Waiting
로그인 처리 중...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
JoVE Journal Neuroscience
Click here for the English version

Neuroscience

עירוי stereotaxic של Oligomeric עמילואיד-ביתא להיפוקמפוס העכבר

Published: June 17, 2015 doi: 10.3791/52805
Automatic Translation
1, 2, 2, 1,2, 1,2,3
1Department of Pathology and Cell Biology, Columbia University Medical Center, 2The Taub Institute for Research on Alzheimer's Disease and the Aging Brain, Columbia University Medical Center, 3Department of Neurology, Columbia University Medical Center

Abstract

מחלת אלצהיימר היא מחלה ניוונית של מערכת עצבים המשפיעה על הזדקנות האוכלוסייה. תכונת נוירו מפתח של המחלה היא ייצור היתר של עמילואיד-ביתא והתצהיר של לוחות עמילואיד-ביתא באזורים במוח של האנשים הנגועים. לאורך שנות מדענים יצרו מודלים עכבר מחלת אלצהיימר רבים המנסים לשכפל את הפתולוגיה עמילואיד-ביתא. למרבה הצער, המודלים העכבר רק באופן סלקטיבי לחקות את תכונות המחלה. מוות עצבי, השפעה בולטת במוחם של החולים במחלת האלצהיימר, חסר ניכר בעכברים אלו. לפיכך, אנו ואחרים מועסקים שיטה של ​​יציקת ישירות מינים מסיסים oligomeric של עמילואיד-ביתא - צורות של עמילואיד-ביתא שהוכחו כרעילים ביותר לתאי עצב - stereotaxically לתוך המוח. בדוח זה אנו מנצלים זכר C57BL / 6J לתעד טכניקה ניתוחית זו של הגדלת רמות עמילואיד-ביתא באזור במוח בחר.יעד עירוי הוא gyrus המשונן של ההיפוקמפוס בגלל מבנה המוח הזה, יחד עם המוח הקדמי הבסיסי שמחובר על ידי מעגל כולינרגית, מייצג את אחד מהאזורים של ניוון במחלה. התוצאות של הרמת עמילואיד-ביתא ברכס המשונן באמצעות עירוי stereotaxic לחשוף עלייה באובדן תא עצב ברכס המשונן בתוך השבוע 1, בעוד שיש עלייה במקביל במוות של תאים ואובדן תא עצב כולינרגית באיבר האנכי של הלהקה האלכסונית של ברוקה של המוח הקדמי הבסיסי. תופעות אלה נצפו עד 2 שבועות. הנתונים שלנו מצביעים על כך שמודל עירוי עמילואיד-ביתא הנוכחי מספק מודל עכבר חלופי לטיפול במות נוירון ספציפי אזור בבסיס לטווח קצר. היתרון של מודל זה הוא שעמילואיד-ביתא יכול להיות מורם באופן מרחב ובזמן.

Introduction

פיקדונות עמילואיד פלאק, אשר מורכבים של עמילואיד-ביתא (Aβ 1-42), הם תכונה מרכזית של הפתולוגיה של מחלת אלצהיימר (AD). מחקרים רבים הראו כי רמות גבוהות או רעילות של Aβ oligomeric רקומביננטי 1-42 לעורר מוות עצבי, ניוון הסינפטי, אובדן וחוסר תפקוד; וכן את גירעונות למידה וזיכרון 1-4. אזורים במוח המושפעים כוללים את ההיפוקמפוס, קליפת המוח, ומבנים קורטיקליים כגון המוח הקדמי הבסיסי ו5,6 האמיגדלה. נכון להיום, יש מודלים עכבר מהונדסים מרובים המנסים לדמות את הפתולוגיה Aβ 1-42 של הספירה. בהתאם לזן בעלי חיים אלה להוכיח להיות שימושיים בבדיקה פתולוגית תכונות נבחרות של הספירה. למרבה הצער, למעט 2 קווים מהונדסים, APP23 ו5XFAD, עכברים אלה לא לשכפל באופן מלא איבוד עצבי, היבט מרכזי של הספירה. אפילו עם האובדן העצבי שנצפה בAPP23 ו5XFAD, obser המוות העצביved היה עדין, גיל תלוי, ומבודד לאזורים נבחרים כמה 7,8.

העירוי הישיר של Aβ oligomeric 1-42 לתוך מוח עכבר wild-type מספק מצוין במודל vivo שמשכפל את היבט המוות העצבי של amyloidopathy 1,9,10. בניגוד למודלי העכבר המהונדס הנפוצה ניצלו את מודל עירוי oligomeric Aβ 1-42 הוא אידיאלי עבור חריפות הרמת Aβ 1-42 רמות באופן מרחב ובזמן. היתרון של שימוש בעכברי wild-type עבור דגם זה מבטל השפעות פיצוי או צד פוטנציאל מהמוטציות הציגו בקווי עכבר מהונדסים. מחקרים קודמים הראו כי רמות רעילות של יציקת Aβ 1-42 להיפוקמפוס מעוררת מות נוירון בקרבת אתר ההזרקה בתוך השבוע 1 1. יתר על כן, עולה בקנה אחד עם התצפית שAβ 1-42 הוא רעיל לתאי עצב כולינרגית 11 המוח הקדמי הבסיסיאוכלוסיית כולינרגית נוירון (BFCN) שמקרינה להיפוקמפוס היא ירד 20-50% בתוך 7-14 ימים הבאים עירוי בטא-עמילואיד בעכברי 1,10, ביעילות ומאפשרת לבחינות של מעגלים עצביים במוח מבודד. מאז פרויקט BFCN ipsilaterally לgyrus המשונן של 12 היפוקמפוס, לשליטה חלק / הרכב וAβ 1-42 פתרונות oligomeric ביותר ניתן להזריק בכל צד של המוח ומאפשר השוואות שנעשו בין האונות ימנית והשמאלי 1.

בדוח זה אנו מספקים מתודולוגיה ניתוח והזרקה מפורטת לC57BL / 6J עכברים בוגרים wild-type. זן עכבר זה נבחר בשל השימוש הרחב שלה במחקר. מבחינה טכנית, כל אזור במוח יכול להיות ממוקד לעירוי, אולם כאן אנו משתמשים ברכס המשונן של ההיפוקמפוס כמטרה להמחיש את הטכניקה.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

הערה: כל הניסויים בבעלי החיים, מוסדי והנחיות הלאומיות לטיפול ושימוש בבעלי החיים במעבדה היו במעקב.

