このプロトコルでは、E7.5のマウス羊膜腔にレンチウイルスを注入し、生存や胚発生への有害な影響を最小限に抑えながら、神経板全体の均一な形質導入をもたらす方法について説明します。...

胎内ナノ注射(NEPTUNE)によるマウス神経板ターゲティング(胎内7.5日目)

学ぶE15マウス胚の子宮内脳室内注入とエレクトロポレーション技術。プラスミドDNAを側脳室に注入し、神経細胞への遺伝子導入を実現する方法を解説。発生神経科学の研究に応用可能です。

E15マウス胚の子宮内での脳室内注入とエレクトロポレーションで

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