Summary
Aqui, descrevemos a indução de síndrome nefrótica experimental em ratos 129S1/SvImJ por injeção retrobulbar rápida de doxorrubicina. Também tratamos nefrótico ratos com pelotas de liberação sustentada contendo aprotinina para inibir a atividade de protease de serina urinária e evitar a retenção de sódio.
Abstract
Síndrome nefrótica é a manifestação mais extrema da doença renal contraste e caracterizado por pesados proteinúria, hipoalbuminemia e edema devido à retenção de sódio e hiperlipidemia. Para estudar a fisiopatologia desta síndrome, desenvolveram-se modelos de roedores baseiam na injeção de substâncias tóxicas como doxorrubicina, causando danos podocyte. Em camundongos, apenas algumas cepas são suscetíveis a este modelo. Em sua 129S1/SvImJ ratos, a administração de doxorrubicina por injeção intravenosa rápida para o seio de retrobulbar induz a síndrome nefrótica experimental que apresenta todos os sintomas das doenças humanas, incluindo edema e retenção de sódio. Após o início da proteinúria, exposição de ratos aumentou a atividade de protease de serina urinária que leva à ativação do canal de sódio epitelial (ENaC) e retenção de sódio. Inibição farmacológica de proteases de serina urinária pelo tratamento com liberação sustentada aprotinina revoga ativação ENaC e evita a retenção de sódio. Este modelo é ideal para estudar a fisiopatologia da proteasuria, i. e., a excreção de ativo Serina proteases que causam ENaC ativação pela proteólise de sua subunidade γ-. Isto pode ser considerado como o principal mecanismo de ativação ENaC e retenção de sódio na doença renal de contraste.
Introduction
Síndrome nefrótica é caracterizada por hiperlipidemia, hipoalbuminemia, edema e proteinúria pesada e pode ser considerada como a manifestação mais extrema da doença renal de contraste. Em roedores, síndrome nefrótica experimental pode ser induzida por injeção única de antraciclinas ou puromicina que leva a danos podocyte e assemelha-se a doença humana mudança mínima e glomeruloesclerose segmentar (FSGS)1. Após sua primeira descrição em 1955 por Frenk et al. 2, nefrose de puromicina nucleosídeos (PAN) em ratos tornou-se um modelo padrão para investigar a fisiopatologia da síndrome nefrótica em numerosos estudos3,4,5,6. Nos ratos, o modelo correspondente pode ser induzido pela doxorrubicina regime7. No entanto, há uma forte tensão-dependência que é geneticamente determinada pelo menos dois loci genéticos8. Além disso, existem diferenças na resposta de contraste e curso da síndrome nefrótica9,10. Usando ratos 129S1/SvImJ e injeção intravenosa rápida de doxorrubicina através do seio retrobulbar, respostas proteinúria atingem valores que são suficientes para induzir as características típicas da síndrome nefrótica, particularmente de retenção de volume caracterizada por ascite e quase livre de sódio urina7. Retenção de sódio na síndrome nefrótica experimental tem sido presume-se que o resultado da ativação do canal de sódio epitelial (ENaC) no túbulo distal por proteases de serina aberrantly filtrado como plasmina causando proteólise de sua subunidade de γ-4 ,11,12. Recentemente, este conceito foi comprovado em ratos nefrótico que estavam protegidos de ativação proteolítica do ENaC e retenção de sódio pelo tratamento com a aprotinina de inibidor de protease serina que foi igualmente eficaz como o bloqueador de ENaC amilorida13. Para garantir a entrega contínua para o túbulo distal, aprotinina foi administrada através de liberação sustentada por via subcutânea implantado Pelotas. Futuros estudos são necessários para identificar as proteases de serina que são responsáveis pela ativação proteolítica do ENaC em síndrome nefrótica que é pensado para a situação humana em paralelo. Para este efeito, síndrome nefrótica induzida por doxorrubicina é um modelo valioso que pode ser usado em ratos do selvagem-tipo ou expandido para camundongos geneticamente modificados. Suas vantagens incluem o baixo custo da droga, menor complexidade de gestão e de boa reprodutibilidade14.
