Name: バイタル顕微鏡によるゼブラフィッシュ胚におけるマイコバクテリア感染時のマクロファージ溶解細胞死の可視化 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-01-09T15:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 49 s
Description: 学ぶ マイコバクテリア感染時のマクロファージ溶解細胞死の可視化法。バイタル顕微鏡を用いてゼブラフィッシュ胚でマクロファージの動態と細胞死モードを観察し、感染や炎症応答の研究に応用できる技術です。

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ゼブラフィッシュ株を共有してくれたジロン・ウェン博士、ステファン・オーラーズ博士、デビッド・トビン博士がM.マリナム関連の資源を共有してくれたことに感謝します。この作品は、中国国立自然科学財団(81801977)(B.Y.)、上海市保健委員会優秀青少年研修プログラム(2018YQ54)(B.Y.)、上海セーリングプログラム(18YF1420400)、上海キー研究所オープンファンド(2018年)によって支援されました。

ゼブラフィッシュは、動物福祉の倫理的見直しのための実験動物ガイドラインに準拠して標準的な条件下で飼育されました (GB/T 35823-2018).本研究におけるゼブラフィッシュ実験は全て承認され(2019-A016-01)、復旦大学上海公衆衛生臨床センターで実施されました。
1. M. マリナム単細胞接種準備 (図 1)
<ol><li>セルリアン蛍光M.マリナムグリセロールストックを-80°Cから解凍し、10%(v/v)OADC、0.25%グリセロールおよび50μg/mLハイグロマイシンを有する7H10寒天プレートを接種します。プレートを32°Cで約10日間インキュベートします。</li>
	<li>陽性蛍光を発現するコロニーを選択し、10%OADC、0.5%グリセロール、および50μg/mLハイグロマイシンを有する7H9培地の3 mLを接種する。<ol>
<li>培養が対数相(OD600 = 0.6~1.0)に達するまで、4~6日間、32°Cと100回転/分(rpm)で接種します。</li>
		<li>サブカルチャー(1:100)は、10%OADC、0.5%グリセロール、0.05%Tween-80、およびOD600が約1.0に達するまで50μg/mLの新鮮な7H9培地の30 mLで。 注: 最高のカルチャ品質を得る場合は、この時点でサブカルチャーステップをお勧めします。私たちの経験では、クローンを大量の媒体に直接添加すると、細菌塊の形成につながります。</li>
	</ol>
</li>
	<li>以下に説明するようにM.マリストム細胞を収集する。<ol>
<li>3,000 x gで10分間遠心分離機を行い、M.マリナムをペレットとして回収する。上清の300°Lを除くすべてを捨て、ペレットの再サスペンドに使用します。</li>
		<li>10%グリセロールで7H9培地の3 mLを追加し、ペレットをさらに再懸濁し、15 s ONで100 Wの水浴中の懸濁液を超音波処理し、合計2分間オフにします。 注:超音波処理の目的は、マイクロインジェクション針の閉塞を防ぐ接種のための単一の細胞ホモジネートを達成することです。</li>
	</ol>
</li>
	<li>細菌懸濁液を10mLシリンジに移し、5μmフィルターを通過して細菌塊を除去します。</li>
	<li>分光光度計を用いて懸濁液の光学密度(OD)を測定し、10%グリセロールを含む7H9媒体でOD600 = 1.0に希釈します。懸濁液を10μLのアリコートに分割し、将来の使用のために-80°Cの冷凍庫で保存します。</li>
	<li>OADCの10%(v/v)、グリセロールの0.5%、ハイグロマイシンの50μg/mLを含む7H10寒天プレート上の細菌ストックの連続希釈およびめっきによって、接種液(cfu/mL)の細菌濃度を確認します。</li>
</ol>2. ゼブラフィッシュ胚製剤
<ol><li>産卵の前日に、飼育室にゼブラフィッシュの繁殖ペアを設置します。 注:各繁殖室に1組のみを追加します。</li>
	<li>受精後1時間以内に翌朝胚を採取する。蒸留水で胚を慎重に洗浄し、E3培地30mLを含む100mmペトリ皿に最大100個の胚を移します。28.5 °Cでインキュベートします。</li>
