Name: ヒトとマウスにおける脳室周囲の組織の側脳室および組織学的特性の3次元モデリング (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-05-19T15:00:00.000+00:00
Duration: 15 min 26 s
Description: 学ぶ脳室の3次元モデリング手法。MRIスキャンと免疫組織化学を用いて、ヒトとマウスの側脳室の体積変化と細胞構造を可視化し、神経変性疾患や加齢に関する知見を得る。

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<li>Bergmann, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+age+of+olfactory+bulb+neurons+in+humans%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">The age of olfactory bulb neurons in humans.</a> Neuron. 74, 634-639 (2012).</li>
<li>Sanai, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Corridors+of+migrating+neurons+in+the+human+brain+and+their+decline+during+infancy%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Corridors of migrating neurons in the human brain and their decline during infancy.</a> Nature. 478, 382-386 (2011).</li>
<li>Wang, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+and+characterization+of+neuroblasts+in+the+subventricular+zone+and+rostral+migratory+stream+of+the+adult+human+brain%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Res%22%5BJournal%5D)">Identification and characterization of neuroblasts in the subventricular zone and rostral migratory stream of the adult human brain.</a> Cell Res. 21, 1534-1550 (2011).</li>
<li>Carmen Gomez-Roldan, D. el, M,, et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neuroblast+proliferation+on+the+surface+of+the+adult+rat+striatal+wall+after+focal+ependymal+loss+by+intracerebroventricular+injection+of+neuraminidase%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Comparative+Neurology%22%5BJournal%5D)">Neuroblast proliferation on the surface of the adult rat striatal wall after focal ependymal loss by intracerebroventricular injection of neuraminidase.</a> The Journal of Comparative Neurology. 507, 1571-1587 (2008).</li>
</ol>

著者らは開示するものは何もない。

我々は、マウスおよびヒトにおいて、脳の脳室系の完全性を評価するために使用できるツールおよびプロトコルを提示します。これらのツールは、しかし、また、14,21,22または老化プロセス中に損傷、疾患に起因する変化を受ける他の脳構造または器官系にも適用することができます。戦略は断面および縦MRI配列のアラインメントは、特定の領域または対象の構造の3次元体積表現を生成することができるソフトウェアのテイク利点を提示します。縦MRIシーケンスは、時間の経過とともに発生し、総脳容積比の側脳室のために、総脳容積を含むように拡張することができる3Dボリュームの変更、および/ ​​または他の脳構造の編集（ 例えば 、視床下核23または脳梁白質路可能）拡散強調テンソル画像を用いました。同時に、脳の構造変化の包括的分析を行うことができます。最終的には、マルチモーダルイメージング技術の収集脳構造への加齢関連疾患と関連の変化を評価するために、脳の健康状態24の最も正確な画像を提供するために必要とされます。一緒対象被験者の変動と被験者全体の変動の範囲で重要な構造...

