Name: 蛍光活性化細胞選別（FACS）によって新鮮な組織からの正常および癌関連線維芽細胞の分離 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-01-14T13:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 31 s
Description: 学ぶFACSを用いてマウスおよびヒトの新鮮組織から正常線維芽細胞と癌関連線維芽細胞を高純度に分離する方法。PDGFRαを表面マーカーとして使用し、免疫細胞や上皮細胞の汚染を最小限に抑えつつ、培養による遺伝子発現変化を回避できます。

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我々は、FACSソーティングと彼らの助けのために博士Yitzchak Oschry博士と点の他鷺-アシフに感謝します。この研究は、助成合意nの下欧州連合第7次フレームワーク計画（FP7/2007-2013）から°[276890]、イスラエル癌学会（＃20110078）から、イスラエルがん研究基金（ 研究からNEへの補助金によって支えられてキャリア開発賞 ）。

1。マウスから乳腺や皮膚組織を解剖する<ol><li>マウスから所望の組織を切開する前に、次の消耗品と試薬を準備します。 備品： <ul><li>手術ツール（洗剤で洗浄した後、70％エタノールに浸漬）。 </li><li>発泡スチロールの表面には、解剖時にマウスを休ませる。 </li><li>解剖時にマウスを保持するためにピンや針。 </li><li>磁気攪拌棒（オートクレーブ）を含む消化のために蓋付きのガラスの瓶、。 </li><li> 37℃水浴℃、撹拌プレート上で休んでいる間、潜水マグネチックスターラーと水没消化jarをするのに十分な水を含む。 </li></ul>試薬： <ul><li> FACS緩衝液I：（4℃）：ダルベッコのリン酸緩衝生理食塩水、CMF（カルシウムマグネシウム無料）+0.5％BSAをバッファ</li><li>コラゲナーゼ溶液（使用直前に作られる）： 0.05グラムコラゲナーゼII 0.05グラムコラゲナーゼIV 0.01グラムのデオキシリボヌクレアーゼ 20ミリリットルFACS緩衝液Iを使用するまで氷上でコラゲナーゼ溶液を保管してください。 </li><li> PharmLyse（塩化アンモニウムの溶解試薬）。 </li><li> FACS緩衝液II：ダルベッコのリン酸緩衝生理食塩水、CMF + 1％FCSをバッファ。 </li></ul></li><li> 乳腺の解剖 （また、17を参照）。 <ul><li>二酸化炭素（CO 2）の吸入を使ってメスのマウスを安楽死させる。 </li><li>発泡スチロールの表面に、その背中の上にマウスを置き、しっかりと25ゲージ針（ 図1A）を使用して、すべての四肢をピン。 70％エタノールで寛大にマウスを吹き付けます。 </li><li>ピンセットを用いて、正中線で腹部の皮膚を引き上げて、鋭いハサミで小さな切開を加える。 </li><li>腹部または胸部の空洞に穴をあけることを回避しながら切開から始まり、動物の首に皮膚をカット。 </li><li> &quot;Y字&quot;で、その結果、足に向かって正中切開から後脚の皮膚を切り取ります。 </li><li>マウス本体から離れて皮を引き、突き止める、露光乳腺は皮膚の下側（ 図1B）に接続されている。 </li><li>マウスの背に向かって乳腺を区切るには小さな鋭いハサミで結合組織を切断するときに優しく、皮膚から乳腺を区切るには綿棒を使用しています。 </li><li>腹部腺（＃4、5）はこのプロトコルのために最適です。また、第2 回乳腺を使用していますが、これらの腺は、解剖学的に混合した組織由来の細胞で、その結果、分離するのは難しいかもしれません胸筋に近接して配置されていることを念頭に置くことができます。 </li><li>注：腫瘍組織を切開する際には、壊死領域を削除することを推奨します。 </li></ul></li><li> 皮膚組織の解剖：脱毛に対処することなく、皮膚組織を取得する最も簡単な方法は、マウスの耳を使用することです。組織の大規模な量が必要な場合は、マウスの胴体から毛を剃ると肌を分析することができます。 <ul><li> CO 2吸入を使用してマウスを安楽死させる。 </li><li>鋭いはさみを使用して、氷の上でのPBS少量（〜0.5ミリリットル）を含む消化瓶に直ちに耳と場所の両方を遮断する。 </li></ul></li></ol> 2。乳腺/肌単一細胞懸濁液の調製<ul><li>氷の上でPBSの小さなボリュームを含む消化瓶に乳腺/肌を置きます。組織はその後、PBSで洗浄血まみれX2れている場合、そして過剰のPBSを捨ててください。 </li><li>湾曲したハサミで徹底的にミンチ。 </li><li> 20mlのコラゲナーゼ溶液（注​​：コラゲナーゼ溶液のこの量は、効率的に15匹までから乳腺または腫瘍組織と耳の約5グラムを解離する）を追加します。 </li><li> 37にプレートをかき混ぜる時にすぐ℃の水浴を置き、中間速度で攪拌しながら15分間インキュベートする。 </li></ul> 注：他の組織を消化し ​​た場合、最適なインキュベーション時間は変わる場合があります。 <ul><li>反応を停止し、30 mlの冷DMEM + 10％FCSを追加します。 </li><li>組織/メディア混合througを痛める50 mlコニカルチューブの上に置かれヘクタール70μmのセルストレーナー。 </li><li> 4℃で450×gで5分間コニカルチューブを遠心</li></ul> 3。赤血球の溶解 注：それらを屠殺する前にマウスをPBSで心臓潅流した場合は、この手順は必要ありません。 <ul><li>細胞ペレットを乱すことなく、真空に取り付けられたガラスピペットを用いて、上清を吸引します。 </li><li>室温で5分間、10mlのPharmLyse液とインキュベートでRBC、再懸濁した細胞ペレットを溶解する。 </li><li> FACS緩衝液Iの約40ミリリットルを添加して溶液を中和PharmLyse </li><li> 4℃、450×gで5分間細胞でコニカルチューブをスピン</li><li>上清を吸引します。 </li></ul> 4。内因FCのブロッキング<ul><li>オプション：次のステップのために適切なボリュームを確認するには、Count細胞。 </li><li> 1〜3ミリリットルFACS緩衝液Iに細胞を再懸濁します（o応じn個の細胞数、および使用する抗体の量）。 </li><li> 1:50希釈液（10μg/ ml）で到達し、10月20日 &#39;、氷上でインキュベートしFcBlock（抗マウスCD16/CD32）を追加します。 いいえFcBlockを洗い流しする必要はありません。 </li></ul> 5。染色<ul><li>非ステンド制御と単一色コントロール（使用する蛍光抗体の数に応じて）として使用するエッペンドルフチュー​​ブに100μlのアリコートを取り出します。 </li><li>ラベルの線維芽細胞に：1:50（10μg/ ml）を希釈に（フルオロフォアに直接結合）抗PDGFRα追加します。 </li><li>他の細胞集団（ 例えば、免疫細胞、マクロファージ、内皮細胞など）を標識するために：1:50希釈し、表面マーカーに適切な蛍光標識抗体を加える。 </li></ul> 注：PDGFRαは、線維芽細胞のための堅牢なマーカーであるが、それは任意の二重陽性を排除するために免疫細胞や上皮細胞の抗体を含むことが推奨され集団およびこうして孤立した線維芽細胞の純度を高める。 <ul><li>単色コントロールエッペンドルフチュー​​ブのそれぞれに各抗体の2μlを添加する。 </li><li>暗闇の中で氷上で1時間抗体で細胞をインキュベートします。 </li><li>洗浄するには、次のようにFACS緩衝液Iでチューブを記入し、4℃で450×gで5分間スピン</li><li>約2×10 6細胞/ ml、またはいずれかの利用可能なFACS選別機で選別するための最も適切な濃度の濃度になるように私をバッファリングし、FACSで上清を、再懸濁した細胞を吸引します。 </li></ul>オプション：細胞をソーティングの持続時間のために、FACS緩衝液IIに再懸濁させてもよい。これは、細胞の生存率を向上させることができる。しかしながら、血清中の因子への曝露は、テストされ、考慮されるべき効果の遺伝子発現を有することができる。 <ul><li>細胞塊を防止するためのチューブにフィルター細胞：フィルタートップとFACSチューブに標識された細胞を転送します。 </li><li>死細胞を除外するには、7AAD（0.5μg/ ml）を追加したり、プロップサンプルにidiumヨウ化物（PI）（非ステンドコントロールを除く）。 </li></ul>注：セルを無駄にしないように、あなたは、FACSで録音した後、未染色試料に7AAD/PIを追加し、7AAD専用コントロールとして再び使用することができます。 <ul><li>分析しながら、サンプルを氷上で保管してください。 </li></ul> 6。 FACSによる細胞の分離 （注：プロトコルのこの部分は、以前のFACSソーターを動作させるの知識、 例えば BD FACS AriaII、または熟練した技術者の支援が必要です）。 <ul><li> FACSソーターソフトウェア（BD FACSDiva）を使用して、前方散乱（FSC）、側方散乱光（SSC）、7AAD、FITC、PEおよびラベル細胞（ 図2）に使用される任意の他の蛍光色素分子を分析するために、適切な解析プロットを準備します。 </li><li>セルソーターに各サンプルをロードする前に、渦は簡単に細胞を再懸濁する。 </li><li> CELからゲートに、全細胞集団のためのゲーティングを設定するために、無染​​色試料を分析することから始めリットルの破片、および自家蛍光やバックグラウンド染色を決定する。 </li><li>全細胞集団からの生細胞の集団を決定し、ゲートに染色されていないサンプル+ 7AADを分析します。 </li><li>このような補償などのパラメータを決定して、キャリブレーションする各単一カラーコントロールを分析します。 </li><li>並べ替えのためにゲートの位置を定義するために染色されたサンプルを分析します。 </li><li>いったん所望の細胞集団のパラメータとゲートが設定されている、エッペンドルフチュー​​ブまたは培養培地またはRNA溶解緩衝液（例えば、RLTバッファーまたはトリゾールなど）を含む15mlのコニカルチューブにラベルされた細胞集団を選別開始。 </li></ul>注：多数のセルをソートする場合、それは細胞が溶解緩衝液を希釈し、収量を減少させるでしょうに伴うシース液の大きなボリュームとしては、RNA溶解用緩衝液に直接ソートすることは推奨されません。 <ul><li>デ、新鮮な培地またはRNA溶解用緩衝液にソートが終了した直後に、転送ダウン細胞をスピンあなたの実験の目的で保留中。 </li><li>文化単離された細胞への順序でソートする場合は、無菌のソートを実行します。細胞のよりよい回復のために、代わりにFACS緩衝液IIのフェノールレッド不含DMEM +5％FCSを使用し、20％FCSを含む培地に細胞を回収します。 </li><li>培養は、線維芽細胞をソートしたときは、それらの遺伝子発現の変化につながる線維芽細胞の活性化では、この結果として、プラスチックの上にコラーゲンコートしたプレート上alwaysplate、決して直接。 </li></ul>

