Name: 부분 결합하여 마우스 경동맥 동맥에있는 방해 흐름 유발 죽상 경화증과 경동맥 내피로부터 RNA 분리의 간단한 방법의 모델 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2010-06-22T17:30:00.000+00:00
Duration: 11 min
Description: 학습하세요 마우스 경동맥 부분 결찰 수술을 통해 교란 혈류를 유도하고 죽상경화증을 유발하는 방법을. 고순도 내피 RNA 분리 기법과 초음파 검증 과정도 함께 다룹니다.

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이 작품은 과학, 기술 및 S. 한국의 교육부에서 NIH 기금 HL87012 (HJ), HL75209 (HJ), UO1HL80711 (DH, DG, HJ) 및 세계 클래스 대학 프로젝트 (HJ)의 기금에 의해 지원되었다.

1. 왼쪽 경동맥 부분 내고 <ol><li> 생쥐는 세 ~ 8 주가되면 사용됩니다. 생쥐의 무게는 최소한 18g으로 권장합니다. </li><li> 비드 악기 살균기 30 초 악기를 소독하고 진정 수 </li><li> 케타민을 (80mg/kg)과 Xylazine (10mg/kg) IACUC 승인으로 intraperitoneal (IP) 주입 또는 대체 마취와 마취를 유발. IP 주사, 복부의 왼쪽 낮은 사분면에 마우스를 주입. </li><li> 완전히 anesthetized까지 온난 챔버에 넣어 마우스. 발가락 핀치에 대한 응답과 마취의 깊이를 확인합니다. </li><li> 부정사 (배꼽 사이드까지) 위치에 수술 무대에서 플레이스 마우스. 테이프 포어 - 포스 야자수와 무대 아래로 뒷다리 - 싶단다 단독. </li><li> mandible과 흉골 사이에 목에 depilatory 에이전트 교양 금액 (예 : 나이르)을 적용합니다. 부드럽게 마사지는 모든 머리가 제거됩니다 때까지. </li><li> depilatory 에이전트를 청소하고 depilated 지역 Betadine의 자유 금액을 적용합니다. </li><li> ligations에 대한 6-0 실크 봉합사의 1 인치 길이의 섹션을 준비합니다. 각 마우스 치료의 두 ​​가지가 필요합니다. </li><li> 날카로운 작은 가위를 사용하여 목 가운데 4-6밀리미터 수직 절개를합니다. 피부와 기본 근막 모두 절단해야합니다. </li><li> 정중선에서 왼쪽으로 왼쪽 귀 부근의 선 (腺)을 이동하고 퉁명스럽게 바로 기관의 해부 시작합니다. 당신은 쉽게 pulsating 왼쪽 일반 경동맥을 식별할 수 있어야합니다. </li><li> 당신이 분기점을 찾을 때까지 caudally 일반적인 경동맥을 따르십시오. </li><li> 외부 경동맥의 동맥, 내부 경동맥, 후두 동맥과 우수한 갑상선 동맥 : 퉁명스럽게 왼쪽 일반적인 경동맥에서 다음 네 가지 말초 지점을 노출하는 분기점을 해부하다. 이러한 혈관, 특히 우수한 갑상선은 깨지기 수 있습니다. 절개 매우주의하십시오. </li><li> 6-0 실크 봉합사를 사용하여 뛰어난 갑상선 위에 외부 경동맥을 묶어. 이렇게하려면 동맥 아래 한 포셉을 통과하고 다른 집게의 도움으로 precut 치료의 한 조각을 들고. 부드럽게 동맥 아래 통과 치료를 가져옵니다. 단단히 매듭에서 잡은되는 모든 주변 조직을 피하고 타이. 당신이 효과적으로 크게 다른 모델 완전한 결합을 수행합니다 프로 시저의 끝 부분에 의해, 뛰어난 갑상선 동맥의 이륙 아래 당신이 찾아낸다면. </li><li> 같은 기술을 사용하는 한 매듭으로 내부 경동맥과 후두 동맥을 묶어. </li><li> 봉합과 뛰어난 갑상선 동맥의 명백의 위치를​​ 확인합니다. </li><li> 조직 수선의 소량을 사용하여 대략적인 피부와 가까운 피부. </li><li> 복구까지 온난 챔버에 넣어 마우스. 복구는 일반적으로 30-60분 걸립니다. </li><li> 동물 첫 번째 24 시간 이내에 곤경에 처한 경우 사용되는 마취가 연장 통증 (예 흡입 isoflurane)를 제공하거나하지 않는 경우 Buprenorphine (0.1mg/kg)의 하나 복용량은 게시 즉시 수술을 시행해야합니다. 우리의 경험에서, 마취에 대한 관리 케타민을 복용은 수술 경험이 풍부한 외과 의사에 의해 수행되고 더 이상의 진통제가 필요하지 않습니다 충분한 진통제를 제공합니다. </li></ol> 2. 경동맥의 초음파 검사 <ol><li> 부분 내고이 흐름을 방해 유도 여부를 확인하기 위해 경동맥 흐름은 하루 후 내고 검사를해야합니다 </li><li> isoflurane과 마취를 유도 - 필요한 경우 마취 유도 상자가 사용할 수 </li><li> 최대 이미징 단계, 배꼽쪽에 anesthetized 쥐를 플레이스 </li><li> 이미징 무대에서 ECG 센서에 테이프 팔, 다리 </li><li> 나이르의 교양 프로그램 (이미 내고 절차 완료하지 않을 경우이 단계에만 필요)의 목을 잎이 진 </li><li> 온도를 기록하는 직장​​ 온도계를 삽입 </li><li> 목에 젤 에코 신청 </li><li> B - 모드에서 시작합니다. </li><li> 이미징 비행기는 90도 (프로브에 손잡이가 마우스의 코를 향해 가리 켜야합니다)해야합니다 </li><li> 이미지가 얻을 때까지 마우스 목에에 프로브를 낮춥니다. </li><li> 무대 왼쪽과 오른쪽기도까지 (중간 라인 구조) 식별 조작 </li><li> 왼쪽 일반적인 경동맥을 식별 </li><li> 틸트 영상 무대 너무 각도는 이미징 비행기와 경동맥 사이에 만들어집니다. 큰 이런 각도에서 강한 도플러 신호가 될 것입니다. </li><li> 왼쪽 일반적인 경동맥의 중간에 자리 펄스 웨이브 도플러. </li><li> 필요에 따라 각도 보정을 사용합니다. </li><li> 오른쪽 공통 경동맥에서 측정을 반복합니다. </li><li> 성공적인 부분 경동맥 내고는 심장 확장하는 동안 대동맥 입구쪽으로 흐름의 반전과 함께 오른쪽에 비해 왼쪽 일반적인 경동맥의 흐름 전반적인 감소 (~ 80-90%)가 발생합니다. </li><li> 만족스러운 이미지를 취득했습니다 일단 마취를 해제, 테이프 레스에서 마우스와 무료 생쥐에서 젤 에코 닦아traints. 