Introduction
Metastaser tegner sig for over 90% af dødsfald forårsaget af solide tumorer. Knogle er den mest almindelige organ påvirkes af metastaser af forskellige cancertyper, især brystkræft og prostatakræft. Når diagnosticeret i klinikken, som regel knoglemetastaser har allerede indgået fremskredne stadier med enten osteolytiske eller osteoblastiske ændringer i knogler, ofte ledsaget med neurologiske symptomer.
Tidligere undersøgelser overvejende fokuseret på de åbenlyse osteolytiske knoglemetastaser 1-3, men vi har begrænset forståelse af mikrometastaser i knogler før begyndelsen af den osteolytisk processen. Dette er i det mindste delvis på grund af manglende egnede eksperimentelle modeller og tilgange. Gensplejsede musemodeller for brystkræft ofte metastaserer til lungerne, men langt mindre effektivt til knogler 4. Ligeledes orthotopisk transplanterede tumorer udvikles sjældent spontane knoglemetastaser, med nogle ikke-tropisk 4T1 mamma carcinomen sub-kloner og MSP overudtrykt PyMT transgen musemodel som undtagelser 5-7. Intra-tibial boring kan levere kræftceller til benet 8-10, men det medfører også skader og betændelse til lokale væv. Øjeblikket intrakardielle injektion af brystcancercellelinier har været den største tilgang til at undersøge knogle kolonisering 11-13. Men efter cancerceller indføres i venstre ventrikel kun en begrænset del vil endelig når knogle og knoglemarv, hvilket gør det vanskeligt at spore mikroskopiske metastaser i en kvantificerbar måde.
I denne undersøgelse har vi etablere en teknik, nemlig inden bækkenarterie (IIA) injektion 14, til selektivt at levere kræftceller i bagben væv, derved berige kræftceller i knogle og knoglemarv uden at forårsage skade på lokale væv. På grund af knoglen specificitet, denne fremgangsmåde giver også tilstrækkelig tid til indolent cancerceller til sidst kolonisere før enimals bukke under for primære tumorer eller metastaser i andre vitale organer. Når det kombineres med en række andre teknikker, såsom bioluminescens billeddannelse, immunfluorescensfarvning og knoglehistomorfometri, IIA injektion er potentielt anvendelige til en bred vifte af forskningsformål relateret til knoglemetastaser, især til at spore progressionen fra enkelte cancerceller til multi-celle mikrometastaser. Især viste vi, at IIA injektion giver os mulighed for at visualisere samspillet mellem kræftceller og forskellige typer af omkringliggende celler i knoglen mikromiljø.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Alt dyr arbejde blev udført i overensstemmelse med retningslinjerne for dyr pleje af Baylor College of Medicine.
1. Cell Fremstilling
Bemærk: Forskellige kræftceller kan bruges til IIA injektion afhængig forskningsformål. Vi har anvendt brystkræft cellelinier MCF7, 4T1, 4T07, MDA-MB-361, MDA-MB-231, MDA-MB-436 og prostatacancer-cellelinie c4-2 i vores forskning. Vi bruger typisk både GFP- og ildflueluciferase-mærkede cancerceller for vores undersøgelse og vise nogle data her fra GFP-Luciferase-mærket MCF7 cellelinje.
- Opretholde celler i DMEM indeholdende 10% FBS og 0,1 mg / ml penicillin-streptomycin ved 37 ° C i 5% CO2.
- Før IIA injektion, Trypsinisér cellerne ved 80 - 90% sammenløb med 0,25% trypsin / EDTA-opløsning. Brug kold PBS til at vaske cellerne to gange, og re-suspendere celler i 10 ml PBS til celletælling. For at fjerne PBS, centrifugeres celler ved 800 xg i 5 min.
- Re-suspendere cellerved en koncentration på 5 x 10 6 celler / ml i iskold PBS.
- Bruger 100 pi GFP- og ildflueluciferase-mærkede cancerceller til IIA injektion af en mus.