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特別な利害関係は宣言されません。

組織培養で行われた実験は、有益であるとin vivoで検証することができる機能的な原則を提案することができますが、それは文化11,12中の細胞の遺伝子発現に大きな変化が起こることが知られている。線維芽細胞における遺伝子発現プロファイルの作成時手順組織培養を避けるために、私たちは新鮮なマウスやヒト組織から通常の分離、ならびに癌関連線維芽細胞を可能にするプロトコルを開発しました。このプロトコルは正常マウスとヒトから9時から皮膚、膵臓、乳房組織に適用した。 FACSソーティングにより線維芽細胞の分離は、表面マーカー、ラベルの線維芽細胞を必要とします。我々は、PDGFRαは、線維芽細胞9の高度に濃縮された集団の単離を可能にする堅牢な表面マーカーであることを確立した。また、PDGFRαは、このように公平な分離とプロファイリング組織の線維芽細胞ではなくfocusiを許し、正常組織の線維芽細胞の両方でとCAFSに発現しています特定の亜集団でNG。 線維芽細胞は、マーカー分子の発現に関してだけでなく、その起源とシグ...

<table border="1"&gt;<tbody&gt;<tr&gt;<td<strong試薬の&gt;名前</strong</td&gt;<td<strong&gt;会社概要</strong</td&gt;<td<strong&gt;カタログ番号</strong</td&gt;<td<strong&gt;コメント（オプション）</strong</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; DMEM</td&gt;<td&gt;ギブコ</td&gt;<td&gt; 41965</td&gt;<td</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; PBS</td&gt;<td&gt;生物産業</td&gt;<td&gt; 02-023-1A</td&gt;<td</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt;コラゲナーゼII</td&gt;<td&gt;ワージントン</td&gt;<td&gt; LS4176</td&gt;<td</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt;コラゲナーゼIV</td&gt;<td&gt;ワージントン</td&gt;<td&gt; LS4188</td&gt;<td</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt;デオキシリボヌクレアーゼ</td&gt;<td&gt;ワージントン</td&gt;<td&gt; LS2007</td&gt;<td</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; PharmLyse</td&gt;<td&gt; BD</td&gt;<td&gt; 555899</td&gt;<td</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt;セルストレーナー70μmの</td&gt;<td&gt; SPL</td&gt;<td&gt; 93070</td&gt;<td</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt;精製された抗マウスCD16/CD32</td&gt;<td&gt; BDファーミンジェン</td&gt;<td&gt; 553142</td&gt;<td</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt;を介してプローブ（7AAD）</td&gt;<td&gt;電子バイオサイエンス</td&gt;<td&gt; 00-6993-50</td&gt;<td</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt;アンチマウスCD140a-PE（PDGFRA）</td&gt;<td&gt;電子バイオサイエンス</td&gt;<td&gt; 