Name: マイクロ流体共培養装置の使用歯胚神経支配の開発の分析 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-08-14T14:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 1 s
Description: 学ぶマイクロ流体共培養法を用いた三叉神経節と歯胚の分離培養技術。マウス胎生期組織を用いて神経支配パターンを可視化し、神経と標的組織の相互作用を解析する発生生物学研究に応用できます。

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この作業はチューリッヒ大学によって資金提供されました。著者らは、共培養条件の確立に協力してくれたEstrela Neto氏とMeriem Lamghari博士に感謝します。

全てのマウスは、チューリッヒ、スイスの動物福祉法に、州立獣医局の規制に準拠してに従って維持し、取り扱いました。 解剖素材、文化メディア、マイクロ流体デバイスの作製<ol><li>オートクレーブマイクロ解剖ピンセットやハサミ（121℃、滅菌時間：20分）、滅菌容器に保管してください。 </li><li> 37℃でオービタルシェーカー上で24時間、1 M HCl中でそれらをインキュベートすることにより、ガラスカバースリップ（24ミリメートル×24 mm）を滅菌します。 99％エタノールで滅菌蒸留H 2 O 3回とそれらを3回洗浄します。乾燥後、37℃または滅菌流フードの下でカバースリップ。最後に、滅菌を完了するためにUV光（30分）にカバースリップをオートクレーブまたは露出します。カバースリップは、次いで、70％エタノールに保存することができます。 </li><li>滅菌ピンセットを使用してパッケージから慎重AXIS軸索分離デバイ​​スを取り外し、滅菌ペトリ皿に置きます。 </LI&gt; <li>滅菌生検パンチ（φ：1ミリメートル）を使用すると、培養室に対応して（ 図1）で培養するサンプルあたり一つの穴を作成します。 注：それらが適用された圧力によって損傷する可能性があるとして、微小溝に近すぎるパンチしないでください。 </li><li> 70％エタノールでそれらを浸すことにより、AXIS軸索分離デバイ​​スを滅菌します。完全無菌流フードの下で乾燥した後、AXIS軸索分離デバイ​​スとカバーガラス。先に進む前に、3時間以上の間隔をあけてください。 注：不完全な乾燥は、マイクロ流体デバイスの組立不良になります。 </li><li> 6ウェルプレート内で35ミリメートルペトリ皿にまたはウェルに各カバースリップを置きます。 </li><li>絶縁装置とカバーガラスとの間に完全な接着を可能にするために曲がった端部を有するピンセットで慎重にしっかりとカバーガラスとプレスにAXIS軸索遮断装置を配置します。 </li><li>ポリ-D-リジンの各培養室では、ピペットを150μl（滅菌蒸留H 2で0.1 mg / mlのO）。培養チャンバからすべての空気を除去するために、5分間真空下でのマイクロ流体デバイスを置きます。 </li><li>空気は、依然としてチャンバへの再ピペットポリ-D-リジン溶液、チャンバ内見られる場合。 </li><li> 37℃で、ポリ-D-リジンO / Nを有するデバイスをインキュベートします。 </li><li>滅菌蒸留H 2 Oで室を3時間を洗います</li><li> 150（PBS中のシグマアルドリッチ、5μg/ mlの、または無血清培地）μlのラミニン作業溶液とチャンバーを記入し、37℃でO / Nインキュベート。 </li><li> 48ミリリットルたNeurobasal培地、1mLのB-27、100 U / mlペニシリン/ストレプトマイシン、2mMのL-グルタミン、5 ngの/ mlの神経成長因子（NGF）：三叉次のように構成される神経節培養37のための培地50mlを準備、0.25のPMシトシンアラビノシド。 </li><li> 40ミリリットルDMEM-F12 10mlのウシ胎児血清（FBS、最終濃度：20％）を以下のように構成され、歯胚培養37培地50mlを調製し、100 U / mlペニシリン/ストレプトマイシン、2mMのL-グルタミン、150 / mlのアスコルビン酸。 </li></ol> 2.マウスの胚の発生と解剖<ol><li>膣プラグ（膣プラグ：開発0.5、E0.5の胚日）に応じて、胚の年齢を判断し、形態学的基準を介して確認します。このプロトコルのために、私たちは一般的にE14.5-E17.5マウス胚を使用しています。 </li><li>解剖エリアとエタノール70％でステレオスコープを清掃してください。 </li><li>頚椎脱臼を経由して妊娠中の母親を生け贄に捧げます。グリッド上に第一および第二指でマウスの首をブロックし、決定に尾を引きます。 </li><li>下腹部の周りの皮膚を切開し、はさみを使って腹部を開きます。子宮の位置を確認します：妊娠のような後期の段階で、子宮が豊富に腹腔を埋めます。 </li><li>氷上でPBSで満たされたチューブ内の子宮と場所を解剖。氷の上で、組織はいくつかの時間のために残すことができます。機関のガイドラインに従って、母の死体を捨てます</li> &lt;LI&gt;子宮から胚を解剖し、それらの胚体外組織からそれらを解放。氷上でPBS中で胚を置きます。 </li><li>はさみを使用して胚を刎ねると、マイクロ解剖ハサミ（ 図2A）を使用して、ヘッドの残りの部分から下顎を分離します。三叉神経節を損傷することなく、正確に下顎を外します。後者は下顎に近接して局在しているように、それらの偶発的な損傷が可能です。氷上で、冷PBS中で下顎と頭の残りの部分を保持します。 </li><li> TGを分析するには、頭を取ると、以前に冷PBSで満たされた解剖ガラスシャーレ上に置きます。鉗子を使用して、皮膚や頭蓋骨を削除します。終脳とリフトの下に鉗子を配置することにより、次に終脳と小脳を削除します。終脳と小脳が露出頭蓋骨の底部を残して、一緒に反転します。 </li><li> （ 図2Bに示されている）三叉神経節をローカライズ。鉗子を使用してください三叉神経からTGを分離します。ナイフのように解剖針を使用して、三叉神経突起の残党を排除します。冷PBSで満たされたペトリ皿に解剖TGを配置し、氷上で保管してください。 </li><li> 、胚の歯を解剖下顎を配置するには、以前に冷PBSで満たされた解剖ガラスシャーレ上に、頭蓋骨から分離。ナイフのように解剖針を使用して、舌と顎の周囲の皮膚を取り除きます。顎の正中線に沿って切断することにより、左右の半顎を分離します。 図1Cに示すように、歯胚は、簡単に可視化されます。解剖針を使用して歯胚を分離し、非歯の組織の過剰を取り除きます。冷PBSで満たされたペトリ皿に解剖歯胚を置き、氷上で保管してください。 </li></ol> 3.マイクロ流体共培養<ol><li>解剖後、マイクロ流体デバイスからラミニンを削除します。 respecti200μlのチャンバーを埋めますメディアVEの。 </li><li>ピンセットで、（ 図1D）を打ち抜いて作成した穴の中に静かに解剖し、TGと歯胚を転送します。歯胚が浮いていないことを確認し、彼らがカバーガラスに連絡するまで、彼らは沈むこと。 </li><li>培養を37℃、5％CO 2のインキュベーター内のサンプル。 </li><li>培地を48時間ごとに変更します。完全にチャンバーを空にしないでください、培養室に直接ピペットではありません。チャンバの完全な排出はチャンバ内の気泡の形成をもたらします。チャンバ内への直接ピペッティングは軸索損傷をもたらすであろう。これらの問題を回避するために、井戸の外側に向かってピペットポインティング培地を除去し、同様に、チャンバの反対側に位置井戸の側に新鮮な培地をピペット。 </li><li>培養期間中、同時培養を簡単タイムラプス顕微鏡によって画像化することができます。共培養物を10日間維持することができます。 </li><li>培養後のペリオD、室につき1つのウェルにPBSを150μlをピペットし、チャンバーを3回PBSを流すことにより、チャンバーを洗浄します。 </li><li> PBSを除去し、チャンバー当たり1つのウェルに（PBS中）パラホルムアルデヒド150μlの4％をピペットでサンプルを修正。室温で15分間インキュベートします。 </li><li> 3.6で説明したようにPBSで2回チャンバーを洗浄します。 </li><li>さらに分析を進めます。 </li></ol>