	<li>12時間後、顕微鏡で観察し、受精または損傷した卵を廃棄する。</li>
	<li>24 hpfで、N-フェニルチウリア(PTU、0.2 nM最終濃度)で培地を新鮮なE3培地に変更し、顔料の発達を防ぎます。胚がマイクロインジェクションの準備ができるまで、28.5 °Cで胚をインキュベートします。</li>
</ol>3. 細菌マイクロインジェクションによる感染
<ol><li>前述の参照13に記載されているようにホウケイ酸ガラスマイクロキャピラリー注射針を調製する。</li>
	<li>ゼブラフィッシュ胚感染用取り付け<ol>
<li>マイクロ波100mL1%(w/v)および100 mLの0.5%(w/v)低融解アガロースは、アガロースが完全に溶融するまでオートクレーブ化E3培地中で行う。1 mLのアリコートチューブに分け、4°Cで保存し、将来の使用のために使用します。</li>
		<li>使用前に、アガロースを完全に溶かすまで95°加熱ブロックで加熱します。アガロースを45°Cの加熱ブロックに入れて液体の形で維持する(図2)。</li>
		<li>幹領域における筋肉内感染の取り付け<ol>
<li>ガラスのスライドに0.5 mLの1%(w/v)アガロースを均等に注いで、底部アガロース層を作成します。氷箱または冷たい表面に3分間置いて固める。</li>
			<li>卵水中のゼブラフィッシュ胚(48~72hpf)をトリカイン(200μg/mL)とPTUで取り付ける前に5分間麻酔します。下部アガロース層に最大60個のゼブラフィッシュ胚を配置し、慎重に2つの列にレイアウトします(図2B)。</li>
			<li>0.5%(w/v)アガロースを加える前に、組織紙で下部アガロース層の残りの水を取り除き、上層を作成します。胚がアガロースに完全に埋め込まれていることを確認します。ガラスのスライドをもう一度アイスボックスに戻してアガロースを固め、脱水を防ぎます。</li>
			<li>余分なE3卵の水で表面を覆うことによって、アガロースの最上層を湿らせておきます。</li>
		</ol>
</li>
		<li>中脳感染症の取り付け<ol>
<li>単一の凹面ガラス顕微鏡スライドの溝を1%(w/v)アガロースで覆い、4~6個のトリカイン麻酔胚をアガロースに移します。</li>
			<li>各胚の頭部を10G針で慎重に上に置きます(図2C)。</li>
			<li>すべての胚の位置が固定されたら、ガラススライドを氷箱または冷たい表面に移してアガロースを固化させます。 注:胚との卵水の移動量を最小限に抑えることによって、低融解アガロースの希釈を避けてください。</li>
		</ol>
</li>
	</ol>
</li>
	<li>感染症に対する細菌の準備<ol>
<li>滅菌濾過フェノールレッド(10x)を細菌ストックの10μLアリコート(ステップ1で作製)に加え、ボルテックスで簡単に混ぜます。 注:最終濃度は滅菌PBSを使用して調整することができる。</li>
		<li>10 s ON で 100 W を使用して準備を超音波処理し、10 s OFF を 1 分間使用して、14を形成した可能性のある塊を分割します。</li>
	</ol>
</li>
	<li>マイクロインジェクションによる感染<ol>
<li>マイクロインジェクターとマイクロマニピュレータを、以前に報告した13のようにマイクロインジェクションの適切な位置と設定に調整する。</li>
		<li>マイクロローダーを用いて細菌製剤の3μLを調製針に移す(ステップ3.1参照)。ピペットは、気泡を形成しないようにゆっくりと慎重に。</li>
		<li>トランク領域の感染については、100 cfu をトランク領域に注入します (図 3A)。ノトコードに細菌を注入することは避けてください。 注:注射用cfuは、式cfu=細菌ストック濃度x希釈係数x注入液滴体積によって推定される。実際のcfuは、OADCの10%(v/v)、グリセロールの0.5%、および50μg/mLのハイグロマイシンを含む7H10寒天プレート上に細菌接種液を1滴めっきすることによって確認されます。</li>
		<li>中脳感染の場合は、約500cfuを中脳領域に注入する(図3B)。</li>
		<li>マイクロインジェクションの後、ゼブラフィッシュ胚をプラスチックピペットで新鮮な卵水に慎重に洗い流します。 注:非常に初期の自然免疫細胞応答の観察をカバーするために、できるだけ早くガラス底皿に胚をマウントします。</li>
	</ol>