예열 복구 챔버의 생쥐를 배치합니다. </li></ol> 3. 경동맥 내막에서 RNA 격리 <ol><li> 기관 IACUC 프로토콜에 따라 CO 2 흡입하여 마우스를 희생 </li><li> 종이 타월에 테이프 발. </li><li> 복부에서 흉부의 상단에 마우스의 피부를 잘라. </li><li> 가위의 날카로운 쌍의로 ribcage 아래의 복부 벽을 엽니다. </li><li> 다이어프램을 집게로 흉골을 들어 컷 후 심장을 노출하는 ribcage 버려야. </li><li> 가위로 베나 카바 컷. </li><li> 폐, 간 창백한 될 때까지 좌심실을 통해 10 단위 / ML 헤파린을 포함한 정상적인 생리와 2-3 분 압력 perfuse (120 mmHg). </li><li> 목 피부를 잘라 경동맥 동맥이 노출되기 전까지는 모든 지방, 근육 및 결합 조직을 제거하십시오. </li><li> 해부 현미경으로 마우스를 놓습니다. </li><li> 찔린 오른쪽 두번째 재관류를 위해 왼쪽 경동맥에 내고 사이트 아래에 구멍. </li><li> 좌측 경동맥이 잘되어 있는지 확인한하고, 좌심실을 통해 10 단위 / ML 헤파린을 포함한 정상적인 생리와 함께 ~ 1 분 다시 압력 perfuse. </li><li> 좋은 팁 포셉 작은 봄 가위를 사용하여, 신중하게 carotids를 둘러싼 페리 - adventitial 조직을 제거합니다. 이 세척 단계에서 carotids를 당기거나 스트레칭하지 않도록주의하십시오. </li><li> 대동맥 아치와 경동맥 분기점 위에 내고 지점 사이의 좌측 경동맥을 잘라. </li><li> 오른쪽 쇄골 하 동맥 분기 지점과 경동맥 분기점 사이의 오른쪽 경동맥을 잘라. </li><li> 얼음처럼 차가운 HBSS를 포함, 35mm 문화 요리에 carotids를 전송합니다. 필요한 경우, 신중하게 남아있는 페리 - adventitial 조직을 제거합니다. </li><li> 각 경동맥 당 150 μl QIAsol의 용해 버퍼 (Qiagen)를 작성하여 29g 바늘로 인슐린 주사기 (10분의 3 ML 주사기)를 준비합니다. </li><li> 조심스럽게 경동맥의 한쪽에 바늘의 끝부분을 삽입합니다. </li><li> 포셉과 경동맥과 바늘의 끝을 잡고 있지만, 신속하게 (~ 1 초) (intima의 eluate) 1.5ml 튜브에 QIAsol 용해 완충액 (150 μl)를 플러시. </li><li> 경동맥 남은 (미디어 + adventitia) 한 HBSS에서 1.5 ML 튜브에 넣어 액체 질소 스냅인 동결을 씻어. </li><li> Intima의 eluate 및 냉동 남은 그 다음 제조 업체의 지침에 따라 miRNeasy 미니 키트 (QIAGEN)를 사용 내막 또는 미디어 + adventitia RNA 분리에 사용됩니다. </li></ol> 4. 대표 결과 : 우리는 부분적으로 마우스 경동맥 동맥과 초음파 검사는 다음과 같은 절차 언젠가 실시되었다 왼쪽 출혈도 잡았. 그림 1에 나타난 성공적인 부분 내고 혈액 흐름 속도를 감소시키고 심장 확장하는 동안 왼쪽 일반적인 경동맥의 흐름을 (방해 흐름) 반대. 높은 지방 음식과 함께 ApoE 녹아웃 (KO) 생쥐의 부분 내고는 왼쪽 일반 경동맥 (LCA)에 강력한 죽상 경화증을 유도하지만 contralateral 오른쪽 경동맥에서 2 주 (그림 2). 경동맥 intima에서 수집한 RNA는 PECAM - 1과 같은 내피 마커 유전자를 포함, 예 : A - SMA (그림 3)와 같은 중간 평활근 세포 마커 유전자 무료 동안. <img src="/files/ftp_upload/1861/1861fig1.jpg" alt="그림 1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="그림 1"> 그림 1 : 경동맥 해부학 및 ligations의 도식 : 우수한 갑상선 동맥 (STA)가 열려 떠나면서 왼쪽 일반적인 경동맥의 세 지점 (LCA) [외부 경동맥의 동맥 (ECA), 내부 경동맥 (ICA), 그리고 후두 동맥 (OA)가], 출혈도 잡았했다. <img src="/files/ftp_upload/1861/1861fig2.jpg" alt="그림 2" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="그림 2"> 그림 2 : 초음파 이미지 유속 프로필을 표시하고 부분 내고는 심장 확장하는 동안 LCA의 흐름 반전을 (화살표로 표시) 유도 것을 공개. RCA의 흐름을 내고 이후에 변경되지 남아 있습니다. <img src="/files/ftp_upload/1861/1861fig3.jpg" alt="그림 3" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="그림 3"> 그림 3 : 부분 내고 높은 지방 다이어트는 빠르게 ApoE KO 마우스의 LCA에 죽상 경화증을 유도 ApoE KO 마우스 부분적으로 출혈도 잡았 1로 3 주간 높은 지방 음식을 공급했다.. LCA의 냉동 섹션은 오일 - 레드 - O 물들일되었습니다. <img src="/files/ftp_upload/1861/1861fig4.jpg" alt="그림 4" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="그림 4"> 그림 4. 내막 RNA의 준비 방법. 내막 RNA와 중간 + adventitial (M +) RNA가 가짜 운항 RCA 및 LCA C57BL에 / 6 생쥐에서 얻은되었습니다. RNAS는 PECAM - 1과 α - SMA는 내부 통제로 18 기의를 사용하는 세미 양적 RT - PCR (A) 및 qPCR (B, C)에 의해 분석되었다. 막대 그래프는 ± SEM, n은 = 3 건 있습니다.

