생물발광을 이용한 쥐 모델에서 요로 감염의 시각화

마취된 쥐를 이용해 카테터를 사용해 병원성 박테리아의 현탁물을 요광에 주입하세요.

이 박테리아들은 생물발광 오페론을 가지고 있어 자율적으로 빛을 생성하여 감염을 추적할 수 있게 합니다.

방광의 내막은 내강과 그 아래 조직을 분리하는 특수한 상피입니다.

박테리아 부착 단백질은 숙주 상피 표면의 당단백질 수용체에 결합하여 수용체 매개 엔도사이토시스를 유발합니다.

내부화된 박테리아는 증식하여 밀집된 세포 내 박테리아 군집을 형성합니다.

박테리아는 발광 오페론을 발현하여 루시퍼라제 효소와 루시퍼라제 기질을 합성하는 효소 복합체를 생성합니다.

루시페라제는 기판을 산화시켜 가시광선을 방출합니다.

쥐를 영상 상자 안에 위치시키고 생물발광 신호를 포착하세요.

관심 지역을 선택하고 생물발광 강도를 정량화하세요.

이 신호를 세균 양과 감염 진행을 실시간으로 모니터링하세요.

BLI 획득 소프트웨어를 열고 영상 장치에서 초기화(Initialize)를 클릭하여 카메라와 스테이지 컨트롤러 시스템을 테스트하고, 전하 결합 장치 카메라를 영하 90도로 냉각하세요. 획득 버튼을 클릭하고, 자동 저장하세요. 발광과 사진을 선택하세요. 여기 필터를 차단으로, 방출 필터를 열어서 기본 발광 설정을 확인하세요.

첫 사진을 찍을 때 노출 시간을 자동으로 설정하세요. 생체 내 측정과 밝은 신호를 위해서는 노출 시간을 약 30초로 설정하세요. 포화 이미지로 인해 경고가 뜨면 노출 시간을 줄이세요.

중간 빈 설정을 선택하고 F/스톱 1을 선택한 후 올바른 FOV를 선택하세요. 쥐를 촬영할 때 피사체 높이를 1센티미터로 설정하세요. 최대 5마리의 쥐를 동시에 촬영하고, 반사를 막기 위해 라이트 배플을 사용해 동물들을 분리하세요.

문을 닫고 Acquire를 클릭하면 영상 시퀀스가 시작됩니다. 그 다음 실험에 대한 자세한 정보를 작성하세요. 쥐를 영상 챔버에서 꺼내 다시 우리로 돌려놓으세요. 마취 후 완전한 회복 여부를 확인하세요. 그 후 케이지를 환기 가능한 선반에 다시 넣어 다음 영상 촬영 사이클까지 보관하세요.

영상 소프트웨어를 실행하고 '탐색(Browse)'을 클릭하여 실험 파일을 불러오세요. 툴 팔레트를 사용해 이미지의 색상 스케일을 조정하세요. ROI 도구를 사용해 이미지 위에 관심 영역을 그려 전체 영역을 덮을 만큼 충분히 크고 모든 이미지에 동일한 치수를 사용하세요. 그 다음 ROI 측정을 클릭하여 빛의 세기를 정량화하세요.