<ol><li>Pagella, P., Jiménez-Rojo, L., Mitsiadis, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Roles+of+innervation+in+developing+and+regenerating+orofacial+tissues%5BTitle%5D)+AND+%22Cellular+and+molecular+life+sciences+%3A+CMLS%22%5BJournal%5D)">Roles of innervation in developing and regenerating orofacial tissues.</a> Cellular and molecular life sciences : CMLS. 71, 2241-2251 (2014).</li>
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</ol>

著者らは、競合する金銭的利益はないと宣言している。

歯の神経支配のインビトロ研究における前は三叉神経節及び歯の組織または細胞26,28,29の従 ​​来の共培養に基づいていました。これらの研究は主に感覚軸索38にこれらの細胞または組織の魅力的な効果を調査するために行きました。フィールドに大きな進歩をもたらしたが、いくつかの技術的な問題が提起されました。歯胚を培養37の数日後に退化し始めます。これらの観​​察に基づいて、同じ培養条件下で成長したニューロン及び歯は、これら2つの組織間のクロストークに関与する分子のいずれかの最終的な解析を損ないます。最適な培養条件は、三叉神経節及び歯の組織の生理学的分子プロファイルを維持するために必要とされます。 マイクロ流体システムは、最適化されたメディア34,36にニューロンおよび種々の細胞型の共培養でこれまでに使用されています。このマイクロ流体システムは、より多くの信仰を表すことができ完全に神経細胞体、軸索の端末と、標的組織は、一般に、異なる細胞および分子の微小環境にさらされて...

神経支配は、臓器や組織1,2の発達、ホメオスタシスおよび再生に重要な役割を果たしています。 5 -さらに、神経支配は、幹細胞の増殖、分化及び動員3の調節に関与します。実際には、口腔顔面複合体の組織で実現最近の研究は、上皮前駆細胞は唾液腺6,7の開発と再生中の機能のために副交感神経が必要であることを示しています。 11 -同様に、神経支配が味蕾8の開発及び維持のために必要であることが実証されています。したがって、このような歯のような他の重要な口腔顔面器官および組織の発達における神経支配のまだ無視役割を分析することが重要です。 大人の歯の豊富な神経支配にもかかわらず、ボディ、develo他のすべての臓器や組織とは対照的に、pingの歯は、最も初期の出生後の段階で神経支配され始めます。歯は口腔外胚葉および頭蓋神経堤由来の間葉間シーケンシャルと逆数の相互作用の結果として発生します。これらの相互作用は、それぞれ12、上皮由来エナメル芽細胞とエナメル質や象牙質の形成に関与している間葉由来の象牙芽細胞を生じさせます。 15 -上頸神経節から三叉神経節および交感神経からの感覚神経は大人の歯13を支配します。胚発生時には、神経線維は、現像歯胚に向けて三叉神経節プロジェクトから発せられると次第にそれらを囲むが、彼 ​​らは歯乳頭間葉13に浸透しません。神経線維は、象牙芽細胞分化と象牙質マトリックスの沈着16と相関より高度な発達段階に歯髄間葉を入力してください。歯髄神経支配はCOMPLですすぐに口腔13内の歯の噴火後にeted。 19 -これまでの研究では、様々なセマフォリンおよびニューロトロフィンは、歯牙16の間に神経支配の調節に関与することを明らかにしました。以前の研究は明らかに神経支配が魚20で歯の形成のための前提条件であることを実証しました。より最近の研究は、ソニックヘッジホッグ（SHH）21の分泌を介して感覚神経によって調節されるマウス切歯歯科間充織幹細胞の恒常性を示しました。 24 -それにもかかわらず、歯の開始、開発、再生中の神経支配の役割は、哺乳類22にまだ非常に論争です。 インビボ研究の過多は、様々な動物モデル13,25,26の開発および修復プロセス中に歯の組織の神経支配のパターンに関する重要な情報を提供しています。しかし、これらのほとんどは、アプロ痛みは、神経線維と標的器官と組織との間の相互作用の分子的基礎を強調するために最適ではありません。 29 -共培養は、制御され、隔離された環境26に神経線維と歯の間の相互作用を調査し、操作するための貴重な方法を構成しています。同時に、共培養は、種々の技術的な調整を受けます。 32 -例えば、神経および特定の歯の組織（ 例えば、歯髄、歯小嚢、歯科上皮）は、多くの場合、時間は30の長期間のための組織の生存を保証するために、異なる培地を必要とします。 29 -過去数十年間で、同じ培地を用いた従来の共培養は、感覚神経線維27の口腔および歯の組織を開発するの魅力や反発効果を調査するための非常に短い期間（ 例えば 、2日）のために行われています。しかし、培養期間の延長は、歯の形態形成および細胞分化における神経支配の影響を調査するために、および標的器官内の分岐神経線維の動態を研究するために必要とされます。したがって、非連続的な共培養は、神経、歯の組織の相互作用の研究を実行することがより適切であろう。 マイクロ流体システムは、適切な培養培地中のニューロンと異なる細胞型の共培養を可能にします。それらの標的組織33を含む区画に向かってマイクロチャネルを介して神経細胞体からの軸索の成長を可能にしながら、これらのデバイスでは、歯の組織およびニューロンは、異なる区画に分離されます。マイクロ流体デバイスは、すでにがんや血管新生35で細胞の相互作用へのニューロンとミクログリア34,35との間の相互作用、ならびに細胞を研究するために使用されてきました。さらに、これらのシステムは、ドースの間の相互作用を研究するために使用されていますアル根神経節および骨芽細胞36。 我々は最近、三叉神経節（TG）と歯が時間共培養した場合、マイクロ流体デバイス37での長期間生存することができることを実証しています。また、我々は、異なる発達段階から歯がこれらのin vitroの条件彼らは生体内 37 に示す三叉神経支配で同じ反発や魅力的な効果に維持することを実証しました。このプロトコルは、単純な強力かつ柔軟な方法する共培養神経節/神経と標的組織と制御され、隔離された環境でのこのような相互作用の特定の分子の役割を研究するための情報を提供します。