12-1401-81</td&gt;<td</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt;アンチマウスF4/80- FITC</td&gt;<td&gt; Cederlane</td&gt;<td&gt; CL8940F</td&gt;<td</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; DMEM W / Oフェノールレッド</td&gt;<td&gt;ギブコ</td&gt;<td&gt; 31053</td&gt;<td</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; I型コラーゲン</td&gt;<td&gt; BD Biosciences社</td&gt;<td&gt; 354236</td&gt;<td</td&gt;</tr&gt;</tbody&gt;</table

蛍光活性化細胞選別（facs）によって新鮮な組織からの正常および癌関連線維芽細胞の分離

Isolation of Normal and Cancer-associated Fibroblasts from Fresh Tissues by Fluorescence Activated Cell Sorting (FACS)

癌関連線維芽細胞（CAFS）は、特定の乳癌では、多くの癌の腫瘍間質内で最も顕著な細胞型であり、その卓越した存在は、しばしば予後不良の1,2に関連付けられています。 CAFSは、間質の線維芽細胞の活性化亜集団であり、それらの多くは筋線維芽細胞マーカーのα-SMA 3を発現している 。 CAFSは、地元組織の線維芽細胞からだけでなく、骨髄由来細胞から由来する腫瘍の開発に採用され、腫瘍微小環境4の影響下にCAFの表現型を採用しています。 CAFSは、腫瘍細胞増殖、血管新生、および浸潤5-8を促進し、そのシグナル伝達を介して腫瘍の開始、成長と進行を促進することが示された。我々は、CAFSは早く前腫瘍段階9時から、腫瘍促進炎症を介在することによって腫瘍の成長を高めることが実証された。腫瘍の成長を促進する上で重要な役割をCAFSプレイの増加する証拠にもかかわらず、勉強CAFSは、CAF-特異的なマーカーと腫瘍微小環境10に共存する多くのサブタイプを持つこれらの細胞の広大な異質性の欠如のために継続的な課題となっている。また、in vitroで線維芽細胞を研究し、それらの遺伝子発現プロファイルはしばしば組織培養11,12で変更されているという事実によって妨げられる。この問題に対処するために、新鮮なマウスおよびヒト組織からの線維芽細胞の公平な遺伝子発現プロファイリングを可能にするために、我々は、蛍光活性化細胞ソーティング（FACS）13,14は、前のプロトコルに基づいた方法を開発した。我々のアプローチは新鮮なマウスおよびヒト組織から線維芽細胞を単離するための表面マーカーとしてPDGFRαを利用に依存しています。 PDGFRαは豊富正常線維芽細胞およびCAFS 9,15両方で表される。このメソッドは、正常線維芽細胞およびCAFSの純粋な集団の単離を可能に含むが、α-SMA +活性化筋線維芽細胞に限定されません。隔離された線維芽細胞は、その後することができます特性評価および腫瘍形成時にCAFSで発生し遺伝子発現の進化の比較のために使用される。実際、我々と他の人は16を細胞選別によって単離された線維芽細胞の発現プロファイリングを報告した。このプロトコルは正常皮膚、乳腺、膵臓、肺組織からの線維芽細胞の高度に濃縮された集団を分離し、プロファイリングを行った。また、我々の手法は、機能の実験を行うため、しばしば文化CAFSしようと、大きな障害となっている腫瘍細胞による汚染を避けるために、選別された細胞を培養することができます。

組織の線維芽細胞の高度に濃縮された集団の分離における線維芽細胞の結果のためのマーカーとしてPDGFRαを使用。ポスト·ソート解析（ 図2A）によって定量化と並べ替えの後に純度のレベルは、99％であった。細胞特異的な制御遺伝子の相対的発現（ 図2B）によって、非線維芽細胞を汚染の割合を推定することは、一般的に0.1から0.6パーセントの汚染を示しています。純度のこのレベルでは、孤立した線維芽細胞の9の高品質のトランスクリプトームプロファイリングを可能にします。 乳腺では、組織における線維芽細胞の割合は、正常乳腺組織に5から20パーセント、およびMMTV-PyMT腫瘍の1〜5％の間で変化します。腫瘍組織における線維芽細胞の相対的な割合は上皮区画の大規模な拡大に起因する線維芽細胞の総数は増加したものの、前腫瘍組織の場合よりも低くなります。腫瘍組織から単離された線維芽細胞の減少％もの結果である技術的な難しさを加え、非常に壊死組織から細胞選別の効率を低下させた。 <p class="jove_c...