</li>
</ol>4. 感染症の生きたイメージング
<ol><li>ライブイメージング用魚の取り付け<ol>
<li>グラス底35mm皿の真ん中に最大10個のトリカイン麻酔胚を移します。余分な E3 メディアを破棄します。</li>
		<li>1%低融点アガロースで皿をカバーし、10 G針を使用して慎重にゼブラフィッシュ胚の向きを付けます。グラス底皿を氷の上に10s入れ、アガロースを固める。 注:中脳注射の場合、胚は頭を上向きにアガロースに取り付ける必要があります(図4A)。体幹領域の筋肉内感染の場合、胚はアガロースに横に取り付けるべきである(図4B)。</li>
		<li>完全に固化したら、アガロースを卵水の層(プラス1×トリカインとPTU)で覆います。</li>
	</ol>
</li>
	<li>3色の高解像度タイムラプス共焦点顕微鏡 注:以下のステップは、63.0x 1.40オイルUV対物レンズを搭載した共焦点顕微鏡で操作されます。<ol>
<li>環境室の温度を28.5 °Cに設定します。湿気を与え、卵水の蒸発を防ぐために、室内にいくつかの湿ったティッシュペーパーを置きます(補足図1)。</li>
		<li>環境室にゼブラフィッシュと35ミリメートルのガラス底皿を置きます。</li>
		<li>共焦点ソフトウェアを開き、ステージを初期化します。63.0 x 1.40オイルUV目的に切り替え、差動干渉コントラスト(DIC)フィルタを使用して明視野チャネルを使用してゼブラフィッシュを見つけます。</li>
		<li>405ダイオード、アルゴン(20%パワー)、およびDPSS 561 nmレーザーを開きます。適切なレーザーパワーとスペクトル設定を設定します。 注: セルリアン(励起 = 405 nm;放出= ~456-499 nm)、eGFP(励起= 488 nm、発光= ~500~550 nm)、DsRed2(励起= 561 nm;放出=~575~645 nm)(補足図2B)のスペクトル設定を以下に示します。</li>
		<li>"XYZ" "シーケンシャル スキャン" 取得モードを選択し、イメージ形式を "512 x 512 ピクセル" に設定します (補足図 2A)。</li>
		<li>"ライブデータ モード" に切り替えます。最初のゼブラフィッシュの位置をターゲットにし、"Begin"と"End"Z の位置をマークします。残りの胚ごとにこのプロセスを繰り返します。プログラムの最後に "一時停止" を追加できます (補足図 2C)。</li>
		<li>プログラムのループとサイクルを定義します。</li>
		<li>ファイルを保存します。</li>
	</ol>
</li>
</ol>5. アポトーシスとライブイメージングを誘導する単一細胞UV照射
<ol><li>ステップ4.1の説明に従って魚をマウントします。</li>
	<li>受精後3日間の中脳領域のイメージング(dpf)マクロファージ特異的トランスジェニックTg(mfap4-eGFP)胚15
</li>
	<li>1つの蛍光標識マクロファージの対象領域を選択し、400 Hz速度でスキャンし、50sの6%UVレーザーパワーをスキャンします。 メモ:走査速度と時間は、個々の顕微鏡に基づいて最適化する必要があります。スキャン時間は、その後標的細胞アポトーシスを引き起こす広範なDNA損傷を引き起こすように最適化する必要がありますが、細胞全体をフォトブリーチすることはありません。</li>
	<li>上記の手順を繰り返して、より多くの標的細胞を照射します。</li>
	<li>セクション4で説明するように中脳領域のタイムラプスイメージングを行う。</li>
</ol>6. 画像処理
<ol><li>取得した画像に対して「最大投影」を実行します。</li>
	<li>[最大投影数] ビューで、ターゲット セルの XY 位置と時間を検索してマークします。</li>
	<li>標準ビューに戻り、ターゲット セルの Z 位置を検索してマークします。</li>
	<li>ターゲット セルの単一レイヤー イメージをトリミングします。</li>
	<li>オーバーレイチャンネルと明るいフィールドをビデオとしてAVI形式で書き出します。</li>
	<li>ImageJ でオーバーレイ チャネルと明るいフィールドの対象領域をトリミングします。</li>
	<li>最後のステップの 2 つのビデオを垂直方向に結合し、ImageJ で 1 つの AVI 形式のビデオとして保存します。</li>
</ol>