<table><tbody><tr><td>AXIS Axon Isolation Devices</td><td>Millipore</td><td>AX15010-TC</td><td>異なる長さのマイクロチャネルが利用可能</td></tr><tr><td>Laminin</td><td>Sigma Aldrich</td><td>L2020</td><td></td></tr><tr><td>Neurobasal</td><td>Gibco</td><td>21103-049</td><td></td></tr><tr><td>B27</td><td>Gibco</td><td>17504</td><td></td></tr><tr><td>組換えマウスβ-NGF</td><td>R&D Systems</td><td>1156-NG-100</td><td>ヒトおよびラット β-NGF (R&D Systems)は</td></tr><tr><td>、DMEM-F12</td><td>Gibco</td><td>11320-033</td><td></td></tr> と同等です</tbody></table>。

マイクロ流体共培養装置の使用歯胚神経支配の開発の分析

Analysis of Developing Tooth Germ Innervation Using Microfluidic Co-culture Devices

神経支配は、臓器や組織の発達、ホメオスタシスおよび再生に重要な役割を果たしています。しかし、これらの現象の根底にあるメカニズムはまだよく理解されていません。具体的には、歯の発生と再生における神経支配の役割は無視されます。 in vivo試験でのいくつかは、様々な動物モデルの開発および修復プロセス中に歯の組織の神経支配のパターンに関する重要な情報を提供しています。しかし、これらのアプローチのほとんどは、神経線維と標的器官と組織との間の相互作用の分子的基礎を強調するために最適ではありません。 共培養物を制御し、隔離された環境で神経線維と歯の間の相互作用を調査し、操作するための貴重な方法を構成しています。過去数十年間で、同じ培地を用いた従来の共培養物は、非常に短い期間に行われている（ 例えば 、2日）感覚神経線維上の口腔や歯の組織の開発の魅力や反発効果を調査します。しかし、培養期間の延長は、歯の形態形成と細胞分化の神経支配の影響を調査するために必要です。 マイクロ流体システムは、適切な培養培地中のニューロンと異なる細胞型の共培養を可能にします。我々は最近、三叉神経節（TG）と歯が長期間生存することができることを実証している時に共培養マイクロ流体デバイスで、それらは、これらの条件で、それらが生体内で示す同一の神経支配のパターンを維持します。 これに基づき、我々は単離する方法を説明し、共培養マイクロ流体共培養system.Thisプロトコルで三叉神経節と歯の細菌の開発は神経節/神経および標的組織培養共同すると役割を研究するために、シンプルで柔軟な方法について説明しますCONTRでこのような相互作用の特定の分子のolledと隔離された環境。

