Name: から細胞のサブセットの遺伝子発現プロファイリングへの応用レーザーマイクロダイセクションショウジョウバエウィングディスク (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2010-04-30T17:00:00.000+00:00
Duration: 15 min 59 s
Description: 学ぶレーザーマイクロダイセクションを用いたDrosophilaウィングディスクの特定領域における遺伝子発現プロファイリング手法。RNAiによる局所的遺伝子サイレンシングと定量RT-PCRを組み合わせ、組織マイクロ環境における遺伝子発現動態を解析する。

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

著者は、profを感謝。キアラカンパネッラとコンピテンスのアムラセンター、レーザーmicrodissectorの使用とそれらを提供するためのナポリフェデリコIIの大学、ナポリ、イタリア、、と3Dアニメーションの寛大な助けのためのMRヴィンチェンツォVicidomini。

パート1。特定とローカライズRNAiのを受けるショウジョウバエ成虫ウィングディスクの調製。 生体物質として、GAL4/UASシステム1によりローカライズと特定遺伝子サイレンシングにさらさトランスジェニック幼虫から得ショウジョウバエ成虫ウィングディスクを使わ。 GAL4ドライバ、第二UASレスポンダを運ぶOne：この幼虫子孫は2親系統が関与遺伝クロスからorginates。特定時間的及び/または空間パターンでGAL4を表現する加え、ドライバラインはGAL4発現ドメインを視覚化できるUAS - GFPレポーターを運びます。 UASレスポンダラインは、UASシーケンスの制御下、特に関心の選択遺伝子（呼び出しそれ遺伝子X）2をターゲットできなけれRNA（hpRNAを）サイレンシングヘアピンを表現。かつて細胞で発現、hpRNA Xは特に選択遺伝子を黙らできなけれ小さな干渉RNA（siRNAを）生成する切断さ。ドライバとレスポンダ導入遺伝子両方を運ぶ幼虫子孫、で、UAS -サイレンシングコンストラクトはのみGAL4タンパク質を発現それら細胞で転写、およびこうして選択遺伝子X.の空間的制限サイレンシングを誘導できなけれですさ可能さまざまなアプリケーション中でも、我々は縁をギザギザにした - GAL4の制御下たち関心の選択遺伝子（遺伝子X）（EN）ドライバ、翼ディスク3の後部コンパートメントで特定サイレンシングをトリガできます無音にこのアプローチを適用、テリトリーUAS - GFPトランスジーンの発現によってマークれました。 沈黙成虫翼ディスクは、手作業-解剖特に汚染組織、付着気管を取り巻く排除するケアを取っていた。各孤立翼ディスクはその後迅速かつ優しく選択区域の即時レーザーマイクロダイ用既治療、RNaseフリー解剖フレームへ移した。 パート2。翼ディスクの沈黙（後部）とunsilenced（前方）コンパートメントから選択した領域のレーザー顕微解剖。 とunsilenced（前方; GFP -非標識）コンパートメントが達成れた;いったん翼ディスクは沈黙（GFP標識後部）から特定領域のレーザー顕微解剖は、メンブレンにあった。このは容易両方に収まるエリア、ディスクのGFP陽性とGFP -負両側を描画によって行った。 microdissector下、まず選択周囲沿っカットを作る、GFP陽性組織上レーザービームを焦点。 microdissector選択スピードとパワーで切削進めます、しかし組織の選択面積が下チューブで下がるまでそれは、手動カッティングを絞り込むことです。このチューブはGFP陽性組織が後続RNA抽出の準備なるよう。、TRI試薬の小さな容積を含みます当社はその後unsilenced、GFP -負組織から同等領土を解剖ために、翼ディスクの反対、GFP -負側に切削領域を移さ。もう一度、自動カット後、とりあえず手動カットを精製に進んだ。カットが行われたいったん、またGFP -負組織はRNA抽出用準備、TRI試薬で回収した。 第3部。マイクロダイセクションティッシュエリアからRNA抽出と転写プロファイリング。 当社はキャップから液体をデタッチするチューブをスピンし1mlにTRI試薬を加算、その後標準TRI試薬プロトコル続くRNA抽出を行わ。十分材料を収集する、我々は100成虫翼ディスク上カッティング手順を繰り返した。約5000μm2である各の100分野から始まる、たち収量はRNA1.5μgのであった。マニュアル解剖の精度はその後ランダムヘキサ持つcDNAを合成スーパースクリプトIII（インビトロジェンを）用いた、RT - PCRによる沈黙とunsilencedサンプルでGFP発現をチェックによって制御れました。その規制経路の推定標的のそれらと共に、沈黙遺伝子Xの発現レベルを決定する焦点後続定量分析は、マスターミックス（インビトロジェンを）用いたRT - PCRリアルタイムによって行った。

