Summary
I denne studien, til en roman plattform undersøke intranevronale molekylære signaturer av behandlingsrespons ved bipolar lidelse (BD) ble utviklet og validert. Lukteepitelet fra BD pasienter ble innhentet gjennom nese biopsier. Deretter laser-fangst mikrodisseksjon ble kombinert med Real Time RT PCR for å undersøke den molekylære signatur av litium respons i BD.
Abstract
Bipolar lidelse (BD) er en alvorlig nevropsykiatrisk lidelse med dårlig forstått patofysiologi og vanligvis behandles med stemningen stabilisator, litiumkarbonat. Dyrestudier samt menneskelige genetiske studier indikerer at litium påvirker molekylære mål som er involvert i nevronale vekst, overlevelse og modning, og særlig molekyler involvert i Wnt signalering. Gitt den etiske utfordring å skaffe hjernebiopsi for undersøkelse av dynamiske molekylære forandringer assosiert med litium-respons i det sentrale nervesystemet (CNS), kan man tenke seg bruken av neuroner oppnådd fra olfactory vev for å nå dette målet olfaktoriske epitel inneholder lukt reseptor neuroner på ulike stadier av utvikling og glial-lignende støtte celler. Dette gir en unik mulighet til å studere dynamiske endringer i CNS av pasienter med nevropsykiatriske sykdommer, ved hjelp av lukte vev trygt oppnådd fra nese biopsier. For å overvinne den ulempen som utgjøres av substantial forurensning av vevsprøve olfaktorisk vev med ikke-nevronale celler, ble en ny tilnærming for å oppnå anrikede neuronal cellepopulasjoner utviklet ved å kombinere nese biopsier med laser-capture mikrodisseksjon. I denne studien ble et system for å undersøke behandlingsassosiert dynamiske molekylære forandringer i nervevevet utviklet og validert, ved hjelp av en liten pilot utvalg av BD pasienter rekruttert for studiet av molekylære mekanismer av litium behandlingsrespons.
Introduction
Bipolar lidelse (BD) er en alvorlig nevropsykiatrisk lidelse, preget av patologiske endringer i humør, kjøre bil og kognisjon en. Litium brukes for behandling av BD har vist seg å endre steady state mRNA-nivåer av et stort antall gener i dyrestudier 2, men det er fortsatt ukjent om noen av disse molekyler er assosiert med klinisk respons i mennesker 2. Forstå mekanismen av litium svar ville kreve etterforsker litium-indusert molekylære forandringer i nervevevet. Dessverre er det ikke praktisk å få hjerne biopsier av BD pasienter før og etter litium terapi for å identifisere molekylære signaturer av litium respons. Post-mortem hjernevev er blitt brukt til å studere biomarkører i BD, men de kan ikke brukes til å vurdere molekylære markører knyttet til dynamiske endringer i følelser, kognisjon og drive; og gyldigheten av retrospektivt konstatert litium behandlingsrespons kan være problematisk 4. Lymfocytter og andre blodceller kan være nyttig, men molekylære endringer i blodceller viser ikke nødvendigvis den nevronale endringer 3-5. Cerebrospinalvæsken kan være utilstrekkelig for å få informasjon om intracellulære molekyler som kan gjenspeile sykdomsassosierte og medisinering-reversibel iboende endringer.
Det olfaktoriske epitel (OE) er en unik del av sentralnervesystemet (CNS), embryologically-relatert til limbiske strukturer 6; og det er lett tilgjengelig gjennom nese biopsier. Den består av glial-lignende bære (dvs. sustentacular) celler, basal prolifererende celler, og lukt reseptor nevroner på forskjellige utviklingsstadier 7-9. Derfor gir OE en unik mulighet til å accessibly studere dynamiske endringer i CNS av pasienter med nevropsykiatriske sykdommer 7. Studier demonstrerer nytten av OE som et surrogat vev for å undersøke sykdoms forbundet hendelser som gjenspeiler disse OCCurring i hjernens nerveceller 8,9. For eksempel har studier benyttet OE å undersøke molekylære profiler forbundet med psykiatriske tilstander 10-14. Luktsystemet tjener også til å identifisere kliniske endophenoytpes eksempel lukt underskudd som er forbundet med negative symptomer på schizofreni 15. I tillegg nevrologiske prosesser fortsette i OE gjennom hele livet, og gir en nyttig vei å modellere den underliggende patofysiologien av psykiatriske tilstander 8,9.