Neste artigo, demonstramos a indução de síndrome nefrótica experimental por injecção intravenosa rápida de doxorrubicina para o seio de retrobulbar e implantação de pellets de liberação sustentada contendo aprotinina para inibir urinária serina protease atividade, medida com um ensaio cromogênico.
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Protocol
Todos os métodos foram conduzidos de acordo com os institutos nacionais de saúde guia para o cuidado e uso de animais de laboratório e a lei alemã para o bem-estar dos animais, e que foram aprovadas pelas autoridades locais (Regierungspräsidium Tübingen).
1. indução de síndrome nefrótica Experimental por injeção de doxorrubicina para o seio de Retrobulbar
- Prepare uma seringa de 0,5 mL, com uma cânula de 30g montado, marcando a posição de parada do pistão.
- Calcule o volume de injeção de doxorrubicina para macho (7,25 µ l/g peso corporal (PC) igual a doxorrubicina de bw 14,5 µ g/g) e ratos fêmeas (6,9 µ l/g bw igual a doxorrubicina de bw 13,8 µ g/g), de acordo com o peso do corpo de manhã.
Nota: A dose dada é adequada para indução de síndrome nefrótica. Pequenas alterações na dosagem originar um curso diferente crucial de nefropatia renal aguda falha (15,4 µ g/g bw a doxorrubicina)7, alcançando de doença renal crônica leve, com apenas pequenas mudanças na taxa de filtração glomerular (doxorrubicina de bw 12.6 µ g/g) 15. - Aquecer a quantidade calculada de solução de doxorrubicina (2 µ g / µ l) em uma câmara quente de 37 ° C.
Cuidado: Doxorrubicina é prejudicial se ingerido e pode causar câncer. Sempre use luvas se trabalhando com doxorrubicina e evitar qualquer contacto com a pele. - Prefill a seringa com a solução de doxorrubicina, até o ponto de marcação e defina o saldo zero. Encha a seringa com o volume de injeção e verificar o volume por pesagem da seringa.
- Narcotize profundamente o mouse com 5 vol % isoflurano usando um vaporizador e o fluxo de oxigênio de 2 L/min.
- Não use pomada sobre os olhos antes da injeção. O operador precisa de uma visão clara da cavidade orbital para a realização de uma injeção retrobulbar segura e bem sucedida.
- Avaliar o nível de anestesia por reflexo pedal e ajustar anestésica entrega se necessário antes de iniciar a injeção.
- Posicione o mouse em uma prostração lateral direita com o dorso voltado para o corpo do operador e sua cabeça virada para mão de injeção do operador.
Nota: O procedimento é descrito por uma pessoa destra, para pessoas canhotas, realizando a injeção com a mão esquerda é mais fácil fazer a posição e injeção invertida direita para esquerda. - Cuidadosamente se projetam globo ocular esquerdo do mouse, da tomada de olho aplicando uma pressão suave para a pele, dorsal e ventral ao olho.
- Punção do seio esquerdo retrobulbar do ângulo interno do olho (comissura palpebral medial). Evite qualquer contacto com o globo ocular mouse´s.
- Ligeiramente, incline a seringa e injetar o volume inteiro de uma só vez. Certifique-se que o volume é injetado sem qualquer resistência e sem quaisquer sinais de extravasamento como exopthalmus ou escapamento do local da injeção.
- Desde que a doxorrubicina é uma substância altamente tóxica, verifique bem estar pelo menos uma vez por dia usando uma folha de Pontuação de acordo com a Morton e Griffiths et al . 16 e pagar atenção especial para o local da injeção. Se há sinais de extravasamento como exopthalmus, fechamento da pálpebra prejudicada ou sinais de necrose como occure de lesões de pele ou inchaço após a injeção ou nos dias seguintes, o rato deve ser sacrificado.