<ol><li>Elliott, D. A., Brand, A. H. The GAL4 System A Versatile System for the Expression of Gene. Dahmann, C. , Humana Press Inc. Totowa, NJ. (2008).</li>
<li>Klein, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Wing+disc+development+in+the+fly%3A+the+early+stages.+%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Opinion+in+Genetics+%26+Development%22%5BJournal%5D)">Wing disc development in the fly: the early stages. </a> Current Opinion in Genetics & Development. 11, 470-475 (2001).</li>
<li>Dietzl, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+genome-wide+transgenic+RNAi+library+for+conditional+gene+inactivation+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">A genome-wide transgenic RNAi library for conditional gene inactivation in Drosophila.</a> Nature. 448, 151-U1-151-U1 (2007).</li>
<li>Martin, F. A., Morata, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Compartments+and+the+control+of+growth+in+the+Drosophila+wing+imaginal+disc%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Compartments and the control of growth in the Drosophila wing imaginal disc.</a> Development. 133, 4421-4426 (2006).</li>
<li>Tabata, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetics+of+morphogen+gradients%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Genetics%22%5BJournal%5D)">Genetics of morphogen gradients.</a> Nature Reviews Genetics. 2, 620-630 (2001).</li>
<li>Moreno, E. &amp, Basler, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((dMyc+transforms+cells+into+super-competitors%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">dMyc transforms cells into super-competitors.</a> Cell. 117, 117-129 (2004).</li>
</ol>

unsilenced翼ディスクの前部/後部コンパートメントで達成されたそれらの基底レベルの発現量を基準にして、選択された遺伝子のXの活動は、サイレンシング時に40％に減少が見出された。対照的に、その推定ターゲット（遺伝子Y）のいずれかで、私たちはそれが否定的に遺伝子Xによって規制されているという仮説を検証するためにつながる、（7倍 - 増）が大幅にアップレギュレートを発見された我々は、上述の実験的アプローチが正常に様々な調節経路の推定ターゲットの検証に適用できると結論付けている。 さらに、我々は、RNA抽出の収率の改善が急速にマイクロアレイ解析によりローカライズされた転写プロファイリングの特性評価を可能にすることができると推測。これは重要な生物学的プロセスのより詳細なビューを達成する可能性を開きます。例については、形態形成の勾配4,5、または失うと勝者の細胞クローンは、差動のGFPの発現を可視化することができる細胞の競争6のプロセスを下線転写スイッチのローカライズ形成は、より具体的...

株を飛ぶショウジョウバエUAS -サイレンシングラインはVDRCのRNAiコレクション2から取得することができます。 GAL4 -ドライバの行のコレクションはブルーミントンショウジョウバエストックセンター（インディアナ州、米国）から入手できます。 機器必要な機器は、レーザーmicrodissector（ライカLMD6000）、コールターマイクロ22R（ベックマン）、PCR（マイサイクラーBIO - RAD）、リアルタイムPCR（BIO - RAD iQ5）が含まれます。 ツール必要なツールが含まれます：ガラス井戸、ブラシ、マイクロダイセクション鉗子、ハンギングドロップスライド、注射針、PET膜、プラスチックチューブ（50ミリリットル、05ミリリットル、0.25 ml）を持つ金属製のフレームにマウントされている昆虫ピンを。

から細胞のサブセットの遺伝子発現プロファイリングへの応用レーザーマイクロダイセクションショウジョウバエウィングディスク

Laser Microdissection Applied to Gene Expression Profiling of Subset of Cells from the Drosophila Wing Disc