上衣細胞単層系脳脊髄液（CSF）と間質液（ISF）1-3との間で双方向のバリア及び輸送機能を提供する脳の脳室系。これらの機能は、脳が毒物を含まない、生理バランス2,3で維持するのに役立ちます。ヒトでは怪我や病気を通してこのライニングの部分の損失は他の上皮ライニングに見られるような、再生、交換をもたらすように表示されません。むしろ上衣細胞カバレッジの損失は、心室表面における上衣細胞の無欠陥領域を覆う星状細胞の網目構造と脳室周囲アストログリオーシスをもたらすと思われます。重要CSF / ISF交換やクリアランス機構に深刻な影響は、この上皮層1,2,4-7の喪失に起因すると予測されます。 人間の老化の共通の特徴は、側脳室（脳室）とobservなどの関連する脳室周囲の浮腫を拡大していますMRIおよび流体弱毒化反転回復MRI（MRI / FLAIR）8-14により編。脳室と心室ライニングの細胞組織との関係を調べるために、死後の人間のMRIシーケンスは、側脳室の脳室周囲組織の組織学的調製物と一致しました。脳室拡大例では、神経膠症の実質的な領域は、側脳室の壁に沿って上衣細胞カバレッジを交換していました。心室拡張がMRIベースのボリューム分析によって検出されなかった場合には、上衣細胞のライニングは無傷であったとグリオーシスは心室ライニング6に沿って検出されませんでした。このコンビナトリアルアプローチは、部分のホールマウントの準備や全体の側脳室の壁と心室容積6の3Dモデリングを使用して、側脳室のライニングの細胞の完全性の変化を詳細に最初の包括的なドキュメントを表します。いくつかの疾患（アルツハイマー病、統合失調症）、および外傷（外傷性脳損傷）初期の神経病理学的特徴として脳室拡大を示します。上衣細胞ライニングの領域の裸出は、それによって、通常の上衣細胞機能を妨害し、CSF / ISF流体と溶質交換機との間の恒常性バランスを損なうことが予測されるであろう。したがって、脳室系への変更の、より精密検査、その細胞組成、およびその下または隣接する脳構造の結果は、最終的に心室肥大に関連した神経病理の詳細を明らかにするために開始されます。 一緒に組織学的組織サンプルを対応へのアクセスが制限されたマルチモーダルイメージングデータの不足、特に縦方向のデータ列には、人間の脳の病理の解析を困難にします。ヒトの老化や病気に見られるモデリングの表現型は、多くの場合、マウスモデルを用いて達成することができ、動物モデルは、ヒト疾患の開始および進行についての質問を探検するために最善の手段の一つになります。でいくつかの研究健康な若いマウスは、側脳室の壁の細胞構築とその下の幹細胞ニッチ4,7-15を記載しています。これらの研究は、高齢化6,15を介して3Dモデリングおよび心室壁の細胞分析を含むように拡張されています。マウスは比較的堅牢subventicularゾーン（SVZ）は、無傷の上衣細胞ライニング6,15に細胞ニッチの下にある幹表示むしろ脳室周囲グリオーシスも脳室のいずれもが、老齢マウスで観察されます。このように、印象的な種特異的な違いは、6,15の老化過程における側脳室のライニングの一般的なメンテナンスと整合性の両方に存在します。したがって、ヒトで見られる条件を調べるための最良の使用マウスに、2種間の違いは、任意のモデリングパラダイムを特徴とし、適切に考慮される必要があります。ここでは、人間とMの両方で側脳室および関連する脳室周囲組織に長手方向の変化を評価するための手順を提示しますウーズ。私たちの手順は、細胞、組織と構造の両方を特徴づけるために、3Dレンダリングとマウスおよびヒトの心室の両方の容積測定、および脳室周囲組織の全載標本の免疫組織化学的分析の使用を含みます。一緒にこれらの手順は、脳室系の変化と関連する脳室周囲の組織を特徴付けるための手段を提供します。