<ol><li>Korshunov, V. A., Berk, B. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Flow-induced+vascular+remodeling+in+the+mouse%3A+a+model+for+carotid+intima-media+thickening%5BTitle%5D)+AND+%22Arterioscler+Thromb+Vasc+Biol%22%5BJournal%5D)">Flow-induced vascular remodeling in the mouse: a model for carotid intima-media thickening.</a> Arterioscler Thromb Vasc Biol. 23 (12), 2185-2191 (2003).</li>
<li>Sullivan, C. J., Hoying, J. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Flow-dependent+remodeling+in+the+carotid+artery+of+fibroblast+growth+factor-2+knockout+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Arterioscler+Thromb+Vasc+Biol%22%5BJournal%5D)">Flow-dependent remodeling in the carotid artery of fibroblast growth factor-2 knockout mice.</a> Arterioscler Thromb Vasc Biol. 22 (7), 1100-1105 (2002).</li>
<li>Nam, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Partial+carotid+ligation+is+a+model+of+acutely+induced+disturbed+flow%2C+leading+to+rapid+endothelial+dysfunction+and+atherosclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Heart+Circ+Physiol%22%5BJournal%5D)">Partial carotid ligation is a model of acutely induced disturbed flow, leading to rapid endothelial dysfunction and atherosclerosis.</a> Am J Physiol Heart Circ Physiol. 297 (4), H1535-H1543 (2009).</li>
</ol>

