Name: 마우스 블레더 월 주입 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-07-12T12:00:00.000+00:00
Duration: 3 min 48 s
Description: 배우세요 마우스 방광벽 세포 주입법으로 줄기세포와 암 생물학 연구를 수행하는 방법을. 정밀한 세포 이식이 가능한 이 기법은 전통적 기술 대비 우수한 표적화를 제공합니다.

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우리는 기꺼이 NIDDK에서 스탠포드 소아 연구 기금과 K08DK087895 - 01의 파일럿 부여의 지원을 인정합니다.

1. 마우스 블레더 월 주입 마우스 변형, 연령 및 성별의 선택은 실험 요구에 의해 결정됩니다. 이것이 노화하기 전에 면역 성숙의 윈도우이기 때문에 우리는, 나이, 8, 12 주 정도 마우스를 사용합니다. 일반적인 지침으로, 생쥐가 스트레스 유발 혼란함을 주죠 요인을 방지하기 위해 실험 조작하기 전에 적어도 한 주에 도착해야합니다. <ol><li> 비누와 물로 수술 테이블 표면을 청소하십시오. </li><li> Cide의 Swipes 또는 살균 잎사귀와 수술 테이블 표면을 닦아주십시오. </li><li> 수술에 사용하기 전에 깨끗한 수술 악기 압력솥. </li><li> 또한, 사용하는 즉시 사전 핫 구슬 살균기와 수술 도구를 소독뿐만 아니라, 수술하는 동안 동물 사이. </li><li> 100 μL 해밀턴 주사기 29 또는 30 게이지 (긴 2분의 1 인치) 처음 사용하기 전에 절대 알코올로 반복 흡인과 주사로하고 최종 수술의 끝에 바늘을 청소하십시오. </li><li> 각 동물 간의 생리 인산염 버퍼 소독과 해밀턴 주사기를 씻고 린스. </li><li> 2~5% 사이 isoflurane 세트와 isoflurane 유도 챔버에서 그들을 배치하여 생쥐를 마취. </li><li> 전신 마취를 얻을되면 정상적인 체온을 유지하기 위해 밑에 따뜻한 패드와 부정사 위치에 챔버와 장소에서 마우스를 제거합니다. </li><li> (적절한 마취를 유지하기 위해 필요한 1~3%에서 titrated) isoflurane 기화가 들어있는 노즐​​에서 동물의 주둥이를 배치하여 유지 보수 마취를 얻을 수 있습니다. </li><li> 가위로 복부 피부를 면도. </li><li> 수술하는 동안 배설물로 오염을 방지하기 위해 항문을 충당하기 위해 일회용, 살균 외과 드레이프를 사용하십시오. </li><li> 외과 분야 (낮은 복부)를 충당하기 위해 두 번째 일회용, 살균 외과 드레이프를 사용하십시오. </li><li> Betadine - 젖었 거즈 3 가지로 준비 복부. 이 단계를 세 번 반복합니다. </li><li> 확대를위한 해부 현미경을 사용하여 가위로 더 낮은 복부 정중선 절개를합니다. </li><li> 방광을 폭로. </li><li> 방광이 가득 경우, 부분적으로 돔에서 완만한 하향 압력에 의해 그것을 압축 해제. </li><li> 위쪽을 향하고 바늘의 베벨과 방광 돔 (교내 사출)의 벽에, 29 또는 30 게이지 바늘과 주사기를 사용하여 샘​​플 솔루션을 (최대 50 μL) 주사. </li><li> 방광 벽에 ​​샘플 솔루션을 주입하는 주사기의 플런저를 밀어. 잘화된 물집이 방광 벽에있는 세포의 성공적인 주입의 표시입니다. </li><li> , 주사기를 제거 상처 클립으로 절개를 닫고 마우스가 온난 패드에 복구할 수 있습니다. </li></ol> 2. 대표 결과 : 누출 액을하지 않으며 크기의 안정 유지 잘화된 물집은 방광 벽 (그림 1)에 세포의 성공적인 주입의 표시입니다. Histological 분석은 방광 벽에 ​​주입된 세포의 존재를 확인하기 위해 수행할 수 있습니다. <img src="/files/ftp_upload/2523/2523fig1.jpg" alt="그림 1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="그림 1"> 그림 1. 보여주기위한 인도 잉크를 사용하여 성공적인 방광 벽 주입의 예. <img src="/files/ftp_upload/2523/2523fig2.jpg" alt="그림 2" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="그림 2"> 그림 2. 실험 절차의 도식.