Bemærk:. Derfor er antallet af celler, der modtages af hvert dyr er 5 x 10 5 Dette antal kan være nødvendigt at ændre baseret på aggressivitet cellelinier. - Hold cellesuspensioner på is.
Bemærk: Vibrationer kan være nødvendig for at forhindre celleaggregering hvert par minutter, indtil den er klar til injektion. For nogle cellelinier (såsom MDA-MB-231), kan strengere procedurer (f.eks, der passerer gennem 45 um cellefilter) være nødvendig for at forhindre aggregering. Bemærk venligst, at træsko af skibe kan forårsage vævsnekrose, og derfor confounding eksperimenterne.
2. Animal Forberedelse
- For dyr smertebehandling, giver 5 mg / kg / dag carprofen (eller andet smertestillende middel) med kosttilskud til musene ikke mindre end 24 timer før operation. Forvalteen dosis på 0,1 mg / ml buprenorphin subkutant 60 min før operationen. Bemærk: en valgfri procedure er at implantere estradiol palle ind i bagsiden af dyr til at give ekstra estradiol. Dette vil fremskynde vokse af ER + cancerceller (f.eks MCF-7-celler) 9.
- Bedøver en 4 - 6 uger gamle mus (ca. 20 g) med ketamin (80 - 100 mg / kg) og xylazin (10 -12.5 mg / ml) ved intraperitoneal injektion.
- Bekræft passende sedering af en 20 g mus ved tå knivspids og observation af en reduktion i respirationsfrekvens 50% og pink slimhinder (f.eks mus øre hud og pote huden). Hold overvåge disse vitale tegn hver 15 min under operationen. Bemærk: Ingen bevægelse af dyret indikerer at dyret er tilstrækkeligt bedøvet og klar til kirurgi.
- Brug dyrlæge salve på øjnene for at forhindre tørhed.
- Barbering musen på underlivet, især den højre lyske område, hvor operationen og injektion vilfinde sted.
Bemærk: Dette er ikke nødvendigt, hvis der anvendes atymiske nøgne mus. - Sæt musen på ryggen, sprede benene i deres naturlige positioner og holde tæerne til mobil dissektion pap med tape.
- Tør højre lyske område med 70% isopropyl ethanol gennemvædet sterile vatpinde, efterfulgt med betadin kirurgisk krat flere gange.
3. iliaca Vein og Artery Beliggenhed og Separation
- Lav en hud snit på 1,0 - 1,2 cm lang mellem 4. og 5 th brystvorter i nederste højre del af maven ved hjælp af sterile, # 10 kulstof stål skalpelblade afholdt i en nr 3 håndtag. Brug derefter en steril kirurgisk afdækningsstykke til at dække dyrets krop undtagen incisionssted.
- Flyt dyret til standard bænk top dissektion mikroskop. Brug en forstørrelse på 4X til injektion.
- Under 4X forstørrelse af dissektion mikroskop, indsætte stumpe adskillelse pincet mellem fedtvævet og peritoneum, og skub væv udad på begge sider for at eksponere iliaca kar og nerver (se figur 1).
Bemærk: arterien mellem aorta fra midterlinien og den nedre del af arterie grene kaldes fælles bækkenarterie. Dette er hvor injektionen finder sted. - Brug en par lige fine pincet til at bryde igennem bindevæv (ligesom en membran) mellem fartøjer og nerve, tættere på skibene.
- Skift de lige fine pincet til venstre. Snup et par vinklede fine pincet ved hjælp af højre hånd. Sæt højre hånd pincet i samme position, hvor bindevæv er blevet brudt. Og derefter holde højre hånd pincet gennem, under skibene.
- Samtidig, indsætte den venstre hånd pincet ind i bindevævet på venstre side af skibene til at guide de rigtige hånd pincet går igennem.
- Når højre hånd pincet får under skibene, forsøge at adskille skibene fra den omgivende tissue en lille smule mere, og derefter holde dem på toppen af højre hånd pincet.
