Name: 修正されたMicroSecureガラス化：人間の胚盤胞のための、安全なシンプルで非常に効果的な凍結保存手順 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-03-02T12:30:00.000+00:00
Duration: 9 min 35 s
Description: 学ぶ 人間胚盤胞のガラス化保存法。FDA承認品を用いた閉鎖系で技術的ばらつきを排除し、99.9%以上の胚回収率と95%以上の生存率を達成。生殖医療の現場で再現性の高い優れた臨床成績を実現する。

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

MC Schieweは、毎年恒例のCDCとSARTデータを分析し、評価する上で彼の統計的な専門知識のためにラスベガスの不妊センターで氏の森ガーナーに感謝したいと思います。また、著者らは、当社の技術力と専門知識の彼の専用サポートと信仰のために、彼らのメディカルディレクター、ロバートE.アンダーソンに感謝したいです。

<ol><li>Edgar, D. H., Gook, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+critical+appraisal+of+cryopreservation+%28slow+cooling+versus+vitrification%29+of+human+oocytes+and+embryos%5BTitle%5D)+AND+%22Hum.+Reprod.+Update%22%5BJournal%5D)">A critical appraisal of cryopreservation (slow cooling versus vitrification) of human oocytes and embryos.</a> Hum. Reprod. Update. 16, 536-554 (2012).</li>
<li>Schiewe, M. C., Whitney, J. B., Anderson, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Potential+risk+of+monochorionic+dizygotic+twin+blastocyst+formation+associated+with+early+laser+zona+dissection+of+group+cultured+embryos%5BTitle%5D)+AND+%22Fertil.+Steril%22%5BJournal%5D)">Potential risk of monochorionic dizygotic twin blastocyst formation associated with early laser zona dissection of group cultured embryos.</a> Fertil. Steril. 103, 417-421 (2015).</li>
<li>Schiewe, M. C. <a target="_blank" href="https://www.researchgate.net/publication/301673333_The_Historic_Development_and_Incorporation_of_Four_Assisted_Reproductive_Technologies_Shaping_Today's_IVF_Industry">The historic development and incorporation of four assisted reproductive technologies shaping today's IVF industry.</a> J. Fertil. In Vitro Reprod. Med. Genet. 4, 2-9 (2016).</li>
<li>Rall, W. F., Fahy, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ice-free+cryopreservation+of+mouse+embryos+at+-196+degrees+C+by+vitrification%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Ice-free cryopreservation of mouse embryos at -196 degrees C by vitrification.</a> Nature. 313, 573-575 (1985).</li>
<li>Rall, W. F., Wood, M. J., Kirby, C., Whittingham, D. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+mouse+embryos+cryopreserved+by+vitrification%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Reprod.+Fertil%22%5BJournal%5D)">Development of mouse embryos cryopreserved by vitrification.</a> J. Reprod. Fertil. 80, 499-504 (1987).</li>
<li>Schiewe, M. C., Rall, W. F., Stuart, L. D., Wildt, D. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analysis+of+cryoprotectant%2C+cooling+rate+and+in+situ+straw+dilution+using+conventional+freezing+or+vitrification+for+cryopreserving+sheep+embryos%5BTitle%5D)+AND+%22Theriogenology%22%5BJournal%5D)">Analysis of cryoprotectant, cooling rate and in situ straw dilution using conventional freezing or vitrification for cryopreserving sheep embryos.</a> Theriogenology. 36, 279-293 (1991).</li>
<li>Lane, M., Schoolcraft, W. B., Gardner, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vitrification+of+mouse+and+human+blastocysts+using+a+novel+cryoloop+container-less+technique%5BTitle%5D)+AND+%22Fertil.+Steril%22%5BJournal%5D)">Vitrification of mouse and human blastocysts using a novel cryoloop container-less technique.</a> Fertil. Steril. 72, 1073-1078 (1999).</li>
<li>Mukaida, T., Oka, C., Goto, T., Takahashi, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Artificial+shrinkage+of+blastocoeles+using+either+a+micro-needle+or+a+laser+pulse+prior+to+the+cooling+steps+of+vitrification+improves+survival+rate+and+pregnancy+outcome+of+vitrified+human+blastocysts%5BTitle%5D)+AND+%22Hum.+Reprod%22%5BJournal%5D)">Artificial shrinkage of blastocoeles using either a micro-needle or a laser pulse prior to the cooling steps of vitrification improves survival rate and pregnancy outcome of vitrified human blastocysts.</a> Hum. Reprod. 21, 3246-3252 (2006).</li>
<li>Kuwayama, M., Vatja, G., Ieda, S., Kato, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+open+and+closed+methods+for+vitrification+of+human+embryos+and+elimination+of+potential+contamination%5BTitle%5D)+AND+%22Reprod.+Biomed.+Online%22%5BJournal%5D)">Comparison of open and closed methods for vitrification of human embryos and elimination of potential contamination.</a> Reprod. Biomed. Online. 11, 608-614 (2005).</li>
<li>Vanderzwalmen, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Births+after+vitrification+at+morula+and+blastocyst+stages%3A+effect+of+artificial+reduction+of+the+blastocoelic+cavity+before+vitrification%5BTitle%5D)+AND+%22Hum.+Reprod%22%5BJournal%5D)">Births after vitrification at morula and blastocyst stages: effect of artificial reduction of the blastocoelic cavity before vitrification.</a> Hum. Reprod. 17, 744-751 (2002).</li>