Imidlertid er en ulempe ved anvendelsen av dette vevet er vesentlig kontaminering av olfactory biopsier med ikke-nevronale celler 16. For eksempel kan totalt RNA anvendes for genuttrykkstudier i tidligere studier OE inneholdt RNA ekstrahert fra hele nasal biopsied vev inkludert RNA fra ikke-nevronale celler 17. Derfor har tidligere fremgangsmåter vært begrenset av kvaliteten av celler. For å overvinne dette problemet, til en ny tilnærming innhente beriket nevronale cellepopulasjoner ved å kombinere nasale biopsier med laser-fangst mikrodisseksjon (LCM) har blitt utviklet 18.
LCM er en teknikk som muliggjør selektiv isolering av celler ved hjelp av UV-laserskjæring kombinert med infrarød laser 19-21. Kombinere LCM med OE tilnærming reduserer betydelig forurensning av OE av ikke-nevronale celler, og dermed styrke berikelse av nerveceller 18. Videre kan den neuronale sjikt skilles fra submucosa lag under et mikroskop, og dermed eliminere behovet for farging. Nevronale celletyper kan videre skilles fra andre cellepopulasjoner ved hjelp av primære antistoffer som uttrykkes av cellen type interesse 7. Derfor, etablerer denne fremgangsmåten en enklere fremgangsmåte for anriking av nesten rent neuronal cellepopulasjon som kan bli benyttet for genuttrykkstudier, immunhistokjemi og andre morfologiske undersøkelser.
ve_content "> Denne studien tar sikte på å etablere en eksperimentell plattform for å undersøke molekylære endringer i olfactory nevroner i forbindelse med sykdomstilstander og behandlingsrespons. For å løse dette, et lite sett med røykfrie pasienter som oppfylte DSM-IV diagnostiske kriterier for BD basert på Diagnostic Interview for genetiske studier (DIG) 22 ble rekruttert til å gjennomgå to nese biopsier: en biopsi pre-behandling med litium og andre biopsi, etter 6 uker med daglig oral litium terapi Videre må kvalifiserte BD pasientene være:. symptomatisk for depresjon , basert på scoring ≥10 av 60 i klinikeren administreres Montgomery-Åsbergs Rating Scale (MADRS) 23; symptomatisk for hypomani eller mani, basert på en score ≥10 ut av 56 på klinikeren administreres Young-Mania Rating Scale (YMRS) 24., eller ≥10 på begge MADRS og YMRS Rater-Inter-Rater koeffisient av enighet mellom klinikere for begge skalaer er> 0,96 Etter biopsier, nevroner var Enri.Ched fra OE av LCM. Etter ytterligere kvalitetskontroll tiltak, for å sikre utvinning av høy kvalitet RNA fra vevet og nevronale berikelse, ble Real Time RT PCR gjennomført for å undersøke før og etter behandling uttrykk nivåer av gener av interesse. De påfølgende avsnittene inneholder en beskrivelse av validering av denne tilnærmingen, fremhever optimalisering av protokollen og de strategier som ble brukt for feilsøking protokollen.Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
MERK: All forskning frivillige i denne studien ble gitt informert samtykke dokumenter godkjent av Institutional Review Board of Howard University og Johns Hopkins University. Kun deltakere som samtykket ved å signere informert samtykke dokumenter ble innmeldt i studien. Studien base for denne analysen besto av: 20 personer (12 BD og 10 kontroller, 30% menn) og gjennomsnittsalder (sd) av 38.2 (14.1) år.
MERK: Spray alle overflater med RNase Zap å fjerne RNase forurensning fra glass og plastflater.