2. a implantação de Pellets de liberação sustentada contendo aprotinina
- Ordem de pelotas com a dose desejada por dia e lançamento duração antecipadamente. Em caso de aprotinina, escolha uma dose de 1 mg por dia para ser lançado durante 10 dias.
Nota: Neste estudo, as pelotas de aprotinina contém uma dose de 10 mg.- Armazenar as pelotas sob condições de seca e evitar qualquer exposição à umidade.
- Prepare os itens necessários para a cirurgia, incluindo um par de tesouras de cabelo, um par de tesouras de preparação de pele, um bisturi, uma pinça cirúrgica, dois pares de pinças de tecido, um porta-agulha e 15 cm monofile sutura não absorvível.
- Esterilizar os instrumentos usando um esterilizador calor por 5 min a 240 ° C. Antes de utilizar os instrumentos, espere por 5 min até atingirem a temperatura ambiente.
- Evite qualquer contato de dicas de instrumento esterilizado para superfícies não estéreis.
- Evite queimadura da pele por instrumentos quentes.
- Esterilizar os instrumentos usando um esterilizador calor por 5 min a 240 ° C. Antes de utilizar os instrumentos, espere por 5 min até atingirem a temperatura ambiente.
- Narcotize rato com isoflurano vol 5% seguido por 1,5% vol, usando um fluxo de 2 L/min vaporizador e oxigênio.
- Coloque o mouse em posição em um dispositivo de aquecimento, coberto com uma camada de gaze para evitar lesões térmicas para o mouse. Temperatura da superfície é de cerca de 37 ° C.
- Protege os olhos com pomada.
- Remover o cabelo no meio, em uma área de aproximadamente 0,5 cm2 usando uma tesoura ou um aparador de pelos e desinfectar a pele sem pelos com um desinfectante adequado para desinfecção da pele. Remova como menos cabelo possível, então fica mais difícil para o mouse atingir a ferida e thread termina mais tarde e para manter a temperatura do corpo.
- Faça uma incisão na pele sem pelos com um bisturi em direção cranio-caudal de um comprimento de aproximadamente 5 mm. Prepare uma bolsa lateral esquerda de cerca de 1 cm de profundidade no tecido conjuntivo subcutâneo utilizando uma preparação sem corte.
- Avaliar o nível de anestesia por reflexo pedal e ajustar anestésica entrega se necessário antes de iniciar a cirurgia.
- Insira uma pelota de lançamento de 10 dias a bolsa lateral esquerda preparada usando uma pinça estéril de tecido. Deixe o sedimento no fundo da bolsa em posição plana.
- Evite qualquer contato da pelota, para líquido e umidade até colocado na bolsa do preparado.
- Feche a pele com suturas de 2-3. Só deixe pontas de fio muito curto para torná-lo mais difícil para o mouse abrir as suturas roendo.
- Coloque os ratos individualmente para reduzir o desconforto pós-operatório e impedir a abertura das suturas roendo. Manter o mouse no modo de exibição até que recuperou a consciência suficiente após a narcose.
Nota: Não há nenhuma necessidade para dor pós-operatória desde que esta intervenção é bem tolerada sem quaisquer sinais de desconforto ou dor. Alternativamente recomendamos analgésicos tópicos, por exemplo, uma gota de bupivacaína na incisão antes da sutura que forneceria até 8 h de analgesia.
3. avaliação pelo modelo de indução, sinais de síndrome nefrótica e bem-estar
- Colete urina da manhã (08:00) em um copo de reação (1,5 mL) todos os dias a partir do dia da injeção por massageando a bexiga.
- Medir a proteinúria por meio de ensaio da proteína de Bradford e normalizar a creatinina.
Nota: Para indução de síndrome nefrótica, proteinúria deve atingir um limiar de creatinina 120 mg/mg, entre 7 e 10 dia após a injeção de doxorrubicina.
- Medir a proteinúria por meio de ensaio da proteína de Bradford e normalizar a creatinina.
- Olhe para o desenvolvimento de ascite. Seleção para aumento da circunferência abdominal ou pendendo sobre os flancos.