これらの結果は、単離された三叉神経節は、単離された歯の細菌の開発は、マイクロ流体デバイスの他の区画内の長期間持続すること、加えて、マイクロ流体デバイスの一の区画で成長し得ることを示します。異なる培地は、二つの区画で使用されると、2つの区画間マイクログルーブは、現像歯胚に向かって三叉神経節からの軸索の伸長を可能にする。 図3マウスの共培養において、免疫蛍光37を介して、神経フィラメントの視覚化を表します記載のマイクロ流体共培養系における胚の三叉神経節およびマウス胚性切歯。一貫して、三叉神経節からの軸索が多く10日間培養での開発歯胚によって廃止されている。図3（a）は、この中に軸索室の概要を示し、マウスの門歯は、in vivoでの開発時に神経支配されていません。<html>共培養系。 図3（b）及び（c）を示して軸索室とマイクロ畑内の神経突起の進行倍率。歯の細菌（または任意の共培養の器官または組織）は、組織学的染色のために、または遺伝子発現分析のため...

共培養は、神経と標的組織や臓器との間の相互作用を研究するための貴重な方法を表しています。マイクロ流体システムは、神経節と発生中の臓器または組織全体を異なる培養培地で共培養することができるため、ニューロンとその標的との間のクロストークのin vitro研究のための貴重なツールとなります。

Innervation plays a key role in the development, homeostasis and regeneration of organs and tissues. However, the mechanisms underlying these phenomena ...