1. Biopsi Prosedyre
- Spray topisk lidokain (xylokain) væske 4% og oksymetazolin HCl 0,05% i nesehulrommet av studien deltaker og tillate 15 minutter av lammende tid.
- Suge ½ x 3 tommer kirurgiske cottonoids i en blanding av lidokain og oxymetazoline og sette inn i nesehulen sammen overlegen del av nasal septum og la den sitte i 15 min.
- Ved hjelp av en 30 ° rigidnasal endoskop for å finne den øvre delen av nesehulen, fjerne neseslimhinnen som bruker up-biting nese tang fra overordnet del av neseskillevegg, tar flere små prøver.
2. Utarbeidelse av vevsblokker
- Umiddelbart før biopsi, fyll standard størrelse cryomolds med vev frysing medium.
- Ved hjelp autoklaveres pinsett, montere frisk vev i iskaldt medium og fryse på tørris. Fyll resten av cryoblock med frysemedium, fryse cryoblock på tørris, og butikk blokker på -80ºC.
3. Cryosectioning
- Forbered polyetylennaftalat (PEN) membran glass umiddelbart før cryosectioning. Spray lysbilder med RNase Zap løsning for 5 min. Skyll deretter lysbilder i dietylpyrokarbonat (DEPC) vann og la det lufttørke i 30 min. Aktiver tørkede lysbilder under UV-lys i 30 minutter.
- Cryosection hver blokk helt på 30 mikrometer. Hold lysbilder på tørr jegce og seksjoner frosset så mye som mulig. Butikk lysbilder ved -80 ºC ved ferdigstillelse.
4. Laser-Capture mikrodisseksjon
- Begynn med å dehydrere lysbilder umiddelbart før mikrodisseksjon. La frosne lysbilder tine i 10 sek, og deretter bruke følgende etanol serien til hvert bilde: 60% (2 ml, 15 sek), 80% (2 ml, 15 sek), 95% (3 ml, 25 sek), 100 % (7 ml, 60 sek).
- Slå photoactivated lokalisering mikroskopi (PALM) mikroskop på og satt til følgende forhold: For 10X forstørrelse sette energien til 82, fokus til 74, og hastighet til 25 - 30. For 20X forstørrelse, sette energien til 63, fokus til 67, og hastigheten til 5 - 6. Juster som nødvendig for å oppnå optimale klipperesultat.
- Identifisere visuelt nevroner som bruker 20X eller 10X forstørrelse. Skille de tynne overflate olfaktoriske nervecellen laget fra den underliggende sub-mucosa under et mikroskop uten bruk av fargeprosedyre. Observere nevroner som en tett søyle utseende 18.
- Ved hjelp av blyant funksjon i de tidligere nevnte mikroskop i trinn 4.2, sporer rundt neuronal lag. Spore litt vekk fra nerveceller for å hindre brenning av nerveceller fra laser. Dette er vesentlig for å oppnå høy kvalitet RNA. Deretter initiere laser guidet skjæring.
- Plukk opp dissekert delene med fin spiss mikrodisseksjon tang og sette vev i en microtube som inneholder 100 mL lysisbuffer på is. Gjenta for alle nevronale seksjoner hentet fra en enkelt prøve. Total disseksjon tid per prøve bør ikke overstige 50 min.
- Når disseksjon er komplette, umiddelbart virvelprøvelysatene og holde på tørris. Oppbevar prøver på -80ºC for total RNA isolering.
5. Isolering av Total RNA og Quality Control Analysis
- Tine prøvelysatene på is. Gjennomføre total RNA isolering med RNAqueous Micro Kit med DNase-I inaktivering ved å følge produsentens protokoll uten modifikasjoner (se <strong> Figur 1). Den totale elueringsvolum er omtrent 20 pl.
- Mål RNA konsentrasjon og evaluere RNA kvalitet med RNA Integrity Number (RIN) ved hjelp Bioanalyzer. Prøvene som oppfyller kriteriene for kvalitetskontroll i figur 2 kan brukes for cDNA-syntese.