- Brug venstre hånd pincet til at levere spidsen af en 4-0 silke sutur til den højre pincet, og træk derefter sutur blidt og langsomt gennem under skibene. Bemærk: Nu både almindelige vene og arterie fartøjer løftes op af suturen (se figur 2).
4. Injektion og Post-injektion Care
- Forbered cellerne til injektion i en 31 G insulinsprøjte. Brug 100 pi cellesuspension i PBS per injektion. Sørg for at pipettere op og ned flere gange for at separere cellerne og undgå aggregering således at de injicerede celler ikke vil tilstoppe og blokere blodstrømmen.
- Med de vinklede pincet i venstre hånd, sætte pincet under skibene langs vejledning af sutur, og derefter åbne de to grene af tangen, der har de skibe bestemt forsigtigt på tangen.
Bemærk: Intervallet mellem de to grene af tangen bliver jegnjection site. - Hold 31 G nål med 100 pi cellesuspensioner i højre, med facet af nålen opad, klar til injektion.
- Stik nålen ind i arterien lumen (blod træder nålespidsen). Skub derefter cellesuspensionen langsomt i at injicere cellerne. Cellesuspensionen vil skubbe væk den røde blod i karret. Prøv ikke at bryde skibene eller lække cellesuspensionen ud.
- Når injektionen er færdig, skal du forsigtigt trække sig tilbage nål og holde holde skibene op på den venstre hånd pincet for at stoppe blødningen. Derefter trække væk sutur.
- Træk væk den venstre hånd pincet, og hurtigt bruge en vatpind til at trykke snittet området arterie for at stoppe blødningen.
Bemærk: sædvanligvis 5 - 10 min konstant pres er tilstrækkelig til at stoppe blødningen. - Når blødningen stopper, bruge hud lim til at lukke huden kanterne af kirurgi området. Lav et øremærke, og tjek for bioluminescens signalering at undersøge fordelingen af injicerede celler. <br /> Bemærk: En succesfuld injektion vil resultere i et billede svarende til figur 3.
- Check bioluminescens signalering ved injektion af 100 pi 15 mg / ml luciferin i PBS ved 75 mg / kg mus koncentration via intra-orbital sinus.
- For intra-orbital injektion, sætte fingrene på begge sider af muse øjet, bruge tryk til at gøre øjet bold lidt pop ud fra øjet ramme, indsætte 28 g insulinsprøjte nåle mellem øjet pasning og næse, og derefter langsomt skubbe sprøjten at injicere luciferin .
Bemærk: På den korrekte position, bør nålen kunne nå en dybde på 2 - 3 mm, før der trykkes hårdt væv (knogler). - Placer musen ind afbildningssystem til in vivo hele dyret billeddannelse i 10 - 60 sek inden for 5 min (se figur 3).
Bemærk: En valgfri procedure er at implantere estradiol pillen ind i bagsiden af dyr til at give ekstra estradiol. Dette vil fremskynde væksten af ER + cancerceller (f.eks MCF-7celler) 15.
- For intra-orbital injektion, sætte fingrene på begge sider af muse øjet, bruge tryk til at gøre øjet bold lidt pop ud fra øjet ramme, indsætte 28 g insulinsprøjte nåle mellem øjet pasning og næse, og derefter langsomt skubbe sprøjten at injicere luciferin .
- Check bioluminescens signalering ved injektion af 100 pi 15 mg / ml luciferin i PBS ved 75 mg / kg mus koncentration via intra-orbital sinus.
- Lad musen på en varm varmepude, indtil det vågner. Overvåg blødning, hævelse, tegn på aabning og smerter under postoperative periode. Sæt musene tilbage til buret med analgetiske dækning (carprofin kosttilskud foreslået) givet for smertebehandling, indtil der ikke tegn på smerte. Vær meget opmærksom og omsorg for dyrene under 7 dage efter operationen.
5. Overvågning Metastatisk vækst
- histomorfometri:
- Harvest tumor bærende knoglevæv, fastsætte knoglerne i 4% paraformaldehyd i 24 timer, så afkalk dem pH 7,0 14% EDTA-opløsning i 3 - 5 dage, og underkaste dem paraffin indlejring som tidligere beskrevet 14.
