Name: エアロゾル化リポ多糖を使用して生成肺好中球増加のための方法 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-12-15T13:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 33 s
Description: 学ぼう、エアロゾル化LPSを用いてマウスの気道好中球増加を誘導する方法。気管支肺胞洗浄液の細胞計数と免疫組織化学解析により、肺炎症の評価と治療介入研究への応用が可能です。

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私たちは、カースティン·ティム（アストラゼネカ、ルンド、スウェーデン）、ベニータダールバーグ博士アンダースエクランド（カロリンスカ研究所、ストックホルム、スウェーデン）だけでなく、熟練した援助のためのドクターマーチンシュテンプフリ（マクマスター大学、ハミルトン、ON、Canada）を感謝したいと思いますと専門家の助言。

動物研究は、北ストックホルム動物福祉倫理委員会によって承認された。実験手順は、スウェーデンの法律に準拠して行った。 1. LPSエアロゾルの生成<ol><li> P.精製を0.5g溶解穏やかに撹拌しながら50ミリリットル滅菌生理食塩水中の緑膿菌 LPS及び溶解を確認します。 1mg / mlの最終濃度に9 mlの滅菌生理食塩水にLPSを溶解した1 mlで希釈する。 -20℃でアルミ箔とストアとの光から保護します。 </li><li>室温で暗所に可溶化されたLPSを解凍し、使用直前によく混ぜる。 </li><li>換気されたレベルIIバイオハザードフード中で、噴霧器に赤の入口を挿入し、メーカーが提供するチューブ（ 図1の実験装置を提示するレビュースキーム）を介して加圧された室内空気に噴霧器を接続してください。 注意：適切な個人保護具を、半分の顔ピース再利用可能なrespirat含むまたは粒子フィルタ、ゴーグル、手袋、防護服との暴露の過程で使用されるべきである。 </li></ol><img alt="図1" src="/files/ftp_upload/51470/51470fig1highres.jpg" /> 図1：エアロゾルを生成するために用いた実験装置の概略プレゼンテーション噴霧器の入口は、空気供給源に接続されている。噴霧器の出口は、第15.9ミリメートル管及びエアフィルタ、及び空気供給を介して流量計に接続された2キロバールの圧力で5.0 L /メートルに調整する。出口は、圧力上昇を防止するために取り外し可能な蓋と、5mmの穴を取り付けプレキシガラス箱に接続次ある。 <ol start="4"><li>エアフィルタを介して質量流量計に噴霧器の出口に接続します。電源に質量流量計を接続します。 </li><li> 1.0-2.0バーで残りの圧力で、5 L / minに空気の供給を調整します。 </li><li>質量流量計を取り外し、空気供給を切断します。 </li><li> 150×163 X 205ミリメートル、取り外し可能な蓋を装備：分岐すると寸法を持つ2つのプレキシガラスのボックスに接続する15.9ミリメートルのチューブに噴霧器の出口に接続します。各ボックスは、圧力上昇を防止するために、入口に対向する側に5mmの穴を有するべきである。 </li><li>各プレキシグラスボックス内の5匹のマウスにまで入れて、蓋を閉じます。 </li><li>噴霧器を開き、滅菌生理食塩水または単独の車両に溶解し、少なくとも4ミリリットルのLPSでの挿入を埋める（滅菌生理食塩水;ボリュームは、8ミリリットルを超えないようにしてください）​​。空気供給への入口を再接続します。 </li><li>エアゾールを10分間閉鎖さプレキシグラスの箱に流入することを許可する。継続的に動物を監視します。空気供給が噴霧器の入口にしっかりと保護されたままにしてください。 </li><li>空気供給を外します。蓋を閉じた状態で、動物は2分間プレキシグラスの箱に残ってみましょう。 </li><li>蓋を開き、エアロゾルが分散することを可能にし、tに動物を返す彼のケージ。動物は湿っ表示された場合は、低体温症を防ぐために、弱火に設定された加熱パッドの上にケージを置く。 </li><li>最初の30分間連続して動物を監視し、その後、最初の6時間ごとに2時間。動物は、噴霧手順の間および後に正常呼吸パターンおよび活性を示すべきである。 </li></ol> 2.