6. cDNA Synthesis
- Syntetisere cDNA ved hjelp av en validert kommersiell kit (se tabell av reagenser). Utføre glødetrinn ved å kombinere 0,1 til 1,0 ng av RNA (avhengig av tilgjengelighet) og RNase fritt vann til et totalt volum på 8 ul per rør. Deretter legger en ul av oligo d (T) 20 primer og 1 pl 10 mM dNTP blanding per rør, for et totalt volum på 10 pl.
- Forsiktig vortex og sentrifuger prøver og annealing prøver ved 65 ° C i 5 min. Etter at reaksjonen er fullført umiddelbart kjøle prøvene på is.
- Forbered mester mix løsning i henhold til spesifikasjonene i Tabell 1. Deretter legger 9,5 μl konsentrat-blanding, og 0,5 ul av kommersielt forberedt revers transkriptase (RT) til hvert rør. Tilsett 0,5 mL RNase-fritt vann for å kontrollere tube i stedet for RT.
- Kjøre en RT reaksjon med den første inkubasjon ved 50 ° C i 50 min, deretter 85 ° C i 5 minutter og en endelig 4 ° C hold, uten sykling.
- Fortynn alle prøvene med 5x med vann og tilsetning. Oppbevar prøver ved -80 ºC.
7. Real Time PCR - Bekreft Neuronal Enrichment
- Forberede master mix løsning i henhold til spesifikasjonene i Tabell 2. Bruk en intern kontroll som GAPDH. Sammenligne olfactory markør protein (OMP) uttrykk i microdissected vev med OMP uttrykk i undissected vev å bestemme neuronal berikelse.
MERK: OMP er en markør for lukt nevroner.
OMP sekvens: fremover, 5'-CTGTCGGACCTGGCCAAG-3 '
omvendt, 5'-CACCCTCGCCAAAGGTGA-3 '
GAPDH sekvens: fremover, 5'-CATGAGAAGTATGACAACAGCCT-3 '
omvendt, 5'-AGTCCTTCCACGATACCAAAGT-3 '. - Sett opp PCR plate ved å legge 7 mL av masterblanding i hver brønn og 3 mL av cDNA.
- Sentrifuger plate i 5 min ved 300 x g (1300 rpm). Kjør Real Time-PCR reaksjon ved hjelp av standard termiske sykkelforholdene spesifisert for kommersiell SuperMix som SYBR grønnere qPCR.
- Analysere data (se figur 2 for spesifikasjoner).
8. Real Time PCR - Uttrykk av gener av interesse
- Utføre på prøver som viser neuronal anrikning av to ganger eller mer.
- Forbered mester mix på is for hver sonde (FAM-merket probe av interesse og VIC-merket GAPDH) i separate rør i henhold til spesifikasjonene i Tabell 3.
- Sett opp en PCR-plate med 8 mL mester mix i hver brønn og 2 mL av cDNA.
- Sentrifuger plate i 5 min ved 300 x g (1300 rpm). Kjør Real Time-PCR reaksjon med defAult termiske sykkelforholdene som per genuttrykk mester mix protokollen gitt av produsenten. Analysere uttrykk resultater (se figur 2 for spesifikasjoner).
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Protokollen og feilsøking strategi i studiet av molekylære signaturer ble vellykket optimalisert. RNA kvalitet og neuronal berikelse kriterier for prøver som skal brukes i videre nedstrøms Real Time-PCR-analyse ble standardisert. RIN og RNA konsentrasjonen ble undersøkt som konfunderende faktorer til oppdagede uttrykk nivåer. Basert på analyse av flere prøver med rins strekker 1-10, ble det fastslått at et minimum RIN på ~ 3,0 og ovenfor er tilstrekkelig for genetisk analyse i denne studien. Som et resultat, ble RNA-mengde for cDNA-syntese standardisert til 1,0 ng. Således høykvalitetsprøver med en RIN oven ~ 3,0 og RNA-mengde på 1,0 ng ble omdannet til cDNA. Prøver med 0,1 til 1,0 ng av RNA kan brukes hvis en tilstrekkelig prøvestørrelse er vanskelig å oppnå.