- Sektion paraffin-indkapsle knoglevæv ved tykkelse på 3 um og udføre standard histologisk metode til hematoxylin / eosin-farvning som tidligere beskrevet 14.
- Immunohistochemisprøve:
- Emne paraffinindlejret tumorbærende knogle glider til immunhistokemisk farvning til forskellige formål som tidligere beskrevet 14. Kort beskrevet immunofarvningsprocedure MCF7 cancerceller ved anti-GFP-antistoffer og immunofarvningsprocedure osteogene celler (præ-osteoblaster og osteoblaster) ved anti-Osterix antistoffer og anti-alkalisk phosphatase (ALP) antistoffer, henholdsvis.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Figur 1 illustrerer den anatomiske placering og forholdet af arteria iliaca communis (rød) og vene (blå).
Figur 2 viser relative position af iliaca kar og nerver under dissektion mikroskopi. Som afbildet i figur 2A, karrene og nerverne er lige under bugvæggen og kan afsløres efter huden incision og bughinden skubbes bort. Den iliaca vene er til venstre, og er større og mørkere end arterien. Den arterie er i midten, og ser pink. Det er tyndere end den vene, men har tykkere muskel væg. Venen og arterien er parallelle og tæt forbundet med hinanden. Længere til højre er den hvide lumbosacral nerve. Figur 2B viser iliaca kar adskilt fra de omgivende bindevæv, muskler og nerver, og løftet op af en 4-0 silkesutur. Den iliaca vene, arterie, og lumbosacral nerve er også angivet.
Figur 3 viser repræsentative in vivo og ex vivo bioluminescens billeder af dyr efter intra-bækkenarterie injektion. Fem x 10 5 GFP-luciferin-mærkede MCF7-celler i 100 pi blev indgivet til højre bagben på musen ved intra-bækkenarterie injektion. D-luciferin blev derefter administreret ved intra-orbit sinus injektion, efterfulgt af in vivo hele dyret bioluminescens billeddannelse. De injicerede MCF7-celler blev beriget på det rigtige bagben på musen som angivet ved bioluminescens signaler (figur 3A). In vivo bioluminescens signaler af hele dyret blev overvåget hver 3. dag eller hver uge, og derefter muse knoglevæv blev høstet på dag 14 efter injektion, når hele dyret bioluminescens signal nået en vis tærskel (Fotonflux> 10 4). Efter D-luciferin indgivelsen blev knoglevæv fra intra-bækkenarterie injiceret mus hurtigt høstet og nedsænket i PBS i ex vivo-billeddannelse. Den stærke bioluminescens signal fra intra-bækkenarterie injiceret højre bagben knogle, men ikke fra venstre kontrol knogle viste den specifikke lokalisering af injicerede celler (figur 3B).
Figur 4 viser repræsentative billeder af histologiske og immunfluorescensfarvning. Når tumoren bærende knogler blev høstet, blev de udsat for paraformaldehydfiksering, EDTA afkalkning, og derefter paraffin-indlejring. Tre um bone objektglas blev fremstillet og standard H & E-farvning blev udført. De kompakte brosten-lignende celler med større kerner var mikroskopiske MCF7 metastatiske læsioner i knoglevævet 14 dage efter intra-bækkenarterie injektion, som angivet ved de røde pile. Knoglemarv (BM) Og de store lyserøde flade trabekulære knogler (TB) med spredt kerner er så mærket (figur 4A). Figur 4B viser GFP-mærkede MCF7-celler (grøn), ALP-mærkede osteoblaster (røde i billedet til venstre), og Osterix-mærket præ-osteoblaster (røde i det rigtige billede) efter immunfluorescensfarvning. Blå DAPI-farvning indikerer kernen.
Figur 1:. Anatomi af arteria iliaca communis (rød) og vene (blå) i muse Abdominal aorta, fælles bækkenarterie, ekstern bækkenarterie, og femorale arterie er vist som angivet. Injektion udføres ved iliaca arterie fra aorta mod femoral arterie retning. Klik her for at se en større version af dette tal.