気管支肺胞洗浄（BAL） <ol><li>実験の終了時点で、深くあなたの機関の獣医スタッフによって推奨されているように達成するためにイソフルランで動物を麻酔。大手術を行うために、麻酔の十分な深さを確保するために引っ込め反射を確認するために後肢をピンチ。 70％エタノールを用いた動物の毛皮ダウンスプレー。 </li><li>はさみを使用して腹部を開き、動物を放血する大動脈を切断。血液を吸収するために腹部の上に組織片を置きます。 </li><li>安楽死をFollwingにハサミのシングル前後カットを使用胸部を公開。胸骨の前方先端で胸郭を持ち上げ、すべての肺葉に切断することなく、ほとんどの腹側時点でダイヤフラムを穿刺するはさみを使用しています。前後方向（顎下の会合）で2カットを行うことで胸郭を開きます。 </li><li>静かに鉗子を用いて胸郭を引き離す、および喉頭下に気管をカット。 </li><li>鉗子で気管を持ち上げ、胸腔へのローブを接続する靭帯を切断し、そして優しく脂肪と心臓組織によって引っ張って肺を取り除く。 </li><li>気管に及び絹糸の文字列を使用してチューブを固定し;：ポリエチレンチューブ（0.965ミリメートル、外径0.58ミリメートル内径）を挿入します。 </li><li>絹糸で（右肺の4のローブ）マルチローブをオフに接続します。 </li><li>ポリエチレンチューブに23ゲージの針を挿入し、ゆっくりと1ミリリットルの注射器を持つ単一の葉に氷冷滅菌PBS250μlのを注入する。 </li><li>慎重に肺をタップする30回と注射器を介して液体を集める。 200μlのPBS（約300μlのPBSを450μlの総注入量から単一の葉から回収する必要があります）を使用して手順を繰り返します。 </li><li>氷上で気管支肺胞洗浄液（BALF）を保持、またはすぐにBAL細胞を列挙。細胞11を染色するトルコ溶液を使用して、heamocytometerで細胞を数える。染色溶液の希釈係数とheamocytometerカウントフィールド内の体積で細胞数を乗じることによって総細胞数を計算する。 </li><li>他の場所で11説明したように細胞遠心細胞から差動細胞数を準備します。 </li></ol>組織学的評価のための肺組織の3ホルマリン固定<ol><li>マルチローブを削除し、スナップ凍結をドライアイス上。 -80℃で保管してください。 </li><li>金属支持スタンドに取り除かジャーで60ミリリットル注射器を取り付けます。 10％ホルマリンで注射器を充填一定圧力の20センチメートルを表す実験台上20cmの高さは、。 </li><li>ホルマリンの流れを制御するバルブでプラスチックチューブを経由して60ミリリットル注射器に気管に固定さ23ゲージの針を接続します。 </li><li> 5分間ホルマリンで肺葉を吹き込み。針を外し、気管を閉じて、肺の中の圧力を保持するために絹糸に引きながら気管からポリエチレンチューブと一緒にそれを削除します。 </li><li>ホルマリンで肺葉水没し、4℃で24時間固定します。 </li><li> 70％エタノールで少なくとも20分間固定した組織を3回洗浄し、そして以下のレジメン（1時間毎）を介してキシレンに脱水する。 <ul><li> 3倍の70％エタノール</li><li> 3倍の95％エタノール</li><li> 3倍の100％エタノール</li><li> 3Xキシレン</li><li> 1×（液体）パラフィン</li></ul></li><li>埋め込み脱水4-5ミクロン切片に切断し、パラフィン組織、および組織学的評価を可能にするためにヘマトキシリン​​およびエオシンで染色する。</li>
</ol>

<ol><li>King, J. D., Kocincova, D., Westman, E. L., Lam, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Review%3A+Lipopolysaccharide+biosynthesis+in+Pseudomonas+aeruginosa%5BTitle%5D)+AND+%22Innate+Immun%22%5BJournal%5D)">Review: Lipopolysaccharide biosynthesis in Pseudomonas aeruginosa.</a> Innate Immun. 15, 261-312 (2009).</li>
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</ol>