<ol><li>Dinney, C. P., Fishbeck, R., Singh, R. K., Eve, B., Pathak, S., Brown, N., Xie, B., Fan, D., Bucana, C., Fidler, I. J., Killion, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+and+Characterization+of+Metastatic+Variants+from+Human+Transitional+Cell+Carcinoma+Passaged+by+Orthotopic+Implantation+in+Athymic+Nude+Mice%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Urology%22%5BJournal%5D)">Isolation and Characterization of Metastatic Variants from Human Transitional Cell Carcinoma Passaged by Orthotopic Implantation in Athymic Nude Mice.</a> The Journal of Urology. 154, 1532-1538 (1995).</li>
<li>Singh, A. V., Franke, A. A., Blackburn, G. L., Zhou, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Soy+Phytochemicals+Prevent+Orthotopic+Growth+and+Metastasis+of+Bladder+Cancer+in+Mice+by+Alterations+of+Cancer+Cell+Proliferation+and+Apoptosis+and+Tumor+Angiogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Soy Phytochemicals Prevent Orthotopic Growth and Metastasis of Bladder Cancer in Mice by Alterations of Cancer Cell Proliferation and Apoptosis and Tumor Angiogenesis.</a> Cancer Res. 66, 1851-1858 (2006).</li>
<li>Yanagiuchi, A., Miyake, H., Nomi, M., Takenaka, A., Fujisawa, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modulation+of+the+Microenvironment+by+Growth+Factors+Regulates+the+In+Vivo+Growth+of+Skeletal+Myoblasts%5BTitle%5D)+AND+%22BJU+International%22%5BJournal%5D)">Modulation of the Microenvironment by Growth Factors Regulates the In Vivo Growth of Skeletal Myoblasts.</a> BJU International. 103, 1569-1573 (2009).</li>
<li>Miyake, H., Hara, I., Yamanaka, K., Gohji, K., Arakawa, S., Kamidono, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Overexpression+of+Bcl-2+Enhances+Metastatic+Potential+of+Human+Bladder+Cancer+Cells%5BTitle%5D)+AND+%22British+Journal+of+Cancer%22%5BJournal%5D)">Overexpression of Bcl-2 Enhances Metastatic Potential of Human Bladder Cancer Cells.</a> British Journal of Cancer. 79, 1651-1656 (1999).</li>
<li>Chancellor, M. B., Yokoyama, T., Tirney, S., Mattes, C. E., Ozawa, H., Yoshimura, N., Groat, W. C. de, Huard, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preliminary+Results+of+Myoblast+Injection+into+the+Urethra+and+Bladder+Wall%3A+a+Possible+method+for+the+Treatment+of+Stress+Urinary+Incontinence+and+Impaired+Detrusor+Contractility%5BTitle%5D)+AND+%22Neurourol+Urodyn%22%5BJournal%5D)">Preliminary Results of Myoblast Injection into the Urethra and Bladder Wall: a Possible method for the Treatment of Stress Urinary Incontinence and Impaired Detrusor Contractility.</a> Neurourol Urodyn. 19, 279-287 (2000).</li>
<li>Dinney, C. P., Tanguay, S., Bucana, C. D., Eve, B. Y., Fidler, I. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intravesical+Liposomal+Muramyl+Tripeptide+Phosphatidylethanolamine+Treatment+of+Human+Bladder+Carcinoma+Growing+in+Nude+Mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Interferon+Cytokine+Res%22%5BJournal%5D)">Intravesical Liposomal Muramyl Tripeptide Phosphatidylethanolamine Treatment of Human Bladder Carcinoma Growing in Nude Mice.</a> J Interferon Cytokine Res. 15, 585-592 (1995).</li>
