ヒト腎動脈枝のマルチレベル顕微解剖と機能構造プロファイリング

私たちの研究は、ヒトの腎動脈枝を分離して機能的に評価し、血管機能障害のメカニズムを明らかにし、標的療法を導くための標準化された方法を確立することを目的としています。これまでの研究は動物モデルまたは間接イメージングに依存しており、当社のワイヤーミオグラフィーはin vitroでヒトの腎動脈機能を直接反映していました。当社の方法は、正確なヒト特異的血管分析を可能にし、種の限界を克服し、トランスレーショナル医薬品の開発を改善します。

まず、組織の生存率と構造的完全性を維持するために、輸送中に腎臓組織が液体に完全に浸されたままであることを確認してください。腎門の位置を特定し、腎盂と外側の凸状境界の両方を通過するように切り口を位置合わせすることにより、冠状面を視覚的に識別します。滅菌メスを使用して、この冠状面に沿って腎臓を二分して対称的な半分を作成し、腎錐や柱などの内部構造を露出させます。

実体顕微鏡下で、顕微解剖はさみと鉗子を使用して、10センチメートルの黒底培養皿で葉間動脈、弓状動脈、および小葉間動脈を注意深く分離します。次に、同じ10センチメートルの黒底培養皿で解剖された動脈から周囲の組織と脂肪をそっと取り除き、徹底的に洗浄します。顕微解剖はさみを使用して、洗浄した動脈を長さ約2ミリメートルのリングに切断し、血管機能検査を行います。

最初のガイドワイヤーを皿の動脈リングに慎重に挿入します。ガイドワイヤーの片側を90度の角度で曲げ、ワイヤー付きの動脈リングをチャンバー内に移します。動脈リングをサンプルホルダーに固定する前に、血管の長さを記録してください。

2つのホルダーの間にリングを置き、マイクロメートルスケールを読み取ります(1つのスケール分割は10マイクロメートルに相当します)。ホルダー同士が接触したときに測定された初期スケール値を減算して、動脈リングの長さと幅を計算します。次に、機器に付属のネジを使用して動脈リングをアサリ型サンプルホルダーに固定し、時計回りに締めます。

次に、2 番目のガイド ワイヤーを動脈リングに通します。両端の固定ネジにワイヤーを時計回りに巻き付け、サンプルホルダーの表面にしっかりと固定します。DMTメニューからノーマライゼーション設定を選択し、接眼レンズキャリブレーションを1分割あたり1ミリメートル、目標圧力を13.3キロパスカル、IC1/IC100を0.9、オンライン平均時間を3秒、遅延時間を60秒に設定します。

標的動脈に対応するチャネルを選択し、DMTメニューから正規化画面を開きます。適切なフィールドに、a1 がゼロに等しく、a2 が測定された血管長 (ミリメートル単位) に等しいため、組織エンドポイントを入力します。線径を40マイクロメートルとして入力し、目盛りからマイクロメーターの読み取り値を入力します。

[ポイントの追加] をクリックしてデータを保存します。次に、受動的なストレッチを適用し、3分間待ちます。次のポイントとして新しいマイクロメーターの読み取り値を入力し、[ポイントの追加]をクリックします。

5ミリリットルの60カリウムイオン溶液をチャンバーに加えて、カリウムを介した容器の収縮を誘発します。60カリウムイオン溶液を洗い流すには、5ミリリットルのクレブス溶液を3回加えます。フェニレフリン誘発性の濃度依存性収縮を評価するには、累積フェニレフリンを 10 の負の 9 乗から 10 の負の 4 乗の半対数刻みで塗布します。

追加の薬物試験では、張力がベースラインに戻り、少なくとも 10 分間安定するまで、温かい 5 ミリリットルのクレブス溶液でチャンバーを少なくとも 5 回洗浄します。葉間動脈は腎髄質から正常に解剖され、厚い血管壁と周囲の脂肪組織が示され、構造的完全性を維持するために慎重な除去が必要でした。弓状動脈は皮質髄質接合部で分離され、血管壁が薄く、軌道がアーチ状でした。

小葉間動脈は、非常に薄い壁を持ち、皮質組織と密接に統合された腎皮質を直線的に走っていることが確認されました。組織学的分析により、葉間動脈は外膜がはっきりした血管壁が最も厚く、弓状動脈と小葉間動脈は壁が徐々に薄くなり、平滑筋層が少なくなることが明らかになりました。動脈の正常化には、機械的伸張とカリウム誘発刺激の繰り返しが含まれ、サンプル全体で安定したベースライン張力条件が確立されました。

フェニレフリンを10から負の9乗から負の4モル濃度の累乗に10乗に累積添加すると、用量依存的に動脈輪に徐々に強い収縮が誘発されました。フェニレフリンが収縮した動脈では、アセチルコリンの濃度を10から負の8乗から負の5モルの3乗に10の3倍に増加させると、濃度依存性血管拡張が生じました。