박테리아 감염 시각화를 위한 마우스 방광 조직 준비

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방광이 노출된 안락사한 쥐와 병원성 박테리아에 미리 감염된 상태로 시작하세요.

박테리아는 요상피를 침범하여 집단을 형성합니다. 성숙 시 이 박테리아들은 상피 세포를 파열시키고 주변 세포를 감염시킵니다.

고정제가 채워진 주사기에 연결된 카테터를 삽입하세요. 방광을 부풀리고 구조를 보존하기 위해 고정제를 천천히 주입하세요.

요도를 클램프로 고정하여 고정제를 유지하고 방광 모양을 유지하세요.

카테터를 제거한 후 요도를 절단하세요. 방광을 신선한 고정제로 옮기고 구조를 보존하기 위해 배양하세요.

방광을 두 개의 반쪽 방광 컵으로 나누어 요상피를 노출시키고, 완충제로 헹구세요.

대비를 높이기 위해 금속 기반 시약으로 스테인을 한 뒤, 초순수한 물로 세척하세요.

에탄올 구배로 절반을 탈수한 후 임계점 건조를 진행합니다.

말린 방광컵을 반으로 자릅니다.

샘플은 이제 숙주-병원체 상호작용을 시각화하기 위한 후속 처리 준비가 완료되었습니다.

결투르쿨린이 고정제를 넣은 슬립팁 주사기를 삽입한 후, 주사기 마킹 반대편을 향한 경사면으로 끝에 카테터를 부착합니다.

바늘 끝에서 1에서 2밀리미터 떨어진 부분에서 남는 튜브를 잘라내고, 바늘 끝이 드러나지 않도록 주의하세요. 주사기를 튕겨 기포를 제거하고 플런저를 빈 공기로 밀어주세요. 그 다음 미세원심분리관에 고정액을 채우세요. 마취를 마취하고 생긴 후 다리가 고정된 후에는 겸자와 수술용 가위로 골반 부위를 열어 방광을 노출시킵니다. 인접한 지방을 조심스럽게 밀어내되, 방광은 그대로 두세요.

주사기를 주도하는 손으로 바늘을 아래로 향하게 잡으세요. 카테터 끝을 멸균 윤활제에 담근 후 요도 입구에 위치시키고, 주사기 총열을 쥐 몸체 위에서 30도에서 45도 각도로 고정합니다.

약간 시계 방향으로 아래로 압력을 가한 후 카테터를 요도에 부드럽게 삽입하세요. 카테터 끝이 들어가면 주사기를 쥐의 꼬리 쪽으로 경첩으로 돌리고, 카테터를 요도 안으로 더 밀어 넣어 주사기 배럴이 작업면과 평행하게 만듭니다. 전체 카테터 바늘 축이 마우스 안으로 들어가 카테터 끝이 방광 내강 안에 위치하도록 해야 합니다. 50에서 80마이크로리터의 고정제를 천천히 투여해 방광을 풍선처럼 부풀리게 하세요.

카테터를 고정한 채 주사기를 살짝 들어 올려 끝을 위로 기울이세요. 다른 손으로는 지혈기를 열고 한 갈래를 요도 교차점의 카테터 바늘 밑으로 밀어 넣으세요. 지혈기를 부분적으로 닫아 바늘에 닿을 정도로 유지하세요.

카테터 바늘을 방광에서 부드럽게 빼내면서 동시에 고정제가 완전히 고정되도록 고정 장치를 고정하고 잠가세요. 수혈기를 작업면과 평행하게 잡고 방광이 위에 놓이도록 하세요. 지혈기가 연결된 상태로 방광을 제거하기 위해 조심스럽게 들어 올려 주세요.

방광과 고정기를 가열한 고정제가 들어있는 팔콘 튜브에 넣으세요. 방광이 액체에 완전히 잠기고 튜브 벽에 눌리지 않도록 하세요.

주사 전자현미경으로 방광을 영상화하려면, 깨끗한 양면 면도날이나 메스로 방광을 시상식으로 반으로 절단하고, 지혈기 방향으로 두 번째 절단을 하여 방광을 배출합니다. 이로 인해 두 개의 반쪽 방광 컵이 완성됩니다. 방광 외부에 남아 있는 지방 패드가 있다면 부드럽게 제거하세요.

방광 반쪽을 카코딜산 나트륨 버퍼에 세 번 씻어내세요. 0.15몰 카코딜레이트 완충제에 1% 오스뮴 테트로옥사이드를 상온에서 1시간 동안 염색합니다. 이 단계는 염색 용기를 호일로 감싸서 어두운 환경을 유지하도록 합니다. 스테인 후에는 방광 절반을 초순수한 물에 세 번 헹구세요.

물 표면에 삼습 오일이 발견되면 건조 과정에서 오염을 방지하기 위해 흡입하거나 위크로 제거하세요. 조직을 탈수한 후, 깨끗한 양면 면도기로 방광 반을 반으로 가라내어 총 네 조각으로 만듭니다.

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Last updated: 11 July 2026