마이크로플레이트 리더를 이용한 세균 성장의 정밀하고 고처리량 분석

먼저 글리세롤 스톡에 보존한 박테리아를 초기 지수적 단계까지 보존하여 균일한 생리 상태와 재현 가능한 성장을 보장합니다.

배지와 소용돌이를 넣어 박테리아를 고르게 재현지하세요.

신품 배지를 사용해 연속적으로 현탁액을 희석하여 다양한 시작 세포 밀도를 얻습니다.

샘플을 다중 웰 플레이트의 내부 웰에 적재하고, 가장자리 웰은 빈 매질로 채워 증발 관련 변동성을 최소화합니다.

플레이트를 마이크로플레이트 리더에 넣어 지속적인 흔들림과 박테리아 성장에 최적의 온도를 유지하세요.

박테리아가 증식함에 따라 배양물의 광학 밀도(OD)가 증가합니다.

OD를 일정한 간격으로 측정하세요.

배경 흡광도를 보정하기 위해 빈 정에서 얻은 초기 OD 값을 빼는 것입니다.

그 후 정해진 시간 간격에서 측정된 연속된 OD 값에서 성장률을 계산하여 박테리아 성장 역학을 고처리량과 정밀한 정량화할 수 있습니다.

성장 실시간 기록을 위해 멸균된 시약 저장소에 약 25밀리리터의 M63을 추가하세요. 그 다음, 연속 희석을 준비하기 위해 마이크로튜브에 900마이크로리터의 M63을 첨가합니다. 다음으로, 해동한 글리세롤 스톡에 900마이크로리터의 M63을 추가하고 소용돌이로 만드세요.

10배 희석액 중 100마이크로리터를 900마이크로리터의 M63과 소용돌이가 들어 있는 다른 마이크로튜브로 옮깁니다. 원하는 희석 횟수가 달성될 때까지 이 과정을 반복합니다. 이제 멸균된 96웰 평평한 바닥 마이크로플레이트 가장자리에 8채널 피펫을 사용해 200마이크로리터의 M63을 채웁니다.

희석된 샘플당 기준표에 따라 마이크로플레이트 웰에 200마이크로리터를 적재합니다. 가열과 시딩 효율로 인한 할당층을 피하려면, 마이크로플레이트 가장자리의 웰을 사용하지 말고 같은 샘플을 여러 웰에 각기 다른 위치에 적재하세요. 96웰 마이크로플레이트를 플레이트 리더기에 올려놓으세요.

작업 관리자에서 Read Now를 열고 프로그램을 선택하세요. 측정을 시작하려면 '좋아'를 클릭하세요. 마지막으로, 녹음을 데이터 분석을 위한 새로운 실험 파일로 저장하세요.