이 절차에서는 외부 경동맥, 내부 경동맥, 후두 동맥과 우수한 갑상선 동맥을 포함한 일반적인 경동맥의 모든 지점의 적절한 신분증이 필요합니다. 시연으로 초음파를 사용하여 유동 패턴을 확인하는 것도 중요합니다. 우리의 경험 손에, 500 개 이상의 생쥐의 초음파 연구에 따라 부분 내고 수술의 성공 비율은 90 %보다 낫습니다. 경동맥 내막 RNA 준비 들어, 첫 번째 단계 재관류 후 경동맥의 모양에주의하는 것이 중요합니다. 이 시점에서 좌측 공통 경동맥의 흐름 차단의 증거가있다면, 우리는 추가 분석을 위해 이러한 샘플을 사용하지 않는 것이 좋습니다.

<table><tbody><tr><td>생리식염수 (0.9% sodium chloride)</td><td>Baxter Internationl Inc.</td><td>2B1323</td><td></td></tr><tr><td>인슐린 주사기 (3/10 ml 29g 주사기)</td><td>Tyco Healthcare, Covidien</td><td>8881600145</td><td></td></tr><tr><td>HBSS</td><td>Cellgro</td><td>21-023</td><td></td></tr><tr><td>miRNeasy mini kit (QIAzol 포함)</td><td>Qiagen</td><td>217004</td><td></td></tr><tr><td>Vevo 770 고해상도 마이크로 이미징 시스템</td><td>VisualSonics, inc.</td><td>a.Visualsonics 770 시스템 b.이미징 스테이지 c.Vevo 통합 레일 시스템 d.마우스용 RMV 스캔 헤드</td><td>또는 유사 시스템</td></tr><tr><td>6-0 Silk 봉합사, 멸균</td><td>Covidien</td><td>s-1172 c2</td><td></td></tr><tr><td>소형 가위</td><td>Roboz Surgical Instruments Co.</td><td>RS-5675</td><td>또는 유사 제품</td></tr><tr><td>해부용 핀셋</td><td>Roboz Surgical Instruments Co.</td><td>RS-5005</td><td>또는 유사 제품</td></tr><tr><td>Tissue Mend II</td><td>Webster Veterinary</td><td>07-856-7946</td><td></td></tr></tbody></table>

부분 결합하여 마우스 경동맥 동맥에있는 방해 흐름 유발 죽상 경화증과 경동맥 내피로부터 rna 분리의 간단한 방법의 모델

A Model of Disturbed Flow-Induced Atherosclerosis in Mouse Carotid Artery by Partial Ligation and a Simple Method of RNA Isolation from Carotid Endothelium