この手順の全体的な目的は、発達中の三叉神経節と歯胚を単離し、共培養する方法を示すことです。まず、マイクロ流体デバイスの滅菌、マウント、およびコーティングを行います。次に、目的のマウスの特定の発生段階から三叉神経節と歯胚を摘出します。次に、三叉神経節と歯胚をマイクロ流体デバイスに配置し、共培養します。最終ステップとして、細胞を固定し、免疫蛍光染色を行います。最終的に、顕微鏡を用いて共培養の結果として得られた神経支配パターンを確認します。従来の共培養などの既存の手法に対する本手法の主な利点は、異なる臓器や組織を、それぞれに最適な培養液を用いて共培養できる点にあります。この手法は、歯の形成におけるさまざまな分子の役割や、歯の発生における形成の規則性など、人工的な形態形成の分野における重要な疑問を解決するのに役立ちます。まず、マイクロ解剖用ピンセットと鋏を含む解剖器具をオートクレーブで滅菌します。次に、24 mm × 24 mmのガラスカバースリップの一群を、1 Mの塩酸溶液に入れ、オービタルシェーカーを用いて37 °Cで24時間処理し、滅菌します。その後、カバースリップを滅菌蒸留水で3回洗浄し、続いて99%エタノールで3回すすぎます。滅菌フローフード内で乾燥させ、乾燥後、フードのUVライトを30分間点灯させます。その後、使用時までカバースリップを70%エタノール中で保存します。次に、滅菌済みピンセットを使用して、軸索分離マイクロ流体デバイスをパッケージから慎重に取り出し、滅菌済みの1mmバイオプシーパンチを用いて、滅菌済みペトリ皿に配置します。培養チャンバーに対応するように、サンプル1つにつきデバイスに1つの穴を開けます。圧力によってマイクログルーブが損傷する可能性があるため、その近くをパンチしないように注意してください。次に、デバイスを70% ethanolに浸して滅菌します。その際、内部に空気が残らないように注意してください。次に、デバイスをエタノールから取り出し、無菌フローフード内で完全に乾燥させます。同様に、カバーガラスを70% ethanol溶液から取り出し、無菌フローフード内で乾燥させます。次の工程に進む前に、最低3時間待ちます。各カバーガラスを6ウェルプレートの各ウェルに入れます。次に、マイクロ流体デバイスをカバーガラスの上に置き、ピンセットで優しく、かつしっかりと押し付けて、分離デバイスとガラスカバーガラスを完全に密着させます。続いて、各培養チャンバーに0.1 mg/mLのポリDリシンを150 µLずつピペットで分注します。次に、マイクロ流体デバイスを5分間真空状態に置き、チャンバー内からすべての空気を除去します。チャンバー内にまだ空気が見られる場合は、ポリDリシン溶液を再度チャンバーに注入してください。デバイスをpoly-D-lysineとともに37°Cで一晩インキュベートし、翌日に、チャンバーを滅菌蒸留水で3回洗浄します。次に、5 µg/mLのlaminワーキングソリューション150 µLをチャンバーに満たし、37°Cで一晩インキュベートします。続いて、付随するテキストプロトコルに従い、三叉神経節および歯胚培養用の培地を調製します。解剖エリアと実体顕微鏡を 70% ethanol で清掃し、安楽死させたマウスの解剖器具を準備します。胚ステージが E 14.5 から E 17.5 のpregnant mouse の下腹部周囲の皮膚を切り開きます。その後、ハサミを使用して慎重に腹腔を開きます。子宮を特定して摘出し、氷を満たしたチューブに入れます。冷えたPBSを用いて胚を剥離し、氷冷PBSを満たした新しいシャーレに個別に移します。すべての胚を胚外組織から取り出した後、はさみを用いて脱頭します。マイクロダイセクション用ハサミを用いて、三叉神経節を傷つけないように注意しながら、下顎を頭部の残りの部分から分離します。次に、頭部を取り出し、冷却した解剖用ガラスシャーレの上に置きます。ピンセットを使用して、皮膚と頭蓋骨を除去します。次に、鉗子を頭部に差し込み、持ち上げます。頭部と小脳を取り出すには、三叉神経節を特定し、鉗子と解剖針を用いて三叉神経節を三叉神経から分離して、神経節を洗浄します。解剖針をナイフとして使用し、冷PBS中で保存します。舌と顎周囲の皮膚を取り除きます。顎の中央線に沿って切開し、左側と右側の半顎を分離します。次に歯胚を確認し、解剖針を用いて単離します。三叉神経節と歯胚の解剖後、マイクロ流体デバイスからラミニンを除去し、各チャンバーにそれぞれの培地を200 microliters充填します。ピンセットを用いて、摘出した三叉神経節と歯胚をバイオプシーパンチで作成した穴に慎重に移植します。このとき、歯胚が浮いていないことを確認し、カバーガラスに接触するまで沈ませてください。サンプルを37°C、5% CO2のインキュベーター内で培養します。培地を交換するため、10日間にわたり48時間ごとに培養液を交換します。まず、ピペットをウェルの外側に向けて培地を除去します。次に、培養期間中、チャンバーとは反対側のウェル壁面に、あらかじめ温めておいた新鮮な培地を添加します。光学顕微鏡を用いて、任意のタイミングで共培養系のイメージングを行います。培養期間終了後、各チャンバーのウェルに150 µLのPBSをピペッティングし、PBSをチャンバー内に流して洗浄します。最後の洗浄を含め、計3回洗浄を繰り返します。PBSを除去し、各チャンバーの1つのウェルに4%パラホルムアルデヒド（PBS溶液）を150 µLピペッティングして別のチャンバーへ流し込むことで、サンプルを固定します。デバイスを室温で15分間インキュベートします。その後、チャンバーをPBSで2回洗浄し、免疫蛍光染色やアウトグロースのイメージングなどのさらなる解析に進みます。共培養において、三叉神経節からの神経突起は培養コンパートメントから分枝し、発達中の歯胚に向かって伸展します。高倍率で観察すると、マイクロ流体デバイス内の軸索チャンバーおよびマイクログルーブを通って伸展する神経突起を確認できます。神経成長の経過を時間経過とともに追跡することで、神経支配の発達過程を記述することが可能です。この手順の後、例えば、導入後の標的組織における遺伝子発現やタンパク質分泌の変化を調べるために、RNA解析やタンパク質分析などの他の手法を実施することができます。

analysis-developing-tooth-germ-innervation-using-microfluidic-co

Research

JoVE Journal

Neuroscience

神経科学

この研究では、神経細胞の軸索と小説（ASTRO）グリア共培養プラットフォームをセットアップする手順について説明します。この共培養系では、単一の軸索（と単一神経膠細胞）との間の直接的な相互作用の操作は、グリアシグナリング相互ニューロンのメカニズム解析を可能にすることが可能となる。...