<li>Schiewe, M. C. Quality control factors influencing the successful and reliable implementation of oocyte and embryo vitrification. <a target="_blank" href="http://www.intechopen.com/books/cryopreservation-in-eukaryotes/quality-control-factors-influencing-the-successful-and-reliable-implementation-of-oocyte-and-embryo-">Cryopreservation</a>. Marco-Jiménez, F., AkdemirKoç, H. , 1st Ed, InTech. Rijeka, Croatia. (2016).</li>
<li>Stachecki, J. J., Garrisi, J., Sabino, S., Caetano, J. P. J., Wiemer, K., Cohen, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+new+safe%2C+simple%2C+and+successful+vitrification+method+for+bovine+and+human+blastocysts%5BTitle%5D)+AND+%22Reprod.+Biomed.+Online%22%5BJournal%5D)">A new safe, simple, and successful vitrification method for bovine and human blastocysts.</a> Reprod. Biomed. Online. 17, 360-367 (2008).</li>
<li>Panagiotidis, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Open+versus+closed+vitrification+of+blastocysts+from+an+oocyte-donation+programme%3A+a+prospective+randomized+study%5BTitle%5D)+AND+%22Reprod.+Biomed.+Online%22%5BJournal%5D)">Open versus closed vitrification of blastocysts from an oocyte-donation programme: a prospective randomized study.</a> Reprod. Biomed. Online. 26, 470-476 (2013).</li>
<li>Papatheodorou, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Open+versus+closed+oocyte+vitrification+system%3A+a+prospective+randomized+study%5BTitle%5D)+AND+%22Reprod.+Biomed.+Online%22%5BJournal%5D)">Open versus closed oocyte vitrification system: a prospective randomized study.</a> Reprod. Biomed. Online. 26, 595-602 (2013).</li>
<li>Schiewe, M. C., Zozula, S., Anderson, R. E., Fahy, G. M. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/?term=Validation+of+microSecure+vitrification+(%26%23181%3BS-VTF)+for+the+effective+cryopreservation+of+human+embryos+and+oocytes">Validation of microSecure vitrification (µS-VTF) for the effective cryopreservation of human embryos and oocytes.</a> Cryobiology. 71, 264-272 (2015).</li>
<li>Schiewe, M. C. MicroSecure vitrification for oocytes and embryos: optimum simplicity, security and cost and effectiveness combining FDA-approved products. J. Clin. Embryol. 13, 33-51 (2010).</li>
<li>Rall, W. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Factors+affecting+the+survival+of+mouse+embryos+cryopreserved+by+vitrification%5BTitle%5D)+AND+%22Cryobiology%22%5BJournal%5D)">Factors affecting the survival of mouse embryos cryopreserved by vitrification.</a> Cryobiology. 24, 387-402 (1987).</li>
<li>Seki, S., Mazur, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+warming+rate+on+the+survival+of+vitrified+mouse+oocytes+and+on+the+recrystallization+of+intracellular+ice%5BTitle%5D)+AND+%22Biol.+Reprod%22%5BJournal%5D)">Effect of warming rate on the survival of vitrified mouse oocytes and on the recrystallization of intracellular ice.</a> Biol. Reprod. 79, 727-737 (2008).</li>
<li>Schiewe, M. C. General hygiene and quality control practices in an embryo-production laboratory. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aSchiewe%2C+MC+%22Manual+of+the+International+Embryo+Transfer+Society%3A+A+Procedural+Guide+and+General+Information+for+the+Use+of+Embryo+Transfer+Technology%2C+Emphasizing+Sanitary+Precautions%22">Manual of the International Embryo Transfer Society: A Procedural Guide and General Information for the Use of Embryo Transfer Technology, Emphasizing Sanitary Precautions</a>. Stringfellow, D. A., Givens, D. , 3rd Ed, International Embryo Transfer Society. Champaign, IL. (2008).</li>
<li>Whitney, J. B., Nugent, N. L., Anderson, R. E., Schiewe, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Single+center+validation+of+routine+blastocyst+biopsy+implementation%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Asst.+Reprod.+Genet%22%5BJournal%5D)">Single center validation of routine blastocyst biopsy implementation.</a> J. Asst. Reprod. Genet. , (2016).</li>
<li>Liebermann, L., Conaghan, J. <a target="_blank" href="http://embryologists.com/jce161-artificial-collapse-prior-blastocyst-vitrification/">Artificial collapse prior blastocyst vitrification: improvement of clinical outcomes.</a> J. Clin. Embryol. 16, 107-118 (2014).</li>
<li>Parmegiani, L., Tatone, C., Cognigni, G. E., Bernardi, S., Troilo, E., Arnone, A., Maccarini, A. M., Di Emidio, G., Vitti, M., Filicori, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+warming+increases+survival+of+slow-frozen+sibling+oocytes%3A+a+step+towards+a+single+warming+procedure+irrespective+of+the+freezing+protocol%5BTitle%5D)+AND+%22Reprod+Biomed+Online%22%5BJournal%5D)">Rapid warming increases survival of slow-frozen sibling oocytes: a step towards a single warming procedure irrespective of the freezing protocol.</a> Reprod Biomed Online. , (2014).</li>
</ol>

