Summary
Axonal retbarhet tekniker ger ett kraftfullt verktyg för att undersöka patofysiologi och biofysiska förändringar som föregår irreversibla degenerativa händelser. Detta manuskript visar användningen av dessa tekniker på ulnarisnerven sövda råttor.
Abstract
Elektrofysiologi möjliggör en objektiv bedömning av perifer nerv funktion i vivo. Traditionella nerv överledning åtgärder såsom amplitud och latens upptäcka kronisk axon förlust och demyelinisering, respektive. Axonal retbarhet tekniker ”av tröskeln tracking” utöka dessa åtgärder genom att tillhandahålla information om aktiviteten av jonkanaler, pumpar och värmeväxlare som avser akut funktion och kan föregå degenerativa händelser. Som sådan kan användning av axonal retbarhet i djurmodeller av neurologiska störningar ge en användbar i vivo -åtgärd för att bedöma nya terapeutiska interventioner. Här beskriver vi ett experiment för flera åtgärder av motor axonal retbarhet tekniker i råtta ulnarisnerven.
Djuren är bedövas med isofluran och noggrant övervakas för att säkerställa konstant och tillräcklig djup anestesi. Kroppstemperatur, respiration klassar, puls och saturation av syre i blodet övervakas kontinuerligt. Axonal retbarhet studierna görs med perkutan stimulering av ulnarisnerven och inspelning från hypothenar musklerna i forelimb tass. Med rätt elektrodplacering registreras en tydlig sammansatta muskel action potential som ökar i amplitud med ökande stimulus intensitet. Ett automatiserat program används sedan för att leverera en serie av elektriska pulser som genererar 5 särskilda retbarhet åtgärder i följande ordning: stimulus svar beteende, styrka Spellängd tidskonstant, tröskel electrotonus, nuvarande-tröskel förhållandet och återhämtning cykeln.
Data som presenteras här visar att dessa åtgärder är repeterbara och Visa likheten mellan vänster och höger ulna nerver när bedömas på samma dag. En begränsning av dessa tekniker i den här inställningen är effekten av dos och tid under narkos. Noggrann övervakning och registrering av dessa variabler bör ske mot vederlag vid tidpunkten för analys.
Introduction
Användningen av elektrofysiologiska tekniker är ett viktigt verktyg för i vivo utredning av perifer nervfunktion i neurologiska sjukdomar. Konventionella nerv överledning metoder utnyttja supramaximal stimuli att registrera motor aktionspotential amplitud och latens. Dessa tekniker ger därför användbar information på antalet genomför fibrer och överledning hastighet snabbaste fibrerna. Ett värdefullt kompletterande verktyg är axonal retbarhet testning. Denna teknik använder sofistikerad Elektrofysiologisk stimulans mönster att indirekt bedöma perifera nerver, såsom aktiviteten av jonkanaler, energiberoende pumpar, jonbyte processer och membranpotentialen biofysiska egenskaper 1.
Axonal retbarhet testning används vanligen i den kliniska inställningen att undersöka patofysiologiska processer och effekter av terapeutiska insatser på olika neurologiska sjukdomar. Ännu viktigare, axonal retbarhet åtgärder är känsliga för terapeutiska interventioner som påverkar perifer nervfunktion såsom intravenöst immunglobulin (IVIg) terapi2, cytostatikabehandling3 och kalcineurinhämmare (CNI)-hämmare 4. även om dessa studier har gett viktiga insikter, kliniska studier ofta utesluter utredning av tidig sjukdom drag och romanen terapeutiska alternativ5. Därför, användningen av dessa metoder i djurmodeller av neurologiska sjukdomar har fått dragkraft6,7,8,9. Ja, dessa metoder ger en möjlighet att förstå de specifika nerv retbarhet förändringar i samband med dessa sjukdomar, således främja translationell forskning.
Proceduren som beskrivs här är en enkel och tillförlitlig metod för att registrera axonal retbarhet åtgärder på ulna nerver intakt råttans.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Alla experimentella procedurer beskrivs här följt med djur vård och etiska kommittén av UNSW Sydney och utfördes i enlighet med den nationella hälso- och medicinsk forskning rådet (NHMRC) av Australien föreskrifter för djurförsök.
1. experimentellt ställa in
Obs: 12 veckor gammal, kvinnlig Long-Evans råttor användes i detta förfarande.