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</ol>

著者たちは何も開示する必要はない。

このプロトコルは、マイコバクテリア感染時のマクロファージ死の可視化を記述する。細胞膜の完全性などの因子に基づいて、感染駆動細胞死は、アポトーシスおよび溶解細胞死24、25に分けることができる。溶解細胞死は、アポトーシスよりも生物にとってストレスであり、強い炎症反応を引き起こすので24、25である。生体内での溶解細胞死の観察は、高い空間時間分解能、適切な共焦点顕微鏡の設定、および強いトランスジェニック発現の要件のために困難である。
適切なマイクロインジェクションには、いくつかの重要なステップが必要です。細菌ストックは、注射前にすべての塊を除去するために徹底的に超音波処理する必要があります。マイクロインジェクション用ゼブラフィッシュの取り付けを、低融点アガロースの2層間のガラススライドに埋め込むことで改良しました。アガロースの第2層を塗布した後、スライド...

マイコバクテリア感染は、宿主免疫細胞死1を引き起こすことが実証されている。例えば、減衰した株はマクロファージ中のアポトーシスを引き起こし、感染を含む。しかし、毒性株は、溶解細胞死を引き起こし、細菌の播種を引き起こす1、2.これらの異なるタイプの細胞死が宿主抗抗抗抗抗抗細菌応答に及ぼす影響を考慮すると、生体内でのマイコバクテリア感染時のマクロファージ細胞死の詳細な観察が必要である。
細胞死を測定する従来の方法は、Annnexin V、TUNEL、またはアクリジンオレンジ/ヨウ化プロピジウム染色3、4、5などの死細胞染色を使用することです。しかし、これらの方法は、生体内での細胞死の動的過程に光を当てることができません。インビトロでの細胞死の観察は、すでに生イメージング6によって促進されている。しかしながら、結果が生理学的条件を正確に模倣するかどうかは不明のままである。
ゼブラフィッシュは、宿主抗抗抗抗抗抗抗菌応答を研究するための優れたモデルである。それは人間と同様に高度に保存された免疫系を有し、容易に操作されるゲノム、および初期胚は透明であり、生きたイメージングを可能にする7、8、9を可能にする。M.マリナムとの感染後、成人ゼブラフィッシュは典型的な成熟肉芽腫構造を形成し、胚性ゼブラフィッシュは構造9、10のような早期肉芽腫を形成する。自然免疫細胞間細菌相互作用の動的過程は、ゼブラフィッシュM.マリナム感染モデル11、12において以前に検討されている。しかし、空間的な時間分解能の要件が高いため、自然免疫細胞の死を取り巻く詳細はほとんど未定義のままである。
ここでは、生体内のマイコバクテリア感染によって引き起こされるマクロファージ溶解細胞死のプロセスを可視化する方法について説明する。このプロトコルはまた、発達および炎症の間に生体内の細胞行動を視覚化するために適用され得る。