1. הכינו מכשירי ניתוח ופתרונות לניתוח

  1. החיטוי כל מכשירי ניתוח הנירוסטה.
  2. הכן אתנול 70% על ידי דילול אתנול מוחלט 200 הוכחה עם deionized מים כיתה מולקולרית סטרילי מזוקק.
  3. צרף את מחט G 29 למזרק המילטון. נקה את הפנים של מזרק המילטון ומחט על ידי ציור ומים ולהוציא שוב ושוב nanopure דקות 1. חזור על תהליך זה עם 70% אתנול.
    1. הסר את הבוכנה ומחט ממזרק המילטון. אוויר יבש החלקים בO מכסה המנוע זרימה למינרית / N.
    2. מכשיר את המחט ומזרק עם אור אולטרה סגול למשך 30 דקות לפני השימוש.
  4. הכן תמיסת מלח על ידי המסת NaCl במי כיתה מולקולריות למשקל סופי לריכוז נפח של 0.9%. SteriliZE את הפתרון על ידי סינונו דרך מסנן 0.2 מיקרומטר נקבובית.

2. הכן Oligomeric Aβ 1-42

  1. Monomerize וresuspend Aβ 1-42 האנושי רקומביננטי בDMSO ל5 מ"מ בדיוק כפי שמתוארת בפרסום פא 'ואחרים 13.
  2. לדלל 5 מ"מ Aβ 1-42 עם סטרילי (1x) PBS ביום 100 מיקרומטר לפני הניתוח.
  3. מערבבים את הפתרון היטב על ידי טחינה דקה.
  4. דגירה פתרון Aβ 1-42 במשך 12 שעות ב4C.
    הערה: פתרונות בקרה כגון דילול DMSO ב PBS או מקושקשת / הפוכים Aβ 1-42 פפטיד צריך להיות מוכן באותו אופן כמו Aβ 1-42.

3. לקבוע את קואורדינטות הזרקה

  1. השתמש באטלס מוח עכבר המבוגר כדי לקבוע קדמי, אחורי המדויק (AP), המדיאלי-רוחב (ML), וגב-הגחון (DV) קואורדינטות לאזור במוח של עניין 14.
    לאטה: כדי להמחיש את הטכניקה שהרמנו gyrus המשונן של ההיפוקמפוס כיעד עם הקואורדינטות מגבחת הבאות: AP, -2.00 מ"מ; ML, ± 1.3 מ"מ; DV, -2.2 מ"מ. הסימן השלילי שקדמו לערך AP מציין שזה 2.00 מ"מ אחורי של גבחת. סימן ± שקדמו לערך ML מצביע על כיוון ימין ועל שמאל מהמרכז. לבסוף, הסימן השלילי שקדמו לDV מציין הוא נע ventrally מפני שטח של המוח.

4. הגדרת מסגרת stereotaxic

  1. ללבוש מסכה כירורגית פנים, מעבדה מעיל נקי, וכפפות מנתחים סטרילית.
  2. נגב את מכשיר stereotaxic ומתאם עכבר עם 70% אתנול.
  3. נשכב לעטוף כירורגית סטרילית על הדלפק.
  4. מניחים את מכשיר stereotaxic עם מתאם עכבר על גבי וילון ניתוח סטרילי.
  5. נגב את כרית חימום עכבר עם 70% אתנול. מקם את כרית החימום מעל מיטת מסגרת stereotaxic. השתמש labora מטרות הכלליקלטת תיוג הטורים לקלטת את כרית החימום מעל מיטת מתאם עכבר.
    1. צרף את כרית החימום למשאבת recirculator מים החמה על פי הוראות יצרן.
    2. הפעל את משאבת recirculator מים החמה ולהגדיר את הטמפרטורה ל -37 מעלות צלזיוס, ולאחר מכן לחכות עד שזה מגיע לטמפרטורה.
  6. להדביק את מזרק המילטון 50 μl עם מחט G 29 על מסגרת stereotaxic ידי הברגה אותו על מוט הזרקה האנכי הממונע על פי הוראות יצרן.
  7. הפעל מעקר את החרוז ולחכות עד שהוא מגיע לטמפרטורה שנקבעה מראש של היצרן.
    הערה: זה משמש לחיטוי מכשירי נירוסטה בין בעלי החיים. זה לוקח 20 שניות מכשירים מגע עם חרוזים לעיקור.
  8. הפעל צלחת חמה ולהגדיר אותו 42 מעלות צלזיוס ולמקם את כלוב ריק נקי על גבי.
  9. בעוד מזרק המילטון קבוע במסגרת stereotaxic להשתמש אני stereotaxic הממונעnjector לצייר את פתרון Aβ 1-42.
    הערה: צייר יותר מ 4 μl של הפתרון לתוך המזרק ולאחר מכן להשתמש במזרק stereotaxic להגדיר הזרקת הנפח. הפעל את המזרק לפי הוראות יצרן.

5. הכנת בעלי החיים

  1. לקבוע את המשקל של העכבר באמצעות לשקול בקנה מידה.
  2. הרדימי עכבר עם קוקטייל קטמין / xylazine על 100 מ"ג / קילוגרם קטמין ו -10 מ"ג / קילוגרם xylazine על ידי הזרקת intraperitoneally (IP). צג עומק ההרדמה על ידי האובדן של רפלקס קמצוץ הבוהן.
  3. לאחר העכבר מסומם לקחת גוזז השיער ולגלח את ראשו כדי לחשוף את העור מעל הגולגולת.
  4. מניחים את העכבר על גבי כרית החימום על גבי מיטת stereotaxic.
  5. השתמש במרית כדי לפתוח את הפה ולמקם את השיניים החותכות בתוך שומר השיניים. Secure מזנקים על פניו של העכבר. הצמד אותו בעדינות ולא חזק מדי.
  6. POSItion crossbars האוזן דו-צדדי לmeatus השמיעתי כדי לאבטח את הראש. העבר כל משקוף בעד שהוא פוגע בגולגולת, ולאחר מכן הפעל את הבורג כדי לנעול אותו.
    1. כדי לוודא את הראש מאובטח להשתמש האצבע שלך לדחוף בעדינות על הראש. אם הראש הוא מאובטח כראוי זה לא ייתן את או להעביר בעת הקשה.
  7. החל ירידה של קרם עיניים או טיפי עיניים לעיניים כדי לשמור אותם לחים. ודא העיניים לחות לאורך כל ההליך כירורגי.
  8. לחטא את האתר כירורגית להשתמש צמר גפן סטרילי ליישם פתרון בבטאדין לעור על הגולגולת, ואחריו אתנול 70%. בצע את בטאדין משתנה ואתנול 70% ניקיון פי 2 יותר.