잘 알려진 가까운 협회에도 불구하고, atherogenesis에 방해 흐름을 연결하는 직접적인 증거가 부족했습니다. 우리는 최근 경동맥 부분 결합 방식의 수정된 버전을 사용해야 [1,2]는 심하게 마우스 일반적으로 경동맥의 낮은 oscillatory 흐름 조건 방해 흐름의 두 주요 특성을 유도 것을 보여주기 위해. 이 모델을 사용, 우리는 방해 흐름이 실제로 Apolipoprotein E의 녹아웃 마우스에서 신속하고 강력한 죽상 경화증의 개발 [3] 단서가 확실한 증거를 제공하고 있습니다. 우리는 또한 마우스 경동맥 intima [3]에서 고순도로 내피 RNA 준비하는 방법을 개발했습니다. 이 마우스 모델과 방법을 사용하여, 우리는 그 부분 내고는 사주에 의해 그러한 intraplaque neovascularization 같은 복잡한 병변 형성의 기능과 함께 hyperlipidemic 마우스 모델에서 2 주내에 강력하고 빠른 atheroma의 형성에 의해 다음, 일주일에 내피 기능 장애의 원인이 발견했습니다. 이 급속한<em&gt; 생체내에</em&gt; 모델과 내피 RNA 준비 방법은 혈관 생물학과 질병의 흐름에 의존 규정을 기본 분자 메커니즘을 결정하는 데 사용할 수 있습니다. 또한, 그것은 상당히 감소 학습 기간의 내피 기능 장애와 죽상 경화증을 대상으로 다양한 치료 개입을 테스트하는 데 사용할 수 있습니다.

이것은 일반적인 마우스 경동맥의 intraplaque 네오 - vascularization (4 주)와 방해 흐름 조건 및 후속 죽상 경화증 개발 (2 주) 원인 부분 경동맥 내고 수술을 설명합니다. 우리는 또한 고순도 내피 RNA를 제공하고, 경동맥 intima에서 RNA의 분리의 소설 방법을 설명합니다.

부분 결합하여 마우스 경동맥 동맥에있는 방해 흐름 유발 죽상 경화증과 경동맥 내피로부터 RNA 분리의 간단한 방법의 모델

잘 알려진 밀접한 연관성에도 불구하고, 교란된 혈류와 죽상동맥경화증 발생을 연결 짓는 직접적인 증거는 부족했습니다. 최근 우리는 수정된 ...를 사용하여