Figur 2:. Iliaca kar og nerver under standard dissektion mikroskop med 4X forstørrelse (a) Billede af de intakte kar og nerver. (B) Billede af løftede fartøjer. Klik her for at se en større version af dette tal.
Figur 3: repræsentant in vivo og ex vivo bioluminescens billeder af mus efter intra-bækkenarterie injektion. (A) In vivo bioluminescens signal af hele dyret lige efter injektionen. (B) ex vivo bioluminescens signalaf venstre kontrol knogle og højre injiceret knogle fra injicerede dyr, der blev høstet 14 dage senere. Alle bioluminescens signaler blev målt ved at følge producentens anbefalede procedure og indstillinger. Klik her for at se en større version af dette tal.
Figur 4: Repræsentative billeder af histologiske og immunfluorescensfarvning. (A) repræsentant H & E farvning foto af MCF7 tumorbærende knoglevæv efter intra-bækkenarterie injektion. Scale bar = 25 um. Bemærk: HE farvning er ikke en effektiv måde at detektere tumorer. I lavere forstørrelse, HE farvningen er ikke følsom nok til at skelne tumorer. I højere forstørrelse, er det ikke effektivt at scanne hele enreas. (B) immunfluorescensfarvning billeder af MCF7 tumorbærende knoglevæv. Green: GFP-mærkede MCF7-celler, Rød i billedet til venstre: ALP-mærkede osteoblaster, Rød i den rigtige billede: Osterix-mærket præ-osteoblaster. Blå DAPI-farvning indikerer kernen. Scale bar = 25 um. Klik her for at se en større version af dette tal.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Selv om kun den iliaca arterie er målet for injektion til kræftceller, anbefaler vi adskillelsen af både iliakal vene og arterie fra omgivende væv, og for at løfte dem sammen som et bundt. Dette skyldes, at venen og arterien udstrakt kontakt med hinanden, og den venøse karvæggen er tynd og er let at bryde. Derfor, for en vellykket injektion, det sparer tid og kræfter til at holde op de to skibe sammen, selv om cancerceller injiceres kun arterien. En 4-0 silkesutur bruges til at hjælpe denne proces som vist i figur 2. Suturen kan også hjælpe med at stoppe blødning bør det ske.
De fleste trin i IIA injektion skal udføres under dissektion mikroskop. Musen fartøjer er bløde og små, hvilket gør procedurerne udfordrende. Men efter tilstrækkelig praksis, kan succesraten nå op på 90 - 100% i vores erfaringer.
Med denne teknik kan forskerne være enble at etablere knogle kolonisering modeller af deres foretrukne kræft celle modeller, herunder dem, der traditionelt tænkt "ikke-metastatisk". MCF-7-celler repræsenterer et sådant eksempel. Faktisk, når ankommer i knoglen mikromiljø, MCF-7 celler undergår en kort vækstdvale, før du tager ud for at kolonisere. er blevet påvist meget få spontane knoglemetastaser i dyr, der bærer ortotopisk MCF-7-xenografter. Imidlertid kan svigt vel resultere fra den resterende mængde disseminerede tumorceller, den langsomme indledning af kolonisering, og den mere aggressive vækst af ortotopisk tumorer (der dræber dyr før knoglelæsioner kan etablere). Således kan ikke tages manglende detektering som bevis mod MCF-7 celler evne til at metastaserer. Faktisk kan indolent eller endda hvilende bone mikrometastaser være mere fremherskende hos patienter human brystcancer, som foreslået af år-til-årtier hviletilstand, som ofte ses i klinikken.