6. ניתוח ועירוי

  1. השתמש אזמל לעשות חתך 2-3 מ"מ בקו האמצע של הקרקפת, ולאחר מכן להשתמש במספריים עדינים ישר להאריך את קו החתך ל1.0-1.5 סנטימטר לחשוף את תפר sagittal, גבחת, ומבדה של הגולגולת, אתרים שקואורדינטות stereotaxic מבוססות על. השתמש מהדק מיקרו כדי לשמור על העור בנפרד.
    הערה: עמדות גבחת ומבדה מוסברות באטלס מוח העכבר "מוח העכבר בStereotaxic קואורדינטות" 14.
  2. קח מקלון צמר גפן, לטבול אותו בתמיסת מלח סטרילית, ולהשתמש בו כדי לנקות את הגולגולת. לאחר מכן, השתמש ספוגית נקייה כותנה יבשה לייבש את הגולגולת.
  3. השתמש בעט נקודת קנס סטרילי כדי לסמן נקודה על גבחת. השתמש micromanipulator stereotaxic כדי למקם את מזרק המילטון, כך שקצה המחט רק נוגע בנקודה על גבחת.
    1. רשום את DV התיאום.
    2. כדי לבדוק אם ציר AP של הגולגולת הוא ברמה להזיז את מזרק המילטון בדיעבד, כך שקצה המחט נוגע בנקודה למבדה.
    3. רשום את עמדת DV. ודא DV קואורדינטות עבור גבחת ומבדה נמצא 0.5 מ"מ.
      הערה: המטרה היא למזער את ההבדל בין DV גבחת ולמבדה.
  4. השתמש במ 'icromanipulator להחזיר את קצה מחט מזרק המילטון חזר לנקודת גבחת.
  5. רשום את עמדת AP מתחילה.
  6. לחשב את מיקום AP סיום על ידי הפחתת 2.00 מ"מ מAP מתחיל לתאם.
  7. השתמש micromanipulator כדי למקם את מחט מזרק המילטון לAP הסופי לתאם.
  8. רשום את ML הנוכחי לתאם.
  9. לחשב את ימין ועל השמאל שהסתיים ML קואורדינטות על ידי הוספה או הפחתה של 1.3 מ"מ ממתחיל ML לתאם.
  10. השתמש micromanipulator להזיז את מחט מזרק המילטון לאו ML הסיום לתאם.
    1. לגעת בקצה המחט אל פני השטח של הגולגולת על שני קואורדינטות ML הסתיימו ולהקליט את קואורדינטות DV ולוודא הערכים הם בתוך 0.5 מ"מ.
      הערה: המטרה היא למזער את ההבדל בין DV שני מסתיימים ML קואורדינטות.
    2. בעוד בסיום לתאם למשוך את המחט עד 0.5-1 סנטימטר מעל הגולגולת. קח עט משובח סטרילי כדי לסמן נקודה על המשטח דואר של הגולגולת. חזור על שלב זה לצד הנגדי של הגולגולת.
  11. Swing מזרק המילטון ברור מהדרך.
  12. צרף ראש מקדח 0.8 מ"מ לתרגיל. קח את התרגיל בשתי הידיים, מרפקים להגדיר על פני השטח של השולחן ליציבות, ולמקם את ראש המקדח מעט מעל הנקודה לנוכל על השמאל או ימין ML לתאם. הפעל את התרגיל, להוריד את קצה המקדח על פני הגולגולת להציג חור בגולגולת. חזור על שלב זה לצד הנגדי.
    הערה: דימום מסוימים עשוי להתרחש מהחורים החדשים הציגו. אם יש דימום ולאחר מכן להשתמש ספוגית נקייה כותנה יבשה להספיג את הדם.
  13. הזז את מזרק המילטון בחזרה להגנה על אחד מחורי ML החדשים הציגו. מנמיכים את מחט המילטון רק עבר הגולגולת. בשלב זה להיזהר לא לנקב את המוח. כדי לוודא שהמחט עברה את הגולגולת לקחת האצבע שלך ודחפה בעדינות את המחט נגד הגולגולת לעשות surדואר המחט לא לצאת מהחור.
  14. רשום את DV מתחיל לתאם.
  15. לחשב את DV הסיום לתאם ידי הפחתה של 2.2 מ"מ מDV מתחיל לתאם.
  16. מנמיכים את המחט עד לסיום DV לתאם.
  17. הפעל את משאבת הזרקת stereotaxic לשאוב 4 μl של Aβ 1-42 לgyrus המשונן בשיעור של 0.5 μl / דקה.
  18. כאשר העירוי יושלם לתת את המחט להישאר במקום במשך דקות 1 נוספת כדי למזער backflow של פתרון מאתר ההזרקה.
  19. להזיז את המחט לצד השני של המוח האחר וחזור על השלבים 6.13-6.18.

7. הסרת בעלי חיים ולאחר ניתוח טיפול

  1. להתיר את הברים אוזן ושומר פנים / האף. הסר את העכבר מן המנגנון.
  2. השתמש במלקחיים דפוס סטנדרטיים תלמיד למשוך לסגור את הקרקפת ולאחר מכן לאטום את הפצע עם תפר.
  3. הזרק 1 מיליליטר של תמיסת מלח סטרילית לעכבר באמצעות IP ללחות.
  4. בעצירות JECT (0.1 מ"ג / קילוגרם) תת עורי כדי להקל על כאב.
  5. לשמור על העכבר בכלוב הריק הנקי להגדיר על גבי צלחת חמה 42 מעלות צלזיוס עד שמתעורר, ואז להחזיר אותו לכלוב הדיור שלה עם אוכל ומים בשפע.
  6. לנהל עצירות באמצעות הזרקה תת עורית כל 12 שעות במשך 3 ימים להקלה על כאב.