MC Schieweは、革新的なクライオ企業への科学諮問委員会のメンバーとして、カリフォルニア精子バンクにテクニカルディレクターとして働きます。このビデオ記事の生産は大喝采豊饒によって支払われています。著者には、競合する金融契約または配偶子および胚のガラス化に関する開示する利害の衝突を持っていません。

今日では、完全な胚盤胞の生存率（&gt; 95％）を達成し、新鮮胚のと同様の移植の成功を達成するための高い期待があります。いくつかのグループには、ガラス固化体胚移植サイクルの出生率は、無傷の凍結保存した胚は、健康な、非ホルモンで刺激された子宮に移植された新鮮胚盤胞よりもさらに高い、おそらくあることを示唆しています。我々のデータは明らかにガラス化が効果的かつ確実に新鮮胚の生存率を維持していることを示しています。さらに、我々は、無菌ことを証明した、MicroSecureガラス化（μS-VTF）と呼ばれる閉じた方法は、に匹敵するか、IVF産業で使用される市販の標準（ すなわち、オープンデバイス・システム）以上の最適な結果を達成することができます。 バリエーションは、ガラス化デバイス/多数の方法を使用して、個人間の技術的な再現性と信頼性に関連しています。今度は、これはinconsiをもたらしましたガラス化を適用するプログラム間stencies。したがって、デバイスの親しみは、実験室での習熟度と成功の成果に関する重要な要因であることは驚くべきことではありません。これは、プログラム間の再現性が問題となり得る理由を説明し、「技術的な署名」11のこの概念です。ダース以上の商業機器の開発は、この現象を複雑にするだけでなく、品質管理上の問題を作成していました。幸いなことに、μS-VTF、ラピッドIのように、ガラス化システムを閉じ、そしてVitriSafeは、今のデバイス・システム12、13、14を開くことが同等に有効であることが証明されています。 MicroSecure VTFは心の中で技術的な使いやすさ、信頼性、およびクライオセキュリティで開発された小説、無菌ガラス化技術です。 2以前に承認され、FDAに準拠したデバイスの使用を組み合わせることにより、非商用のガラス固化システムワットであります特殊なデバイスとは対照的に、確立された低コストを有することの明確な利点第i。また、独自の改竄防止や内在化2色ラベリングシステムと同様に、多数の他の品質管理の利点は、作ったμS-VTF魅力的なグローバルオプション11。非商用VTF装置として、しかし、その広範な業界のアプリケーションがゆっくりと進化しています。のみ、その安全性、セキュリティ、および臨床有効性の継続的な出版物を通じて利用をμS-VTFゲイン成長します。 インナー、非ウィッキング疎水性プラグで製造オリジナルの0.3-mLの胚のストローを取得することができないことに直面したときに2014年8月では、我々は確実にμS-VTF方法を変更することができました。要するに、彼らの綿-PVPプラグを持つ新しい0.3 mLの精液/胚のストローを効果的に適合させました。これは、単にこのように接触し、流体ウィッキングを防止し、綿栓の前に内部シールを作成することによって達成されましたオープンエンドVTFの先端（ すなわち、胚や卵を含むflexipette）。 40 mmのIDロッドはアクセスできない場合はさらに、軽く30 mmの棒に関連付けられている浮力の問題は、2つのボールベアリングを使用してcounterweightedすることができます。 これらの追加の手順は、技術がわずかに少ないシンプル作ったが、まだ非常に効果的です。その正倍数性状態は、遺伝学のレポートで確認されるまで、生検の胚盤胞は、典型的には、個別にガラス化しているように今日では、経済性と有効性は、ますます重要な関心事になっています。確認された非生存異数性のステータスを持つ胚盤胞は、通常、数週間以内に、患者の同意を得て、破棄されます。したがって、VTFデバイスの大部分（&gt; 50％）は、商用デバイスを使用する場合にエスカレート年間コストを引き起こし、短期保管後に廃棄されます。全体的に、μS-VTFは、人間の胚盤胞の凍結保存のために、非常に効果の高い信頼性、および反復可能な手順です。優れた品質・制御設計securelyのラベルや安全に回復の障害を排除し、胚のガラス化への普遍的なアプローチとして、システムの使用を正当化後の温暖化の生存および生存度を、最適化しながら、胚/卵母細胞を格納します。