癌関連線維芽細胞（CAFS）は増殖、血管新生、炎症を促進し、そのシグナル伝達を介して腫瘍の開始、成長と進行を容易にします。ここでは、表面マーカーとしてPDGFRαを使用して、細胞選別により新鮮なマウスおよびヒト組織由来正常線維芽細胞とCAFSの純粋な集団を単離するための方法を説明します。

蛍光活性化細胞選別（FACS）によって新鮮な組織からの正常および癌関連線維芽細胞の分離

がん関連線維芽細胞（CAF）は、多くの癌、特に乳癌の腫瘍ストロマにおいて最も顕著な細胞型であり、その...

この手順の目的は、新鮮な組織から正常および癌関連線維芽細胞を単離することです。まず、乳腺の解剖を行います。次に、乳腺の単細胞懸濁液を調製し、線維芽細胞特異的抗体および他の細胞集団に特異的な抗体を用いて細胞を回収します。最終ステップは、蛍光活性化細胞分取（FACS）を行うことです。最終的に、分取された細胞集団で発現している特定のマーカーのQ-R-T-P-C-R発現プロファイリングを用いて、分取細胞集団の純度を評価します。線維芽細胞分離の既存手法に対する本手法の主な利点は、免疫細胞や上皮細胞による混入を最小限に抑えつつ、組織線維芽細胞の大部分を分離できることであり、同時に、線維芽細胞の遺伝子発現プロファイルを変化させる可能性のある組織培養ステップを回避できる点にあります。この技術の意義は、すべての乳がん治療に及びます。分子標的を理解し特定することは、乳がんの進行を抑制し、患者の生存期間を延ばし、最終的には個別化された治療オプションの改善と最適化に寄与する、新しい複合的なアプローチを提供する可能性があるためです。ここでは、ラボマネージャーのDr. Lenaが単独で手順を実演します。この手順を開始するには、安楽死させた雌マウスをスチロールフォームの表面に仰向けに置き、25ゲージの針を使用して四肢をしっかりと固定します。ピンセットでマウスを固定し、70% ethanolを十分にスプレーします。腹部正中線の皮膚を引き上げ、鋭い鋏で切開を開始し、小さな切開口を作ります。腹腔および胸腔を穿刺しないように注意しながら、動物の頸部まで皮膚を切開します。後肢の皮膚を、正中線の切開線から脚に向かって切り、Y字型にします。次に、皮膚をマウスの体から剥がしてピンで固定し、皮膚の裏側に付着している乳腺を露出させます。この手順で最も困難な点の一つは、筋肉組織を一緒に採取しないようにすることです。この問題を避けるため、筋肉組織に近接している第2乳腺は採取せず、第4および第5乳腺のみを採取します。綿棒を用いて乳腺を皮膚から慎重に剥離させ、同時に小さな鋭いハサミで結合組織を切断して、乳腺をマウスの脊椎方向へと分離させます。壊死している領域が見つかった場合は、それらを除去してください。摘出した乳腺は、氷上のPBSに浸します。除毛の手間を省いて皮膚組織を採取する最も簡単な方法は、マウスの耳を使用することです。安楽死させたマウスから、鋭利な鋏を用いて両耳を切り取ります。切り取った耳は、直ちに氷上の少量のPBSを入れた消化ジャーに入れてください。乳腺単一細胞懸濁液を調製するには、氷上の少量のPBSを入れた消化ジャーの中で、曲剪刀を用いて乳腺を十分に細切し、細切した組織に20 millilitersのコラゲナーゼ溶液を加えます。この量のコラゲナーゼ溶液で、最大15匹のマウスから採取した約5 gramsの乳

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JoVE Journal

Biology

生物学

このプロトコルの目的は、蛍光活性化セルソーティング（FACS）を用いて、ヒトのリンパ奇形嚢胞様血管および包皮を裏打ちするリンパ管内皮細胞を単離することです。その後の細胞培養およびこれらの細胞の拡大は、遺伝的プロテオミクス、機能および細胞分化の研究のための実験的な洗練の新しいレベルを可能にします。...