הסרת 8. תפר

  1. הרדימי עכבר עם קוקטייל קטמין / xylazine על 100 מ"ג / קילוגרם קטמין ו -10 מ"ג / קילוגרם xlyazine ידי ה- IP. הערה: זה נעשה 7-10 ימים לאחר הניתוח.
  2. השתמש במלקחיים תלמיד סטנדרטיים דפוס ומספריים עדינים ישר להסיר את התפר.
  3. הזרק 1 מיליליטר של תמיסת מלח סטרילית לעכבר באמצעות IP ללחות.
  4. לשמור על העכבר בכלוב ריק נקי להגדיר על גבי צלחת חמה 42 מעלות צלזיוס עד שמתעורר, ולאחר מכן להחזיר אותו לכלוב הדיור שלה עם אוכל ומים בשפע.

עיבוד קורבן ורקמות 9. בעלי חיים

  1. להרדים את העכבר ועמ 'erfuse אותו עם 4% paraformaldehyde 15, להסיר את המוח, ולעבד אותו לcryosectioning 16.
    הערה: התזמון של הקרבת בעלי החיים תלוי בניסוי. עם זאת, ללימודים שלנו בחרנו 7 ו -14 ימים שלאחר ניתוח.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

השיטה הנוכחית של הכנת Aβ 1-42 oligomeric רקומביננטי האנושי מניבה מיני oligomeric מסיסים בהיקף של מונומרים, הדימרים, trimers, וtetramers (איור 1 א). מינים אלה נמוכים משקל מולקולרי Aβ 1-42, אבל לא את הסיבים ושלטים, הוכחו בהגדרות רבות להיות רעיל ביותר לתאי עצב 1,4,9,17-19. כדי לקבוע אם או לא oligomeric Aβ 1-42 גורם למוות תאי עצב במוח העכבר Aβ 1-42 (4 μl של 100 מיקרומטר פתרון מניות) היה החדיר לתוך DG של ההיפוקמפוס בחצי כדור אחד C57BL wild-type בן 9 חודש / 6J עכברים. המשקל של ההיפוקמפוס לC57BL / 6J מוערך סביב 0.018 g ולכן המשלוח של Aβ 1-42 היה כ 100 מיקרוגרם / g. DG הנגדי של אותו מוח העכבר היה חדורי פתרון שליטה / רכב - שכלל נפח שווה של DMSO בשימוש בהמסת Aβ 142 בדילול מלא (1x) PBS - להשוואה. כפי שהוזכר קודם לכן מקושקשת או להפוך Aβ 1-42 פפטיד עשוי לשמש כשליטה להשוואה מאחר שלא מצאו השפעה על תאי עצב בהיפוקמפוס 1 בעבר. כהקדמה של המחט לתוך המוח יוצרת נזק לרקמות מקומיות (איור 1) וגורמת לקריסת DG סופו של דבר אנו שבחרנו לבצע לאחר הזרקת מנתח בסמוך לדרך שבי הזרקת הרקמה היא עדיין שלמה. בתוך השבוע של הזרקת Aβ 1-42 1 DG הציג 1-42 רמות Aβ גבוהות בשכבה המולקולרית ושכבת תאי צורות בקרבת אתר ההזרקה (איור 2 א). בשעת 7 ו- 14 ימים Aβ 1-42 עורר עלייה בצביעה חיובית TUNEL וירידה בעובי DG, המאשר את השפעות ניווניות של Aβ 1-42 (איור 2).

משום הנוירונים כולינרגית BF להקרין לDGשל ההיפוקמפוס קבענו הבא אם אובדן תא העצב בDG מפעיל ניוון BF. למחקר זה fluorogold נותב מדרדר (השעיה 2%) היה יחד עם Aβ 1-42 לDG-הזריק שיתוף. 7 ימים הבאים fluorogold ההזרקה זוהו בBF (איור 2 ג) המצביע על תחבורה מדרדר של התווית באמצעות נוירונים כולינרגית. לכן, לצורך הכימות בBF בחרנו נוירונים fluorogold-חיוביים, כי זה מצביע על כך שהמסופים עצביים נחשפו לAβ 1-42 בDG. בשני 1 ו -2 שבועות הבאים עירוי DG Aβ 1-42, הגרעין של הלהקה האלכסונית - subregion של BF בי נוירונים כולינרגית להקרין לDG - ipsilateral לאתר -injected Aβ 1-42 הציג עליות במכתימות TUNEL ויורד בנוירונים כולינרגית (איור 2 ד). אובדן תא העצב שנצפה במחקרים מאשר BF האחרונים מקשרים ההרסניהשפעות של Aβ 1-42 ל1,10 מסלול BF-בהיפוקמפוס. כמו כן, חשוב לשים לב שמההשוואה של נקודת זמן 2 בשבוע לנקודת זמן בשבוע 1 בצד של הגרעין של הלהקה האלכסונית בי פתרון שליטה / רכב הוזרק בDG היו עליות נוספות בצביעת TUNEL ו ירידות בנוירונים כולינרגית (איור 2 ד, שולחן). תוצאות אלו משקפות ירידה משמעותית בעובי GCL ועלייה בתיוג TUNEL-חיובי (איור 2, טבלה) בDG של צד הרכב מוזרק השוואה בין נקודות זמן הזרקה 2 הודעה, רומז כי הטראומה הפיסית שנגרמה על ידי המחט תורמת ל ניוון לאורך זמן. אפילו עם תופעת לוואי בלתי רצוי זו של המחט, את השפעות ניווניות של Aβ 1-42 עדיין גדולות יותר באופן משמעותי מאלה של פתרון שליטה / רכב (איור 2 ד). יחדיו, effectivel מודל העירוי הנוכחיy מתרבה ההשפעות הרעילות של Aβ 1-42 במוח העכבר תוך 7 ימים מה שהופך את מודל אטרקטיבי זה ללמוד גירוי 1-42 טווח קצר Aβ.

איור 1
איור 1. Oligomeric Aβ 1-42 הדמיה הכנה ומערכת הזרקת מוח עכבר. () 2 מיקרומטר Oligomeric Aβ 1-42 הופרד על 10-20% ג'ל tricine ומועבר על גבי קרום nitrocellulose. הקרום היה מחק עם 6E10 Aβ 1-42 נוגדן (1: 1000). (ב) Aβ 1-42 (4 μl של 100 מיקרומטר פתרון) או שליטה / רכב החדיר לתוך ימין ועל שמאל DGS של ההיפוקמפוס, בהתאמה, של 9 חודשים C57BL / 6J ישן. עכברים שרדו למשך 7 ימים. המוח היה מחולק באופן סדרתי בשעה 20 מיקרומטר לכל סעיף. סעיפים בהיפוקמפוס היו מוכתמים עבור DAPI. סימני חשיש מתאריםמערכת ההזרקה. חיצים מראים התמוטטו DG. סרגל קנה המידה מייצג 200 מיקרומטר. אנא לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו.

