We demonstrate the procedure for intra-tracheal inoculation of Haemophilus influenzae into the lower respiratory tracts of mice. This is a very useful tool to study signaling pathways that regulate airway inflammation in mouse models.
Здесь мы опишем подробную процедуру эффективно и непосредственно доставить гемофильной инфекции в нижних дыхательных путей у мышей. Показана процедура подготовки H. инокулята гриппа, внутри трахеи закапывания H. гриппа в легкие, коллекция бронхо-альвеолярного лаважа (БАЛ), анализ иммунных клеток в БАЛ и выделения РНК для дифференциального анализа экспрессии генов. Эта процедура может быть использована для изучения легких воспалительной реакции на любые бактерии, вирусы или грибы. Прямая трахеи инстилляции в основном предпочтительнее интраназального или аэрозольные ингаляции процедур, так как он более эффективно доставляет бактериального инокулята в нижних отделах дыхательных путей с меньшей неоднозначностью.
Воспаление является основной иммунный механизм защиты против инфекционных агентов. Это способствует ликвидации патогенных микроорганизмов и ремонт поврежденной ткани. Это также облегчает восстановление до нормального здорового состояния 1. Тем не менее, дизрегуляции воспаление часто приводит к хроническим воспалительным заболеваниям 2. Воспаление дыхательных путей является начальным толчком для различных легочных заболеваний , таких как хроническая обструктивная болезнь легких (ХОБЛ), астма и легочный фиброз 3.
Нетипируемых (некапсулированного) гемофильной (NTHi) связан с хроническими верхней и нижней легочных воспалительных заболеваний 4,5. Это доминирующий вид , выделенные из нижних дыхательных путей у детей и взрослых с хронической обструктивной болезнью легких 4,6,7. Воспалительная реакция после NTHi инфекции характеризуется повышающей регуляции провоспалительных цитокинов (таких как TNF и IL-1 & beta;), и он опосредован бу митоген активированный протеин киназа (МАРК) и ядерный фактор-kB (NF-kB) через Toll-подобных рецепторов (TLRs) 8.
Мышиные модели являются очень полезными инструментами для анализа, лежащей в основе патологии легких воспалительного заболевания из-за наличия различных генов-дефицитных линий. Существует несколько методов были использованы для инокуляции живых / ослабленные бактерии и бактериальные продукты, в том числе интраназального закапывания и аэрозольного ингаляционного 9,10. Здесь мы демонстрируем внутри трахеи закапывания. Несмотря на то, используется менее часто, такой подход является более эффективным и высокой воспроизводимостью, из-за прямой доставки прививочного материала в нижних отделах дыхательных путей.
Здесь мы описываем уникальную и минимально инвазивные процедуры для инокуляции легких мышей с бактериальным патогеном легких. Показано, что эта процедура может быть использована для изучения функции различных генов с использованием мышей, которые дефицитны по генам воспалительных с…
The authors have nothing to disclose.
We thank Dr. Carson Harrod for critical reading of the manuscript. We also thank Mr. Minghui Zeng and Drs. Mahesh Kathania and Prashant Khare for their contributions. This work was supported by grants from the American Cancer Society (Research Scholar grant, 122713-RSG-12-260-01-LIB) and the Sammons Cancer Center (Pilot Project grant) to K. Venuprasad.
Chocolate agar plate | Fisher Scientific | CAS50-99-7 | |
Dextrose Anhydrous | Themo Scientific | R01300 | |
Heparin | Hospira,Inc | RL-3010 | |
Deft quick solution | Sigma | GS500-500ML | |
Syringe needle 20/26G | BD | (REF305115/175) | |
Iml syringe | BD | REF 309602 | |
Catheter 20GA | BD | REF 381433 | |
Dissecting Scissors, straight, 10 cm long | kentscientific | INS600393 | |
Iris Forceps, serrated, 10cm long | kentscientific | INS650915 | |
Tweezer #5 Stainless steel, 11cm long | kentscientific | INS600095 | |
10% Formalin | Fisher Scientific | CAS 67-56-1 | |
Agarose | peqlab | 35-1020 | |
5ml polystyrene round-bottom tubes | BD | REF 352058 | |
1.5 ml Microcentrifuge tubes | Light Labs | A-7001-R | |
Reasy Mini kit | Qiagen | 74104 | |
Pellet pestile motor (Tissue homoginizer) | Sigma | Z359971-1EA | |
96 well microtiter plates V bottom | Thermo | 2605 | |
1X PBS | Gibco | 10010-023 | |
OneComp eBeads | eBioscience | 01-1111-42 | |
CD45.2-APC | eBioscience | 17-0454-81 | Working dilution 1:100 |
Ly-6G-eFlor 450 | eBioscience | 48-5931-82 | Working dilution 1:100 |
BSA | HyClone | SH30574.03 | |
RBC Lysis Buffer (10X) | Biolegend | 420301 | |
Live/Dead fixable aqua dead cell stain kit | Invitrogen | L-34957 | |
EDTA (0.5M) | lifetechnologies | 15575-020 | |
CD16/CD32 FcBlock | BD | 553142 | |
Facs tubes polystyrene round bottom tube | BD | 352052 | |
Formaldehyde | Polyscience | 4018 |