- Söva råtta i en induktion kammare med 4% isofluran och 1 L per min O2 flöde. Bekräfta tillräcklig anestesi genom att testa för de rätande reflexen och säkerställa att dess frånvaro innan du tar bort djuret från induktion kammaren. Observera att olika bedövningsmedel differentiella effekter på nerv retbarhet10.
- Säkert placera djurets nos i näsan konen kvarstad och leverera en underhållsdos av 2,5% isofluran och 1 L per min O2 flöde.
- Bekräfta adekvat anestesi genom att kontrollera både pedal tillbakadragande och korneal reflexer genom klämmande djurets tår och försiktigt trycka sitt öga.
Obs: Tillämpning av veterinär salva på ögon, att förhindra torrhet medan under anestesi, är rekommenderade men inte nödvändigt eftersom förfarandet tar normalt 30 min per djur. - Upprätthålla kroppstemperaturen hos råtta vid 37 ° C med hjälp av en feedback kontrollerade Värme matta och en rektalkapslar termometer probe. Ställ in Värme matta och integrerad kropp temperaturgivare till 40 ° C för att förhindra huden som uppstår med högre temperaturer.
Obs: Det rekommenderas att övervaka och registrera fysiologiska åtgärder (puls, syremättnad, kroppstemperatur och andningsfrekvens) varje 10s med användning av ett djurens fysiologiska övervakningssystem. Optimal inspelning förfarandena bör omfatta lokala mätning av lem temperaturen som perifer temperatur kan vara kallare än core temperatur11 (figur 1). - Använda antiseptisk handskar och alltid använda instrument som har rengjorts med 70% etanol, upprätthålla en patogenfria miljö under hela förfarandet.
2. elektrofysiologiska Ställ
- Använd låg impedans platina elektroencefalogram (EEG) visarelektroderna för detta förfarande.
- Förbereda inspelning visarelektroderna genom att infoga inspelningen nål elektroden (figur 1, anges i lila) via hypothenar muskeln och referenselektroden genom den dorsala aspekten av den 4: e siffran (figur 1, anges i Orange) att registrera förening muskel handlingspänningar (CMAPs).
- Placera den mark elektroden genom huden på överlägsen aspekt av underarmen mellan stimulerande och inspelning elektroder (figur 1, anges i grönt). Var försiktig när du sätta elektroderna för att undvika muskelvävnad.
- Förbereda perkutan stimulerande visarelektroderna genom att infoga katoden (figur 1, märkta i blå) ca 4 mm distalt om den kubiska tunnel vid armbågen. Infoga anoden (figur 1, märkta i rött) ca 1 cm proximalt genom huden av regionen axillar.
Figur 1: en schematisk bild av nålen elektrod placeringarna i råtta forelimb. Katoden (blå) sätts cirka 4 mm distalt om kubiska tunneln vid armbågen och anoden (röd) sätts in ca 1 cm proximalt genom huden av regionen axillar. Marken nål elektroden (grön) förs in genom huden på överlägsen aspekt av underarmen mellan stimulerande och inspelning elektroder. Registrering (lila) och referens (orange) visarelektroderna infogas genom hypothenar muskeln och den dorsala aspekten av den 4: e siffran. Den temperatur sonden (grå) placeras på den överlägsna aspekten thenar muskeln. Klicka här för att se en större version av denna siffra.
3. axonal retbarhet förfaranden
- Utföra den gnagare motor nerven TRONDNF-protokollet använder en halvautomatisk, kontrollerade axonal retbarhet datorprogram (se tabell av material) kopplad till en konstant nuvarande stimulator och en förstärkare. Ta bort överflödigt 50 Hz elektriska störningar med en 50/60 Hz buller eliminator.
- Registrera CMAP från hypothenar muskeln genom samtidigt visualisera CMAP morfologi och tillämpa en 1 ms kvadratiska våg puls den ulnar nerven med katod nål elektroden.
- Att uppnå optimal inspelningar, noggrant justera i vinkel eller en position av katoden tills en optimal bifasisk responskurva med konstant amplitud är uppnås (figur 2A.). När den optimala positionen har bestämts, stabilisera katoden med en repositionable elektrodhållare.
Obs: Programvaran används automatiskt levererar de test stimuli, som beskrivs nedan, och ökar eller minskar den ström som krävs för att uppnå tröskeln.