איור 2
איור 2. Oligomeric Aβ 1-42 גורם למוות תאי עצב בDG וBF. בקרה / רכב או AΒ 1-42 (4 μl של 100 מיקרומטר פתרון) הייתה החדירה לתוך ימין ועל שמאל DGS של ההיפוקמפוס, בהתאמה, של 9 C57BL / 6J ישן חודש. עכברים שרדו או 7 או 14 ימים. המוח היה מחולק באופן סדרתי בשעה 20 מיקרומטר לכל סעיף. (א) 7 ימים לפרסם חלקי הזרקה בהיפוקמפוס המוכתמים ל1-42 Aβ (נוגדן NU4, 1: 2,000). ML, שכבה מולקולרית; GCL, שכבת תא גנגליון; PCL, שכבת תאי צורות. סרגל קנה המידה מייצג 50 מיקרומטר. (ב (ג) או Aβ 1-42 שיתוף הוזרק fluorogold (פתרון 2%). תיוג Fluorogold נקבע בBF 7 ימים לאחר ההזרקה. שקופיות המכילות את BF נבחרו באופן אקראי. תיוג Fluorogold שימש כדי לקבוע את האזור של עניין. ברגע שהאזור של העניין זוהה פרוסות מוח סמוכות שמשו להכתים לסמנים של עניין. ריבועי הם אזורים שבהם תמונות ב( ד ') נבחרות. סרגל קנה המידה מייצג 200 מיקרומטר. (ד) 7 או 14 ימים הודעה סעיפי BF הזרקה מוכתמים לצ'אט (1: 100, polyclonal העז) או TUNEL. *** P <0.001 לעומת השבוע 1. * P <0.05 בהשוואה לרכב. כימות נעשו על האזור כולושל עניין. הגבול בין המחיצה המדיאלי והלהקה האלכסונית הוא מותווה מבוסס על המיקום של השליך הקדמי. סרגל קנה המידה מייצג 100 מיקרומטר. (N = 5 עכברים). אנא לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

כדי להשיג הזרקת Aβ 1-42 מוצלחת הנסיין או המנתח חייב: 1) להשתמש בטכניקה האספטי; 2) בצורה נכונה לזהות את האזור במוח של עניין עם קואורדינטות מדויקות; 3) להיות מסוגל לאבטח את העכבר כראוי במסגרת stereotaxic עם המוח המפולס בציר AP וML; 4) יש את היכולת להפעיל את micromanipulator עם דיוק; 5) להבטיח טיפול שלאחר ניתוח נכון. אם הם אחרי השלבים העיקריים אלה העכבר צריך לשרוד את הניתוח ללא זיהום הנצפה.

בקנה אחד עם מחקרים במבחנה, אנו ואחרים הראינו שAβ 1-42 חדור ישירות לתוך ההיפוקמפוס מעורר מות נוירון 1,4,9,10, מתאר אחד מהתכונות העיקריות של הספירה. הניוון הוא ברור מאליו בקרבת אתר ההזרקה כפי שמוצג על ידי ירידה בהיקף gyrus המשונן שהוא השלים עלייה בסמנים לניוון 1. יתר על כן, לאהוא כולינרגית נוירונים שמקרינים להיפוקמפוס למות באופנת מדרדר כפי שמוצגים על ידי ירידה בתיוג כולינרגית וגידול בצביעה TUNEL חיובית בBF 1,10. לפיכך, מודל זה in vivo משמש כמודל מצוין כדי לחקור את ההשפעות למחצה חריפות של Aβ 1-42 מקומי. היתרון העיקרי של מודל זה הוא הזרקת האופי הדינמי שלה: כל אזור במוח עשוי להיות ממוקד וניתן להשתמש בי בעלי חיים בגילים שונים. עכברי זכרים בן 9 חודש נבחרו בניסויים שלנו משום שאנו מאמינים הגדלת Aβ 1-42 רמות בעכברים מבוגרים יותר המדמה את המחלה אשר מתרחשת באנשים מבוגרים. יתר על כן, אנו שואפים לשמור על הניסויים בקנה אחד באמצעות עכברים באותו הגיל. עם זאת, עכברים, בכל גיל יכולים לשמש להזרקה. בעבר התנסה בעכברים שהיו בן 16 חודשים ואחרים השתמשו בעכברים שהיו 2 חודשים 9,10. רק צריכים להיות בשימוש עכברי זכרים במחקרים כestro תערוכה נקבות עכבריםתנודות ברמת דור ואסטרוגן ידוע להיות השפעות נוירו 20. למרות שתחומי מחקר רבים מרכז סביב תופעות פתולוגיות של Aβ 1-42, יש גם ראיות שAβ 1-42 רמות נמוכות או פיסיולוגיות הנדרשות לתפקוד תקין ללמידה וזיכרון 21,22. במחקרים אלה חוקרים הורידו את הריכוז של Aβ 1-42 מוזרק והחדירו אותו לתוך 22,23 היפוקמפוס, ביעילות חושפים דוגמא נוספת לאופי הדינמי של השירות של פרדיגמה זו. תרכובות אחרות שהחדירו בהצלחה stereotaxically כוללות תרופות, וירוסים, siRNA, נוגדנים, ופפטידים 1,22-26 לחקור תופעות שונות החל מהמוות / הישרדות תא להתנהגות בעלי חיים. לפיכך, יש יישומים רבים להעסקת הפרדיגמה עירוי זה.