IIA injektion kan anvendes ikke blot på luminal eller basal brystkræftceller, men også til andre typer kræft såsom prostatakræft. Når det kombineres med forskellige valg af teknikker overvågning knoglesygdom, kan intra-iliaca arterie injektion yde et væsentligt bidrag til mange forskningsformål. Vi bruger ofte bioluminescens signalering at spore knoglemetastaser progression efter intra-iliaca arterie injektion, og derefter høste tumor-bærende ben til fluorescerende immunhistokemi farvning at definere interaktioner mellem kræftceller og de omkringliggende knogle microenvironment nicher. Knoglehistomorfometri 16-17 og μCT 18-20 kan anvendes til at evaluere knoglestruktur ændringer og andre anatomiske detaljer i knogle, der er forårsaget af podning af kræftceller. Korrekt overvejelser og kombinationer bør bestemmes af hver gruppe for deres specifikke forskning formål.
Svarende til intra-tibial 8-10 og intra-hjerte-podning 11-13, en advarsel af intra-ilIAC arterie injektion er, at det ikke rekapitulere tidlige trin i metastatiske proces forud for blodprop og indtrængen af tumorceller i blodbanen. Ideelt set ville være behov for en spontan metastase proces startende fra ortotopisk tumorer til fuldt ud at rekapitulere metastaser kaskade. Imidlertid er denne proces meget ineffektiv i de fleste modeller, med kun få undtagelser såsom nogle knogle-tropiske 4T1 subkloner 5-6 og MSP overudtrykt PyMT transgen musemodel 7. Vi håber, at den interinstitutionelle aftale injektion vil give nye indsigter i knoglen kolonisering proces, som igen kan lette design og udvikling af virkeligt effektive spontane knoglemetastaser modeller for prækliniske studier.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Materials | |||
| DMEM | HyClone | SH30022.01 | |
| FBS | Gibco | 16000 | |
| Pen/Strep Amphatericin B | Lonza Biowhittaker | 17-745E | |
| PBS | Lonza Biowhittaker | 17-516F | |
| Trypsin/EDTA solution | HyClone | SH30042.01 | |
| 45 μM cell strainer | VWR International Laboratory | 195-2545 | |
| MediGel CPF with carprofen | Controlled item from veterinary care in BCM | For pain management | |
| Buprenorphine | Controlled item from veterinary care in BCM | For pain management | |
| Estradiol pellet | Innovative Research of America | SE-121 | |
| Ketamine and xylazine | Controlled item from veterinary care in BCM | ||
| Vet ointment | Controlled item from veterinary care in BCM | Avoid eye dryness | |
| Shaver | Oster | 78005-050 | For furred mice |
| Isopropyl ethanol | ACROS | 67-63-0 | |
| Betadine surgical scrub | Controlled item from veterinary care in BCM | ||
| #10 scalpel blades | Ted Pella, Inc | 549-3CS-10 | Multiple |
| No. 3 handle | Ted Pella, Inc | 541-31 | Need to be autoclaved |
| Sterile surgical drape | Sai Infusion Technology | PSS-SD1 | |
| Straight forceps | Roboz Surgical Instrument | RS-5132 | Need to be autoclaved |
| Straight fine forceps | Fine Science Tools | 11253-20 | Need to be autoclaved |
| Edged fine forceps | Fine Science Tools | 11253-25 | Need to be autoclaved |
| 4-0 Vicryl silk suture | Johnson & Johnson Health Care | J214H | |
| 31 G insuline syringes | BD | 328418 | Multiple |
| Q-tips cotton swabs (Sterile) | VWR International Laboratory | 89031-272 | |
| Skin glue | Henry Schein Animal Health | 31477 | For surgery site skin closure |
| Ear Tag Applicator | Fine Science Tools | 24220-00 | |
| Ear tags | Fine Science Tools | 24220-50 | |
| D-luciferin | Gold Biotechnology | LUCK | Avoid light and put on ice |
| 28 G insulin syringes | BD | 329410 | For intra-orbital injection |
| Paraformadehyde | Alfa Aesar | 30525-89-4 | For tissue fixation |
| EDTA | OmniPur | 4050 | For bone tissue decalficication |
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Equipment | |||
| Dissection microscope | Leica | Leica S6E stereo | |
| IVIS Lumina II imaging system | Advanced Molecular Vision | ||
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Antibodies | |||
| Anti-GFP antibodies (JL-8) | Clontech | 632381 | |
| Anti-ALP antibodies | Abcam | ab108337 | |
| Anti-Osterix antibodies | Abcam | ab22552 |
References
- Kang, Y., et al. A multigenic program mediating breast cancer metastasis to bone. Cancer cell. 3 (6), 537-549 (2003).