アブラハムルースはベーリンガーインゲルハイム、アストラゼネカのR＆DとアストラゼネカのR＆Dからの研究助成金からの移動補助金から講師料を受け取った。マグナスノールは、アストラゼネカのR＆Dのフルタイムの従業員で、アストラゼネカ、R＆Dからの研究助成金を受けている。ヨハン·グリューネとトーベベルクは、アストラゼネカのR＆Dが出資関係のない研究プロジェクトの共同研究者である。

エアロゾル化LPSは、上皮粘膜下組織中の好中球、誘導気道のほか、肺胞腔を囲むスペースで特徴付けられる気道における炎症反応を、生成されます。これは、一緒に血漿漏出、急性肺障害の病理学の代表を示すBAL​​Fにおける増加し、総タンパク質含有量、である。 LPSは、無菌性炎症を誘導するように、反応は、適応免疫応答とは無関係であり、細菌感染との関連性には限界がある。技術は、しかしながら、適応免疫応答を排除することにより、炎症性のメカニズムを分析するために使用することができる。 方法論は単純で、簡単に別の科学的な質問に答えるように適応するが、噴霧器とチューブの選択が重要です。 LPSそして得られた好中球増加の堆積は、入口、ネブライザーと、ここで説明されているもの以外のチューブを検証する必要があります。また、あまり一般的ではマウスSTとして雨は、LPSの最適な用量はそれぞれの株のために決定されるべきで、LPSに対する異なる応答を表示することがあります。他人12,13によって観察されるようさらに、エアロゾル化LPSで生成された好中球性炎症は、LPSの鼻腔内送達によって誘発さ...

リポ多糖（LPS）は、グラム陰性菌1の細胞壁成分である。 LPSへの挑戦は、急性肺障害、急性好中球性炎症と浮腫2を特徴とする症候群のよく文書モデルです。また、肺好中球増加はまた、COPD増悪4をモデル化するために使用されている慢性閉塞性肺疾患（COPD）3、およびヒトにおけるLPSチャレンジの特徴である。このように、LPS曝露の実験モデルは、臨床的にヒト病理を理解するための関連、貴重なツールです。 ここで説明するエアロゾル化LPSの肺送達の目的は、全身性の関与なしに、導電性、呼吸気道における好中球の炎症性応答を生成することである。 LPSチャレンジのいくつかの技術が、以前に記載されている。 LPSの静脈内注射は、投与の最も一般的に使用される経路である。この技術は、tは容易にアクセス可能であるが彼の主な損傷は、肺への好中球の移行以下の肺上皮の二次破壊に、内皮にある。静脈内投与は、動物モデルにおいて臨床像を複雑にする全身性炎症2を誘導する。全身性炎症は、気管​​内投与では観察されないとは対照的である。しかしながら、この技術は、労働集約的であり、麻酔剤、ならびにかなりの訓練5,6を必要とする。さらに、この投与経路による肺沈着は、呼吸7に依存している。したがって、肺沈着は、気道内、気管内投与、変数析出が観察され得るために必要な麻酔の深さに影響される。対照的に、エアロゾル化したLPSによる肺送達は、最小限の訓練を必要とし、容易に個人5,8の間にほとんど又は全く変動が多数の動物で行うことができる。最近の研究では、エアロゾル送達が堆積に関して気管内経路よりも優れていること、及びLPSのより適切な用量は、このモデル8と好中球性炎症を誘導することを確認する。 これまでの研究では、エアロゾル化した緑膿菌 LPSへの挑戦は、肺胞腔9、10を含む気道内腔および肺実質の著しい炎症反応を生成し、実証した。炎症は、好中球および肺水腫の存在が優位を特徴とし、従って、急性肺損傷の病因に対処し、疾患の病理学に寄与するメカニズムのさらなる知識を得るために使用することができる。