組織の均質性は、ダウンストリームの解析を犠牲にすること、生体試料から生成することができる情報量の制限要因であることが証明されている。多くの組織内に存在する複雑で動的な細胞の関連を考えると、 生体の相互作用における徹底的な分子分析を再現するために、ひとつは、ネイティブのコンテキスト内で特定の細胞集団を分析することができなければなりません。レーザーを介したマイクロダイセクションでは、分子整合性を維持しながら、直接顕微鏡可視化の下で目的の細胞が明確に識別し、成功した収穫を可能にする、この目標を達成することができます。規模の大小、成長制御、細胞分化や器官形成を研究するために有利なモデルシステムを表す開発ショウジョウバエの翅のディスク、の定義の領域内の遺伝子発現を分析するためにこの技術を適用している。幼虫成虫ディスクは、早期に系統限定の境界によって前部と後部、背側と腹側の区画に分割されています。誘導GAL4 - UASバイナリ発現系を利用して、これらの区画の各々が特異的トランスジェニックで標識することができる構築GAL4 -ドライバ適切なの制御下にUAS - GFP遺伝子を発現するハエ。トランスジェニックディスクでは、細胞の離散部分集合の遺伝子発現プロファイリングは正確にレーザーカットを導くために蛍光GFPのシグナルを使用して、レーザーを介したマイクロダイセクションの後に決定することができます。 下流の様々なアプリケーションの中で、我々は、ローカライズされたRNA干渉（RNAi）の後にRNA転写物プロファイリングに焦点を当てた。 RNAi技術の出現により、GFP標識は、特定の遺伝子サイレンシングに離散的細胞集団の転写応答を決めるかもできるように、与えられた遺伝子のローカライズされたノックダウンと組み合わせて使用​​することができます。このアプローチを検証するために、我々は（GFPの発現で標識された）後からディスクに相当する領域を解剖し、それ以外の場合は遍在的に発現する遺伝子のP区画の地域サイレンシング時に前方（非標識）コンパートメント。 RNAは、マイクロダイセクション沈黙とunsilencedエリアと定量的リアルタイムRT - PCRによって決定される比較の遺伝子発現プロファイリングから抽出した。我々はこの方法が効果的にショウジョウバエ成虫のディスク内の細胞のサブセットの正確なトランスクリプトームに適用できることを示している。 RNAの源として巨大なディスクの準備が一般に細胞の均質性を前提としながら、実際、、それが転写発現は、位置情報の結果では、これらの構造の中で大きく変化することはよく知られています。レーザーカットを導くためにローカライズされた蛍光GFPのシグナルを使用して、より正確な転写解析を実施し、収益性の高い、ネイティブのコンテキスト内の異なる細胞系譜の転写産物プロファイリングなど、複数の異なるアプリケーションに適用することができる。

レーザーマイクロダイセクションは、ローカライズされたRNAi実験に供ショウジョウバエの翅のディスクの特定のコンパートメントでの遺伝子発現プロファイリングの解析に適用した<em&gt; in vivoで</em&gt;。沈黙とunsilencedコンパートメントのと同等の領域から抽出したRNAは、ネイティブ組織のミクロ生態学のコンテキスト内での比較遺伝子発現プロファイルを決定する定量的RT - PCRにより解析した。

組織の不均一性は、生物学的サンプルから得られる情報の量を制限する要因となることが証明されており、...