ガラス化は、細胞質内精子注入の開発以来、 体外受精（IVF）業界で単一の最も影響力の生殖補助技術です。今日では、胚盤胞は、以前に、従来の低速凍結方法1に関連付けられた胚の生存率の損失なしに凍結保存します。信頼性の高いポスト温暖化胚の生存と、不妊の業界は、従来の新鮮胚移植よりも同等以上の妊娠の転帰をもたらす凍結保存した胚移植サイクルの好ましい使用に転換されます。胚盤胞の生検および着床前遺伝子スクリーニング（PGS）との関連では、ガラス化が正倍数体の単一胚移植2、3を介して健康的な出生の成果を最適化するために不可欠な臨床ツールとなっています。 マウス胚のガラス化は、1980年代半ば4で開発されました</SUP&gt; 5年と1990年6により畜産に適応。ガラス化溶液は、氷結晶形成を損傷のない、準安定glasseous状態を形成することを前提に基づいて、より効率的に胚の完全な細胞の完全性を維持することが証明されています。興味深いことに、ヒトの発生学へのガラス化の有望な受け入れは、21世紀までに実現することを開始しませんでした。ガラス化の利用を促進する初期の刊行物は、ユニークな「オープン」システム・デバイス7、8、9の開発と一致しました。それは遅い胚盤胞の凍結の改善にも発生した時に来たとしてしかし、臨床診療へのガラス化の採用は、遅かったです。成功し、従来の遅い速度の凍結は、ガラス化に加えて、だけでなく、incorporatで、胚培養システムの改善と整列させましたその後、栄養外胚葉の両方の全体的な生存を強化し、胞胚-崩壊のアプローチのイオン、注入10。 最後の10年間で、ガラス固化技術が急速に従来の凍結慣行に取って代わりました。大幅に、これは特殊なガラス化デバイスの開発によるものでした。これらのデバイスのいくつかは、IVF産業11内で使用されているデバイスに固有の設計上の欠陥を導入することにより、臨床ガラス化の全体的な安全性、効率性及び有効性をハンディいます。実際に、異なるデバイスのニュアンスは、一般に「技術的な署名」12と呼ばれるプログラム間の重要な技術的変化を、ご紹介します。このように、科学雑誌は、可視化実験のジャーナル（Joveの）のように、結果のばらつきを低減するのに役立ちます技術的な詳細を、実証するための貴重な資源としての役割を果たすことができます。もう一つの継続的な問題は、sであります青梅胎生学者は、「オープンガラス化システム」における胚または卵母細胞の「超急速冷却（液体窒素（LN 2）を持つ、すなわち、直接胚の接触は）最適化するための前提条件であるという主張に基づいて、今日でも、誤解され続け成功率。」明らかに、この信念は、無菌の実証済みの成功に基づいて、不正確であるシステム13、14、15を閉じました。 ガラス化のcryobiological原理に基づいて、ガラス化の効果は速度16、17、18の冷却に比べて温暖化レートに、より大きく依存します。一般に、使用されるガラス化装置の独立した、加温速度は、高い生存率を保証するために冷却速度を超えなければなりません。高い温暖化率は、任意の氷の成長（ すなわち、recrの機会を最小限に抑えます温暖化の失透フェーズ中にクライオソリューション）中の有核の不純物のystallization。確かに、ガラス化溶液（ すなわち、タイプおよび使用される凍結保護剤の濃度）の安定性は、交絡効果を有することができるが、これは別のパブリケーション11で対処されています。冷却加温速度の問題を考慮すると、MicroSecureガラス化（μS-VTF）ガラス化の品質管理の側面を最適化し、安価な、非商用、FDA準拠法として2008年に開発されました。それは、耐タンパ性を、内在化、二重色の標識を提供していることで独特でした。さらに、ロードおよびピペッティングのために使用される滅菌flexipetteに直接胚を保存する（ すなわち、二次デバイス表面にピペッティングせず）によると、完全に溶接シールが自動化されたシーラーを使用して、アイオノマー樹脂製のストローを使用することにより、技術的な変動が効果的に除去されています。 Cを評価する場合潜在的な使用のためのガラス固化装置のompleteness、などの考慮すべきであるいくつかの品質管理の要因がある：1） 標識化の可能性 -CANラベルが確実に接着させることは？彼らは不正開封防止していますか？彼らは、デュアル色識別の可能性を提供していますか？それは、二次ラベルを必要としない、とラベルは簡単に記録保持の目的のために取り外すことができる（ すなわち、患者確認）後の温暖化？ 2） 技術的な使いやすさ -CAN胚は簡単にタイムリーにデバイスに/にロードされ、簡単に識別され、後の温暖化を追跡することが？ 3） 手続きシンプルさ/再現性は、技術者（内部）とプログラム（外部）間の変動を最小限に抑えることが容易に再現することが可能ガラス化法オファーシンプルさと信頼性を、-Does？ 4）LN 2の記憶容量を容易にかつ安全に取り扱われ、識別されるデバイスをれる-CAN？そのSTOです効率的な潜在的な空間を激怒？無菌閉鎖システムなどの物理的な損傷または可能な汚染物質からのデバイスのオファーのセキュリティと安全性をしていますか？ 5） 回復の可能性/耐障害 -Isデバイス胚の保証回復における潜在的な問題になりやすいデザイン、そして、彼らは確実にガラス化し、完全な細胞の完全性ポスト温暖化を維持するのだろうか？後者は特定の品質上の問題、回収率は、実際には、驚くべきことに公表された報告に最小化されています。これは、一般に、典型的に、良好な生存率の不利な結果（ すなわち、失われた胚または卵子を）隠すことによって行われます。一貫性のない回復（&lt;99％）になりやすい任意のデバイスは真剣に欠陥があると手続き負債を構成しています。 私たちの無菌は、μS-VTF方法は戦略的に各品質管理対策を考慮して開発された閉じました。しかし、優れた臨床的成功と検証14の5年後、手続きはトンを持っていましたO修正すること。 （疎水性プラグを有する）元の0.3-mLの胚のストローは、IVF業界から除去し、標準的な綿/ PVP栓を有する0.3-mLの精液ストロー（ すなわち、精液/胚のストローとして再度ラベル付け）に置き換えられました。この手続き論文では、安全に、簡単に、かつ効果的μS-VTFを実装するために必要な具体的な手順と戦略の概要を説明します。代替理想的なわらのコンテナが臨床検査室に戻って再導入されるようにさらに、我々はそのような時間まで、確実に供給制限を考慮するために必要な修正（複数可）をハイライト表示します。