- Pese o mouse, as pelotas de alimento e o frasco bebendo de manhã (08:00) todos os dias.
- Verifique bem estar pelo menos uma vez por dia, usando uma folha de Pontuação de acordo com a Morton e Griffiths et al. 16
4. medida da Protease de serina urinária com um ensaio cromogênico
- Prepare a solução de substrato trabalho adicionando-se 15 mL de soro fisiológico estéril tamponado de fosfato (PBS) para um frasco de 25 mg de liofilizado substrato cromogênico S-2251, produzindo uma concentração de 2 mM. Dissolva a aprotinina em PBS para obter uma solução de aprotinina com uma concentração de 2 mg/mL.
- Loja preparada soluções a-20 ° C. Isto retarda significativamente a autodegradação de S-2251. Não utilize soluções velhas com um tom forte de amarelo.
- Usar a solução de trabalho de substrato recém preparada ou descongeladas e aquecê-lo em uma câmara de calor de 37 ° C.
- Descongele as amostras de urina à temperatura ambiente.
- Prevenir a degradação de protease por evitar repetidos congelamentos e descongelamentos. Amostras de urina de armazenamento-20 ° c.
- Use uma placa de 96 micropoços adequada para medição fotométrica. Adicionar 3 µ l de urina não diluída em cada um dos dois poços e adicionar 50 µ l de solução de trabalho de substrato com 3 µ l de solução de PBS ou aprotinina nos poços. Cubra o prato com um aferidor de placa.
- Incube a placa coberta de microplacas por 60 min em uma câmara de calor de 37 ° C.
- Medir a densidade óptica de cada poço a 450 nm, utilizando um leitor de microplacas.
- Tome a diferença entre o OD sem aprotinina e com aprotinina como atividade de urinária sensíveis à aprotinina serina protease.
Nota: Medição de uma amostra emparelhada com e sem aprotinina aumenta a especificidade do ensaio desde que o substrato também pode ser clivado por outras proteases que não desempenham um papel fisiopatológico.
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Representative Results
Após a indução de isoflurano narcose, doxorrubicina rapidamente foi injetada através do seio esquerdo retrobulbar. Todo o volume de 7,25 µ l/g bw foi injetado sem qualquer resistência e extravasamento provando corrigir localização venosa da cânula. O mouse recuperou de narcose rapidamente e não tinha nenhuma imparidade naquele dia e depois disso. Particularmente, não havia nenhum sinal de danos no olho esquerdo. Depois de doxorrubicina injeção, comida e líquido consumo caiu sobre os 3 primeiros dias devido a um efeito tóxico geral de doxorrubicina e recuperado posteriormente (Figura 1a). Durante os 3 primeiros dias após a injeção, o mouse perdeu 3,4% do seu peso corporal devido a inappetence (Figura 1b). A partir do 5º dia, o mouse desenvolvido marcada proteinúria (Figura 1C) que foi seguida por uma forte diminuição da excreção urinária de sódio, apesar da ingestão de alimentos adequados (Figura 1a, b). Esta retenção de sódio, levar a um enorme ganho de peso corporal por 22,2% do dia 3 até dia 10 e foi acompanhado por ascite. Em consequência da proteinúria, o mouse desenvolvido hipoalbuminemia (Figura 1C). Em uma amostra de plasma, tirada no dia 10, hiperlipidemia era visível. Estes dados mostram que a doxorrubicina dada pelo seio retrobulbar rapidamente e de forma impressionante induz um full-blown síndrome nefrótica em sua 129S1/SvImJ ratos.