<table><tbody><tr><td>精製 &lt;em&gt;Pseudomonas aeruginosa&lt;/em&gt; LPS</td><td>Sigma-Aldrich</td><td></td><td>有害。精製済みを推奨。他の細菌から精製されたLPSも使用可能。</td></tr><tr><td>Pari LC sprint star ネブライザー</td><td>PARI Respiratory Equipment Inc.</td><td>023G1250</td><td></td></tr><tr><td>TSI マスフローメータ 4040</td><td>TSI</td><td>4040</td><td>サプライヤーの代替製品も使用可能。</td></tr><tr><td>Saint-Gobain 15.9 mm Tygonチューブ</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>Z685704</td><td>推奨ブランド。</td></tr><tr><td>取り外し可能な蓋付きプレキシグラスボックス</td><td>カスタム製作</td><td>N/A</td><td>150 x 163 x 205 mm（側面に2 mmの穴あり）。&amp;nbsp;</td></tr><tr><td>3M 半面形再使用可能呼吸用保護具</td><td>3M</td><td>7503</td><td>推奨ブランド。</td></tr><tr><td>3M 高性能粒子フィルター (P100)&amp;nbsp;</td><td>3M</td><td>2291</td><td>推奨ブランド。</td></tr><tr><td>はさみ</td><td>VWR</td><td>233-1104</td><td>好みのはさみを使用可能。</td></tr><tr><td>ピンセット</td><td>VWR</td><td>232-1313</td><td>好みのピンセットを使用可能。</td></tr><tr><td>Intramedic PE50 ポリエチレンチューブ</td><td>BD</td><td>427411</td><td>推奨ブランド。</td></tr><tr><td>Ethicon 2-0 Perma-hand シルク糸</td><td>VWR</td><td>95056-992</td><td>推奨ブランド。</td></tr><tr><td>26 &amp;frac12; ゲージ針</td><td></td><td></td><td>代替サプライヤーあり。</td></tr><tr><td>1 ml BD スリップチップシリンジ、非滅菌</td><td><a href="http://catalog.bd.com/bdCat/viewProduct.doCustomer?productNumber=301025" target="_blank"><img src="/img/new_window.png"> BD</a></td><td>301205</td><td>代替サプライヤーあり。</td></tr><tr><td>60 ml BD Luer-Lok シリンジ、非滅菌、ポリプロピレン</td><td>BD</td><td>301035</td><td>代替サプライヤーあり。</td></tr><tr><td>Fluka ヘマトキシリン・エオシン</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>3972</td><td>代替サプライヤーあり。</td></tr><tr><td>T&amp;uuml;rk液</td><td>Merck Millipore</td><td>109277</td><td></td></tr><tr><td>卓上遠心機</td><td></td><td></td><td>代替メーカーあり。</td></tr><tr><td>Cytospin 4 細胞遠心機</td><td>Thermo Scientific</td><td>A78300003</td><td>代替の遠心機も使用可能。</td></tr><tr><td>HEMA-3 stat pack</td><td>Fisher Scientific</td><td>23-123-869</td><td>代替の染色キットあり。</td></tr><tr><td>ホルマリン溶液、中性緩衝、10%</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>HT501128</td><td>代替サプライヤーあり。</td></tr></tbody></table>

エアロゾル化リポ多糖を使用して生成肺好中球増加のための方法

A Method for Generating Pulmonary Neutrophilia Using Aerosolized Lipopolysaccharide

急性肺損傷（ALI）限られた治療選択肢と高い死亡率と、肺胞好中球増加によって特徴付け重篤な疾患である。 ALIの実験モデルは、疾患の病因の我々の理解を高める上で鍵となります。グラム陽性細菌由来のリポ多糖（LPS）は、マウスの気道および肺実質における好中球性炎症を誘導する。 LPSのような化合物の効率的な肺送達は、しかし、達成することは困難である。ここに記載されたアプローチでは、マウスでの肺送達は、エアロゾル化された緑膿菌 LPSをチャレンジすることによって達成される。溶存LPSは、圧縮空気に接続ネブライザーによりエアロゾル化した。マウスは、エアロゾルを中止した後、2分間コンディショニングした後、10分間のプレキシグラスボックス内LPSエアロゾルの連続流に暴露した。気管挿管し、滅菌Pの特性評価を可能にし、ホルマリン灌流に続いて、その後の気管支肺胞、次の行われた、ulmonary炎症。エアロゾル化LPSは、気管支肺胞洗浄および組織学的評価によって検出された歯槽好中球増加によって特徴づけられる肺の炎症を、生成されます。この手法は、少数の家電の小さなコストで設置し、最小限のトレーニングと専門知識を必要とすることができます。露光システムは、このように日常的に肺の病理学の理解を向上させる可能性のある、任意の実験室で行うことができる。

