세포 이질성을 결정하기 위한 Single-Cell Western Blotting

염증 부위에는 단핵구, 대식세포, 백혈구 등 다양한 면역세포가 포함되어 있습니다.

단일 세포 웨스턴 블로팅(western blotting)으로 이질적인 세포 집단을 식별하려면, 블록으로 패턴화된 광활성성 폴리아크릴아미드 겔로 구성된 사전 수화된 블로팅 칩을 사용합니다. 각 블록에는 수많은 마이크로웰이 있습니다. 여러 블록으로 패턴화하면 여러 셀이 병렬로 캡처됩니다.

이질적인 세포 집단을 포함하는 현탁액을 추가합니다. 우물의 치수는 단일 세포가 침전될 수 있도록 합니다. 적절한 완충액으로 채워진 전기영동 챔버에 칩을 담그십시오. 완충액에 있는 세제 분자는 세포막을 파괴하여 세포 내용물을 방출합니다.

전기장을 적용합니다. 방출된 단백질은 겔을 가로질러 이동하여 뚜렷한 크기의 띠로 분리됩니다. 세척 버퍼로 칩을 세척하여 특이적으로 결합되지 않은 분자를 제거하고 원하는 마커 단백질을 포함한 세포 단백질만 남깁니다.

젤을 자외선에 노출시켜 표면을 활성화하고 단백질을 고정시킵니다.

각 세포 유형에 고유한 marker 단백질에 특이적으로 결합하는 1차 항체 칵테일을 추가하여 단백질-1차 항체 복합체를 형성합니다. 형광 태그가 지정된 2차 항체의 혼합물을 분주하여 각각의 1차 항체에 결합하여 해당 세포 특이적 마커 단백질을 라벨링합니다.

스캐너에 칩을 넣습니다. 형광 강도를 측정하며, 이는 샘플 세포 현탁액의 단일 세포에 특이적인 해당 단백질 마커의 발현 수준에 비례합니다.