이 영상에서는 마취된 마우스의 외경동맥, 내경동맥 및 후두동맥을 결찰하여 혈류 장애 조건을 유도하고 이에 따른 급성 동맥경화증 발전을 유도하는 부분 경동맥 결찰 수술을 시연합니다. 초음파를 통해 수술의 성공 여부를 확인한 후, 안락사시킨 마우스에서 결찰된 경동맥과 대조군 경동맥을 적출하여 고순도의 내피 세포 RNA를 얻습니다. 안녕하세요, 저는 Georgia Tech 및 Emory University의 생체 의공학 및 심장학 분과 hon Jo 교수님 연구실의 Doug Na입니다.안녕하세요, 제 이름은 Amir Revan이며 JO Lab 소속입니다. 저는 결찰의 초음파 검증 방법을 시연하겠습니다. 그리고 저는 마찬가지로 JO Lab 소속인 CHI입니다.오늘은 내부 RNA 준비 과정을 시연하겠습니다. 부분 경동맥 결찰, 초음파 검사, 결찰 확인 절차 및 정밀 RNA 분리 방법을 보여드리겠습니다. 저희 실험실에서는 죽상동맥경화증에 미치는 전단 응력의 영향을 연구하기 위해 이 절차를 사용합니다.그럼 시작하겠습니다. 이 절차를 시작하기 전, 발가락 꼬집기(toe pinch)를 통해 8주령 생쥐의 케타민 및 자일라진 유도 마취 깊이를 확인하십시오. 생쥐를 수술대 위에 앙와위(subline position)로 놓은 다음, 네 발의 손바닥이 위를 향하도록 하여 수술대에 테이프로 고정하십시오.그 다음 뒷발을 바닥 쪽으로 향하게 하여 테이프로 고정합니다. 마우스의 목 부분에 쿠션으로 사용할 거즈를 댑니다. 이어서 하악과 흉골 사이의 목 부위에 제모제를 충분히 도포합니다.모든 털이 제거될 때까지 해당 부위를 부드럽게 마사지합니다. 면봉을 사용하여 제모제를 닦아냅니다. 그런 다음 작은 정밀 가위로 Betadine을 충분한 양으로 도포합니다.동물의 목 중앙에 4~6mm 길이의 수직 절개를 가하여 피부와 하부 근막을 모두 절개합니다. 해부용 핀셋을 사용하여 왼쪽 경동맥선을 정중선에서 동물의 왼쪽으로 조심스럽게 이동시킵니다. 해부용 핀셋으로 조직을 둔성 박리합니다.맥동하는 총경동맥을 노출시킵니다. 총경동맥을 따라 조심스럽게 진행합니다. 분지점을 찾습니다.분기점을 조심스럽게 박리하여 다음 구조물들을 노출시킵니다. 좌측 총경동맥의 4개 원위 분지인 외경동맥, 내경동맥, 후두동맥 및 상갑상선동맥입니다. 이 혈관들, 특히 상갑상선동맥은 매우 취약할 수 있습니다.포셉 한 쌍을 상갑상선동맥 위쪽의 외경동맥 아래로 통과시킨 후, 다른 포셉으로 잡고 있는 1인치 길이의 6-0 실크 봉합사를 잡습니다. 봉합사를 조심스럽게 당겨 동맥 아래로 통과시킵니다. 주변 조직이 함께 잡히지 않도록 주의하며 외경동맥을 단단히 결찰합니다.동일한 기술을 사용하여 내경동맥과 후두동맥을 단일 매듭으로 결찰합니다. 봉합사의 위치와 상갑상선동맥의 개통 여부를 육안으로 확인한 후, 귀밑샘을 원래 위치로 밀어 넣고 피부를 접합한 뒤 조직 접착제를 사용하여 피부를 폐쇄합니다. 수술 절차가 끝나면 마우스가 회복될 때까지 가온 챔버에 넣습니다.보통 30분에서 60분 정도 소요됩니다. 그 후 마우스를 일반 사육 구역으로 옮길 수 있습니다. 마우스가 첫날 동안 음식을 먹기 위해 위로 뻗는 것을 불편하게 느낄 수 있으므로, 케이지 바닥에 먹이를 놓아두십시오.통증 완화를 위해 다음 날 buprenorphine을 1회 투여해야 합니다. 이는 결찰 후 1일째에 해당합니다. isof fluorine으로 마취된 동물을 초음파 검사를 위해 영상 스테이지 위에 배가 위로 향하도록 놓아 준비합니다.팔과 다리를 ECG 센서에 테이프로 고정합니다. 동물의 목에 에코 젤을 도포합니다. 실험 전 과정 동안 동물의 체온을 모니터링해야 합니다.컴퓨터와 이미징 소프트웨어를 켭니다. 적절한 사용자와 에코 프로브를 선택하십시오. 초음파 설정을 bee 모드로 맞춥니다.그런 다음 프로브의 노브가 마우스의 코 쪽을 향하게 한 상태에서, 영상이 얻어질 때까지 프로브를 마우스의 목으로 내립니다. 기관을 식별할 수 있을 때까지 프로브 스테이지를 좌우로 조절하십시오. 이어서 왼쪽 총경동맥을 찾고, 영상 평면과 경동맥 사이에 각도가 생기도록 영상 스테이지를 기울입니다.프로브를 왼쪽 총경동맥 중앙에 유지한 상태에서 초음파 모드를 B 모드에서 펄스파 도플러(pulse wave doppler) 모드로 전환합니다. 각도 보정 노브를 사용하여 각도 보정선이 총경동맥과 평행하도록 각도를 조정합니다. 