- Att uppnå optimal inspelningar, noggrant justera i vinkel eller en position av katoden tills en optimal bifasisk responskurva med konstant amplitud är uppnås (figur 2A.). När den optimala positionen har bestämts, stabilisera katoden med en repositionable elektrodhållare.
- Spela in en stimulus-respons-kurva genom att stegvis öka stimulansen intensiteten av 1 ms impulsen av 1 mA tills ett maximalt svar uppnås.
Notera: Lila och gröna linjen i figur 2B och 2C representerar inkrementella ökningen av stimulus intensitet och det automatiska systemet respektive. Målet amplituden för tröskelvärde spårning anges automatiskt till 40% av den maximal amplitud som motsvarar området i brantaste på stimulus-respons-kurva. Förändringen i ”tröskel” (dvs stimulus krävs för att framkalla 40% CMAP) induceras av olika test stimuli är variabeln av erhållits under återstoden av protokollet. - Spela in flera axonal retbarhet parametrar, inklusive tröskel electrotonus (TE), nuvarande-tröskel (jag / V) relation och återhämtning cykel (RC) som beskrivs i referens12.
Obs: Kontrollerade axonal retbarhet datorprogrammet bedömer den tröskel (TE) med en 100 ms subthreshold depolariserande och hyperpolarizing strömmar som är inställd på ±20% och ±40% av tröskeln kontroll nuvarande. Förändringen i tröskeln efter både depolariserande och hyperpolarizing strömmar registreras automatiskt på 14 tidpunkter under 100 ms polariserande nuvarande och 12 poäng efter den polariserande nuvarande. Tröskelvärde för electrotonus indirekt bedömer de internodal conductances och är en markör för membranpotential. I / V förhållandet bedöms med 200 ms subthreshold luftkonditionering strömmar som växlar i intensitet från + 50% till -100% av kontroll tröskelvärdet i steg om 10%. I / V relation skiljer sig till TE att strömmarna är längre varaktighet, polarisering intensitet ändras gradvis från + 50% till -100% och tröskel förändringen bedöms vid varje intensitet 1 ms efter den polariserande nuvarande har upphört. I / V relation ger inblick i riskhanteringsprocessen egenskaperna av axon1. RC bedöms med en parkopplad puls paradigm, där en inledande supramaximal luftkonditionering stimulans appliceras följt av en serie test stimuli med jämna mellanrum från 2,5 ms till 200 ms. denna parameter testar en väldefinierad serie av händelser som inträffar i de nodal regionen av axon supramaximal stimulering. Dessa händelser inkluderar, inaktivering av spänningskänsliga Na+ kanaler vilket gör det svårare att framkalla en efterföljande reaktion och kvantifieras i behandlingsresistens och relativa eldfasta period 1. Detta följs av en laddning av internoden och en period av ökad retbarhet medieras av snabb kaliumkanaler, kvantifieras av superexcitability. Slutligen, långsamt aktiverande kaliumkanaler medla en sena period av minskad retbarhet, kvantifieras som subexcitability.
- Registrera CMAP från hypothenar muskeln genom samtidigt visualisera CMAP morfologi och tillämpa en 1 ms kvadratiska våg puls den ulnar nerven med katod nål elektroden.
Figur 2: rådata från en axonal retbarhet test. Panel A visar abiphasic CMAP responskurva efter stegvis ökning av stimulering till ulnarisnerven. Paneler B och C representerar stimulus intensitet (mA) och amplituden av CMAP (mV), respektive. Den gröna delen av B och C skildrar den automatiserade stegvis minskningen av stimulus intensitet och associerade sigmoideum formade minskningen CMAP krävs för tröskelvärde för spårning.
4. inlägg elektrofysiologi förfaranden
- Överföra råtta till en separat bur tills den har återfått tillräcklig medvetande för att upprätthålla sternala koordinationsrubbning. Lämna inte ett djur obevakad och i sällskap av andra djur tills det har återhämtat sig helt från anestesi. När råttan har återhämtat sig helt från anestesi, överföra det tillbaka till sin ursprungliga bur.
- Vid slutförandet av studien, eutanasi råtta utan smärta för djur, t.ex. dödliga intraperitoneal injektion av en barbiturat (t.ex. lethabarb).
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Elektrofysiologiska åtgärder av råtta ulnarnerven erhölls med detta protokoll. Figur 3 visar en representant inspelning från vänster ulnarisnerven på en 12 veckor gamla kvinnliga lång Evans råtta. Sammansatta muskel aktionspotential avser antalet genomför fibrer som aktiveras samtidigt. Supramaximal peak svaret (mV) (figur 3A) visar den maximala belastningen uppnås när stimulansen som ökar inkrementellt tills att det inte finns någon förändring i svaret (figur 2B).
