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DOI: 10.3791/55004-v
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This study focuses on quantifying transcript accumulation in specific cellular domains in maize. It highlights the importance of understanding gene expression differences at the leaf blade-sheath boundary and in lg1-R mutants compared to wild-type.
多くの発生的に重要な遺伝子は、細胞または組織特異的な発現パターンを持っています。この論文では、野生型と比較して、トウモロコシの葉身と鞘の境界で発現が異なる遺伝子とlg1-R変異体で発現が異なる遺伝子を特定するためのLM RNA-seq実験について説明します。ここで説明する実験的考察は、他の発生現象のトランスクリプトーム解析にも当てはまります。
この方法の全体的な目標は、特定の細胞または細胞ドメインにおける転写産物の蓄積を定量化し、変異型サンプルと野生型サンプルの異なるドメイン間または同等のドメイン間で比較できるようにすることです。この方法は、臓器ドメインがどのように特定されるか、特定の突然変異が遺伝子発現にどのように影響するかなど、発生生物学における重要な質問に答えるのに役立ちます。この手法の主な利点は、転写産物の蓄積を、手で解剖するには小さすぎる、細かく定義されたドメインで定量化できることです。
この手順を開始する前に、標準的な条件下でトウモロコシの苗のフラットを生後2週間まで育てます。横方向のセクションのシュートアピスを解剖するには、まず土壌線のすぐ下にある苗を切除します。次に、かみそりの刃を使用して、1つまたは2つの成熟した葉に囲まれた落ち着いた楕円形が見えるまで、茎の付け根から薄いスライスを取り除きます。
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