Nevronale berikelse ble bekreftet ved hjelp av Real Time-PCR-analyse. OMP-genet ekspresjonsnivåer i microdissected prøver ble sammenlignet med de i undissected prøvens for å avgjøre om den nevronale laget ble beriket. Microdissected prøver med to ganger eller større OMP-ekspresjon sammenlignet med ikke-dissekert vev blir benyttet.
Derfor, ved å bruke disse kriteriene, gjennomførbarheten av denne foreslåtte tilnærming for å studere molekylære endringer i OE nevroner ble validert. Figur 3 viser at uttrykket nivåer av GSK-3β påvirkes av litium snarere enn av uspesifikke eksogene faktorer, som indikerer at denne metodikken er tilstrekkelig til å påvise spesifikke molekylære endringer før og etter litiumbehandling. Mer spesifikt, kan endringer av molekylære signaturer i forbindelse med litium behandlingsrespons i BD løses ved å kombinere disse molekylære data med kliniske data.
Figur 1. RNA Utvinning og DNase Inaktive Protocol. Den flowchart illustrerer fremgangsmåten for ekstraksjon av RNA fra prøvene etter LCM. Total RNA ble eluert to ganger for å gi en maksimal RNA volum på omtrent 20 pl. Eluted prøvene deretter gjennomgå DNase behandling for DNase inaktivering. Vennligst klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
Figur 2. Protokoll Summary. Dette tallet oppsummerer hele protokollen for studie eksperimenter. Nasal vev er først biopsied og frosset som cryoblocks. Etter snitting av vevet, blir de neuronale lag dissekert ved hjelp av LCM. RNA ekstraksjon og DNase inaktivering utføres med produsentens retningslinjer (se figur 1). Prøvene som oppfyller kvalitetsstyringskriterier (RIN og RNA-mengde) blir brukt til å syntetisere cDNA og ossed for nevronale berikelse analyse. Beriket prøvene brukes i Real Time-PCR-analyse med de ønskede mål. Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
Figur 3. GSK-3β Ekspresjon i BD og kontrollprøver. Denne figuren illustrerer endringene i GSK-3β ekspresjonsnivåer i BD prøvene før og etter litiumbehandling og konsistens i GSK-3β ekspresjonsnivåer i kontrollprøver mellom den første og andre biopsi. Samlet utgjør disse dataene viser at GSK-3β uttrykk påvirkes av litium snarere enn uspesifikke eksogene faktorer.
| Reagenser | Volum |
| 10 x RT Buffer | 2 pl |
| 25 mM MgCl | 4 pl |
| 0,1 M DDT | 2 pl |
| RNase Out | 0,5 pl |
| Super III | 0,5 pl |
| RNase fritt vann | 1 mL |
Tabell 1. cDNA Synthesis Master Mix Solution.
| Reagenser | x1 | x (antall prøver) |
| Mal DNA | 3 pl | - |
| SYBR Grønn | 5 mL | |
| Primer Mix | 0,8 mL | |
| Vann | 1,2 mL | |
| Total | 10 pl | - |
Tabell 2. Neuronal Enrichment PCR Master Mix Solution.
| Reagenser | x1 | x (# av prøver / primer) |
| dWater | 2 pl | |
| Master Mix | 5 mL | |
| FAM Merket Probe | 0,1 mL | |
| VIC Merket Probe | 0,5 pl | |
| cDNA | 2 pl | - |
Tabell 3. Target PCR Master Mix.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
En ny plattform for å skaffe beriket olfactory nevronale lag ved å kombinere nasal biopsi og LCM er presentert og har blitt validert i denne studien. Denne teknikken kan ha vidtrekkende konsekvenser. Det kan brukes mot biomarkør studier, inkludert de for behandlingsrespons, og legemiddelforskning innsats for andre nevropsykiatriske tilstander, gjør en bredere effekt på feltet.