エアロゾル化P.への挑戦緑膿菌 LPSは、通常、両方の初期および後期の時点で好中球の優位性によって特徴づけられる気道内腔および肺胞腔における顕著な炎症反応を、得られます。 エアロゾル化LPSは、肺好中球増加を誘発する C57BL / 6byとBALB / cマウスを、エアロゾル化P.に曝露した緑膿菌 LPS単独車両と好中球がBALF中で数えた。 C57BL車両で生成されたエアロゾルに露出/ 6byマウスのBALFにおける総細胞数は、典型的には約200,000細胞未満であり、細胞が少数のリンパ球（0.5〜5％）で、95から100パーセントの単核細胞から構成され、かつBALF中の好中球ないなかった（ 図2A-C）。マウスは、6時間後に&gt;一般的に、エアロゾル化LPSの展示BALF中の増大した総細胞数を500,000細胞に挑戦。細胞浸潤は、24時間後に高いままである。 BALF中の細胞のプロファイルは、APの方にシフトしているLP...

我々は、急性肺損傷をモデル化するために、噴霧によりエアロゾル化したリポ多糖にチャレンジすることにより好中球の肺の炎症を誘導するための方法を記載している。また、肺の分離、気管挿管および気管支肺胞洗浄のための基本的な外科技術も記載されている。

Acute lung injury (ALI) is a severe disease characterized by alveolar neutrophilia, with limited treatment options and high mortality. Experimental models ...