<li>Mohamedali, K. A., Kedary, D., Sweeney, P., Kamaty, A., Davisy, D. W., Evey, B. Y., Huangy, S., Thorpez, P. E., Dinney, C. P., Rosenblum, M. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Vascular-targeting+Fusion+toxin+VEGF121%2FrGel+Inhibits+the+Growth+of+Orthotopic+Human+Bladder+Carcinoma+Tumors%5BTitle%5D)+AND+%22Neoplasia%22%5BJournal%5D)">The Vascular-targeting Fusion toxin VEGF121/rGel Inhibits the Growth of Orthotopic Human Bladder Carcinoma Tumors.</a> Neoplasia. 7, 912-920 (2005).</li>
<li>Slaton, J. W., Perrotte, P., Inoue, K., Dinney, C. P., Fidler, I. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interferon-%CE%B1-mediated+Down-Regulation+of+Angiogenesis-related+Genes+and+Therapy+of+Bladder+Cancer+Are+Dependent+on+Optimization+of+Biological+Dose+and+Schedule%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">Interferon-α-mediated Down-Regulation of Angiogenesis-related Genes and Therapy of Bladder Cancer Are Dependent on Optimization of Biological Dose and Schedule.</a> Clinical Cancer Research. 5, 2726-2734 (1999).</li>
<li>Yokoyama, T., Huard, J., Pruchnic, R., Yoshimura, N., Qu, Z., Cao, B., De Groat, W. C., Kumon, H., Chancellor, M. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Muscle-Derived+Cell+Transplantation+and+Differentiation+into+Lower+Urinary+Tract+Smooth+Muscle%5BTitle%5D)+AND+%22Urology%22%5BJournal%5D)">Muscle-Derived Cell Transplantation and Differentiation into Lower Urinary Tract Smooth Muscle.</a> Urology. 57, 826-831 (2001).</li>
<li>Chan, E., Patel, A., Heston, W., Larchian, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+Orthotopic+Models+for+Bladder+Cancer+Research%5BTitle%5D)+AND+%22BJU+International%22%5BJournal%5D)">Mouse Orthotopic Models for Bladder Cancer Research.</a> BJU International. 104, 1286-1291 (1988).</li>
<li>Russell, P. J., Jelbart, M., Wills, E., Singh, S., Wass, J., Witherspoon, J., Raghavan, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Establishment+and+characterization+of+a+new+human+bladder+cancer+cell+line+showing+features+of+squamous+and+glandular+differentiation%5BTitle%5D)+AND+%22Int.+J.+Cancer%22%5BJournal%5D)">Establishment and characterization of a new human bladder cancer cell line showing features of squamous and glandular differentiation.</a> Int. J. Cancer. 41, 74-74 (1988).</li>
<li>Ahlering, T. E., Dubeau, L., Jones, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+new+in+vivo+model+to+study+invasion+and+metastasis+of+human+bladder+carcinoma%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">A new in vivo model to study invasion and metastasis of human bladder carcinoma.</a> Cancer Res. 41, 6660-6660 (1987).</li>
<li>Heaney, J. A., Omellas, E. P., Daly, J. J., Lin, J. C., Rout, G. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+growth+of+human+bladder+cancer+cell+lines%5BTitle%5D)+AND+%22Invest.+Urol%22%5BJournal%5D)">In vivo growth of human bladder cancer cell lines.</a> Invest. Urol. 15, 380-380 (1978).</li>
<li>Hadaschik, B., Black, P., Sea, J., Metwalli, A., Fazli, L., Dinney, C., Gleave, M., So, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+validated+mouse+model+for+orthotopic+bladder+cancer+using+transurethral+tumor+inoculation+and+bioluminescence+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22BJU+International%22%5BJournal%5D)">A validated mouse model for orthotopic bladder cancer using transurethral tumor inoculation and bioluminescence imaging.</a> BJU International. 100, 1377-1384 (2007).</li>
</ol>