<table><tbody><tr><td>リン酸緩衝生理食塩水(PBS)</td><td>Life Technologies</td><td>21600-069</td><td></td></tr><tr><td>パラホルムアルデヒド(PFA)</td><td>電子顕微鏡科学</td><td>19210</td><td>PBSで4%、4°Cで使用。C</td></tr><tr><td>Normal Horse Serum</td><td>Life Technologies</td><td>16050</td><td>10% in PBS-TX (v/v)</td></tr><tr><td>Normal Goat Serum</td><td>Life Technologies</td><td>16210</td><td>10% in PBS-TX (v/v)</td></tr><tr><td>Triton X-100 (TX)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T8787</td><td>0.1% in PBS (v/v)</td></tr><tr><td>Vibratome</td><td>Leica</td><td>VT1000S</td><td></td></tr><tr><td>Fluorescence Microscope</td><td>Zeiss</td><td>Imager.M2</td><td></td></tr><tr><td>カメラ</td><td>浜松</td><td>オルカ R2</td><td></td></tr><tr><td>顕微鏡 ステージコントローラー</td><td>Ludl 電子製品</td><td>MAC 6000</td><td></td></tr><tr><td>立体学ソフト</td><td>MBF Bioscience</td><td>Stereo Investigator 11</td><td></td></tr><tr><td>立体学ソフト</td><td>ImageJ/</td><td>NIH NIH フリーウェア</td><td></td></tr><tr><td>3D再構成ソフト</td><td>MBF Bioscience</td><td>Neurolucida Explorer</td><td></td></tr><tr><td>共焦点顕微鏡</td><td>Leica</td><td>TCS SP2</td><td></td></tr><tr><td>MRIソフトウェア</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Freesurfer</td><td>https://surfer.nmr.mgh.harvard.edu/fswiki/DownloadAndInstall</td><td>セグメンテーションとボリューム</td><td></td></tr><tr><td>ITK-Snap</td><td>http://www.itksnap.org/pmwiki/pmwiki.php</td><td></td><td>セグメンテーションとボリューム</td></tr><tr><td>マルチイメージ解析 GUI (Mango)</td><td>http://ric.uthscsa.edu/mango/</td><td></td><td>縦方向のオーバーレイ</td></tr><tr><td>ホールマウント 機器</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>22.5°C 顕微手術用ストレート スタブナイフ</td><td>フィッシャー・サイエンティフィック</td><td>NC9854830</td><td></td></tr><tr><td>パラフィルム</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>ワックス ボトム ディスセッティング ディッシュ&nbsp;</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>ピン</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>ファイン 鉗子</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>aquapolymount</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>解剖顕微鏡</td><td>ライカ</td><td>MZ95</td><td></td></tr><tr><td>ホールマウント抗体</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>マウス 抗 b-カテニン</td><td>BD Bioschiences, カリフォルニア州サンノゼ, 米国</td><td></td><td>1:250</td></tr><tr><td>ヤギ抗GFAP</td><td>Santa Cruz Biotechnology</td><td></td><td>1:250</td></tr><tr><td>ウサギ抗AQP4(アクアポリン-4)</td><td>&nbsp;Sigma-Aldrich</td><td></td><td>1:400</td></tr><tr><td>Coronal Antibodies</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Anti-S100&beta; antibody</td><td>Sigma-Aldrich</td><td></td><td>1:500</td></tr><tr><td>4',6-ジアミジノ-2-フェニルインドール (DAPI)</td><td>Life Technologies</td><td>D-1306</td><td>10 &micro;PBSのg / ml</td></tr></tbody></table>

ヒトとマウスにおける脳室周囲の組織の側脳室および組織学的特性の3次元モデリング

3D Modeling of the Lateral Ventricles and Histological Characterization of Periventricular Tissue in Humans and Mouse

心室系は脳脊髄液(CSF)を運び循環させ、脳からの溶質と毒素の除去を促進します。心室の機能単位は、上衣細胞と呼ばれる繊毛上皮細胞であり、心室の内側を覆い、繊毛作用を通じて心室表面でCSFの層流を生成することができます。この上衣細胞の単層は、脳間質液(ISF)と循環CSFとの間の交換を促進するバリアおよびろ過機能も提供します。それにより、脳内の生化学的変化はCSFの組成に反映され、上衣の破壊はCSFとISF交換の微妙なバランスを乱す可能性があります。ヒトでは、側脳室の拡大と老化との間には強い相関関係があります。加齢性脳室拡大は、認知症やCSFの流れの閉塞がない場合でも発生する可能性があります。脳室拡大の正確な原因と進行はしばしば不明です。しかし、脳室の拡大は、心室表面の星状膠症および関連する脳室周囲浮腫が機能的上衣細胞単層を置き換えることにより、上衣細胞被覆の局所的および多くの場合の広範な喪失を示すことがあります。MRIスキャンと死後のヒト脳組織を使用して、側脳室容積の3Dレンダリングを準備、画像化、編集する方法、側脳室容積を計算する方法、および顔面側脳室壁組織調製物の免疫組織化学的分析を通じて脳室周囲組織を特徴付ける方法について説明します。マウス脳組織の対応する解析も提示されており、ヒトの老化や疾患に見られる側脳室および脳室周囲組織の変化を評価する手段としてマウスモデルを使用することを支持しています。これらのプロトコルを組み合わせることで、脳室拡大の原因と影響の調査が可能になり、脳内の心室系の健康とその重要なバリアおよびろ過機能を研究する技術が強調されます。

