הזרקת subretinal של וקטורי ריפוי גנטי ותאי גזע לעיניים המאוסות
Summary
טכניקה ניתוחית זו ממחישה את הזריקה של וקטורים בריפוי גנטי ותאי גזע לתוך חלל subretinal של עין העכבר.
Abstract
אובדן הראייה משפיע על כ -3.4 מיליון בני אדם בארצות הברית והוא צפוי לגדול בשנים הקרובות. 1 לאחרונה, ריפוי גנטי והשתלות תאי גזע הפכו לכולים טיפוליים מרכזיים לטיפול בעיוורון כתוצאה ממחל ניווניות של רשתית. ישנם מספר סוגים של השתלה עצמית לניוון מקולרי גיל (AMD), כגון השתלת תאי אפיתל קשתית פיגמנט, יצרו תוצאות מעודדות, וניסויים בבני אדם החלו לצורות אחרות של טיפולים בתאי גזע וגנים. 2 אלה כוללים החלפת הגן RPE65 הטיפול בחולים עם amaurosis המולד של Leber והשתלת תאי רשתית באמצעות תאי גזע עוברי אנושיים (ES) במחלת Stargardt. 3-4 עכשיו שקיימים נתיבי ריפוי גנטיים ותאי גזע זמינים לטיפול בחולים עם מחלות רשתית, חשוב לוודא הטיפולים הפוטנציאליים הללו במודלים של בעלי חיים לפני שיחולוing במחקרים בבני אדם. העכבר הפך מודל מדעי חשוב לבדיקת היעילות הטיפולית של וקטורי גן טיפוליים והשתלת תאי גזע בעין. 5-8 במאמר זה וידאו, אנו מציגים טכניקה להזריק וקטורי ריפוי גנטיים או תאי גזע לתוך החלל של subretinal עין העכבר תוך מזעור ניזק לרקמות שמסביב.
Protocol
Representative Results
Discussion
טכניקת וידאו זה מספקת הוראות השלמת ההליך כירורגי הזרקת subretinal בהצלחה, ולהבטיח שוקטור הריפוי הגנטי או תאי גזע ממוקם במיקום הנחוץ יעילות לטיפול במחלה העינים. טכניקה זו מאפשרת למיקוד של תאי רשתית כגון רשתית או קולטני אור, שכן הוא מציב את וקטורי הריפוי הגנטיים או רקמות של…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
מחקר כדי למנוע עיוורון; סיוע ניסויי מטקיוקי נגסאקי; מחקר זה תואם את הצהרת ARVO לשימוש בבעלי חיים ברפואת עיניים ומחקר חזותי. KJW נתמך על ידי מענקי NIH 5T32EY013933 ו5T32DK007647-20. VBM נתמך על ידי מענק NIH K08EY020530.
Materials
| Name | Company | Catalog | Comments |
| 0.8-1.10 x 100 mm Capillary Tube (glass) | Kimble Glass, Inc. | 34502 99 | |
| Flaming/Brown Micropipette Puller | Sutter Instrument | P-97 | Narishige microforge can be used instead. Catalog #MF-900 |
| Sigmacote | Sigma Aldrich | SL2-25ML | Silicone |
| Dubecco’s Phosphate Buffered Saline with Calcium Chloride and Magnesium Chloride | Gibco-Invitrogen | 14040-133 | |
| Safety-Lok 25 3/4G x 12″; Blood Collection Set | B-D Vacutainer | 367298 | |
| 1 ml Sub-Q 26 5/8G Slip-Tip Syringe | Becton-Dickinson | 309597 | |
| 0.5-10 μl Finnpipette II Adjustable-Volume Pipetter | Fisherbrand | 21-377-815 | |
| 1-200 μl Natural Beveled Tips | USA Scientific, Inc. | 1111-1700 | |
| Discovery.V8 Stereo Microscope | Zeiss | MC1500 | |
| 60 mm x 15 mm Style Treated Polystyrene Cell Culture Dish | Corning Incorporated | 430166 | |
| Vannas Straight Scissors | Storz Ophthalmics | E3383 S | |
| Curved Dressing Forceps with Serrations Delicate | Storz Ophthalmics | E1408 | |
| 15 Degree Microsurgery Knife | Wilson Ophthalmic Corp. | 091204 | |
| Ketamine | Ketaset III | NADA #45-290 | |
| Xylazine | Lloyd Laboratories | NADA #139-236 | |
| Bupivacaine (Marcaine) | AstraZeneca | N/A | |
| Buprenorphine | Sigma Aldrich | B9275 |
References
- Abe, T. Regeneration of the retina using pigment epithelial cell transplantation. Nihon Ganka Gakkai Zasshi. 106, 778-803 (2002).
- Jacobson, S. G., Cideciyan, A. V., Ratnakaram, R., Heon, E., Schwartz, S. B., Roman, A. J., Peden, M. C., Aleman, T. S., Boye, S. L., Sumaroka, A., et al. Gene therapy for Leber congenital amaurosis caused by RPE65 mutations: safety and efficacy in 15 children and adults followed up to 3 years. Arch. Ophthalmol. 130, 9-24 (2011).
- Schwartz, S. D., Hubschman, J. P., Heilwell, G., Franco-Cardenas, V., Pan, C. K., Ostrick, R. M., Mickunas, E., Gay, R., Klimanskaya, I., Lanza, R. Embryonic stem cell trials for macular degeneration: a preliminary report. Lancet. 379, 713-720 (2012).
- Wang, N. K., Tosi, J., Kasanuki, J. M., Chou, C. L., Kong, J., Parmalee, N., Wert, K. J., Allikmets, R. Transplantation of reprogrammed embryonic stem cells improves visual function in a mouse model for retinitis pigmentosa. Transplantation. 89, 911-919 (2010).
- Song, B. J., Tsang, S. H., Lin, C. -. S. Genetic models of retinal degeneration and targets for gene therapy. Gene Ther. Mol. Biol. 11, 229-262 (2007).
- Tosi, J., Sancho-Pelluz, J., Davis, R. J., Hsu, C. W., Wolpert, K. V., Sengillo, J. D., Lin, C. S., Tsang, S. H. Lentivirus-mediated expression of cDNA and shRNA slows degeneration in retinitis pigmentosa. Exp. Biol. Med. 236, 1211-1217 (2011).
- Tucker, B. A., Park, I. H., Qi, S. D., Klassen, H. J., Jiang, C., Yao, J., Redenti, S., Daley, G. Q., Young, M. J. Transplantation of adult mouse iPS cell-derived photoreceptor precursors restores retinal structure and function in degenerative mice. PLoS One. 6, e189992 (2011).
- Mahajan, V. B., Mondino, B. J., Tsang, S. H. . A high-throughput Mouse Eye Phenomics System. , (2010).
- Chang, B., Hawes, N. L., Hurd, R. E., Davisson, M. T., Nusinowitz, S., Heckenlively, J. R. Retinal degeneration mutants in the mouse. Vision Res. 42, 517-525 (2002).
- Hawes, N. L., Smith, R. S., Chang, B., Davisson, M., Heckenlively, J. R., John, S. W. Mouse fundus photography and angiography: a catalogue of normal and mutant phenotypes. Mol. Vis. 5, 22 (1999).
- Won, J., Shi, L. Y., Hicks, W., Wang, J., Hurd, R., Naggert, J. K., Chang, B., Nishina, P. M. Mouse model resources for vision research. J. Ophthalmol. 2011, 391384 (2011).