Retenção de sódio na síndrome nefrótica experimental estava ligada à ativação do ENaC por filtração aberrante de Serina proteases como plasmina11,12. Se este conceito aplica-se, então, a inibição de proteases de serina urinária por aprotinina deve proteger de ENaC ativação e retenção de sódio. Para estudar o efeito da aprotinina na ativação de ENaC, tratamos um rato nefrótico com aprotinina. Como a aprotinina é liberada rapidamente por filtração glomerular, optamos por administração de drogas usando uma pelota de liberação sustentada para garantir disponibilidade contínua de aprotinina no túbulo distal durante 10 dias. No terceiro dia após a injeção de doxorrubicina, um rato foi implantado com um pellet contendo aprotinina e um rato de controle recebeu uma pelota de placebo sob narcose de isoflurano. Animais recuperaram rapidamente narcose do formulário e a ferida sarou sem problemas. Dia 5 em diante, proteinúria desenvolvido em ambos os ratos em uma medida semelhante (Figura 2a). No entanto, só os ratos nefrótico tratada com placebo experimentaram retenção de sódio (Figura 2b) e ganho de peso (Figura 2C) indicando ativação ENaC. Em contraste, o mouse tratados com aprotinina foi protegido de retenção de sódio e ganho de peso de corpo (Figura 2b, c). Isto demonstra claramente que a atividade de protease de serina urinário é a causa da retenção de sódio na síndrome nefrótica.
A concentração de aprotinina alcançada na urina e plasma foi medida com um ELISA. Como mostrado na Figura 3a, concentração urinária aprotinina chegou logo após a implantação e foi constante posteriormente. Significa concentração urinária aprotinina foi 207 ± 29 µ g/mL (32 ± 4 µM), Considerando que a concentração plasmática de aprotinina após 10 dias de tratamento foi 13 µ g/mL (2 µM), que é comparável à concentração de plasma alcançados em pacientes tratados com aprotinina17. O efeito de aprotinina na atividade de protease de serina urinária foi medido com um ensaio cromogênico usando amostras de urina colhidas durante o curso da síndrome nefrótica experimental. Este ensaio baseia-se a hidrólise da ligação peptídica no substrato liberando p-nitroanilina que pode ser facilmente detectado por fotometria a 450 nm. Como mostrado na Figura 3b, atividade de protease de serina aumentou rapidamente na urina a partir do rato nefrótica tratada com placebo em paralelo com o aparecimento de proteinúria. Em contraste, atividade de protease de serina urinária foi completamente inibida no tratados com aprotinina mouse nefrótico coincidindo com a prevenção da ativação ENaC e retenção de sódio, mostrado na Figura 2b, c.
Figura 1: curso de alimentos e fluido de entrada (a) sódio urinário excreção e corpo peso (b) e concentração de albumina proteinúria e plasma (c) antes e após a indução de síndrome nefrótica experimental. Depois de um declínio no alimento e ingestão de líquidos durante os primeiros três dias após a doxorrubicina, ratos mostram um consumo quase constante. Depois de cinco dias, o desenvolvimento de proteinúria começa e atinge nefrótica limite entre dia 7 e 10, levando à síndrome nefrótica full-blown, com formação de edema, retenção de sódio e hipoalbuminemia. Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.
Figura 2: curso de proteinúria (a), excreção urinária de sódio (b) e peso do corpo (c) em um rato tratados cada um com um bola de aprotinina ou placebo no dia 3, após a injeção de doxorrubicina. Apesar do desenvolvimento de proteinúria em uma medida semelhante a aprotinina protege contra a formação de edema e retenção de sódio causada pela ENaC ativação durante a síndrome nefrótica. Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.
Figura 3: curso de concentração urinária aprotinina após a implantação da pelota com concentração plasmática de aprotinina. Curso de atividade de protease de serina urinário medido com o ensaio cromogênico descrito na etapa 4. Concentração urinária aprotinina picos logo após a implantação e é constante, daí em diante. Atividade de protease de serina aumenta rapidamente na urina durante a síndrome nefrótica, em paralelo com o aparecimento de proteinúria. Aprotinina na vivo previne contra aumento na atividade de protease de serina urinária. Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.