관심 없음 충돌 선언하지 않습니다.

마우스 방광 벽 주입은 방광 벽 정의된 영역에 특정 세포의 주입을 허용합니다. 이 기술은 방광 암, 부드러운 근육, 그리고 줄기 세포 생물학의 마우스 모델에 대한 다양한 응용 프로그램을하고 있습니다. 자신의 성장과 분화가 생리학 관련 해부학 맥락에서 공부를 할 수 있도록 정의함으로써, 마우스 방광 벽 주입은 orthotopic 위치에 방광 암 또는 줄기 세포의 도입을 용이하게합니다. 사실, Dinney 외. 첫 번째는 누드 생쥐 1 orthotopic 인간의 방광 암 xenografts를 공부하기 위해이 기술을 설명했다. 방광 벽 사출 기술이 방광 암, 줄기 세포 연구 1-9의 번호를 이용하고있는 동안, 그것은 사용할 수있는 유일한 방법은 아닙니다. 많은 과학자들은 피하, intraperitoneal, 또는 정맥 주사하여 누드 마우스로 방광 암 세포를 이식하려고 노력하지만, 이러한 모델은 예측 tumorigenicity 및 생체내...

<table border="1"><tbody><tr><td> 시약의 이름 </td><td> 회사 </td><td> 카탈로그 번호 </td></tr><tr><td> Isoflurane (Aerrane) </td><td> 백스터 </td><td> NDC 10019-773-60 </td></tr><tr><td> 29 또는 30 게이지 바늘 </td><td> 해밀턴 </td><td> 7803-06 또는 7803-07 </td></tr><tr><td> 100 microliter 주사기 </td><td> 해밀턴 </td><td> 7656-01 </td></tr></tbody></table>

마우스 블레더 월 주입

Mouse Bladder Wall Injection

마우스 방광 벽 주입은 orthotopically 줄기 세포, 평활근, 그리고 암 생물학을 포함하여 방광 현상​​을 연구하기위한 유용한 기술입니다. 주사를 시작하기 전에, 수술 지역은 비누와 물로 및 살균 솔루션을 청소해야합니다. 수술 장비는 사용하기 전에 각각의 동물 사이에 소독해야합니다. 각각의 마우스는 흡입 isoflurane 마취 배치 (유도에 대한 2~5%, 유지 보수 1-3 %)와 방광 가위로 복부 정중선 절개하여 노출됩니다. 방광이 가득있다면, 두 손가락 사이 압박에 의해 부분적으로 부드럽게 풀립니다. 관심의 세포 현탁액은 intramurally 29 또는 30 게이지 바늘 1 CC 또는 작은 주사기를 사용하여 방광의 돔 벽에에 주입합니다. 상처는 상처 후 클립과 온난 패드를 복구하는 허용 마우스를 사용 닫힙니다. 방광 벽 주입은 연습 마스터 수있는 민감한 microsurgical 기법입니다.

마우스 방광 벽 주입은 orthotopically 방광 줄기 세포와 암 생물학을 연구하는 유용한 방법입니다. 이 섬세한 microsurgical 방법은 신중 기술과 연습 마스터하실 수 있습니다.

마우스 방광벽 주사는 줄기세포, 평활근 및 암 생물학을 포함하여 방광 현상을 정위적으로 연구하는 데 유용한 기술입니다. ...

이 절차의 전반적인 목표는 방광벽의 특정 영역에 세포를 도입하는 것입니다. 이는 먼저 복부 절개를 통해 방광을 노출시킴으로써 수행됩니다. 절차의 다음 단계는 바늘의 사면을 방광벽 내로 삽입하는 것입니다.절차의 마지막 단계는 시린지의 플런저를 밀어 관심 세포를 방광벽에 주입하는 것입니다. 세포가 성공적으로 이식되면 액체가 새지 않고 크기가 일정하게 유지되는 국소적인 수포(bleb)가 형성됩니다. 세포를 요도를 통해 접종하는 기존의 마우스 접종법과 비교했을 때 이 기술의 주요 장점은 방광 내에서 세포가 이식될 위치를 직접 지정할 수 있다는 점입니다.근육 내 주사 부위의 시각적 시연은 주사 위치를 익히기가 어렵기 때문에 매우 중요합니다. 방광으로 들어가는 바늘의 정확한 각도와 진입 위치를 아는 것이 기술적 성공의 필수 요소입니다. 실험의 필요에 따라 마우스의 연령, 성별 및 계통을 선택하십시오.8~12주령의 마우스를 사용하며, 먼저 비누와 물로 수술대의 표면을 깨끗이 닦습니다. 다음으로, 사이드스와이프(sideswipes) 또는 살균 티슈로 수술대 표면을 닦아냅니다. 수술 도구는 수술 전 오토클레이브(autoclave)로 멸균해야 합니다.사용 직전에 기구들을 70% ethanol로 닦고, 개별 수술 사이에 열구슬 멸균기로 다시 멸균합니다. 30 gauge 바늘이 장착된 100 microliter Hamilton 시린지를 절대 알코올로 반복적으로 흡입하여 세척한 후, 멸균된 phosphate buffered saline으로 세척합니다. 마취된 동물을 가온 패드 위에 등으로 누운 자세로 배치하여 정상 체온을 유지하도록 합니다.기화된 isof fluorine이 포함된 노즐에 동물의 코를 위치시켜 충분한 수준의 마취 상태를 유지합니다. 다음으로, 클리퍼를 사용하여 복부 피부의 털을 제거합니다. 수술 중 분변 오염을 방지하기 위해 일회용 멸균 수술 포로 항문 부위를 덮습니다.두 번째 수술용 드레이프를 하복부에 덮고 수술창을 노출시킵니다. 해부 현미경으로 확대하여 Betadine과 알코올을 반복적으로 도포해 수술 부위를 멸균합니다. 가위로 하복부 정중선 절개를 실시합니다.복부에 가벼운 압력을 가해 방광을 노출시킵니다. 방광은 대개 부분적으로 또는 완전히 채워져 있으므로, 복부에 압력을 가하면 다른 장기들이 우선적으로 밀려나 방광이 절개 부위로 드러나게 됩니다. 방광이 가득 차 있는 경우, 돔(dome) 부위에 가벼운 하방 압력

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연구

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의학

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