For å oppnå høy kvalitet nevroner mottagelig for nedstrøms applikasjoner, må bemerkes noen kritiske og feilsøking. For det første, få 4 - 6 stykker av lukte vev per pasient for å ha en tilstrekkelig utvalgsstørrelse. Dernest, siden prøvene er utsatt for RNA degradering, holde vev ved riktig temperatur, arbeide med RNase gratis utstyr og overflater, bruk hansker, og unngå å puste direkte over prøvene. Hvis RNA kvalitet er fortsatt lav, bør du vurdere å fullføre mikrodisseksjon innen 50 min og utføre RNA ekstraksjon umiddelbart etter disseksjon eller vortex prøvene umiddelbart og holde på tørris før lagring ved -80 ° C. Å øke utbyttet av RNA, øke antall seksjoner dissekert under LCM.
En utfordring for å studere hjerne-assosiert molekylære endringer i nevropsykiatriske lidelser eksisterer på grunn av den manglende tilgjengelighet for å studere den menneskelige hjerne. Alternative tilnærminger inkluderer studiet av perifere blodceller, obdusert hjerner, og indusert pluripotent stilk (iPS-celler). Blodceller kan ikke representere sykdomsassosierte nevronale endringer. Obduseres hjerner kan ikke være den ressursen for å studere dynamiske og tilstandsendringer knyttet til sykdomsutvikling og respons på medisiner. IPS-celler kan ikke direkte reflekterer tilstandsendringer, fordi slike spor er sannsynlig å bli slettet ut i løpet av omprogrammering og vedlikehold av cellene. Derfor er fordelene ved å bruke OE vev er evnen til å studere både statlige og dynamiske endringer i neuronal sammenheng. Spesielt iPS avledet neuronal stilkceller kan ikke i tilstrekkelig grad gjenspeile effekten av seks uker med litium behandling, på grunn av dyrking og omprogrammering trinn. Metodikken presentert i denne artikkelen gjør at vi kan studere behandlingsassosiert molekylære endringer og relatere dem til endringer i kliniske symptomer. Det må bemerkes at, i det minste til stede, er mengden av neuroner oppnådd fra OE vev tilstrekkelig for undersøkelser på molekylnivå, men kan ikke være begrenset til karakterisering av proteiner gjennom immunhistokjemi applikasjoner. Dermed er ytterligere tekniske forbedringer også forventet.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Forfatterne rapporterer ingen finansielle relasjoner med kommersielle interesser.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Tissue Preparation | |||
| Tissue-Tek Cryomold Molds | Sakura Finetek | 4557 | |
| Tissue-Tek O.C.T. Compound | Sakura Finetek | 4583 | |
| Cryosectioning | |||
| Membrane Slide 1.0 PEN (D) | Carl Zeiss Microscopy | 415190-9041-000 | |
| Rnase Zap | Ambion | AM9780 | |
| DEPC Treated Water | Quality Biological | 351-068-131 | |
| Microdissection | |||
| Microscope: PALM Series MicroLaser System | Carl Zeiss Microscopy | Model: Axiovert 200M Software: Robo v3.2 |
|
| No. 5 Dumont Microdissction Forceps | Roboz | RS-49085 | |
| RNA Extraction | |||
| RNAqueous Micro Kit | Ambion | AM1931 | |
| cDNA Synthesis | |||
| SuperScript III First Strand Synthesis Kit | Invitrogen | 18080-051 | |
| OMP qPCR | |||
| SYBR GreenER qPCR SuperMix | Invitrogen | 11760-500 | |
| Taqman qPCR | |||
| TaqMan Expression Assay Probes | Applied Biosystems | Various | |
| TaqMan Gene Expression Master Mix | Applied Biosystems | 4369016 | |
References
- Goodwin, F. K., Jamison, K. R. Manic-depressive illness. , Oxford University Press. (1990).
- Einat, H., Manji, H. K. Cellular plasticity cascades: genes-to-behavior pathways in animal models of bipolar disorder. Biol Psychiatry. 59 (12), 1160-1171 (2006).
- Severino, G., et al.