<table><tbody><tr><td>アルミケーン</td><td>IVM</td><td>XC055</td><td></td></tr><tr><td>ボールベアリング、3/32"</td><td>VXB.com</td><td>KIT15977</td><td>ステンレス鋼</td></tr><tr><td>CBS精液/胚ストロー、0.3 mL</td><td>CryoBioSystems</td><td>25292</td><td>個別滅菌</td></tr><tr><td>カラー、IDロッド、30 mm</td><td>CryoBioSystems</td><td>019021-26</td>加<td>重</td></tr><tr><td>培養チューブ、15 mL</td><td>Falcon</td><td>352099</td><td>Conical</td></tr><tr><td>培養チューブ、10 mL</td><td>Falcon</td><td>352057</td><td>Snap-cap</td></tr><tr><td>Cryosleeves</td><td>Nalgene</td><td>5016-001</td><td></td></tr><tr><td>Filter、250 mL</td><td>Fisher Sci.</td><td>09-740-2A</td><td>0.22 & ミュー;m</td></tr><tr><td>フラスコ、組織培養 50 mL</td><td>Falcon</td><td>353014</td><td></td></tr><tr><td>Flexipettes、300 &mu;m ID</td><td>クックメッド。</td><td>K-FPIP-1300-10BS-5</td><td>滅菌、20/パック</td></tr><tr><td>鉗子、大型</td><td>Miltex</td><td>6-30TC</td><td></td></tr><tr><td>鉗子、スプリンター - ファイン</td><td>Miltex</td><td>17-305</td><td></td></tr><tr><td>ゴブレット</td><td>IVM</td><td>PA003</td><td></td></tr><tr><td>ヒートシーラー、SYMS 1</td><td>CryoBioSystems</td><td>16399</td><td>110 V または 220 V アダプター付き</td></tr><tr><td>Hepes-buffered media&nbsp;</td><td>Life Globalまたは</td><td>LGGH-100; 100&nbsp;mL、または</td><td>2〜8&ordmで保存。C</td></tr><tr><td></td><td>Irvine Scientific</td><td>H-HTF; 90126; 100 mL</td><td>with non-essential AA's</td></tr><tr><td>Labels, Cryo</td><td>GA International</td><td>CL-23T1</td><td>Various colors</td></tr><tr><td>Liquid Nitrogen Tank, 40&nbsp;L</td><td>MVEまたはテイラーウォートン</td><td>各種</td><td>液体貯蔵&nbsp;</td></tr><tr><td>LN<サブ>2</サブ>;デュワーフラスコ、0.5&nbsp;L</td><td>ハンプトン リサーチ</td><td>HR4-695</td><td>ステンレス鋼</td></tr><tr><td>6 ウェル カスター ディッシュ</td><td>バイオジェニックス</td><td>015/020</td><td>プラスチック製品 ケース別</td></tr><tr><td>ピペット バルブ、マイクロ キャップ</td><td>ドラモンド</td><td>フィッシャー #13681451</td><td>バルブ アペ</td></tr><tr><td>ックス ペトリ ディッシュの穴、35 mm</td><td>ファルコン</td><td>351006</td><td></td></tr><tr><td>ペトリ ディッシュ、58 mm</td><td>ナンク</td><td>150288</td><td></td></tr><tr><td>ペトリ ディッシュ、100 mm</td><td>ファルコン</td><td>351029</td><td></td></tr><tr><td>ピペットチップ、ARTロング</td><td>フィッシャーサイ。</td><td>02-707-80</td><td>10 - 100 &L</td></tr><tr><td>Pipet Aid</td><td>Drummond or Falcon</td><td>各種</td><td>充電式</td></tr><tr><td>ピペッティング装置、Stripper</td><td>Cooper Surgical</td><td>MXL3-STR</td><td></td></tr><tr><td>Pipettes、Serological 1&nbsp;mL</td><td>Falcon</td><td>357521</td><td></td></tr><tr><td>Pipettes, Serological 2&nbsp;mL</td><td>Falcon</td><td>357507</td><td></td></tr><tr><td>Pipettes, 血清学 5&nbsp;mL</td><td>Falcon</td><td>357543</td><td></td></tr><tr><td>Pipettes, 血清学 10&nbsp;mL</td><td>Falcon</td><td>357551</td><td></td></tr><tr><td>はさみ、外科用メイヨー</td><td>ミルテックス</td><td>5-SC-16</td><td></td></tr><tr><td>実体顕微鏡</td><td>ニコン、オリンパス、ライカ</td><td>各種</td><td></td></tr><tr><td>滅菌ガーゼパッド、4インチ x 4インチ</td> <td>Kendall Healthcare</td><td>6939</td><td></td></tr><tr><td>合成血清</td><td>Life Global、または</td><td>LGPS-20; 20 mL、または</td><td>2 - 8 & ordm;C</td></tr><tr><td></td><td>Irvine Scientific</td><td>SS-99193; 12 x 10 mL</td><td>低エンドトキシンロット購入</td></tr><tr><td>スクロー</td>ス <td>シグマ ケミカル Co.</td><td>#S9378</td><td>アリコートを50に&nbsp;mLフラスコ、1年; 
17.1 g/フラスコ + ミディアムから 50 mL; 
1 Mソリューションを作成します。 
0.22&microのフィルター。mユニット</td></tr><tr><td>タイマー</td><td>ナルゲン</td><td>5016-001</td><td></td></tr><tr><td>解凍液</td><td>イノベーティブ クライオエンタープライズ</td><td>BL-TS (&le;1.0 m ショ糖)</td><td>T1, T2, T3, T4; 2 - 8 & ordm;&leのC</td></tr><tr><td>ガラス固化ソリューション*</td>開設から1ヶ月後、**<td>Innovative Cryo Enterprises</td><td>BL-VS (&ge;7.9 M [グリセロール/EG])</td><td>V1, V2, V3; 2 - 8 & ordm;&leのC開封後1ヶ月</td></tr><td colspan="4">* 非浸透性の凍結保護添加剤には、ショ糖、フィコール、ヒアルロン酸ナトリウムが含まれます&nbsp;<tr></td></tr><tr><td colspan="4">** その他の市販の調製物は、典型的にはエチレングリコール (EG)/ジメチルスルホキシド (DMSO; 30% v/v; 4.8 M) ですが、EG/プロピレングリコール (32% v/v; 5.2 M) の場合もあります。混合溶液は通常、高モル溶液の凍結毒性の懸念を軽減するために使用されます。商用ソリューションには、通常、ES ソリューションと VS ソリューションが含まれます。市販の調製物の配合は、典型的には専有財産である。</td></tr></tbody></table>

修正されたmicrosecureガラス化：人間の胚盤胞のための、安全なシンプルで非常に効果的な凍結保存手順

Modified MicroSecure Vitrification: A Safe, Simple and Highly Effective Cryopreservation Procedure for Human Blastocysts

臨床胚ガラス化は、「オープン」システム（ すなわち、直接LN 2接点）での超急速冷却がガラス化の成功を最適化するために必要であったことを21世紀のユニークなガラス化装置の開発をし、誤解と進化しました。冷却速度の重要性を取り巻くドグマは、重要な品質制御因子（ 例えば、使いやすさ、再現性、信頼性、ラベリングセキュリティ、およびストレージの安全性を）無視技術的変化へとガラス化装置の作成の対象と危険な慣行につながりました。イントラおよびインター技師変動を最小限に抑えることを目的と、安全・安心、再現性、および信頼性の高いμS-VTF法の開発のために許可された他の機器の品質管理の欠陥を理解します。内在化、2色、改ざん-pの1）0.3-mLのアイオノマー樹脂胚わら：同様に重要な、それは2つの既存のFDA準拠デバイスの可用性を組み合わせました反復可能な溶接シール可能性のある屋根の標識;直接非常に効果の高いグローバルなガラス化デバイスを作成するために、胚（複数可）をロードすると、2）短く、一般的に使用され、300μmのID滅菌flexipettes。他の無菌と同様に、ガラス固化システム（ 例えば、高セキュリティガラス化（HSV）、ラピッドI、およびVitriSafe）効果的に生殖医療で使用される閉じ、microSecureガラス化（μS-VTF）が、それが高いポスト温暖化の生存と妊娠を達成することができることを証明しましたそのシンプルさへのこだわり、そして縮小技術的な変化と成果。内部の疎水性のプラグを含む0.3 mLの胚のストローは、商業的に綿ポリビニルピロリドン（PVP）のプラグを有する標準精液ストローで置換したが、溶接密封を確実にするために、そのアイオノマー樹脂組成物を維持しました。しかし、綿プラグが接触した際にflexipettesの流体胚の内容を吸い上げることができます。修正されたμS-VTF方法は、追加の内部溶接部を含むように適合されましたデバイスの負荷側のプラグの前に密封します。高い生存率（&gt; 95％）と妊娠率が今日続けるようμS-VTF手順に追加された技術的なステップは、その成功のアプリケーションに影響を与えていません。