本資料では、ショウジョウバエの翅原基において、サイレンシングされた領域とサイレンシングされていない領域のRNA転写産物プロファイリングを比較するために適用したレーザーマイクロダイセクションについて詳細に記述します。この手法では、生物学的材料として手動で摘出したショウジョウバエの翅原基を、主要機器としてレーザーマイクロダイセクターを使用します。具体的には、LI A-L-L-M-D 6, 000およびリアルタイムPCR装置を使用しています。BioRad iqを使用しました。必要な5つの小型器具は、凹面プレート、小型の絵筆、マイクロディセクションピンセット、吊下滴下スライド、そしてシリンゲ針に取り付けられた昆虫用ピン、PET膜付き金属フレーム、小型プラスチックチューブです。本手法は以下の手順で行います。ステップ1は、GAL4/UASシステムを用いて、後代において局所的かつ特異的な遺伝子サイレンシングを誘導するため、適切な2つのophトランスジェニック系統を交配させる手順です。ステップ2は、解剖用フレームの処理についてです。ステップ3は、レーザーマイクロディセクターのセットアップについてです。ステップ4では、遺伝的交雑によって得られた幼虫の子代から翅原基盤を manually に回収します。ステップ5では、GFPでラベル化された原基盤の特定領域に対してレーザーマイクロダイセクションを行います。ステップ6では、原基盤のサイレンシング領域と非サイレンシング領域の同等部位について転写プロファイリングを行うことで、目的遺伝子のサイレンシングによって誘発される影響を明らかにすることができます。遺伝子Xと仮定して、in vivoでの転写プロファイリングには、マイクロダイセクションされた領域からのRNA抽出、手動ダイセクションの正確性の検証、R-T-P-C-Rによる2つのサンプルのGFP発現の評価、およびリアルタイムR-T-P-C-Rまたはマイクロアレイ解析による、これら2つのサンプルにおけるサイレンシング遺伝子の推定標的の発現量の定量化が必要となります。それでは、各ステップの詳細について説明します。最初のステップは、遺伝学的交配です。この遺伝学的交配では、GAL4 UASトランスジェニック系統を用い、幼虫の次世代において遺伝子サイレンシングが導入された成像盤を得ることを目的とします。汎用性の高いGAL4システムを利用することで、RNA干渉による特異的かつ局所的な遺伝子サイレンシングを誘導することが可能です。一方の系統により、特定の時間的または空間的パターンでGAL4を発現するドライバー導入遺伝子と、GAL4の発現領域を可視化するためのUAS-GFPレポーターを交配に導入します。もう一方の系統により、細胞内で発現した際に遺伝子Xを特異的に標的とするヘアピンサイレンシングRNAを発現するUASレスポンダー導入遺伝子を導入します。このRNAは切断されて小干渉RNAを生成し、これにより本交配の後代において選択した遺伝子Xを特異的にサイレンシングすることができます。UASサイレンシング導入遺伝子は、GAL4タンパク質を発現している細胞でのみ転写されるため、X遺伝子の空間的に制限されたサイレンシングが誘導されます。さまざまな応用例の中で、本研究ではGrailed GAL4ドライバーによってサイレンシングされた翅原基におけるRNA転写プロファイルを重点的に解析しました。このドライバーは、後区画における特異的なサイレンシングを誘導します。サイレンス領域は、U-A-S-G-F-P導入遺伝子の発現によって標識されます。後方コンパートメントにおいて、GGFPの発現と遺伝子xのサイレンシングという2つのイベントが誘発されます。ステップ2は、RNA活性を抑制するための解剖フレームの処理です。フレームスライドと解剖器具をDEPC処理水で室温で1時間以上洗浄し、滅菌チャンバー内で乾燥させます。RNA活性を抑制するため、あらかじめRNaseフリーの状態にある新品の50 mlチューブにDEPC処理水を満たし、そこにピンセット、吊り下げ滴下スライド、およびペットフレームを入れます。どちらもマイクロダイセクションに必要です。チューブを密閉し、上下に反転させた後、少なくとも1時間反応させます。室温で1時間経過後、ピンセットを用いてDEPC処理水を別のチューブに移します。スライドが落下しないようにチューブ内で保持します。その後、チューブ内でスライドを乾燥させます。ステップ3、マイクロダイセクションのセットアップです。まず、蛍光灯、顕微鏡、およびマイクロダイセクション用ソフトウェアなど、必要なすべての装置の電源を入れます。警告ウィンドウでレーザーの電源を入れるよう指示が表示されますので、電源を入れ、マイクロダイセクションのセットアップを完了させる間にレーザーをウォームアップさせてください。次に、組織を回収するためのウェルを準備します。Leica LMD 6,000レーザーカット装置では、最大4本のチューブをロードして異なるサンプルを回収することが可能です。