本手順の全般的な目的は、エアロゾル化LPSへの曝露により、一貫性と再現性のある気道好中球増多を誘導することです。まず、生理食塩水に懸濁したLPSを、曝露チャンバーに接続されたネブライザーに充填します。次に、マウスをエアロゾル化LPSに曝露させ、その後、気管支肺胞洗浄液を回収し、洗浄液中の炎症細胞数を計測します。最後に、肺組織を固定し、埋め込み、切片作成および免疫組織化学的解析に供します。最終的に、気管支肺胞洗浄液の総細胞数および分画細胞数を測定することで、肺への好中球集積を評価できます。気管内 LPS 投与などの既存の手法と比較した本手法の主な利点は、エアロゾル化した LPS が肺全体に均一に分布すること、実施が容易であること、そして習得に必要なトレーニングを最小限に抑えて成功させられることです。適切な PPE を着用し、換気設備を備えたバイオセーフティーレベル2のフード内で LPS エアロゾルを発生させるには、まずレッドインレットをネブライザーに挿入し、次にメーカー提供のチューブを用いてネブライザーを加圧室内空気へ接続します。次に、エアフィルターを使用してネブライザーの出口をマスフローメーターに接続し、マスフローメーターを電源に接続します。圧力を1〜2 barに維持しながら、空気流量を5 liters per minuteに調整し、その後、マスフローメーターを取り外して空気の流れを遮断します。次に、ネブライザーの出口を15.9 millimeterの分岐管に接続し、その管を、取り外し可能な蓋が付いた2つの50 by 163 by 205 millimeterのプレキシグラス製ボックスに接続します。圧力が上昇するのを防ぐため、各ボックスの入口とは反対側に5 mmの穴を開けておきます。次に、各ボックスに最大5匹のマウスを入れ、蓋を閉めます。その後、ネブライザーを起動します。インサートに、生理食塩水に溶解したLPSまたは生理食塩水のみを4～8 mL注入し、インレットを空気供給源に再接続します。動物の状態を継続的に観察し、エアロゾル化の間、空気供給源がネブライザーのインレットにしっかりと固定されていることを確認しながら、エアロゾルを密閉されたプレキシガラスボックス内に流します。10分後、空気供給を遮断し、動物をそのままプレキシガラスボックス内にあと2分間留めておきます。次に、蓋を開けます。エアロゾルを拡散させ、実験終了時にマウスをケージに戻します。各個体について、まずハサミを用いて前後方向に1回切開し、胸部を露出させます。次に、胸骨の前端を持ち上げて肋骨を上げ、肺組織を切らないように注意しながら、横隔膜の最腹側を穿刺します。次に、顎の下で前後方向に交差するように2箇所切開し、胸郭を開きます。胸郭を開いた後、ピンセットで慎重に広げ、喉頭より下の気管を切断します。続いて気管を持ち上げ、肺葉を胸腔に固定している靭帯を切断します。次に、肺と気管を脂肪組織や心臓組織から慎重に引き上げて離し、シリンジの包装紙の上に置きます。続いて、0.965 millimeterのポリエチレンチューブを気管に挿入し、絹糸で固定します。同様に、多葉を絹糸で結紮し、ポリエチレンチューブに23 gaugeの針を挿入します。次に、気管支肺胞洗浄液を回収するため、1 mL シリンジを用いて、氷冷した滅菌PBSを250 µL 単一葉にゆっくりと注入します。肺を慎重に叩き、ワークベンチの表面に30回当てながら、液体をゆっくりとシリンジに吸い戻します。同様の操作を新鮮なPBS 200 µLで繰り返し、回収した洗浄液をチューブに集めます。その後、後の分析に備えて気管支肺胞洗浄液を氷上に置きます。組織学的分析のために肺組織を固定するには、多葉を摘出し、ドライアイスで急冷します。葉を-80 °Cで保存します。組織学的解析のために組織を固定するには、プランジャーのない60 mLシリンジを金属製支持スタンドに取り付け、単一の葉にホルマリンを5分間注入します。その後、針を取り外し、絹糸を引いてポリエチレンチューブとともに気管から除去します。気管を同時に閉鎖し、肺内の圧力を維持します。次に、葉を4 °CのForminに24時間浸漬します。翌日、固定した組織を70% ethanolで、1回あたり少なくとも20分間、計3回洗浄します。脱水した組織をパラフィルムで包み、肺葉を4〜5 µmの厚さに切片化し、組織学的評価のためにヘマトキシリン・エジンで染色します。溶媒のみで生成したエアロゾルに曝露させたマウスの気管支肺胞洗浄液中の総細胞数は、通常200,000個程度か、あるいはそれ以下です。細胞の内訳は95〜100%が単核細胞であり、リンパ球はわずかであり、好中球は認められません。1 mg/mLのエアロゾル化LPSを投与したマウスでは、気管支肺胞洗浄液中の総細胞数が増加し、通常、投与6時間後に500,000個を超え、24時間後も細胞浸潤が高いまま維持され、細胞分画は好中球優位へと移行します。5 mg/mLのLPSをネブライザーで投与した場合においても、同様の炎症細胞プロファイルおよび肺好中球増多が観察されます。LPS投与から6時間後および24時間後において、好中球が上皮下粘膜および伝導気道と血管の周囲に観察されましたが、対照群の生理食塩水投与マウスでは観察されませんでした。LPS投与マウスの気管支肺胞洗浄液中の総タンパク質含有量は、生理食塩水曝露マウスと比較して増加しており、好中球遊走因子であるケモカインCXCL1およびCXCL2の発現も、LPS投与マウスにおいて増加していました。この手法はLP誘発性肺炎症に関する知見を得るのに有用ですが、エアロゾル化された蒸気は多くの異なる負荷物質の投与に適応させることができるため、細菌感染症やウイルス感染症などの他の疾患モデルにも適用可能です。

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Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

免疫学と感染症

我々は、彼らが病原体を貪食や好中球細胞外トラップ（NETS）を生成しながら、感染肺における好中球顆粒球の動態の観察のために、2光子顕微鏡を使用する方法を、示しています。...