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Discussion
Aqui, demonstramos que a injeção de doxorrubicina através da injeção de sinus retrobulbar induz síndrome nefrótica experimental em ratos 129S1/SvImJ com proteinúria, retenção de sódio, hypoalbumenia e hiperlipidemia. No entanto, existem dois problemas críticos que devem ser levadas em conta ao usar este modelo. Em primeiro lugar, a indução de modelo estritamente é dose dependente e desvios da dose de doxorrubicina tão pequena quanto 0,3 µ g/g afetam a resposta dos ratos15. Quando injetado com uma dose mais baixa como 14 µ g/g bw ou abaixo, doxorrubicina causa proteinúria não nefrótica só que não está associada com a retenção de sódio ostensiva, ascite e hiperlipidemia. Em contraste, a injeção de uma dose maior leva a insuficiência renal aguda e alta mortalidade aguda. De acordo com a dose e a resposta dos ratos, causas de doxorrubicina, um curso semelhante a lesão renal aguda humana (AKI), doença renal crônica com preservada filtração glomerular taxa (fase G1-3 de CKD) ou doença renal crônica progressiva com reduzido taxa de filtração glomerular (CKD G4-5) conduz a uremia7,15.
Em segundo lugar, este modelo é limitado a certas estirpes de rato e a tensão de C57Bl/6 amplamente utilizada é resistente8. Além disso, contaminação genética como eles podem estar presentes durante um cruzamento pode levar a uma taxa de resposta significativamente menor. Isto pode ser evitado em certa medida, aumentando a dose de doxorrubicina. No entanto, a dose de doxorrubicina usado para indução de modelo (14,5 µ g/g bw) é já perto o LD50 descrita entre 15-17 µ g/g bw em esta estirpe7,18.
O uso deste modelo de rato abre a possibilidade de estudar diferentes questões altamente inovadores a síndrome nefrótica, atingindo da formação de edema e proteinúria dysregulations endocrinológica e anemia renal15. Neste sentido, nefropatia induzida por doxorrubicina abrange amplo espectro de CKD humana e é uma boa alternativa aos modelos atuais utilizados em Nefrologia investigação tal de19,de nefrectomia 5/620 ou de ligadura de ureter unilateral21. Além disso, é possível aplicar o modelo de camundongos geneticamente modificados para estudar o papel de um determinado gene de interesse no curso de modelo como a falta da soro-e-glicocorticoide quinase 1 (SGK1)7 ou muitos outros.
Uma característica especial do modelo apresentado é a ocorrência de proteasuria, i. e., a excreção de ativo Serina proteases que causam ENaC ativação por proteólise de sua subunidade γ-. Isto leva a excreção de um quase isento de sódio urina e volume de retenção caracterizada pelo rápido ganho de peso e desenvolvimento da ascite após início da proteasuria. No entanto, este fenômeno é transitório, e após 15 dias, ratos espontaneamente perder ascite e peso embora proteinúria persiste. A razão pela qual, no entanto, ainda não se alcançou. Esse comportamento paradoxal também foi observado em estudos com ratos nefrótica4 e parece representar uma característica geral de síndrome nefrótica experimental em roedores.
Atividade de protease de serina urinária foi medida com um ensaio cromogênico que é simples e rápido. Ele se baseia a hidrólise da ligação amida de p-nitroanilina, ligada a um peptídeo de 4 aminoácidos de comprimento que pode ser clivado por proteases diferentes. Geralmente, substratos cromogênico não são específicos para um determinado tipo de protease e há sobreposição substancial de proteases que decompor um determinado substrato. O substrato utilizado aqui é um substrato preferencial de tripsina Serina proteases como plasmina ou plasma calicreína22. Para aumentar a especificidade, a atividade de protease sempre deve ser determinada de uma amostra emparelhada com e sem um inibidor23,24. Neste estudo, utilizou-se para definir a atividade da tripsina Serina proteases aprotinina. Calculando-se a atividade de aprotinina sensíveis da diferença, as actividades de outras proteases são anuladas. No mouse nefrótico tratado com aprotinina in vivo atividade de protease de serina urinária não foi aumentada e mais importante coincidiu com a revogação da retenção de sódio. Assim, atividade de protease de serina urinária só não é causal para a retenção de sódio na síndrome nefrótica, mas também pode ser considerada um biomarcador para prever a eficácia de um inibidor de protease de serina em síndrome nefrótica, que pode se tornar um novo terapeuticamente abordar de tratamento da síndrome nefrótica. No estudo por Bohnert et al. 13, a Serina protease inibidor camostat e plasminogênio conversão inibidor ácido tranexâmico não foram eficazes na prevenção da retenção de sódio, que coincidiu com uma falha para normalizar a atividade de protease de serina urinária.