今回の目的では、2本のチューブのみを使用します。一方はGFP陽性のサイレンシング組織を、もう一方はGFP陰性の非サイレンシング組織をマイクロピペットで回収します。RNAを保存するため、両方のチューブに20 µLのTRI reagent溶液を注入します。これでマイクロダイセクションの準備が整いました。ステップ4、3齢幼虫からの翅成像盤の手作業による摘出です。既述の方法で得られた幼虫の後代から翅原基を単離し、他の組織が原基に混入しないように注意します。この目的を達成するためには、原基をまとめて回収する際に一般的に用いられる方法とはかなり異なる解剖アプローチが必要となります。まず、幼虫をリンゲル液で洗浄し、付着している培地を取り除きます。その後、吊り滴子スライドに転送し、口側を下に引いてすぐに頭部を切り離します。昆虫ピンを使用して、周囲の組織を慎重に切除します。赤色の枠線で囲まれた部分が集めるべき成虫翼原基です。付着した組織を取り除き、速やかに、かつ丁寧に操作してください。単離した各翼原基は、直ちに切片を作成するため、解剖用フレームへ移します。この手順を、 wing disc の総数が100個に達するまで繰り返します。ステップ5は、GFPで標識された wing disc の特定領域のレーザーマイクロダイセクションです。元の wing disc がメンブレン上に配置されたら、切断に進むことができます。フレームをホルダーにセットし、ホルダーを電動ステージに固定します。LMD 6, 000を一般的な顕微鏡として使用し、元の翼盤を探します。それに焦点を合わせ、カット範囲を設定します。ディスクの両側、つまりGFP陽性領域とそれ以外の両方に収まるように楕円形の領域を描きます。GFP陽性部分を回収したいチューブキャップを選択してください。「Start cut」ボタンを押します。マイクロディセクターは、「move（移動）」および「cut（切断）」機能を選択して事前に設定した速度と出力で組織の切断を行います。選択しなかった組織片が脱落するまで、手動で切断を微調整することが可能です。3Dアニメーションでは、マイクロディセクターによる切断時の様子が示されており、レーザーが組織に集束し、選択した外周に沿って切断が行われる過程がわかります。切断が完了すると、組織片が選択したチューブキャップの中に入り、そのまま tri Reagent に落ちます。最初の切断後、切断領域を翼円盤の反対側に移動させ、同等の GFP 陰性領域を切断します。新しい切断に進む前に、GFP 陽性組織と GFP 陰性組織を分けて保持するため、必ず別のチューブキャップを選択してください。自動カット後、「スタートカット」ボタンを押します。2回目のカットを行う前に、3Dアニメーションで示されている通りに手動でカットの微調整を行ってください。電動ステージが、選択したチューブキャップをカット領域の下まで移動させます。レーザービームを選択した外周に沿って組織に集束させ、切断が完了すると、組織片はTri試薬を含む選択したチューブキャップ内に落下します。十分な量の試料を回収するため、この手順を100個の成虫 wing disc で繰り返しました。サンプルの回収が完了したら、チューブを取り出します。ここは、ここまでのすべての作業が無駄になりかねない非常に繊細な工程です。十分に注意してください。キャップを逆さまにして閉じ、実験を続行します。こちらはGFP陽性組織の方です。もう一方はGFP陰性組織の方です。ステップ6、転写プロファイリングを行います。チューブを遠心分離してキャップから液体を分離させ、TRI reagentを1 mLまで加えます。1つの領域が約5,000 µm²である100箇所の領域から、標準的なTRI reagentプロトコルに従ってRNA抽出を行います。本実験におけるRNAの収量は1.5 µgでした。ランダムなヘキサヌクレオチドを用いたCD NAを合成するため、Vitrogenのsuperscript threeを使用します。手動での切り出しの正確性は、2つのサンプルにおけるGFP発現をR-T-P-C-Rで確認することで制御しました。定量R-T-P-C-Rを用いたゲル画像に示されている通りです。我々は、サイレンス遺伝子Xの発現レベルを、遺伝子Xが媒介する調節経路の推定標的となる可能性のある遺伝子の発現レベルとともに評価しました。この図は、遺伝子Xとその推定標的の一つにおける発現レベルの例を示しています。未分化な翅原基の前後コンパートメントにおける基礎発現レベルに基づき、これらを遺伝子Yと呼びます。選択した遺伝子Xの活性は、サイレンシングにより40%まで減少することが判明しました。対照的に、その推定ターゲットの一つである遺伝子Yは7倍という有意な発現上昇が認められたため、遺伝子Yが遺伝子Xによって負に制御されているという仮説が検証されました。以上のことから、上述の実験的手法は、多様な調節経路における推定ターゲットの検証に有効に適用できると結論付けられます。

