C. 예쁜꼬마선충 이동 추적: 웜의 이동을 평가하는 방법

- 예쁜꼬마선충(C. elegans)의 이동을 평가하려면 카메라를 사용하여 한천판에서 지렁이의 움직임을 기록하여 기록하는 동안 판의 균일한 조명을 보장합니다. 플레이트 주위에서 벌레의 움직임을 제한하려면 구리 링을 사용하십시오. 구리는 예쁜꼬마선충(C. elegans)을 혐오하기 때문에 지렁이는 고리 안에 모여 있습니다.

하나의 플레이트에 여러 개의 구리 링을 배치하여 각 링의 웜을 동시에 추적합니다. 이를 통해 대조 동물과 실험 동물에 대한 평가를 동일한 조건에서 수행할 수 있으므로 일일 변동성을 줄이고 나란히 비교할 수 있습니다. 설정된 시간 간격 동안 지렁이의 움직임을 기록하고 컴퓨터 소프트웨어를 사용하여 이동 속도 및 이동 거리와 같은 기관차 동작의 특징을 분석합니다.

예제 프로토콜에서는 알코올이 웜의 운동 속도에 미치는 영향을 테스트하는 움직임 추적 분석의 시연을 볼

수 있습니다.

- 시작하려면 2분 이내에 각 실험 그룹에서 10마리의 벌레를 적응 플레이트의 구리 고리 중앙으로 옮기십시오. 이것은 에탄올이 없는 접시입니다. 벌레와 함께 음식을 옮기면 움직임이 줄어들므로 피하십시오. 또한 벌레가 굴을 파고 들어갈 수 있으므로 한천 표면을 손상시키지 마십시오. 플레이트에 적재되는 시간을 기록하고 각 플레이트로의 웜 이동을 2분 이상 시차를 두어 각 플레이트를 적절한 시간 간격으로 개별적으로 촬영할 수 있도록 합니다.

각 적응 플레이트를 실온에서 30분 동안 배양합니다. 그런 다음 적응 플레이트에 웜을 배치하는 데 사용된 순서에 따라 웜을 분석 플레이트로 옮깁니다. 박테리아가 없는 얇은 모서리의 납작한 지렁이 픽을 사용하여 퍼내는 동작을 사용하여 평평한 픽 위에 있는 지렁이를 수집합니다. 그런 다음 실험실 필름으로 플레이트를 밀봉하여 기화로 인한 에탄올 손실을 최소화합니다.

- 이 단계에서 동물이 이송되는 속도는 이송 된 동물이 에탄올에 더 오래 노출되기 때문에 매우 중요합니다. 따라서 실험 반복실험에서 플레이트에 먼저 배치되는 균주를 회전하는 것이 좋습니다.

- 지금 벌레를 촬영하려면 고해상도 비디오 카메라가 장착된 현미경이 필요합니다. 3인치 정사각형 백라이트와 같은 조명도 분석에 필수적입니다. 그런 다음 대비를 유지하려면 플레이트 미디어 면이 위로 향하게 이미지화합니다.

초당 한 프레임으로 120프레임, 12비트, 그레이스케일, 타임랩스 동영상을 캡처할 수 있는 이미지 분석 소프트웨어를 준비합니다. 충분