Figur 3B representerar den ström-spänningen (jag / V) förhållandet producerad av strömmar längre i varaktighet (200 ms) och deras intensitet ändras i steg om 10% från + 50% till -100% av tröskelvärdet. I / V relation bedömer inåt och utåt rättelse genom att undersöka skillnader mellan tröskelvärde aktuella svar på depolariserande och hyperpolarizing strömmar. Den nedre vänstra kvadranten återspeglar inåt rättelse tillmötesgående till hyperpolarization och aktivering av invärtes rättelse conductances1. Den övre högra kvadranten återspeglar snabba och långsamma K+ kanal aktivering och den yttre rättelse tillmötesgående till den depolariserande nuvarande.
Internodal conductances kan undersökas med hjälp av tröskel electrotonus vågform (figur 3 c) svar på länge subthreshold depolariserande och hyperpolarizing strömmar. Både hyperpolarizing och depolariserande TE har variabler som kan beräknas som medelvärdet tröskel förändringen mellan specifika tidpunkter 10-20 ms, 20-40 ms och 90-100 ms.
Förändringar över tid på grund av skada eller tillämpningen av terapeutiska interventioner kan orsaka vissa förändringar nerv retbarhet parametrar. Detta kan ge användbar i vivo information om patofysiologiska förändringar, tidig sjukdom drag och terapeutisk effekt i djurmodeller av neurologiska sjukdomar.
Figur 3: en representativ axonal retbarhet tomt. (A) stimulus-respons kurva som skildrar supermaximal peak svaret (mV). (B) ström-spänning (jag / V) förhållandet producerad av 200ms polariserande stimulans alltifrån + 50% till -100% av det aktuella tröskelvärdet. (C) gränsvärde electrotonus illustrerar vågformer svar på långvarig subthreshold polariserande nuvarande framkallas av en 20% och 40% depolariserande (ovanför 0 på y-axeln) och hyperpolarizing (under 0 på y-axeln) ström. Klicka här för att se en större version av denna siffra.
Sekventiell axonal retbarhet testning utfördes på vänster sedan höger forelimb av n = 4 råttor (12 veckor gamla). Både vänster och höger inspelningar slutfördes inom 35 min efter förlusten av pedal tillbakadragande reflexen. Analysen utfördes med hjälp av det parkopplade icke-parametriska Wilcoxon signerade rank-testet. Dessa analyser visade inga signifikanta skillnader mellan vänster och höger ulna nerver för någon av variablerna axonal retbarhet. Konsekvens visades i standard nerv överledning parametrar, CMAP amplitud och latens (figur 4A och B) samt nerv retbarhet variabler inklusive superexcitability och tröskel electrotonus hyperpolarizing (TEh) 90-100 (figur 4 c och D). Tidigare studier10 har dock visat signifikant förändring över tid i parametrar uppstår under isofluran anestesi (se diskussion).
Figur 4: menar recordings (n = 4) erhålls för a peak svar b latens (C) superexcitability och (D) hyperpolarizing tröskel electrotonus (90-100ms) i både vänster (röd) och höger (blå) ulna nerver. Felstaplar visar standardavvikelsen för medelvärdet (SEM). Klicka här för att se en större version av denna siffra.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Det beskrivna förfarandet visar en enkel och pålitlig, minimalinvasiv teknik som tillåter bedömning av de biofysiska egenskaperna och membranet potential av axon i en kort tidsperiod. Denna metod av axonal retbarhet testning jämfört med andra mer invasiva tekniker, som kräver exponeringen av nerv, och inducerar minimala vävnadsskada vilket möjliggör i vivo bedömning som bevarar de fysiologiska villkor av den nerv av intresse och möjliggör upprepade mätningar.