프레임 저장 버튼을 눌러 이미지를 캡처합니다.총경동맥 내 혈액의 속도 프로파일을 기록합니다. 이완기 동안 속도 프로파일의 역전이 나타날 것으로 예상됩니다. 비교를 위해 오른쪽 총경동맥에서 앞서 수행한 단계들을 반복합니다.우측 총경동맥에서는 속도가 더 높게 나타나며 역류는 관찰되지 않을 것입니다. 만족스러운 영상을 얻었다면, 마취를 중단하고 마우스의 초음파 젤을 닦아냅니다. 테이프로 고정된 구속 장치에서 마우스를 풀어줍니다.동물을 가온된 회복 챔버에 넣습니다. 흡입된 isof fluorine으로부터의 회복은 보통 5분 이내에 이루어집니다. 가위와 종이 타월을 사용하여 이산화탄소로 안락사시킨 마우스의 발을 고정합니다.마우스의 피부를 복부에서 흉부 상단까지 절개합니다. 그런 다음 핀셋을 사용하여 갈비뼈 아래의 복벽을 날카로운 가위로 엽니다. 흉골을 들어 올리고 횡격막을 절개합니다.흉곽을 절개하여 심장을 노출시킵니다. 그런 다음 버터플라이 관류 키트를 사용하여 CVA 정맥을 절단하고, 폐와 간이 창백해질 때까지 좌심실을 통해 10 units/mL 헤파린이 포함된 생리식염수로 2~3분 동안 가압 관류합니다. 생리식염수 관류 후, 목 피부를 절개하고 경동맥이 노출될 때까지 모든 지방 근육과 결합 조직을 제거합니다.이제 마우스를 해부 현미경 아래에 두고, 29게이지 바늘을 사용하여 2차 관류를 위해 왼쪽 경동맥의 결찰 부위 바로 아래에 작은 구멍을 뚫습니다. 좌심실을 통해 약 1분 동안 다시 압력 관류를 실시하며, 2차 관류 후 왼쪽 경동맥이 충분히 관류되었는지 확인합니다. 미세 팁 포셉과 소형 스프링 가위를 사용하여 경동맥 주변의 외막 조직을 조심스럽게 제거합니다.이제 대동맥궁과 경동맥 분기점 상단의 결찰 지점 사이에서 세척하는 동안 경동맥을 짜거나 늘리지 않도록 주의하십시오. 우측 쇄골하동맥과 동맥 분지점 및 경동맥 분기점 사이의 좌측 경동맥을 절단하십시오. 우측 경동맥을 절단하십시오.경동맥을 얼음처럼 차가운 HBSS가 담긴 35 millimeter 배양 접시로 옮깁니다. 남아 있는 혈관외막 조직을 조심스럽게 제거합니다. 29 gauge 바늘이 장착된 인슐린 주사기를 경동맥의 한쪽 끝에 삽입하고, 핀셋으로 경동맥과 바늘 끝을 함께 잡습니다.빠르고 조심스럽게 수행합니다. 각 경동맥을 150 µL의 cazo 용해 버퍼로 세척하고, 이 버퍼를 intima eit라고 표시된 1.5 mL 튜브에 수집합니다. 마지막으로, 각 경동맥을 HBSS로 한 번 헹굽니다.그런 다음 이를 'media plus adventitia'라고 표시된 1.5 milliliter 마이크로 원심분리 튜브에 넣고 빠르게 닫습니다. 액체 질소에서 급속 냉동하십시오. 이후 frozen samples에서 GINs를 사용하여 RNA를 추출할 수 있습니다.Micro RZ mini kit. 이 그림에 표시된 것과 같이 좌측 경동맥의 부분 결찰 후 하루 뒤에 마우스 초음파 검사를 수행하였으며, 성공적인 부분 결찰은 이완기 동안 좌측 총경동맥의 혈류 속도를 감소시키고 혈류 방향을 역전시킵니다. 고지방 식이를 섭취한 APOE 녹아웃 마우스의 부분 결찰은 2주 후 반대편 우측 경동맥이 아닌 좌측 총경동맥에서 강력한 죽상경화증을 유도합니다. 죽상경화증은 지질에 대한 oil red o 염색과 핵에 대한 hematoxylin 대조 염색을 통해 보여집니다.경동맥 내막에서 수집한 RNA에는 pcam과 같은 내피 마커 유전자와 하나 이상의 평활근 세포 마커가 포함되어 있습니다. alpha SMA와 같은 유전자는 m plus A(중막 및 외막)로 표시된 동맥의 나머지 부분에서 수집한 RNA에는 없으며, 반대로 평활근 마커는 존재하고 내피 마커는 없습니다. 지금까지 부분 경동맥 결찰을 수행하는 방법을 살펴보았습니다.초음파를 사용하여 결찰 상태를 확인하고 내막 RNA 분리 방법을 적용하십시오. 이 절차를 수행할 때 총경동맥의 분지들을 정확하게 식별하고, 다른 분지들은 단단히 결찰하되 상갑상선동맥은 보존되었는지 확인하는 것이 필수적입니다. 초음파를 통해 결찰 결과를 검증하는 것이 중요하며, 간단한 준비 과정에서 세척된 iLet이 혈관 내강 이외의 동맥 다른 부위와 접촉하지 않도록 주의하십시오. 이상으로 시청해 주셔서 감사드리며, 여러분의 실험에 좋은 결과가 있기를 바랍니다.