- Beech, R. D., et al. Gene-expression differences in peripheral blood between lithium responders and non-responders in the Lithium Treatment-Moderate dose Use Study (LiTMUS). Pharmacogenomics J. 14 (2), 182-191 (2013).
- Horiuchi, Y., et al. Olfactory cells via nasal biopsy reflect the developing brain in gene expression profiles: utility and limitation of the surrogate tissues in research for brain disorders. Neurosci Res. 77 (4), 247-250 (2013).
- Dryer, L., Graziadei, P. P. Projections of the olfactory bulb in an elasmobranch fish, Sphyrna tiburo: segregation of inputs in the telencephalon. Anat Embryol (Berl. 190 (6), 563-572 (1994).
- Hahn, C. G., et al. In vivo and in vitro neurogenesis in human olfactory epithelium. J Comp Neurol. 483 (2), 154-163 (2005).
- Cascella, N. G., Takaki, M., Lin, S., Sawa, A. Neurodevelopmental involvement in schizophrenia: the olfactory epithelium as an alternative model for research. J Neurochem. 102 (3), 587-594 (2007).
- Sawa, A., Cascella, N. G. Peripheral olfactory system for clinical and basic psychiatry: a promising entry point to the mystery of brain mechanism and biomarker identification in schizophrenia. Am J Psychiatry. 166 (2), 137-139 (2009).
- Mor, E., et al. MicroRNA-382 expression is elevated in the olfactory neuroepithelium of schizophrenia patients. Neurobiol Dis. 55, 1-10 (2013).
- Kano, S., et al. Genome-wide profiling of multiple histone methylations in olfactory cells: further implications for cellular susceptibility to oxidative stress in schizophrenia. Mol Psychiatry. 18 (7), 740-742 (2013).
- Toritsuka, M., et al. Deficits in microRNA-mediated Cxcr4/Cxcl12 signaling in neurodevelopmental deficits in a 22q11 deletion syndrome mouse model. Proc Natl Acad Sci U S A. 110 (43), 17552-17557 (2013).
- Evgrafov, O. V., et al. Olfactory neuroepithelium-derived neural progenitor cells as a model system for investigating the molecular mechanisms of neuropsychiatric disorders. Psychiatr Genet. 21 (5), 217-228 (2011).
- Fan, Y., et al. Focal adhesion dynamics are altered in schizophrenia. Biol Psychiatry. 74 (6), 418-426 (2013).
- Ishizuka, K., et al. Negative symptoms of schizophrenia correlate with impairment on the University of Pennsylvania smell identification test. Neurosci Res. 66, 106-110 (2010).
- Sattler, R., et al. Human nasal olfactory epithelium as a dynamic marker for CNS therapy development. Exp Neurol. 232 (2), 203-211 (2011).
- Rimbault, M., Robin, S., Vaysse, A., Galibert, F. RNA profiles of rat olfactory epithelia: individual and age related variations. BMC Genomics. 10, 572 (2009).
- Tajinda, K., et al. Neuronal biomarkers from patients with mental illnesses: a novel method through nasal biopsy combined with laser-captured microdissection. Mol Psychiatry. 15 (3), 231-232 (2010).
- Bonner, R. F., et al. Laser capture microdissection: molecular analysis of tissue. Science. 278 (5342), 1481-1483 (1997).
- Fink, L., et al. Real-time quantitative RT-PCR after laser-assisted cell picking. Nat Med. 4 (11), 1329-1333 (1998).
- Emmert-Buck, M. R., et al.
- Nurnberger, J. I. Jr, et al. Diagnostic interview for genetic studies. Rationale, unique features, and training. NIMH Genetics Initiative. Arch Gen Psychiatry. 51 (11), 849-859 (1994).
- Montgomery, S. A., Asberg, M. A new depression scale designed to be sensitive to change. Br J Psychiatry. 134, 382-389 (1979).
- Young, R. C., Biggs, J. T., Ziegler, V. E., Meyer, D. A. A rating scale for mania: reliability, validity and sensitivity. Br J Psychiatry. 133, 429-435 (1978).