マイクロ流体文化·プラットフォーム（MCP）ベースの神経軸索とグリア共培養系におけるグリア相互作用へのニューロンのイメージング解析

マイクロ流体デバイスを使用して神経筋接合部の形成を実演しています。神経前駆細胞と筋前駆細胞は、デバイス内の異なるウェルに播種され、それぞれ運動ニューロンと筋管に成熟するまで放置されます。体積と化学的勾配の生成は、活動的な神経筋接合部の発達につながります。...

マイクロ流体デバイスを用いた神経筋接合部の生成

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歯髄細胞と三叉神経細胞の共培養を確立し、クロスコミュニケーションを実現

このビデオは、歯の胚芽パルプと三叉神経節の間の相互作用を研究するためのマイクロ流体デバイスの使用を示しています。マイクロ流体デバイス内の組織の配置を示し、デバイスのマイクログルーブを介して歯の胚芽に向かっている三叉神経突起の成長を詳細に視覚化します。さらに、歯の胚芽髄への神経突起伸展を促進または阻害する歯由来の分子因子の役割を強調しており、これは出生後の効率的な歯の神経支配を確保するために重要です。...

マイクロ流体共培養システムを用いた歯胚芽と三叉神経節の相互作用の解析

このビデオは、多電極アレイを備えたマイクロ流体デバイスを使用して、hiPSC由来の皮質グルタミン酸作動性ニューロンと神経膠腫細胞の共培養におけるニューロンの電気的活動の評価を示しています。...

共培養におけるグルタミン酸作動性ニューロンと神経膠腫細胞の相互作用の評価

ここでは、詳細な組織チョッパーを用いて下顎骨のスライスにおける培養歯胚へのメソッド。この方法は、より伝統的な培養法を用いて、利用できない、操作および系統の追跡のための素晴らしい機会を提供し、開発中に歯に固有のアクセスを許可します。...

外植片培養での歯胚の開発に続いてのためのスライス培養法

生体材料コーティングのチップ内のプラズマパターニングのための単一ニューロンマイクロ流体アレイ化と水のマスキングのためのプロトコルが記載されている。高度に相互接続された共培養細胞は、最小限の入力を用いて調製することができる。...

単セルの精度で神経共培養の調製

我々は、トランスウェルフィルター上に培養された三叉(TG)ニューロンを用いた歯科パルプ(DP)一次細胞の分離、分散およびめっきについて述べた。DP細胞の細胞応答は、免疫蛍光またはRNA/タンパク質分析で分析することができる。共焦点顕微鏡を用いた神経細胞マーカーの免疫蛍光は、神経突起の成長応答の解析を可能にする。...

歯髄パラクリン信号に反応した神経突起の成長を研究する共培養法

トロウェル型臓器培養法は、歯の発達を支配する複雑なシグナル伝達ネットワークを解明するために使用され、最近では、継続的に成長するマウス切歯の幹細胞に関与する調節を研究するために使用されています。蛍光レポーター動物モデルとライブイメージング法は、歯科幹細胞とその特定のニッチ微小環境の詳細な分析を容易にします。...

歯科幹細胞の制御を研究するためのトロウェル型臓器培養の使用

最近の研究では、高等度の小児神経膠腫(pHGG)細胞とそれらの相互相互作用に対する神経細胞の影響を明らかにする。本研究は、イン ビトロ...

グルタミン酸ニューロンと小児の高品位グリオーマ細胞の微小流体デバイスへの共培養による電気的相互作用の評価

neuroHuMiXは、近位および代表的な共培養条件下での細菌、上皮細胞、および神経細胞の相互作用を研究するための高度なガットオンチップモデルです。このモデルにより、腸内細菌叢と神経系の間のコミュニケーションの根底にある分子メカニズムを解明することができます。...

腸内細菌叢-神経系軸を研究するためのGut-on-a-chipモデル

学ぶマイクロ流体共培養法を用いた三叉神経節と歯胚の分離培養技術。マウス胎生期組織を用いて神経支配パターンを可視化し、神経と標的組織の相互作用を解析する発生生物学研究に応用できます。

マイクロ流体共培養装置の使用歯胚神経支配の開発の分析

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