マルチパラメータ蛍光活性化細胞選別によるヒトリンパ内皮細胞の単離

線維芽細胞の振る舞いは、さまざまな臨床実体の根底にありますが、それらは主にその固有の不均一性のために、特徴付けられていないままです。従来の線維芽細胞研究は、in vivoでの線維芽細胞の挙動をマスキングするin...

FACSによるマウス皮膚線維芽細胞の分離

ここでは、凍結胃、小腸、および結腸組織産生細胞から初代線維芽細胞/筋線維芽細胞(MF)培養を分離し、確立するためのプロトコルが提示されます。これは、MF表現型を持つ細胞です。これらの細胞はCD90、α-SMA、ビメンチンを発現します。MFは、酵素活性やサイトカイン産生など、さまざまな機能アッセイに使用できます。...

人間の冷凍消化管標本からCD 90 +線維芽細胞/筋線維芽細胞の単離

この原稿は、ヒトの皮膚から乳頭線維芽細胞および網状繊維を単離するための FACS ベースのプロトコルを記載している。それは、explant...

蛍光活性化細胞選別によるヒトの皮膚からの乳頭状および網状線維芽細胞の単離

我々は、初心者(例えば、学生)が実行可能な、簡単で迅速かつ信頼性の高い方法で原発性成人線維芽細胞を分離するためのプロトコルを提示する。この手順は、酵素組織の消化と機械的撹拌を超音波と組み合わせて、一次線維芽細胞を得ます。プロトコルは、特定の実験要件(例えば、ヒト組織)に容易に適合させることができる。...

超音波増強原発性成人線維芽細胞分離

線維芽細胞の純粋な集団を得ることは、創傷修復および線維化におけるその役割を研究するために重要である。ここでは、線維芽細胞と筋線維芽細胞を、傷つけていないマウスの心臓から分離し、その後、免疫蛍光、RTPCR、蛍光支援細胞選別による純度と機能性の特徴付け、およびコラーゲンゲル収縮。...

成人心臓線維芽細胞と筋線維芽細胞の分離と特徴付け

本論文は、三重陰性乳癌の同種マウスモデルからの原発性癌関連線維芽細胞の単離と培養と、腫瘍微小環境を標的とするように設計された新規ナノ粒子の前臨床試験への応用を目的とする。...

標的ナノ粒子の研究のための乳癌の同質性マウスモデルからの原発癌関連線維芽細胞の分離

線維脂肪原性前駆細胞(FAP)および筋幹細胞(MuSC)の正確な同定は、生理学的および病理学的状態におけるそれらの生物学的機能を研究するために重要です。このプロトコルは、成体マウスの筋肉からのFAPおよびMuSCの分離、精製、および培養のためのガイドラインを提供します。...

FACSによる無動および損傷マウス骨格筋からの線維脂肪原性前駆細胞および筋幹細胞の単離および培養

多細胞3D腫瘍スフェロイドを肺腺癌細胞、線維芽細胞、および単球を用いて調製し、続いてこれらのスフェロイドから癌関連線維芽細胞(CAF)を単離した。単離されたCAFを正常な線維芽細胞と比較し、ミトコンドリアの膜貫通電位、活性酸素種、および酵素活性を研究することにより、ミトコンドリアの健康状態を評価しました。...

3D多細胞肺腫瘍スフェロイドから分離された癌関連線維芽細胞におけるミトコンドリアの健康評価

このプロトコルは、根治的前立腺切除術から線維芽細胞を単離、増殖、および不死化するための包括的な手順を提供します。さらに、線維芽細胞と腫瘍細胞のクロストークの機能的効果を評価するために開発されたアッセイについても説明しており、条件付け培地による処理と共培養の両方を利用しています。...

前立腺癌関連線維芽細胞の単離、培養、および特性評価

学ぶFACSを用いてマウスおよびヒトの新鮮組織から正常線維芽細胞と癌関連線維芽細胞を高純度に分離する方法。PDGFRαを表面マーカーとして使用し、免疫細胞や上皮細胞の汚染を最小限に抑えつつ、培養による遺伝子発現変化を回避できます。

蛍光活性化細胞選別（FACS）によって新鮮な組織からの正常および癌関連線維芽細胞の分離

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