免疫染色50μmの冠状切片と3次元再構成（ 図3）に基づいて、マウス側脳室の輪郭追跡は、ボリュームデータは、病気やけがのためのモデル系としてマウスを使用して、異なる実験パラダイムに収集することができるようになります。この手順に重要な側脳室の壁が互いに付着領域の除外です。心室の領域をsubsegmenting各領域（ 図3C）のために別の色を指定することにより、隣接するセクションを遵守することができ、地域の全量は、コンパイルされたサブセグメントから計算することができます。 同様の研究は、3Dレンダリングのための側脳室の半自動セグメンテーション（ITK-SNAP）と共に脳のMRIスキャンを用いて行うことができます。心室容積の直接のペアリングと脳室周囲組織分析、前または死後のためにMRIスキャンは、セグメント化され、（3次元再構成を作成するために整列されています<stronG&gt;図4）。縦MRIスキャンが使用可能な場合は、3D再構成は、整列して時間をかけて拡張（ 図5）の分析のために...

MRIスキャン(ヒト)、3Dイメージングソフトウェア、免疫組織学的分析を使用して、脳の側脳室の変化を記録します。次に、側脳室の体積変化の縦方向3Dマッピングと、加齢や病気によって人間の脳に発生する脳室周囲細胞の変化の特性評価をマウスでモデル化します。

The ventricular system carries and circulates cerebral spinal fluid (CSF) and facilitates clearance of solutes and toxins from the brain. The functional ...