Embora a doxorrubicina é uma substância altamente tóxica, injeção retrobulbar é seguro e não associado com qualquer dano que prejudicada o bem-estar do animal. Pode-se argumentar que a cauda veia injeção seria uma abordagem mais adequada, reduzindo o sofrimento animal. Em um estudo comparativo, descobrimos que indução através da injeção de veia de cauda de doxorrubicina foi inferior à rota retrobulbar devido a uma maior taxa de ratos que não desenvolvem a síndrome nefrótica (34% não-Respondente) em comparação com aqueles induzidos pelo retrobulbar rota ( 0-15% não-Respondente). Além disso, proteinúria por injeção de veia de cauda foi menor levando a retenção de sódio atenuada. Isso pode ser explicado por diferenças na farmacocinética e uma maior concentração de pico de doxorrubicina conseguida após injeção retrobulbar rápida que é essencial para a indução do modelo podocyte danos. No entanto, deve-se enfatizar que a injeção retrobulbar precisa um operador altamente qualificado e experiente para evitar complicações relacionadas com o extravasamento de quantidades mesmo minutos de doxorrubicina.
Em conclusão, a síndrome nefrótica experimental por doxorrubicina é um modelo versátil da doença de contraste renal em ratos 129S1/SvImJ que permite investigar questões científicas altamente atuais, o mais importante proteasuria.
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Disclosures
Os autores não têm nada para divulgar.
Acknowledgments
Este estudo foi suportado por uma concessão da Fundação de pesquisa alemã (DFG, AR 1092/2-1).
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| supplies | |||
| BD Micro FINE + U-40 (0.30 mm x 8 mm) | BD Deutschland GmbH, Heidelberg, Germany | PZN: 07468060 | syring |
| ETHILON*II (5/0, 16 mm, 3/8c, 45 cm) | Johnson&Johnson Medical GmbH, Ethicon Deutschland, Norderstedt, Germany) | EH7823H | suture |
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| reagents | |||
| aprotinin (6000 KIU/mg) | LOXO, Heidelberg, Germany | CAS 9087-70-1 | |
| Bepanthen, Augen- und Nasensalbe | Bayer Vital GmbH, Leverkusen, Germany | PZN: 1578681 | ointment |
| Chromogenix S-2251 | HAEMOCHROM DIAGNOSTICA GmbH, Essen, Germany | 82 0332 39 | chromogenic substrate |
| doxorubicin (2.0 µg/µL) | Cell Pharm, Bad Vilbel, Germany | CAS 25316-40-9 | doxorubicin |
| isofluran CP (1 mL/mL) | CP-Pharma, Burgdorf, Germany | CAS 26675-46-7 | isofluran |
| pellets with matrix-driven sustained release (custom-made) | Innovative Research of America, Sarasota, FL | X-999 | pellet |
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| equipment | |||
| ELx808 Absorbance Mikroplate Reader | BioTek, Bad Friedrichshall, Germany | ELx808 | microplate reader |
| MICROSTERIL - 436 | B.M.S., Trescore Balneario, Italy | GAL/436 | sterilizer |
| Hybridization oven/shaker | GE Healthcare UK Limited, Amersham LIFE SCIENCE, Little Chalfont, UK | RPN 2511 | heat chamber |
| Thermo MAT Pro 10 W, 15x25 cm, Lucky Reptile | Import Export Peter Hoch GmbH, Waldkirch, Germany | 61201 | mouse warming device |
References
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