För att säkerställa är konsekventa resultat det några metodologiska överväganden som behöver åtgärdas. En sådan faktor är den koncentration och typ av bedövningsmedel. Det har tidigare visats att isofluran har en effekt på hyperpolarisering-aktiverat cykliska nukleotid-gated kanaler10. Alternativt en injicerbara bedövningsmedel blandning av midazolam, Medetomidin och butorphanol undersöktes och även visat effekter på nerv retbarhet över tiden10. Medetomidin/midazolam/fentanyl (MMF) tycks ha liten effekt på nerv retbarhet och har framgångsrikt använts i många nerv retbarhet studier7,13,14, men dess effekter över tid på nerv retbarhet har inte utretts systematiskt. Notera är detta bedövningsmedel svårt att få i USA och Australien som fentanyl är ett kontrollerat ämne med stränga införselregler. Oavsett valt anestesi, bör dosering och tid under anestesi övervakas noga för behandling vid analys.
En annan faktor att beakta är elektroden kvalitet. Tack vare stark och långvarig hyperpolarizing och depolariserande strömmar tillämpas i axonal retbarhet krävs studier högkvalitativa elektroder. I denna studie användes låg impedans platina elektroencefalogram (EEG) visarelektroderna. Låg impedans elektroderna är normalt inom intervallet kilo-ohm och platina EEG elektroderna konventionellt driva inom 0,5 - 5 kilo-ohm sortiment som kvalificerar som låg impedans elektroder. Axonal retbarhet programmet kan spela in nuvarande utdata och beräkna impedansen kontra målet ut spänning och det har tidigare konstaterats att strömmen var stabila i 30 min, vilket är typiska längden av detta protokoll15. Dessutom dessa elektroder har nyligen införts i möss16 och befanns inte vara föremål för polariserande effekter14,15. Polarisering skulle därför inte vara ett problem under det experimentella förfarandet.
I motsats till protokoll som exponerar nerven av intresse, utnyttjar dessa studier en intakt modell vilket gör positionering av stimulerande elektroder ungefärliga. Exakt upprepning av elektrodplacering i longitudinella studier kan således vara svårt. Trots detta visade en tidigare studie med olika anestesi bra repeterbarhet av 30/34 ulnarisnerven retbarhet parametrar i 3 separata studier liknar den som ses i tibial och stjärtfenan nerver13. I denna studie visade jämförelsen mellan höger och vänster CMAPs konsekvens (figur 4), tyder på exakt och korrekt elektrodplacering är tillräcklig för att kompensera denna möjliga begränsning.
I området i närheten finns det flera kritiska steg i processen att förvärva CMAP svaren. Korrekt och konsekvent placering av stimulerande nål elektroden är avgörande för reproducerbara mätningar av amplituden. Dessutom är det viktigt att säkerställa korrekt placering av inspelning visarelektroderna för att minimera bakgrundsljud. Därför, samtidigt visualisera responskurvan utsläppande stimulerande nål elektroden är viktigt att bekräfta konsekvent placering.
Användning av denna minimalinvasiv teknik på djurmodeller av neurologiska störningar kan vara ett värdefullt verktyg för att undersöka patofysiologiska förändringar och tidig sjukdom drag. Dessa kan fungera som biomarkörer och underlätta utredningen av romanen terapeutiska interventioner i samband med beteendemässiga åtgärder av handfunktion. Validering av dessa tekniker i gnagare kan dessutom göra det möjligt för utredningen av farmakokinetiska och farmakodynamiska relationer av nya föreningar. Detta kan möjliggöra bättre översättning av terapeutiska föreningar innan fas 1 och 2 kliniska prövningar
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Författarna har något att avslöja.
Acknowledgments
Projektet stöddes av Lundbeck Foundation, Novo Nordisk Foundation, danska Medicinska forskningsrådet, Ludvig och Sara Elsass Foundation, Stiftelsen för forskning inom neurologi och Jytte och Kaj Dahlboms Foundation. Marita stöds av en tidig karriär Post-Doctoral Fellowship av nationella hälso- och medicinsk forskning rådet i Australien (nr 1091006)
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| QTracS Program | Digitimer Ltd. | Axonal excitability program | |
| AM-Systems 2200, Analog Stimulus Isolator, 2200V/50Hz | SDR Scientific | 850005 | Stimulator |
| High Performance AC Amplifier Model LP511 | Grass Technologies | Amplifier | |
| Humbug 50/60Hz Noise eliminator | Quest Scientific Instruments | 726310 | Noise eliminator |
| Low Impedance Platinum Monopolar Subdermal Needle Electrodes | Grass Technologies | F-E2-24 | Recording electrodes, 10 mm length, 30 gauge |
| Low Impedance Platinum Electroencephalography Needle Electrodes | Cephalon | 9013L0702 | Stimulating electrodes, 10 mm length, 30 gauge |
| Multifunction I/O Device Model USB-6341 | National Instruments | Multifunction input/output device | |
| Iron Base Plate IP | Narishige Scientific Instrument Laboratory | Used for holding stimulating needle electrode in place | |
| Rotating X-block X-4 | Narishige Scientific Instrument Laboratory | Used for holding stimulating needle electrode in place | |
| Magnetic Stand GJ-8 | Narishige Scientific Instrument Laboratory | Used for holding stimulating needle electrode in place | |
| Micromanipulator M-3333 | Narishige Scientific Instrument Laboratory | Used for holding stimulating needle electrode in place |
References
- Krishnan, A. V., Lin, C. S. -Y., Park, S. B., Kiernan, M. C. Axonal ion channels from bench to bedside: a translational neuroscience perspective. Prog neurobiol. 89 (3), 288-313 (2009).