<table><tbody><tr><td>0.05% Tween-80</td><td>Σ</td><td>P1379</td><td></td></tr><tr><td>10 mL シリンジ</td><td>Solarbio</td><td>YA0552</td><td></td></tr><tr><td>10% OADC</td><td>BD</td><td>211886</td><td></td></tr><tr><td>3-アミノ安息香酸</td><td>ΣE10521</td><td></td><td></td></tr><tr><td>5 &mu;mフィルター</td><td>Mille X</td><td>SLSV025LS</td><td></td></tr><tr><td>50 &mu;l/ml ハイグロマイシン</td><td>サンゴン バイオテック</td><td>A600230</td><td></td></tr><tr><td>7H10</td><td>BD</td><td>262710</td><td></td></tr><tr><td>7H9</td><td>BD</td><td>262310</td><td></td></tr><tr><td>ガラス底 35 mm ディッシュ</td><td>インビトロ科学</td><td>D35-10-0-N</td><td></td></tr><tr><td>アガロース</td><td>サンゴン バイオテック</td><td>A60015</td><td></td></tr><tr><td>共焦点顕微鏡</td><td>ライカ</td><td>TCS SP5 II</td><td></td></tr><tr><td>環境チャンバー</td><td>Pecon</td><td>temp control 37-2 デジタル</td><td></td></tr><tr><td>Eppendorf マイクロローダー</td><td>Eppendorf</td><td>No.5242956003</td><td></td></tr><tr><td>ガラス顕微鏡スライド</td><td>Bioland Scientific LLC</td><td>7105P</td><td></td></tr><tr><td>Glycerol</td><td>Sangon Biotech</td><td>A100854</td><td></td></tr><tr><td>Incubator</td><td>Keelrein</td><td>PH-140(A)</td><td></td></tr><tr><td><>M.marinum</td><td></td><td></td><td>ATCC BAA-535</td></tr><tr><td>マイクロインジェクションニードル</td><td>ワールド精密機器</td><td>IB100F-4</td><td></td></tr><tr><td>マイクロインジェクター</td><td>エッペンドルフ</td><td>フェムトジェット</td><td></td></tr><tr><td>マイクロマニピュレーター</td><td>成茂</td><td>MN-151</td><td></td></tr><tr><td>msp12:セルリアン</td><td></td><td></td><td>Ref.: PMID 25470057; 27760340</td></tr><tr><td>フェノールレッド</td><td>Σ</td><td>P3532</td><td></td></tr><tr><td>PTU Σ</td><td></td><td>P7629</td><td></td></tr><tr><td>シングルコンキャビッドガラス顕微鏡スライド</td><td>セイルブランド</td><td>7103</td><td></td></tr><tr><td>ソニケーター</td><td>SCICNTZ</td><td>JY92-IIDN</td><td></td></tr><tr><td>分光光度計 (OD600)</td><td>エッペンドルフ AG</td><td>22331 ハンブルク</td><td></td></tr><tr><td>実体顕微鏡</td><td>オリンパス</td><td>SZX10</td><td></td></tr><tr><td>Tg(mfap4:eGFP)</td><td></td><td></td><td>Ref.: PMID 30742890</td></tr><tr><td>Tg(coro1a:eGFP;lyzDsRed2)</td><td></td><td></td><td>参照: PMID</td></tr> <tr><td>31278008Tg(mpeg1:LRLG;lyz:eGFP)</td><td></td><td></td><td>参照: PMID 27424497; 17477879</td></tr></tbody></table>

バイタル顕微鏡によるゼブラフィッシュ胚におけるマイコバクテリア感染時のマクロファージ溶解細胞死の可視化

Visualization of Macrophage Lytic Cell Death During Mycobacterial Infection in Zebrafish Embryos via Intravital Microscopy

ゼブラフィッシュは、その透明な性質と初期の発達中の自然免疫系のみに依存しているため、自然免疫細胞の挙動を研究するための優れたモデル生物です。ゼブラフィッシュマイコバクテリウム・マリナム(M.マリナム)感染モデルは、マイコバクテリア感染に対する宿主免疫応答の研究において十分に確立されている。異なるマクロファージ細胞死の種類は、マイコバクテリア感染の多様な結果につながることが示唆されている。ここでは、M.マリナム感染後のゼブラフィッシュ胚におけるマクロファージ細胞死を観察するために、生内顕微鏡を用いたプロトコルについて説明する。マクロファージと好中球を特異的に標識するゼブラフィッシュトランスジェニックラインは、中脳または幹のいずれかで蛍光標識M.marinumの筋肉内マイクロインジェクションを介して感染する。感染したゼブラフィッシュ胚は、その後、低融解アガロースに取り付けられ、X-Y-Z-T次元の共焦点顕微鏡によって観察される。長期ライブイメージングでは、光漂白や光毒性を避けるために低いレーザーパワーを使用する必要があるため、トランスジェニックを強く表現することを強くお勧めします。このプロトコルは、免疫細胞遊走、宿主病原体相互作用、および細胞死を含む生体内の動的プロセスの可視化を容易にする。