המתודולוגיה העירוי המתוארת, תוך מציגים פוטנציאלים שונים בנאיבו לומד באמצעות טכניקה זו, מגיע גם עם מגבלות מובנות. ראשית, מודל זה מנסה רק לשחזר את ההשפעות של Aβ 1-42 באזור במוח מבודד. שנית, באתר ההזרקה פגום מתוך ההקדמה של מחט לתוך המוח. זה תורם למוות של תאים נוספים ודבק. לכן, ניתוח צריכה להתבצע ממערכת ההזרקה. עם שליטה ברכב מתאימה בצד הנגדי של אותו המוח זה לא צריך להיות בעיה כרכב המוזרקת ופתרונות 1-42 התפשטות Aβ לרקמות. שלישית, משום שהנוירונים כולינרגית BF להקרין להיפוקמפוס, הנזק הפיזי של ההיפוקמפוס כפי שמשתקף מהקריסה של DG ידי המחט (איור 1) עלול בטעות להרוג כמה BFCNs. למרבה המזל, בוחן את המעגלים עצביים בטווח הקצר - בשבוע של עירוי חד-ירייה 1 - אינו מהווה בעיה הנתונים שלנו מצביעים על כך שמאז גדלומות כולינרגית במוח הקדמי הבסיסי הוא התוצאה של Aβ 1-42 ולא מהטראומה של המחט; זריקות שליטה מספקות הניתוח המתאים. הנתונים מצביעים על כך שהניוון של DG הוא גם הכרחי לאובדן של תאי עצב כולינרגית BF כנוירונים אלה מאבדים את המטרות שלהם הסינפטי (איור 2). למרבה הצער, לבעלי חיים ששרדו עד 2 שבועות בצד המוזרק רכב תערוכות העלאה משמעותית של מות BFCN על בעלי חיים שלאחר רכב-שבוע 1 מוזרק שנראית נובעת בחלקו הניוון והדילול של הרכס המשונן כתוצאה מהטראומה הפיסית של מחט. עם זאת, גם בשלב זה הנתונים מרמזים שיש יותר באופן משמעותי במות ipsilateral BF לאתר -injected Aβ 1-42. רביעית, זיהוי גבולות אנטומיים עדינים עלולה להיות קשה להשגה. לדוגמא, את הגבול בין המחיצה המדיאלי ולהקת האלכסון נקבע בהתבסס על מיקומו של קדמיהשלכתי, טכניקה שהייתה שתוארה קודם לכן 27. כמו כן, בשל הקרנת ipsilateral BF כולינרגית העצבית - בעיקר מהמחיצה המדיאלי והאיבר האנכי של הלהקה האלכסונית (MS / DB) - לgyrus המשונן של ההיפוקמפוס 12,28,29 החלטנו להזריק חצי כדור אחד עם Aβ 1-42 ולהשתמש בחצי הכדור ההפוך כשליטה להשוואה. זה מתקבל על הדעת שדאגה לפרדיגמה זו תהיה זיהוי הנכון של הגבול המפריד בין MS / DB ימין ועל שמאל. בעוד MS הוא באזור קו האמצע, DBS הוא לרוחב יותר. לעבודה הנוכחית והפרסום האחרון שלנו 1 שהיינו מסוגלים להבחין DB ימין ועל שמאל בנוחות. כימות שלנו מגלה צ'אט הנוירונים (+) הירידה של כ -25% בDB בצד -injected Aβ 1-42. עם זאת, אנחנו לא לזהות כל שינוי משמעותי בצ'אט (+) נוירונים בMS 1. בגלל loc הרוחבני של DBS והשינויים שנצפו הרגישו שאנחנו היו מוצדקים להעסיק רכב וזריקות 1-42 Aβ בתוך אותה החיה. יתר על כן, בדיקת 2 תנאי ניסוי שונים בתוך אותה החיה מקסימום לא רק את השימוש בבעלי החיים, אלא גם מפחית את השונות של בעלי חיים לבעלי החיים פוטנציאליים. בעוד עיצוב הניסיון שלנו מאפשר לנו להשוות אונות שמאל וימין זה מתקבל על הדעת טכניקת השוואה זו לא יכולה להיות אפשרית במחקרים עתידיים, כלומר, אם המחיצה המדיאלי היא המוקד העיקרי של המחקר. במקרה כזה כל חיה תצטרך לשמש כתנאי ניסוי. לפיכך, השימוש בבעלי החיים הוא בשיקול דעתו של הנסיינים. חמישי, יכול מודל ההזרקה הנוכחי ישמש לקריאת פסקי אחרים כגון התנהגות? המטרה שלנו בהעסקת מודל ההזרקה הנוכחית Aβ 1-42 הייתה להעריך את השפעות נוירו של Aβ 1-42 in vivo ולהשוות אותו במבחנת ממצאים 1 (איור 1 ו -2) כאשר אנו ממקדים את מחט הזריקה לתוך או ליד DG ב -7 ימי חורבן DG עשוי להצמיח חריגות התנהגות מכוונות. לפיכך, אם מחקר דורש בוחן את ההשפעה של Aβ 1-42 בהתנהגות בהיפוקמפוס תלוי, אז יעד ההזרקה עשוי להיות מיקומו בסמוך להיפוקמפוס ולא ישירות לתוכו ולאפשר Aβ 1-42 לנטרל לתוך ההיפוקמפוס. שאמרו, השימוש בפרדיגמה ההזרקה הנוכחית לבדיקת התנהגות אפשרית אבל דורש יותר מבחןING ואפיון, והאסטרטגיה הניסיונית הסופית ייקבעו על ידי משתמש הקצה. מעניין, היו מחקרים במכרסמי התנהגות לפני שכרוכים משלוח חיצוני של Aβ 1-42 ישירות לתוך המוח. 22,30 יחדיו, מגבלות אלה צריכים להילקח בחשבון בעת תכנון במחקרי עכבר vivo העסקת מודל זה.

מאז אין מודל עכבר אחת בקיום לוכד את ההשפעות חולניות המלאה של הספירה טכניקת עירוי stereotaxic Aβ 1-42 מספקת הנסיינים עם חלופה במודל העכבר vivo 1-42 Aβ. כאשר מבוצעים על ידי אדם מאומן היטב במודל זה הוא מתאים ביותר ללימודים בטווח קצרים המתמקדים בהשפעות של Aβ 1-42 באזור מסוים במוח או מעגלים.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

המחברים מצהירים שאין להם אינטרסים כלכליים מתחרים.

Acknowledgments

עבודה זו נתמכה על ידי המכון הלאומי להפרעות נוירולוגיות ושבץ להעניק NS081333 (לCMT), NIRG-10-171,721 אלצהיימר מענק האיגוד והמכון הלאומי לבריאות נפש מענק MH096702 (לUH), ומכון לאומי להזדקנות במימון מחקר מחלת אלצהיימר מרכז בAG008702 מענק טייס אוניברסיטת קולומביה (לYYJ וJB).