- Lin, C. S. -Y., Krishnan, A. V., Park, S. B., Kiernan, M. C. Modulatory effects on axonal function after intravenous immunoglobulin therapy in chronic inflammatory demyelinating polyneuropathy. Arch neurol. 68 (7), 862-869 (2011).
- Park, S. B., Goldstein, D., Lin, C. S. -Y., Krishnan, A. V., Friedlander, M. L., Kiernan, M. C. Acute abnormalities of sensory nerve function associated with oxaliplatin-induced neurotoxicity. J. Clin. Oncol. 27 (8), 1243-1249 (2009).
- Arnold, R., Pussell, B. A., Pianta, T. J., Lin, C. S. -Y., Kiernan, M. C., Krishnan, A. V. Association between calcineurin inhibitor treatment and peripheral nerve dysfunction in renal transplant recipients. Am. J. Transplant. 13 (9), 2426-2432 (2013).
- Boërio, D., Greensmith, L., Bostock, H. Excitability properties of motor axons in the maturing mouse. J. Peripher. Nerv. Syst. 14 (1), 45-53 (2009).
- Boërio, D., Kalmar, B., Greensmith, L., Bostock, H. Excitability properties of mouse motor axons in the mutant SOD1(G93A) model of amyotrophic lateral sclerosis. Muscle & Nerve. 41 (6), 774-784 (2010).
- Alvarez, S., Calin, A., Graffmo, K. S., Moldovan, M., Krarup, C. Peripheral motor axons of SOD1(G127X) mutant mice are susceptible to activity-dependent degeneration. Neurosci. 241, 239-249 (2013).
- Fledrich, R., et al. Soluble neuregulin-1 modulates disease pathogenesis in rodent models of Charcot-Marie-Tooth disease 1A. Nat. Med. 20 (9), 1055-1061 (2014).
- Vianello, S., et al. Low doses of arginine butyrate derivatives improve dystrophic phenotype and restore membrane integrity in DMD models. FASEB J. 28 (6), 2603-2619 (2014).
- Osaki, Y., et al. Effects of anesthetic agents on in vivo axonal HCN current in normal mice. Clin Neurophysiol. 126 (10), 2033-2039 (2015).
- Biessels, G. J., et al. Phenotyping animal models of diabetic neuropathy: a consensus statement of the diabetic neuropathy study group of the EASD (Neurodiab). J. Peripher. Nerv. Syst. 19 (2), 77-87 (2014).
- Boërio, D., Greensmith, L., Bostock, H. A model of mouse motor nerve excitability and the effects of polarizing currents. J. Peripher. Nerv. Syst. 16 (4), 322-333 (2011).
- Arnold, R., Moldovan, M., Rosberg, M. R., Krishnan, A. V., Morris, R., Krarup, C. Nerve excitability in the rat forelimb: a technique to improve translational utility. J. Neurosci. Methods. 275, 19-24 (2017).
- Moldovan, M., Alvarez, S., Krarup, C. Motor axon excitability during Wallerian degeneration. Brain. 132 (Pt 2), 511-523 (2009).
- Madison, R. D., Robinson, G. A., Krarup, C., Moldovan, M., Li, Q., Wilson, W. A. In vitro electrophoresis and in vivo electrophysiology of peripheral nerve using DC field stimulation. J. Neurosci. Methods. 225, 90-96 (2014).
- Moldovan, M., Krarup, C. Evaluation of Na+/K+ pump function following repetitive activity in mouse peripheral nerve. J. Neurosci. Methods. 155 (2), 161-171 (2006).