2光子顕微鏡を用いて感染肺における好中球による貪食とNET -形成の直接観察

Source: Yuan, Z., et al. Bronchoalveolar Lavage Exosomes in Lipopolysaccharide-induced Septic Lung Injury. J. Vis. Exp. (2018)This video demonstrates an in vivo mouse model for inducing and analyzing acute lung injury (ALI) using intraperitoneal administration of bacterial lipopolysaccharide. The inflammatory cascade triggered by alveolar macrophages and neutrophils leads to epithelial and endothelial barrier disruption, allowing fluid and immune cells to accumulate in the alveoli. Alveolar...

Lipopolysaccharide-Induced Acute Lung Injury in Mice for Exosome and Immune Analysis

この動画では、マウスの皮下組織にエアパウチを生成し、in...

リポ多糖誘発性炎症性滲出液コレクションのためのエアポーチマウスモデル

病原体感染に対する宿主の免疫応答が厳密に調節されたプロセスである。マウスにおけるリポ多糖肺露光モデルを利用し、それは疾患の病因に関連付けられている複雑な機構の高解像度の評価を実施することができる。...

マウスにおける宿主の免疫応答を評価する口腔咽頭気管内PAMP管理および気管支肺胞の活用

本研究は、肺の自然免疫応答を高め、マウスの急性肺炎球菌性肺炎に対する防御を与えるために舌下免疫療法を使用することの利便性を示しています。...

代替として舌下免疫療法は、急性呼吸器感染症に対する保護を誘導するために

いくつかの方法は、マウスにおける細菌性肺炎をモデル化するための文献に記載されています。ここで、我々は、中咽頭にピペット細菌接種の吸引（ すなわち 、吸入）を介して肺炎を誘導するための非侵襲性の、安価で迅速な方法を記載します。肺の先天性免疫応答を評価するための下流の方法も詳しく説明されています。...

マウスにおける実験的細菌性肺炎の誘導と表現型のための非侵襲的および技術的に非集中的な方法

マウス腹腔内組合は、miRNAs とパッケージ化された気管支肺胞洗浄 (BAL) 液のエクソソームを分泌します。共培養システムを用いて、BAL 液中リリース エクソソームの気管支上皮細胞におけるタイト結合蛋白質の表現を中断させ、肺損傷を強調する炎症性サイトカインの発現を示す.

リポポリサッカライド投与による敗血症性肺損傷における気管支肺胞洗浄エクソソーム

ここでは、直接気管内リポ多糖類の含有によってマウスの急性肺損傷を誘発し、血液サンプル、気管支藻胞洗浄液、および肺組織のFACS分析を行うステップバイステップの手順です。最小限の侵襲性、簡単な処理、良好な再現性、および疾患の重症度の滴定は、このアプローチの利点です。...

直接気管内リポ多糖刺激によるマウスの急性肺損傷の誘導

オゾンと細菌性内毒素を組み合わせたマウスは、好中球を含む広域細胞死を示す。細胞骨格ラメリポディアの破壊、気管支-肺胞洗浄における複雑なV...

オゾンとLPS誘発マウス急性肺損傷時の肺細胞適応の可視化

ここでは、非侵襲的中咽頭気管内挿管 を介した 気管内リポ多糖(LPS)送達のプロトコルを提案します。この方法は、動物の外科的処置の外傷を最小限に抑え、LPSを気管、次に肺に正確に送達します。...

マウスにおける非侵襲的気管内リポ多糖点滴

本研究では、非侵襲的な気管内挿入技術が、基本的な喉頭鏡を用いてラットでALIを発生させることが示され、肺へのLPSの正確な供給が保証されています。LPSは喉頭鏡を用いた気管内チューブ から 点滴されます。肺損傷の規模は複数の時点で評価されます。...

齧歯類の急性肺損傷を誘発するための非侵襲的気管内リポ多糖投与

学ぼう、エアロゾル化LPSを用いてマウスの気道好中球増加を誘導する方法。気管支肺胞洗浄液の細胞計数と免疫組織化学解析により、肺炎症の評価と治療介入研究への応用が可能です。

エアロゾル化リポ多糖を使用して生成肺好中球増加のための方法

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