- Lu, X., et al. VCAM-1 promotes osteolytic expansion of indolent bone micrometastasis of breast cancer by engaging alpha4beta1-positive osteoclast progenitors. Cancer cell. 20 (6), 701-714 (2011).
- Ell, B., Kang, Y.
- Kretschmann, K. L., Welm, A. L. Mouse models of breast cancer metastasis to bone. Cancer Metastasis Rev. 31 (3-4), 579-583 (2012).
- Lelekakis, M., et al. A novel orthotopic model of breast cancer metastasis to bone. Clin Exp Metastasis. 17 (2), 163-170 (1999).
- Rose, A. A., et al. Osteoactivin promotes breast cancer metastasis to bone. Mol Cancer Res. 5 (10), 1001-1014 (2007).
- Welm, A. L., et al. The macrophage-stimulating protein pathway promotes metastasis in a mouse model for breast cancer and predicts poor prognosis in humans. Proc Natl Acad Sci U S A. 104 (18), 7570-7575 (2007).
- Li, X., et al. Loss of TGF-beta Responsiveness in Prostate Stromal Cells Alters Chemokine Levels and Facilitates the Development of Mixed Osteoblastic/Osteolytic Bone Lessions. Mol. Cancer. Res. 10 (4), 494-503 (2012).
- Gregory, L. S., Choi, W., Burke, L., Clements, J. A. Breast Cancer Cells Induce Osteolytic Bone Lesions In vivo through a Reduction in Osteoblast Activity in Mice. PLoS ON. 8 (9), e68103 (2013).
- Waning, D. L., et al. Excess TGF-β mediates muscle weakness associated with bone metastases in mice. Nat Med. 21 (11), 1262-1271 (2015).
- Simmons, J. K., et al.
- Werbeck, J. L., et al. Tumor microenvironment regulates metastasis and metastasis genes of mouse MMTV-PymT mammary cancer cells in vivo. Vet Pathol. 51 (4), 868-881 (2014).
- Xiang, J., et al. CXCR4 Protein Epitope Mimetic Antagonist, POL5551, Disrupts Metastasis and Enhances Chemotherapy Effect in Triple Negative Breast Cancer. Mol Cancer Ther. 14 (11), 2473-2485 (2015).
- Wang, H., et al. The osteogenic niche promotes early-stage bone colonization of disseminated breast cancer cells. Cancer Cell. 27 (2), 193-210 (2015).
- Hoffmann, J., et al. Characterization of new estrogen receptor destabilizing compounds: effects on estrogen-sensitive and tamoxifen-resistant breast cancer. J Natl Cancer Inst. 96 (3), 210-218 (2004).
- Tannehill-Gregg, S. H., Levine, A. L., Nadella, M. V., Iguchi, H., Rosol, T. J. The effect of zoledronic acid and osteoprotegerin on growth of human lung cancer in the tibias of nude mice. Clin Exp Metastasis. 23 (1), 19-31 (2006).
- Slyfield, C. R., Tkachenko, E. V., Wilson, D. L., Hernandez, C. J.
- Koba, W., Jelicks, L. A., Fine, E. J. MicroPET/SPECT/CT imaging of small animal models of disease. Am J Pathol. 182 (2), 319-324 (2013).
- Simmons, J. K., et al. Canine prostate cancer cell line (Probasco) produces osteoblastic metastases in vivo. Prostate. 74 (13), 1251-1265 (2014).
- Amend, S. R., et al. Thrombospondin-1 regulates bone homeostasis through effects on bone matrix integrity and nitric oxide signaling in osteoclasts. J Bone Miner Res. 30 (1), 106-115 (2015).