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Ketamine HCl (100 mg/ml) Henry Schein Medical 1049007 100 mg ketamine per 1 kg animal
Xylazine (20 mg/ml) Henry Schein Medical not available 10 mg xylazine per 1 kg animal
Buprenex (0.3 mg/ml) Henry Schein Medical 1217793 0.1 mg buprenex per 1 kg animal
Aβ1-42 David Teplow/UCLA not available 100 μM; This amyloid was used in the paper
Aβ1-42 Bachem H-1368 Can be used in place of amyloid from the Teplow lab
Aβ1-42 American Peptide 62-0-80B Can be used in place of amyloid from the Teplow lab
Scrambled Aβ1-42 American Peptide 62-0-46B Can be used as control peptide for comparing Aβ1-42
NU4 Antibody (Oligomeric Amyloid Antibody) Gift from William Klein/Northwestern U. not available 1:2,000 dilution
Anti-Amyloid Oligomeric Antibody  (Polyclonal Rabbit) EMD Millipore AB9234 May be used in place of Nu4; needs to  be tested by the end user
6E10 Antibody (Monoclonal Mouse) (Amyloid Antibody) Biolegend sig-39320 1:1,000 dilution
ChAT Antibody (Polyclonal Goat) Millipore AB144P 1:100 dilution
DeadEnd Fluorometric TUNEL system Promega G3250 Follow manufacturer's directions for use
Prolong Gold Antifade Reagent with DAPI Invitrogen P36935 Use when coverslipping slides
Fluorogold Fluorochrome, LLC not available 2% solution
Absolute Ethanol (200 proof) Fisher Scientific BP2818-4 For making 70% ethanol for sanitizing and disinfecting
Novex 10-20% Tricine gel Life Technologies EC6625BOX For separating Aβ1-42
Novex Tricine SDS Running Buffer (10X) Life Technologies LC1675 For running 10-20% Tricine gels
Novex Tris-Glycine Transfer Buffer (25X) Life Technologies LC3675 For transferring 10-20% Tricine gels
SuperSignal Western Blot Enhancer Thermo Scientific 46640 For enhancing Aβ1-42 signal; follow manufacturer's protocol
Protran BA79 Nitrocellulose Blotting Membrane, 0.1 μm GE Healthcare Life Sciences 10402088 For transferring 10-20% Tricine gels
Xcell SureLock Mini-Cell Life Technologies EI0001 Electrophoresis aparatus for running 10-20% Tricine gels
GenTeal Lubricant Eye Gel Novartis not available For keeping the mouse eyes moist during surgery; can be found in local pharmacy stores
 
Name Company Catalog Number Comments
Refresh Optive Lubricant Eye Drops Allergan not available For keeping the mouse eyes moist during surgery; can be found in local pharmacy stores; Can be used in place of GenTeal
Betadine Stoelting 50998 For sanitizing and disinfecting
Round/Tapered Spatula  VWR 82027-490 For opening animal mouth
Bulldog Serrefines Clamps (Jaw Dims. 9X1.6 mm; Length 28 mm) Fine Science Tools 18050-28 Optional; For keeping scalp skin apart during injection
Straight Fine Scissors (Cutting edge 25 mm; Length 11.5 cm) Fine Science Tools 14060-11 For cutting scalp
#3 Scalpel Handle Fine Science Tools 10003-12
#11 Surgical Blade Fine Science Tools 10011-00 For making scalp incision
Student Standard Pattern Forcep (Tip Dims. 2.5x1.5 mm; Length 11.5 cm) Fine Science Tools 91100-12 For holding scalp closed during suturing
Trimmer Combo Kit Kent Scientific CL9990-1201 For shaving hair
T/Pump Warm Water Recirculator  Kent Scientific  TP-700 For warming animal during surgery
Resusable Warmining Pad (5" x 10") Kent Scientific  TPZ-0510FEA For attaching it to the T/Pump warm water recirculator to warm the animal during surgery
Cordless Micro Drill Stoelting 58610 Use 0.8 mm steel burrs to drill holes in the skull
Lab Standard Stereotaxic Instrument with Mouse & Neonatal Rat Adaptor Stoelting 51615
Just for Mouse Stereotaxic Instrument Stoelting 51730 Can use this in place of Stoelting Cat. #51615
Quintessential Stereotaxic Injector Stoelting 53311
Dry Glass Bead Sterilizer Stoelting 50287 For sterilizing stainless steel instruments
Sterile Surgical Drape (18" x 26") Stoelting 50981
Hamilton Syringe 50 ml, Model 705 RN SYR, NDL Hamilton Company 7637-01 For brain injection; use different syringes for different solutions
29 G Needle, Small Hub RN NDL Hamilton Company 7803-06 For attaching to the Hamilton syringe for brain injection
1 ml BD Tuberculin Syringes VWR BD309659 For administering anesthesia and saline
30 G Needle (0.5") VWR BD305106 For administering anesthesia and saline
Portable Electronic CS Series Scale (Ohaus) VWR 65500-202 For weighing animals to determine anesthesia dose
Hot plate (Top Plate Dims. 7.25x7.25 in) VWR 47751-148 For warming animals post-surgery
Sofsilk Silk Suture C-1 Cutting 3/8, 12 mm Covidien S1173 For closing wound
Vetbond Tissue Adhesive (3M) Santa Cruz Biotechnology sc-361931 Optional: for aiding in wound closure; Use with suture.
Cotton-Tipped Wooden-Shaft Sterile Applicators Fisher scientific 22-029-488 For cleaning and drying surgical wound
Fisherbrand Superfrost Plus Microscope Slides Fisher Scientific  12-550-15 For collecting brain sections
VWR Micro Cover Glass 24 X 50 mm VWR 48393241 For mounting microscope slides
Thermo Scientific Nalgene Syringe Filter 0.2 μm Fisher Scientific 194-2520 For sterilizing saline solution
Sterile dual tip skin markers by Viscot Medical Medline VIS1422SRL91 For marking coordinates on the skull