1316が（98.1パーセント）が生存した1341ガラス固化体胚盤胞は、（100％）2014年6月に2012年の間に温め、1341胚を回収しました。生検胚盤胞は、99.5％の生存上で経験しました。主に単一の転送時には、遺伝的にテストされ、正倍数体、ビトリファイド胚、我々は米国で最も高い注入率と出生率のいくつかを達成することができました、年齢の独立した（ 図3）20、センターによって報告された最近の国の統計によると疾病管理生殖補助医療学会（ 表1、表 2）のために。単独で凍結保存されたサイクルのための良好な予後患者集団（未満35歳）（ 表1）を評価する 、私たちの研究室では、両方の注入率の全国平均（ すなわち、妊娠を確立するために胚の効率）を上回りましたし、最終的に出生率を生きます 30％を超えることもできます。さらに、70の研究・承諾し、再ビトリファイド異数体胚盤胞を使用して、半ば2014年に私たちの修正されたストレージ・ストローの初期確認/検証は、回収率100％と100％の生存率をもたらしました。 <img alt="図1" src="/files/ftp_upload/54871/54871fig1.jpg"> 1. MicroSecure VTFセットアップ図 。 VTF皿（A）は異なる、番号保持液滴に配置する前に、3洗浄液滴を利用するガラス化溶液の3つの異なる列で組み立てられます。また、短縮VTFのヒント（ すなわち、300μmのIDのflexipettes）を有する個々のピペットを確保し、秩序ある使用のために回転させることができる発泡スチロールのチューブラック（B）、で構成されています。代表的な使い捨てのマイクロピペットの電球のピペットアセンブリは発泡スチロールのラックに載っていることに注意してください。 ARGET = "_空白"&gt;この図の拡大版をご覧になるにはこちらをクリックしてください。 <img alt="図2" src="/files/ftp_upload/54871/54871fig2.jpg"> 図2は、 胚盤胞評価システムを変更しました。私たちの修正されたガードナー胚盤胞グレーディングシステムは、胚盤胞の生検を容易にするために、TE細胞の誘導さヘルニアを占めています。孵化胚盤胞（C）が 50％以上ヘルニアを有している：（グレード4 =最大ヘルニア50％B）：（グレード3 = 10％未満のヘルニアA）および拡張胚盤胞修飾は完全胚盤胞の早期ハッチングを考慮します16。 <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/54871/54871fig2large.jpg" target="_blank">この図の拡大版をご覧になるにはこちらをクリックしてください。</a> 54871fig3.jpg "/&gt; 3.比較妊娠成果図。累積1.5年間隔で、妊娠のデータは、ガラス固化体温め正倍数体胚盤胞を転送の効果を評価するために比較された非PGSサイクルと比較した（n = 172サイクル/ 144転送）は、主に新鮮な関与た（n = 160サイクル/ 153転送） 18を転送します。我々の実験のために、このデータは、μS-VTF手順によってガラス化胚盤胞の生検は、それらの生存能力を維持することが明らかになりました。 <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/54871/54871fig3large.jpg" target="_blank">この図の拡大版をご覧になるにはこちらをクリックしてください。</a> <table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody><tr><td>情報元</td><td> ＃サイクル</td><td>移植胚の＃を意味します</td><td>注入率（％） </td><td>ライブ出生率（％） </td></tr><tr><td> NBラボ* </td><td> 144 </td><td> 1.2 </td><td> 74.00パーセント</td><td> 74.50パーセント</td></tr><tr><td>全国平均</td><td> 20423 </td><td> 1.7 </td><td> 39.60パーセント</td><td> 44.10パーセント</td></tr><tr><td colspan="5"> ※データは2008年にmicroSecureガラス化手順を設立し、現在オベーション不妊研究所（NBラボ）を使用して、オレンジ郡豊饒、南カリフォルニア不妊センターと生殖医療クリニックのための南カリフォルニアセンターの2014年のパフォーマンスに基づいて平均しました。 </td></tr></tbody></table> 表1 2014年CDCは生殖統計を支援します。 3から35歳未満の女性の凍結胚移植妊娠データが450以上報告クリニックの米国2013年全国平均と比較して、私たちのNBラボを使用して、医師の診療所を報告します。 <table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody><tr><td colspan="2"> SART全国平均</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>クリニック - 国家</td><td>女性たち</td><td>女性たち</td><td>女性たち</td><td>女性たち</td></tr><tr><td></td><td> &lt;35歳</td><td> 35-37歳</td><td> 38-40歳</td><td> 41-42歳</td></tr><tr><td> SCCRM-CA * </td><td> 63.1パーセント</td><td> 58.3パーセント</td><td> 40.6％ </td><td> 32.3パーセント</td></tr><tr><td> CCRM-CO * </td><td> 64.7パーセント</td><td> 61.5パーセント</td><td> 40.4パーセント</td><td> 32.2パーセント</td></tr><tr><td> RMA-NJ * </td><td> 63.2パーセント</td><td> 59.7パーセント</td><td> 34.6％ </td><td> 18.7％ </td></tr><tr><td>全国平均</td><td> 48.6パーセント</td><td> 38.3パーセント</td><td> 24.3％ </td><td> 12.3％ </td></tr><tr><td colspan="5">生殖医療のためのSCCRM-南カリフォルニアセンター。生殖医療のためのためのCCRMコロラドセンター;そして、RMA-Reproductive医学アソシエイツ</td></tr><tr><td colspan="5"> *これらの大手クリニックはすべて、主に移植胚あたりの出生の成功を最適化するために、患者ケアの彼らの標準的な実践に、着床前遺伝子検査に関連して、ガラス化した胚移植サイクルを実装しています。 </td></tr></tbody></table> 他のいくつかの尊敬のプログラムと、だけでなく、SARTと対比ニューポートビーチ、カリフォルニア州で私たちのオベーション豊饒ラボを使用してSCCRMクリニックのための生殖補助医療のための協会によって報告されるように表2 2014累積出生率、（SART）、全国平均。

