중합효소 연쇄 반응을 이용한 이원 배양에서 당류박테리아 검출

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처음에는 Saccharibacteria에 감염된 Actinomyces 배양 검사부터 시작하세요.

초소형 기생 박테리아인 Saccharibacteria와 그 숙주가 이진 배양을 형성합니다.

감염된 배양 샘플을 증폭 시약과 전기영동 추적 염료, 그리고 Saccharibacteria 특이적 프라이머가 포함된 PCR 튜브에 첨가합니다.

정해진 PCR 조건이 설정된 열사이클러에 튜브를 넣으세요.

초기 변성 과정에서 열로 당류박테리아를 용해하여 유전체 DNA를 방출합니다. 방치맥류는 단단한 세포벽 덕분에 숙주 DNA 방출을 제한하여 온전하게 유지됩니다.

열은 이후 당류박테리아의 DNA 가닥을 변성시키고 타크 중합효소를 활성화시킵니다.

어닐링 과정에서 프라이머는 당류 유전체의 상보 서열에 결합합니다.

확장하여, Taq 중합효소는 프라이머에 dNTP를 첨가하여 새로운 DNA 가닥을 합성합니다.

증폭된 PCR 산물을 DNA 조각에 결합하는 염료로 염색된 아가로스 젤에 적재합니다.

전기영동을 하고 젤을 자외선 아래에서 시각화하세요.

사카리박테리아 특이적 앰플리콘 밴드는 이진 배양에서 숙주-기생충 상호작용을 확인한다.

PCR 마스터 믹스 24마이크로리터를 0.2밀리리터 PCR 튜브에 분리합니다. 1마이크로리터의 당류박테리아가 감염된 배양물에 관을 넣고, 튜브를 열순환기에 넣으세요.

PCR 프로그램을 원고에 설명한 대로 설정하세요. PCR 산물을 1% Agros 겔에 적재하고 돌리세요. 약 600개의 염기로 이루어진 밴드는 당류박테리아의 존재를 확인시켜 줍니다.

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Last updated: 27 June 2026