laser-microdissection-applied-to-gene-expression-profiling-subset

Research

JoVE Journal

Biology

生物学

このビデオ、記事では、単一または複数単離するための方法を提示...

のレーザーキャプチャーマイクロダイセクションショウジョウバエ末梢ニューロン

ショウジョウバエの成体構造は、虚数円盤と呼ばれる袋のような構造に由来します。これらのディスクの解析により、組織決定、コンパートメント境界の確立、細胞増殖、細胞運命の仕様、平面細胞の極性など、多くの発生過程に関する洞察が得られます。このプロトコールは、光/蛍光顕微鏡用の架空ディスクを調製するために使用されます。...

解剖や成虫の免疫染色からキイロショウジョウバエ

ここでは、転写プロファイリングのための特定の植物細胞タイプのレーザー支援マイクロダイセクションのためのプロトコルを提示します。このプロトコルはさまざまな種や細胞タイプに適していますが、焦点は、アブラナ科Boechera属の有性生殖およびアポミティック生殖に重要な雌性生殖細胞の非常にアクセスしにくい細胞にあります。...

個々の細胞タイプの転写プロファイリングのためのツールと​​してのレーザ支援顕微解剖（LAM）

このプロトコルは、 ショウジョウバエの眼/触角成虫（EAD）に蛍光マークされ、遺伝的に定義されたクローンの腫瘍を生成する方法を示します。なお、第3齢幼虫とどのように遺伝子発現の変化と腫瘍侵襲性を可視化し、定量化するためにそれらを処理するからEADと脳を分析する方法について説明します。...

ザ<em&gt;ショウジョウバエ</em&gt;成虫盤腫瘍モデル：遺伝的モザイクを用いた遺伝子発現と腫瘍侵襲性の可視化と定量化

多くの発生的に重要な遺伝子は、細胞または組織特異的な発現パターンを持っています。この論文では、野生型と比較して、トウモロコシの葉身と鞘の境界で発現が異なる遺伝子とlg1-R変異体で発現が異なる遺伝子を特定するためのLM...

レーザーマイクロダイセクションRNA-のSeqのための実験デザイン：トウモロコシ葉の開発の分析からの教訓

正確にショウジョウバエのティッシュの成績証明書または蛋白質を検出する能力は、その豊かさとローカライズ開発プロセスに関連の勉強にとって重要です。ここ蛹翼を分析する簡単な手順の説明です。これらの翼は、いくつかのテクニック(免疫組織化学、PCR...

Immunodetections または PCR の試金に適したショウジョウバエの蛹の翼を解剖する迅速かつ効率的な方法

このプロトコルは、マウス胚の新鮮な凍結切片から軟骨および骨を分離するためのレーザー捕捉マイクロセクションを記述する。軟骨および骨はクレシルバイオレット染色によって急速に視覚化され、正確に集めることができるので、トランスクリプト工学的分析のための高品質のRNAを得ることができます。...

遺伝子発現解析のためのマウス胚軟骨と骨のレーザー捕捉微小分片

リガンドへの暴露のタイミングは、発達の結果に影響を与える可能性があります。ここでは、翼ディスクの細胞からDppと呼ばれるショウジョウバエレベートタンパク質(BMP)の画像放出を行う方法を示す。...

ショウジョウバレウィングディスクからのイメージングDppリリース

レーザーマイクロダイセクションを使用してRNAシーケンシングのために個々の線虫組織を単離するプロトコルが記載されている。このプロトコルは、種固有の遺伝子ツールキットを必要とせず、単一組織サンプルのレベルで異なる種間で遺伝子発現プロファイルを比較することを可能にする。...

種にとらわれない単一組織アプリケーションのためのレーザーマイクロダイセクション

GFP再構成ベースのアプローチを使用して、生きたショウジョウバエの翼の想像上の円盤の隣接する上皮層の細胞間の接触を測定するためのプロトコルについて説明します。...

生きた ショウジョウバエ の翼の想像ディスクにおけるサイトーンメームによって媒介される細胞間接触を評価するためのGFP相補性ベースの二重発現システム

本記事では、試薬を節約し、少数の想像椎間板を取り扱いやすくする効率的な幻想椎間板解剖および抗体染色プロトコルについて説明します。...

ショウジョウバエ・メラノガスターからの眼触角および翼の想像円板の小規模解剖および抗体染色

学ぶレーザーマイクロダイセクションを用いたDrosophilaウィングディスクの特定領域における遺伝子発現プロファイリング手法。RNAiによる局所的遺伝子サイレンシングと定量RT-PCRを組み合わせ、組織マイクロ環境における遺伝子発現動態を解析する。

から細胞のサブセットの遺伝子発現プロファイリングへの応用レーザーマイクロダイセクションショウジョウバエウィングディスク

さらに動画を探す