MicroSecure ガラス固化は、FDAの適正製造および組織取り扱い慣行に準拠した非商用の無菌閉鎖ガラス固化装置システムとして開発されました。疎水性のプラグ付き胚ストローが業界から撤退したため、ガラス化手順は、標準の内部綿プラグの前に内部シールを含めるように変更されました。

修正されたMicroSecureガラス化：人間の胚盤胞のための、安全なシンプルで非常に効果的な凍結保存手順

Clinical embryo vitrification evolved with the development of unique vitrification devices in the 21st century and with the misconception that ultra-rapid ...

MicroSecure胚ガラス化法の全体的な目標は、ヒト胚に対して、安全、確実、シンプルかつ効果的な無菌閉鎖ガラス固化手順を提供することです。この方法は、ヒト胚のガラス化における品質管理の変数を最小限に抑えるために開発されたため、信頼性と再現性のある成功が保証されます。この手法の主な利点は、生物学者と研究所の間の技術的なばらつきを排除しようとしていることです。私たちの技術は非常に簡単に実行できるため、研修生にとって最大の課題は、胚を失わずにピペッティングする方法を学ぶことです。私たちの方法の背後にある考え方は、一般的に使用される2つのFDA承認アイテムを適応させることにより、特殊なデバイスの必要性を排除することでした。内部でラベル付けされたアイオノマー収納ストローと滅菌フレキシペット。この手法の視覚的なデモンストレーションは、その適用を成功させるための基本的なヒントを強調するため、非常に役立ちます。手順を開始する前に、滅菌済みの0.3mlの精液ストローを、プラグのすぐ前にある基本的な卓上インパルスシーラーの電極のテフロン表面に置き、内部シールを作成します。ハンドルを押すと熱が作動し、赤いライトが消えてビープ音が鳴ったらハンドルを離します。次に、セットアップを完了する前に、コットンプラグを内側のシールに押し付けます。クライオ希釈およびサンプルの胚盤胞ローディングの場合は、インキュベーターから患者培養皿を取り出し、すべての標本の同定を二次ソースで確認します。実体顕微鏡下で、vit tipと呼ばれるガラス化フレキシペットを使用して、対応するクライオ皿の最上段にある個々の保持液滴に胚盤胞を移動します。次に、フレキシペットに3マイクロリットルのV1溶液を事前に充填し、内容物の半分を最初の胚に分注します。胚を吸引し、それを最初のV1洗浄液滴に移します。次に、胚を液滴の周囲に2〜3回ピペットで移動させ、液滴の外側に残っているピペットの内容物を皿の表面に取り除きます。次に、胚盤胞を個々のV1保持ドロップに移動し、vitチップに次のV2溶液をプリロードしてから、新しいvitチップで追加の胚をピペッティングします。先ほど示したように、V2およびV3液滴中の胚盤胞をすべて洗浄した後、V3保持液滴の外側のvit先端から残留溶液と気泡を取り除き、最初の胚の周りから先端にきれいなV3溶液を完全に充填します。容量の約1マイクロリットルを排出し、胚盤胞と残りのV3溶液をvitチップに完全に浸します。次に、チップをピペットから取り外し、滅菌ガーゼパッドを使用して、vitチップの外面から残留V3溶液を乾燥させます。先端の外面を乾燥させることは重要であり、胚喪失の追加のリスクを負うことはありません。次に、最初に先端を事前に密封されたストローの開放端に挿入し、ストローを反転させ、ラベルの端を下にします。インナープラグの先端を観察します。開放端に1cmの空域を残してから、安全に溶接シールして閉じます。すべてのストローが密封されたら、ステンレス製デュワーフラスコで液体窒素に直接突っ込み、患者の杖に取り付けられた開いたゴブレットにストローを保管します。クライオ溶液の溶出と希釈には、対応する6ウェル希釈ディッシュを実体顕微鏡ステージの中央に置き、37°Cのショ糖温浴が入った60 mmシャーレを顕微鏡の片側に置きます。次に、温めるストローを分離し、上部のストローシールを液面より上に保持して、サンプルの同一性を確認します。マヨネーズハサミを使用してストローを内部プラグの下に固定し、ビットの先端を液体窒素に浸したままにします。品質管理の予防措置として、ハサミをデュワーフラスコに数回しっかりと叩き、先端を内側のストロー側壁から外し、ストローをステレオスコープ表面の横または下に水平方向に周囲の空気中に持ち上げます。ストローのラベルのない端をつかみ、内側のプラグでストローを切断します。次に、ストローを温めたバスディッシュの上に持ち上げ、先端が完全に押し出されるまで、ビットの先端を60度の角度でお風呂に注ぎます。フレキシペットの基部は、皿の側壁の上に置く必要があります。5〜10秒後、ピペットベースをマイクロキャップピペッティングデバイスに移します。5 分間のタイマーを開始します。顕微鏡を見ながら、人差し指で球根の穴を覆い、球根をそっと絞って、ガラス化した胚盤胞をビタミンの先端からT1洗浄液に放出します。胚盤胞の放出を確認した後、残存するV3溶液と気泡を陽圧で除去し、内容物を未使用の廃棄井の中央に排気します。vitチップをステルバーピペットに移し、残りの4分間、胚を油下で2番目のT1液滴に移します。インキュベーション中に、フレキシペットに次の溶液をあらかじめ充填し、T2、3、および4の液滴で胚盤胞を3分間隔で希釈します。最後に、T5液滴中の胚盤胞を摂氏37度の表面で5分間平衡化してから、インキュベーターに戻します。Modified Gardner Blastocyst Grading Systemは、完全な胚盤胞を栄養外胚葉細胞のヘルニアが10%未満であると見なしますが、ヘルニアが最大50%の胚盤胞は拡張したと分類されます。50%を超えるヘルニアを示す胚盤胞は孵化していると見なされます。実証された凍結保存法と加温法を使用して、着床前遺伝子検査の有無にかかわらず、サイクル開始あたりの高レベルの出生が一貫して達成されています。これらの成功はかなり高いですが、事前に選択された正倍数系胚盤胞を使用します。実際、凍結保存されたサイクルのみで良好な予後患者集団を評価すると、これらの凍結胚移植データは、着床率と生児出生率の両方で全国平均よりも成功率が優れていることを示しています30%以上主に単一の遺伝子試験された真正数体ガラス化胚盤胞を移植することにより、米国で最も高い着床率と生児出生率の一部、 年齢に関係なく、疾病管理センターが報告した他の2つの評判の高い不妊治療クリニックの最近の全国統計、および生殖補助医療協会が発表したデータと比較して達成されています。MicroSecure ガラス固化は、技術的な容易さ、信頼性、およびクライオセキュリティを念頭に置いて開発された新しい無菌手順です。このシンプルで非商業的なガラス化システムは、ガラス化装置に代わる非常に効果的な低コストの代替品を提供します。MicroSecure法は、その開発以来、99.9%以上の胚回収と95%以上の完全な胚盤胞生存を保証してきました。これにより、過去3年間で、私たちの臨床診療をほぼすべての凍結保存胚移植サイクルに転換することができました。私たちは、アイオノマー精液ストローの綿栓の前にインナーシールを含めるように手順を効果的に変更し、信頼性の高い溶接シールと優れた加温後の結果を生み出しました。今日の生殖補助医療業界では、さまざまなデバイスシステムが使用されていますが、MicroSecureガラス固化のように、ユーザーのばらつきを本質的に排除し、最適化された安全性を提供するシンプルさと技術的な再現性を提供するデバイスは他にありません。