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Baleriola, J., et al. Axonally Synthesized ATF4 Transmits a Neurodegenerative Signal across Brain Regions. Cell. 158 (5), 1159-1172 (2014).
  2. Haass, C., Selkoe, D. J. Soluble protein oligomers in neurodegeneration: lessons from the Alzheimer's amyloid beta-peptide. Nature reviews. Molecular cell biology. 8 (2), 101-112 (2007).
  3. Knowles, J. K., et al. The p75 neurotrophin receptor promotes amyloid-beta(1-42)-induced neuritic dystrophy in vitro and in vivo. The Journal of neuroscience : the official journal of the Society for Neuroscience. 29 (34), 10627-10637 (2009).
  4. Troy, C. M., et al. beta-Amyloid-induced neuronal apoptosis requires c-Jun N-terminal kinase activation. Journal of neurochemistry. 77 (1), 157-164 (2001).
  5. Crews, L., Rockenstein, E., Masliah, E. APP transgenic modeling of Alzheimer's disease: mechanisms of neurodegeneration and aberrant neurogenesis. Brain structure & function. 214 (2-3), 111-126 (2010).
  6. Gotz, J., Ittner, L. M. Animal models of Alzheimer's disease and frontotemporal dementia. Nature reviews. Neuroscience. 9 (7), 532-544 (2008).
  7. Calhoun, M. E., et al. Neuron loss in APP transgenic mice. Nature. 395 (6704), 755-756 (1998).
  8. Oakley, H., et al. Intraneuronal beta-amyloid aggregates, neurodegeneration, and neuron loss in transgenic mice with five familial Alzheimer's disease mutations: potential factors in amyloid plaque formation. The Journal of neuroscience : the official journal of the Society for Neuroscience. 26 (40), 10129-10140 (2006).
  9. Jean, Y. Y., et al. Caspase-2 is essential for c-Jun transcriptional activation and Bim induction in neuron death. The Biochemical journal. 455 (1), 15-25 (2013).
  10. Sotthibundhu, A., et al. Beta-amyloid(1-42) induces neuronal death through the p75 neurotrophin receptor. The Journal of neuroscience : the official journal of the Society for Neuroscience. 28 (15), 3941-3946 (2008).
  11. Kar, S., Quirion, R. Amyloid beta peptides and central cholinergic neurons: functional interrelationship and relevance to Alzheimer's disease pathology. Progress in brain research. 145, 261-274 (2004).
  12. Leranth, C., Frotscher, M. Organization of the septal region in the rat brain: cholinergic-GABAergic interconnections and the termination of hippocampo-septal fibers. The Journal of comparative neurology. 289 (2), 304-314 (1989).
  13. Fa, M., et al. Preparation of oligomeric beta-amyloid 1-42 and induction of synaptic plasticity impairment on hippocampal slices. Journal of visualized experiments : JoVE. (41), (2010).
  14. Paxinos, G., Franklin, K. B. J. The Mouse Brain in Stereotaxic Coordinates. , Second edn, Academic Press. (2001).
  15. Gage, G. J., Kipke, D. R., Shain, W. Whole animal perfusion fixation for rodents. Journal of visualized experiments : JoVE. (65), (2012).
  16. Currle, D. S., Monuki, E. S. Flash freezing and cryosectioning E12.5 mouse brain. Journal of visualized experiments : JoVE. (4), (2007).
  17. Jin, M., et al. Soluble amyloid beta-protein dimers isolated from Alzheimer cortex directly induce Tau hyperphosphorylation and neuritic degeneration. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 108 (14), 5819-5824 (2011).
  18. Lambert, M. P., et al. Diffusible, nonfibrillar ligands derived from Abeta1-42 are potent central nervous system neurotoxins. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 95 (11), 6448-6453 (1998).
  19. Masters, C. L., Selkoe, D. J. Biochemistry of amyloid beta-protein and amyloid deposits in Alzheimer disease. Cold Spring Harbor perspectives in medicine. 2 (6), a006262 (2012).
  20. Chakrabarti, M., et al. Estrogen receptor agonists for attenuation of neuroinflammation and neurodegeneration. Brain research bulletin. 109C, 22-31 (2014).
  21. Cirrito, J. R., et al. In vivo assessment of brain interstitial fluid with microdialysis reveals plaque-associated changes in amyloid-beta metabolism and half-life. The Journal of neuroscience : the official journal of the Society for Neuroscience. 23 (26), 8844-8853 (2003).
  22. Puzzo, D., et al. Picomolar amyloid-beta positively modulates synaptic plasticity and memory in hippocampus. The Journal of neuroscience : the official journal of the Society for Neuroscience. 28 (53), 14537-14545 (2008).
  23. Puzzo, D., et al. Endogenous amyloid-beta is necessary for hippocampal synaptic plasticity and memory. Annals of. 69 (5), 819-830 (2011).
  24. Akpan, N., et al. Intranasal delivery of caspase-9 inhibitor reduces caspase-6-dependent axon/neuron loss and improves neurological function after stroke. The Journal of neuroscience : the official journal of the Society for Neuroscience. 31 (24), 8894-8904 (2011).
  25. Fulmer, C. G., et al. Astrocyte-derived BDNF supports myelin protein synthesis after cuprizone-induced demyelination. The Journal of neuroscience : the official journal of the Society for Neuroscience. 34 (24), 8186-8196 (2014).
  26. Thakker-Varia, S., et al. The neuropeptide VGF is reduced in human bipolar postmortem brain and contributes to some of the behavioral and molecular effects of lithium. The Journal of neuroscience : the official journal of the Society for Neuroscience. 30 (28), 9368-9380 (2010).
  27. Greferath, U., et al. Enlarged cholinergic forebrain neurons and improved spatial learning in p75 knockout mice. The European journal of neuroscience. 12 (3), 885-893 (2000).
  28. Brashear, H. R., Zaborszky, L., Heimer, L. Distribution of GABAergic and cholinergic neurons in the rat diagonal band. Neuroscience. 17 (2), 439-451 (1986).
  29. Clarke, D. J. Cholinergic innervation of the rat dentate gyrus: an immunocytochemical and electron microscopical study. Brain research. 360 (1-2), 349-354 (1985).
  30. Garcia-Osta, A., Alberini, C. M. Amyloid beta mediates memory formation. Learning & memory. 16 (4), 267-272 (2009).

Tags

Neuroscience גיליון 100 עמילואיד-ביתא המוח עכבר עירוי ניתוח מדעי המוח
עירוי stereotaxic של Oligomeric עמילואיד-ביתא להיפוקמפוס העכבר
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Jean, Y. Y., Baleriola, J., Fà, … More

Jean, Y. Y., Baleriola, J., Fà, M., Hengst, U., Troy, C. M. Stereotaxic Infusion of Oligomeric Amyloid-beta into the Mouse Hippocampus. J. Vis. Exp. (100), e52805, doi:10.3791/52805 (2015).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter