初期ゼブラフィッシュ幼生における低分子スクリーニングと毒性試験

まず、受精後3日目に初期段階のゼブラフィッシュの胚をペトリ皿に集めます。1000マイクロリットルのマイクロピペットを100マイクロリットルの容量に設定して、健康そうな孵化した胚を1つ、96ウェルプレートの各ウェルに移します。次に、必要な量の試験化学物質を12ウェルプレートの各ウェルにピペットで入れます。

次に、E3メディウムで総容量を2.4ミリリットルに調整します。ストックテストケミカルの溶解に使用される溶媒に従って、車両制御を準備します。200マイクロリットルのピペットを使用して、96ウェルプレートの各ウェルから既存のE3溶液をすべて取り出します。

8チャンネルのマイクロピペットを使用して、濃度ごとに準備した試験媒体100マイクロリットルと交換します。濃度ごとに合計24匹の幼虫がテストされていることを確認してください。24時間後、実体光学顕微鏡を使用して形態学的スコアリングを行います。

バイナリ法を使用して形態をスコアリングします。ここで、absence は正常な形態を示し、 present は形態学的異常を示します。スコアリングが完了したら、各ウェルから50マイクロリットルの培地を取り出します。新たに調製した試験液50マイクロリットルと交換してください。

死んだ幼虫を取り出して記録し、幼虫を摂氏28.5度で14時間の光と10時間の暗サイクルでインキュベートします。受精後5日目のゼブラフィッシュは、薬物曝露の2日後に多様な表現型を示しました。影響を受けていないゼブラフィッシュは正常として観察されましたが、一部の魚では軽度の心膜浮腫が見られました。

他の患者では、卵黄出血および卵黄の進展を伴う重度の心膜浮腫が認められた。色素沈着の減少、水泳用膀胱、および全長の減少を伴う発達の遅延も観察されました。その他の表現型には、卵黄が腫れ、尾鰭がねじれているゼブラフィッシュ、尾鰭がない、脊索が湾曲しているゼブラフィッシュが含まれていました。

重篤な症例では、切開と壊死による死亡が認められました。