modified-microsecure-vitrification-safe-simple-highly-effective

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

発生生物学

マウスの胚のエチレングリコールベースの​​ガラス化法が説明されています。それは、そのシンプルさと低胚毒性の他の方法に有利であるため、近交系や遺伝子改変マウスを含むマウスの多くの株、に広く適用することができます。...

エチレングリコール系ガラス化によるマウス胚の凍結保存

このビデオでは、生体試料を保存するための超高速クライオガラス化法を実演します。この方法では、細胞内の氷の結晶形成を防ぐことにより、生体組織を凍結損傷から保護するために、凍結保護剤の組み合わせを使用することを伴います。...

ガラス固化法による凍結保存:生物試料を超低温で長期保存するための超急速冷却技術

このビデオでは、エチレングリコールとジメチルスルホキシドを凍結保護剤として、極低温ストローをキャリアシステムとして使用して、目的の発生段階で採取したウサギ胚のガラス化の手順について説明します。ガラス化胚は生存率が高く、使用まで長期間保存することができます。...

極低温ストローを用いたウサギ胚ガラス化:ウサギ胚を長期保存するための超急速冷却技術

ウサギモデルにおける最適胚期における低侵襲胚移植と胚ガラス化

タイムラプス形態プロトコル previtrification...

ガラス化と地球温暖化の手順中に胚盤胞の行動の客観的評価のための形態のプロトコル

胚盤胞生検およびガラス化は、移植前遺伝子検査を効率的に行うために必要とされる。5-7日目のゾナ・ペルシダの順次開きと7-8型栄養細胞の検索を伴うアプローチは、必要な操作の数と、最適でない環境条件への胚の暴露の両方を制限する。...

ヒト胚盤胞生検とガラス化

本稿は、商業的支援上の実験室製のメディアを用いた未熟な猫卵母細胞の最小体積ガラス化のためのプロトコルを記述する。それは、エキビボ生殖腺からガラス化および温暖化に至る卵母細胞の分離からあらゆるステップをカバーする。...

未熟ネコの最小体積ガラス化

卵母細胞凍結保存は、思春期後の女性の不妊治療の保存のためのゴールドスタンダードとしていくつかの国際科学協会によって認識されています。適切な臨床および実験室戦略は、最大の有効性、効率、および不妊治療の安全性を保証します。...

卵母細胞ガラス化による不妊治療の保存:臨床および検査の視点

このプロトコルは、成体および若年性羊卵子のガラス化のための標準的な方法を提供することを目的としている。これは、体外成熟培地の調製から温暖化後の培養までのすべてのステップを含む。卵母細胞は最小必須容積を保障するためにクライオトップを使用してMII段階でガラス化される。...

羊の成人および前頭前卵巣から採取された体外期の成熟卵母細胞のガラス化

卵巣組織のガラス化のためのプロトコルは、広く使用されているゆっくりと凍結プロトコルに代わる凍結保存方法として、提示されます。...

ガラス質の凝集状態を達成するための卵巣皮質組織のガラス化

ここでは、マウスとヒツジの着床前胚をガラス化するためのスパチュラモンテビデオプロトコルを紹介します。これは、自家製のヘラで構成され、自家製のソリューションを利用しています。胚を濃度を上げる2つの凍結保護溶液で迅速に平衡化し、スパチュラにロードし、液体窒素に浸漬し、最後に0.5mLストローで密封します。...

哺乳類胚のガラス化のためのスパチュラモンテビデオ

学ぶ 人間胚盤胞のガラス化保存法。FDA承認品を用いた閉鎖系で技術的ばらつきを排除し、99.9%以上の胚回収率と95%以上の生存率を達成。生殖医療の現場で再現性の高い優れた臨床成績を実現する。

修正されたMicroSecureガラス化：人間の胚盤胞のための、安全なシンプルで非常に効果的な凍結保存手順

さらに動画を探す