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의학

이 문서에서 제시 constricting 커프스는 murine 공통 경동맥에서 죽상 경화증을 유발하기 위해 설계되었습니다. 이식 커프스가 다른 염증성 phenotypes의 atherosclerotic 병변의 발전을 게재 낮은 높이 oscillatory 전단 응력의 잘 정의된 영역을 생성하는 자사의 내부 루멘의 원뿔 모양으로 인해.

마우스의 전단 응력 유발 죽상 경화증을 실행을위한 경동맥 혈압계의 주입

마우스 경동맥 동맥 스텐트 시술의 모델이 설명되어 있습니다. 다른 유사한 방법에 비해,이 절차를 편리하게 다른 약물 용출 스텐트 재 협착의 분자 메커니즘 혈관 벽의 반응에서 공부 할 수있는 가능성을 제공, 매우 빠른, 간단하고 액세스 할 수 있습니다.

재 협착의 연구에 대한 경동맥 스텐트 시술의 쥐과 모형

우리는 생쥐의 대퇴 동맥에 와이어 손상을 일으켜 신내막 증식을 유도하는 수술 기법을 설명하며, 이는 재협착 억제를 위한 치료 화합물의 혈관 주위 전달을 위한 모델 테스트 시스템으로 사용됩니다.

혈관 주위 약물 전달 패치의 주입과 대퇴 동맥 와이어 부상의 쥐 모델

이 연구는 마우스에 있는 가속된 죽상 경화증의 유도를 위한 침략적인 절차를 기술합니다. 전기 또는 극저온 유도 된 상해를 사용하는 다른 방법에 비해, 기계적 으로 인한 상해는 재변 치료 후 restenosis의 인간의 상태를 모방하고 관련된 분자 메커니즘의 연구에 이상적입니다.

마우스에서 가속 죽상 경화증의 유도: "와이어 부상" 모델

동맥 발가 벗김 부상 다음 재에 내피 세포의 세포 및 분자 메커니즘을 이해하는 것은 혈전증과 동맥의 재 협착을 방지하는 가장 중요하다. 여기에서 우리는 infrarenal 복부 대동맥의 재현 동맥 발가 벗김 부상에 대한 프로토콜을 설명합니다. 절차는 마우스 모델을 사용하여 내피 세포 재생을 조절하는 기전을 연구하기 위해 개발되었다.

쥐 모델에서 Infrarenal 복부 대동맥 클램핑에 의해 재현 동맥 발가 벗김 부상

우리는 단일 세포 체학 실험을 수행하기 위해 안정하거나 방해받는 흐름 조건에 노출 된 마우스 경동맥의 내강에서 내피 세포와 핵을 분리하는 방법을 제시합니다.

단일 세포 다중 오믹스 실험을 위한 마우스 경동맥 내강에서 내피 세포 분리

본 프로토콜은 심장 비대에 압력 과부하를 유도하기 위해 마우스에서 대동맥 밴딩의 새로운 기술을 기술한다. 밴딩에는 내경이 고정 된 고무 링이 사용됩니다. 이 새로운 기술은 향후 실험을 위해 변동을 줄이고 재현 가능한 데이터를 약속합니다.

O-링 대동맥 밴딩 대 압력 과부하로 인한 심장 비대 모델링을 위한 기존의 횡대동맥 수축

여기서는 마우스 경동맥의 단세포 현탁액을 준비하기 위한 2단계 세포 분해 프로토콜을 설명합니다.

Preparation of a Single-Cell Suspension from Mouse Carotid Arteries for Single-Cell Sequencing

본 프로토콜은 단일 수술을 통해 쥐 모델에서 경동맥류 유도를 위한 표준화된 수술 방법을 설명합니다.

경동맥류 형성의 쥐 모델

본 연구는 쥐 동맥에서 효과적인 지혈 방법을 개발하는 것을 목표로 합니다.

마우스 동맥 내 지혈을 위한 간단하고 효과적인 절차

학습하세요 마우스 경동맥 부분 결찰 수술을 통해 교란 혈류를 유도하고 죽상경화증을 유발하는 방법을. 고순도 내피 RNA 분리 기법과 초음파 검증 과정도 함께 다룹니다.

부분 결합하여 마우스 경동맥 동맥에있는 방해 흐름 유발 죽상 경화증과 경동맥 내피로부터 RNA 분리의 간단한 방법의 모델

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