以下の一連の手順の全体的な目的は、脳室拡大の原因と結果を調査する手段を提供し、脳室系の健康状態および脳内における重要なバリア機能と濾過機能を研究するための手法を提示することである。これは、マウス脳の冠状断切片またはヒト脳のMRIスキャンを収集し、脳室の3D再構成を行い、脳室体積を算出することで達成される。第2段階として、脳室心尖部のen foss標本を含む死後組織を細胞特異的抗体で染色し、脳室 liningsの細胞学的完全性を明らかにする。次に、脳室表面全体の細胞組織のモンタージュを作成し、それを脳室の3Dモデル上にレンダリングすることで、グリオシスが発生している領域と、健全な室管膜細胞が維持されている領域を対比させて示す。これらの結果は、脳室の縦断的3Dモデリングに基づく脳室拡大領域と、脳室壁の室管膜細胞層が維持されず、グリア瘢痕に置換された領域を示しています。3Dモデリングデータと免疫組織化学的データを組み合わせることで、脳室壁の細胞組成に関する3D領域特異的マップを作成できます。この手法の意義は、脳損傷やアルツハイマー病などの神経変性疾患、および正常な加齢に伴う治療や診断へと広がります。これらの病態はいずれも、通常ある程度の脳室拡大を示し、それに伴い脳室表面のスコリオシス（側弯）が生じている可能性が高いためです。マウスを用いた手順のデモンストレーションはRichard Wolfferと当研究室の学部生が行い、ヒトMRIデータおよび死後ヒト組織を用いた手順のデモンストレーションは、現在医学生であるYeunと、研究室の大学院生であるRebecca Chuが行います。プロトコルの記述部分に従い、固定、切片作成、免疫染色、およびマウス脳の封入を行い、イメージング用のスライドを準備します。手順を開始し、マウスの側脳室をトレースするために、正立型蛍光顕微鏡とコンピュータの電源を入れます。顕微鏡にはオートステージとデジタルCCDカメラが装備されている必要があります。マッピングソフトウェアを蛍光モードで起動し、ディスプレイオプションを開いて、トレーシングに必要なツールバーとドッキングプールパネルをロードします。次に、オプション、ディスプレイオプション、アクセサリの順にクリックし、同じメニュー内でメインツールバーとマーカーツールバーを選択します。ドッキングプールパネルでは、カメラヒストグラム、マルチチャンネルコントロール、カメラ設定、および画像取得を選択します。アペンド細胞を標識する強力なS 100 beta蛍光に基づき、側脳室を含む最初の組織片を特定します。側脳室の壁面に沿って確認してください。切片作成時に付けられた小さな切り込みを特定し、左半球と右半球の向きを確認します。次に、新しいデータファイルを作成し、左側脳室上の画像ウィンドウ内をクリックして、ステージ移動の基準点を指定します。トレースファイル全体で、側脳室に対するこの基準点の位置が一定になるようにしてください。連続再構成用のコンターをインポートする際に役立つよう、コンターのドロップダウンメニューから適切なプリセットコンタータイプを選択してください。左側脳室と右側脳室のトレースに、それぞれ異なる色を使用してください。次に、脳室の輪郭をトレースするため、append liningの頂端表面全体に沿ってクリックします。矢印キーを使用してトレースウィンドウを移動させてください。輪郭をトレースした後、右クリックして「close contour」を選択します。別の色を使用して、右心室のトレースを繰り返します。次に、左側のマーカーツールバーから適切なマーカーを選択し、3D再構成のための連続した輪郭の整合を補助するため、トレース画面の中線上にクリックしてマーカーを配置します。この手順を繰り返し、2つ目のマークを作成します。[File]から[Save data file as]を選択して組織のトレースを保存し、新しいフォルダとファイル名を作成してください。連続切片からのトレースを容易に識別できるよう、ファイル名は「スライド番号-組織番号」という形式で番号を付けてください。その後、心室を含むすべての切片に対して、上述の手順を繰り返します。側脳室の3D再構築を行う。3D再構築プログラムを開く。次に、[ファイル]から[開く]をクリックし、最初のトレース連続切片の輪郭ファイルを選択する。左心室および右心室のすべての輪郭追跡データと、追加したすべてのマーカーをインポートします。プロトコルの記述セクションにある指示に従って、輪郭を調整してください。次に、左側のパネルで全ての輪郭を選択し、3D可視化ボタンをクリックして、最終的な3D再構成を表示します。この画像は、S100β免疫反応性エペンディマル細胞によって縁取られた側脳室を含むマウス脳の冠状断面を示しています。アスタリスクは側脳室を示し、括弧は接着部位を囲んでいます。また、スケールバーは500 µmを表しています。マウスの側脳室を輪郭としてトレースし、サブセグメントセクションとして配置します。室内の領域は、体積分析の妨げにならないよう除外します。この画像は、側脳室の輪郭の最終的な3D再構築を示しています。黄色は、側脳室を含む関心領域にわたる全脳体積の輪郭を表しています。冠状面にスライスした脳組織から側脳室の3D再構成を作成する方法を十分に理解しておく必要があります。側脳室の3D画像再構成および体積定量化を行うためのプロトコル、ならびに縦断的オーバーレイ分析を用いて経時的な体積変化を評価するためのプロトコルを以下に記載します。なお、データセットを組み込むには、MR.Rデータの収集および取得後の処理における一貫性が極めて重要な基準となる点に注意してください。脳室のセグメンテーションを行うには、ITK SNAPを用いて、高解像度のT1強調MR画像から脳室をセグメントします。プログラムを起動後、[grayscale image]を開き、目的のファイルを選択して、NIfTIファイルとして開きます。次に、各解剖学的断面をスクロールし、脳室の異常（鼻状領域や、側脳室下角の拡大・縮小など）を確認します。続いて、メインツールボックスから「snake, ROI tool」をクリックします。