マイコバクテリウム感染は、感染経路に基づいて異なる宿主応答を引き起こす可能性があります。このプロトコルでは、ゼブラフィッシュ胚は、蛍光標識細菌を中脳または幹に筋肉内マイクロインジェクションによって感染させ、共焦点生イメージングによって観察される。これら2つの経路を介した感染は、自然免疫細胞の募集とその後の細胞死を引き起こす感染を局所的に制限する。
自然免疫細胞死の詳細を可視化することは困難です。溶解細胞死は非常に短い時間枠で起こり、観察するために高解像度の顕微鏡検査を必要とする。また、自然免疫細胞の運動性が高いため、観察領域外に移動することができます。このプロトコルでは、複数の胚を並行して観察することでこの問題を解決します。ゼブラフィッシュ胚の配列は、感染のための単一のガラス顕微鏡スライドに取り付けることができ、最大10個の胚をライブイメージング用の同じ35mmガラス底皿に取り付けることができます(図4)。共焦点顕微鏡のライブデータモデルを利用することで、複数の胚...

このプロトコルは、マイコバクテリウム・マリナム感染時の胚性ゼブラフィッシュにおけるマクロファージ挙動および死を可視化する技術を記述する。細菌の調製、胚の感染、およびバイタル内顕微鏡検査のステップが含まれています。この技術は、感染または無菌炎症を伴う同様のシナリオにおける細胞行動および死亡の観察に適用され得る。

Zebrafish is an excellent model organism for studying innate immune cell behavior due to its transparent nature and reliance solely on its innate immune ...

このプロトコルは、マイコバクテリア感染時のマクロファージ細胞死モードを明確に区別することができる。複数の胚を並列に観察することで、マクロファージの細胞死過程全体を捕捉する確率が大幅に高まります。このプロトコルは、感染または無菌炎症を伴う同様のシナリオにおける細胞死および他の細胞行動の観察にも適用され得る。拡張ライブイメージングの間、光の漂白や毒性を避けるために、レーザーの強度をできるだけ低く保つことが非常に重要です。原稿による接種後、培養物を10分間Gの3000倍にして、マイコバクテリウムマリナムをペレットとして採取する。上清の300マイクロリットルを除くすべてを捨て、ペレットを再中断します。さらに10%グリセロールで7H9培地の3ミリリットルを追加し、ペレットをさらに再中断し、15秒オンと15秒オフで100ワットのウォーターバスで懸濁液を超音波処理し、合計2分間、単一のセルホモジネートを達成します。細菌懸濁液を10ミリリットルのシリンジに移し、5ミクロンのフィルターを通過して細菌の塊を取り除く。分光光度計を用いて、懸濁液の光学濃度を測定し、10%グリセロールを含有する7H9培地で1枚でOD600に希釈する。懸濁液を10マイクロリットルのアリコートに分け、さらに使用するためにマイナス80°Cの冷凍庫で保管します。まず、アガロースを95°Cの加熱ブロックで完全に溶けるまで加熱します。45°Cの加熱ブロックに置くことによって液体の形でアガロースを維持します。幹領域の筋肉内感染のためにマウントするには、ガラススライド上に均一に体積アガロースによって1%重量の0.5ミリリットルを注ぐことによって底アガロース層を作成します。スライドを氷箱または冷たい表面に3分間置いて固めます。ゼブラフィッシュの胚を麻酔した後、最大60個のゼブラフィッシュ胚を下アガロース層に配置し、2列に慎重にレイアウトします。下部アガロース層に残った水をティッシュペーパーで取り除き、0.5%重量の0.3ミリリットルを体積アガロースで添加して上層を作ります。胚がアガロースに完全に埋め込まれていることを確認します。グラススライドを再びアイスボックスに戻してアガロースを固める。余分なE3卵水で表面を覆うことによって、アガロースの最上層を湿らせておいてください。次に、マイクロインジェクターとマイクロマニピュレータを適切な位置に調整し、マイクロインジェクションを行います。マイクロローダーを使用して、調製した細菌培養物の3マイクロリットルを調製された針に移す。気泡を形成しないようにゆっくりと慎重にピペット。トランク領域に 100 CFU を注入します。マイクロインジェクションの後、シマウマの魚の胚をプラスチックピペットで淡い卵水に慎重に洗い流します。中脳感染症のためにマウントするには、プラスチックピペットを使用

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Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

免疫学と感染症

透明なゼブラフィッシュの胚は、次のような視覚化するための有用なモデルのホストと自然免疫細胞と細胞内細菌性病原体との間の機能的研究の相互作用を、証明している...

細胞内細菌性病原体を持つゼブラフィッシュ胚の感染

ゼブラフィッシュの急速な発展、小型サイズと透明性感染症の自然免疫制御の研究のための途方もない利点があります...

ゼブラフィッシュ幼生における播種性カンジダ症の非侵襲的イメージング

出典: Zhang、X.、 et al.生体材料関連 黄色ブドウ球菌 感染のin vivo可視化と生体内分析のためのゼブラフィッシュはいモデル J. Vis. 経験。 (2019年)このビデオでは、 黄色ブドウ球菌を注射したゼブラフィッシュ胚の蛍光イメージングを示しており、感染の進行と細菌の分布を定量化して、生体材料の微小球が in vivo...

 ゼブラフィッシュ胚における生体材料関連細菌感染の蛍光イメージング

出典: Niu、L.、 et al.、 生体内顕微鏡によるゼブラフィッシュ胚におけるマイコバクテリア感染中のマクロファージ溶解細胞死の視覚化。 J. Vis. 経験。 (2019年)このビデオでは、感染アッセイや下流アプリケーションで一貫して使用するために、後期対数期培養物から Mycobacterium marinum...

単一細胞細菌接種物の調製

出典: Niu, L. ほか。 ゼブラフィッシュ胚におけるマイコバクテリア感染時のマクロファージ溶解細胞死の生体内顕微鏡による可視化。 J. Vis. Exp.(2019年)このビデオは、 マイコバクテリウム・マリナム...

ゼブラフィッシュ胚におけるマイコバクテリア感染時のマクロファージ細胞死のライブ画像

出典: Bernut, A.ら。ゼブラフィッシュ胚における マイコバクテリア・アブスペル の病因解析および解析。 J. Vis. Exp. (2015年)このビデオでは、蛍光マクロファージを発現し、蛍光性 のマイコバクテリウム・ブスペサス...

マイコバクテリウム・ブスペサスに感染したゼブラフィッシュ胚における宿主-病原体相互作用のライブ画像化

光学的に透明なゼブラフィッシュの胚は、病原性微生物と自然免疫細胞との間の相互作用をリアルタイムで研究し、視覚化するために広く使用されています。Mycobacterium...

イメージング病因とのコーディングを解読し、<em&gt;マイコバクテリウム膿瘍</em&gt;ゼブラフィッシュ胚で

その自然の病原体菌 marinumを使用して大人のゼブラフィッシュ モデルひと結核にプロトコルを紹介します。抽出された DNA と感染したゼブラフィッシュの内臓からの RNA は、抗酸菌の合計負荷魚と qPCR...

結核抗酸菌 marinum感染成人ゼブラフィッシュをモデル化

本研究では、生体内可視化と蛍光顕微鏡を基バイオマテリアル関連感染の生体内解析のためのゼブラフィッシュ胚モデルについて説明します。このモデルは、生体内での生体関連感染症を研究するためマウス...

ゼブラフィッシュ胚モデルにおける生体内可視化と生体材料の生体解析黄色ブドウ球菌感染症

ここでは、ヒト脳内出血 (ICH)...

ゼブラフィッシュの幼虫を用いて出血性脳卒中の病理学的結果を研究する

私たちは、高速走査型共焦点顕微鏡法を利用して、発生中のゼブラフィッシュの視蓋でミクログリア細胞のライブイメージングを行い、これらの細胞のin...

ゼブラフィッシュ胚におけるミクログリア動態のライブイメージングとキャラクタリゼーション

学ぶ マイコバクテリア感染時のマクロファージ溶解細胞死の可視化法。バイタル顕微鏡を用いてゼブラフィッシュ胚でマクロファージの動態と細胞死モードを観察し、感染や炎症応答の研究に応用できる技術です。

バイタル顕微鏡によるゼブラフィッシュ胚におけるマイコバクテリア感染時のマクロファージ溶解細胞死の可視化

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