その後、「segment 3D」を選択し、「intensity region」オプションを選択します。次に、「pre-process image」をクリックし、「above」を選択します。スライディングバーを使用して最大強度を記録してください。その後、しきい値を最大強度の15%に設定し、この値を記録します。これにより、ROIが白く強調表示されます。平滑化（smoothness）パラメータを10に設定し、「OK」をクリックします。次に、各脳室に10〜12個の小型の気泡（bubbles）を注入します。前角に2個、側脳室体の上表面に等間隔で7個、後角に1個、そして側脳室の下角に1個ずつ配置します。次に、パラメータを選択し、曲率力を0.4に設定します。その後、再生記号をクリックしてアクティブコンターの進化を開始します。ここで、メッシュ更新をクリックして表面を可視化します。次に、自動更新を確認します。側脳室のすべての領域が関心領域に含まれた時点で、セグメンテーションプロセスを停止してください。第三脳室が含まれないように注意してください。最後に、「Finish」をクリックし、セグメンテーション結果をNIfTIファイル形式で保存します。心室の総体積を求めるには、「Segmentation」、「Volume」、「Statistics」を選択し、設定したカラーラベルを用いて心室の総体積を算出します。このセグメントでは、Mangoソフトウェアを用いて縦方向のROIを重ね合わせ、被験者内の心室体積の経時的な変化を定性的および定量的に示しています。ソフトウェアを開いた後、「Open」をクリックし、ファイルを開いて保存済みのniftyファイルを読み込みます。画像ファイルが読み込まれたら、「File」から「Load ROI」をクリックし、ベースラインROIの時点のROIを緑色で読み込みます。再度「File」から「Load ROI」をクリックし、2番目のROIの時点のROIを赤色で読み込みます。「File」から「Save ROI」を選択して縦断的オーバーレイを保存し、画面に表示されている命名規則に従って各画像にファイル名を割り当てます。次に、ITK-snapを開きます。その後、結合されたROIをグレースケール画像として再度開きます。「Segmentation」から「Load」を選択し、結合ROIファイルから結合ROIを読み込んで縦断的な体積データを取得します。続いて、「Segmentation」、「Volume and Statistics」を実行します。ラベル1（赤）を拡張容積、ラベル2（緑）を狭窄容積、ラベル3（青）を基底容積とする。まず、10%ホルマリンで最大6週間固定し、0.1 M PBSで十分に洗浄した無傷の半球を用いる。大きなナイフとマイクロサージカルメスを使用して、半球全体にわたって厚さ1.5 cmの冠状断切片を作成する。側壁全体を1つの連続した切片として維持しながら、脳室壁を1 cmの深さまで解剖する。染色に適したサイズの切片を作成するため、必要に応じて壁を細分する。脳室壁の反対側の切片に切り込みを入れる。上下方向を特定するために、記述されたプロトコルに従って免疫組織化学染色を行い、切片を封入します。解剖顕微鏡下で、マイクロサージカルスタブナイフを用いてピンで組織を固定し、側脳室壁の均一に薄い切片を作成し、側脳室側を上にしてスライドガラスに載せます。スライドが完全に乾燥したら、免疫蛍光共焦点顕微鏡で切片を観察します。頂端接着のマーカーであるbeta-cateninを用いて、脳室表面にイメージングの焦点面を設定します。付随細胞の接合タンパク質。その後、脳室表面のGFAP染色に基づき、付随細胞の被覆領域および表面アストログリオーシス領域を境界づけし、脳室表面全体を記録してモンタージュを作成する。表面全体のオーバーラップさせた画像を用いて、連続画像のモンタージュを作成する。Adobe Photoshopを開き、「ファイル」→「自動化」→「インタラクティブレイアウトの自動合成」を使用して、オーバーレイする画像を選択し、必要に応じて手動で調整します。モンタージュをトレースするための新しいレイヤーを作成し、無傷の状態を模したカートゥーン表現を生成します。細胞被覆または脳室表面のG scoliosisに基づき、すべてのセクションを統合して脳室壁のマップを再構成し、MRI再構成の対応する領域にリンクさせます。ここではヒトのMR画像の再構成を示しています。側脳室が赤色の関心領域として定義されています。ここに示されているような3D画像再構成により、側脳室の体積定量化および定性的視覚化が可能になります。この画像は、高齢患者における脳室の縦方向の拡大の評価を示しています。複数の時点での縦断的MRIを整列および重ね合わせることで、被験者内における脳室体積の経時的な拡大を視覚化し、定量化することができます。最後の3枚の画像は、ヒト側脳室表面の免疫組織化学的評価および領域マッピングを示しています。$\beta$-cateninおよび染色の結果、輪郭が示されている無傷の室管細胞の領域は、アスタリスクで示されるように石畳状の外観を呈しており、GFAP染色で示される脳室表面のアストログリオーシス領域とは点線で区切られています。連続的な共焦点画像を重ね合わせて領域的なモンタージュを作成し、Adobe Photoshopを用いてトレースするか、あるいは脳室表面における細胞組織の模式図を作成します。このモンタージュの模式図を、対応するMRIベースの3D脳室再構成モデル上の脳室表面にマッピングします。図に示されているように、緑色は正常な付属肢を、赤色の領域はグリオーシスを示しています。この手順を行う際は、連続的な再構成および細胞の完全性のマッピングを行うために、各組織サンプルの記録を詳細に維持することが重要です。本手順の後、側脳室のサブセグメンテーションなどの他の手法を用いることで、時間の経過に伴う領域特異的な拡大に関するさらなる疑問を解消することが可能です。

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神経科学

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