마우스 블레더 월 주입

이 절차의 전반적인 목표는 방광 벽의 정의된 영역에 세포를 도입하는 것입니다. 이것은 먼저 방광을 노출시키기 위해 복부를 절개함으로써 이루어집니다. 절차의 다음 단계는 바늘의 베벨을 벽체 내부에 삽입하는 것입니다.

절차의 마지막 단계는 주사기의 플런저를 눌러 관심 세포를 방광 벽에 주입하는 것입니다. 세포의 성공적인 이식은 액체가 누출되지 않고 크기가 안정적으로 유지되는 잘 국소된 bleb에 의해 표시됩니다. 세포가 있는 마우스의 경요도 접종과 같은 기존 방법에 비해 이 기술의 주요 장점은 세포가 방광 내에서 스스로 이식될 위치를 지시할 수 있다는 것입니다.

리 근육의 시각적 시연은 주입 스테이를 배우기가 어렵기 때문에 매우 중요합니다. 바늘이 방광으로 들어가는 정확한 각도와 위치를 아는 것은 기술 성공에 필수적입니다. 여기에서 실험의 필요에 따라 마우스의 나이, 성별 및 균주를 선택합니다.

8주에서 12주 된 생쥐를 사용하여 비누와 물로 수술대 표면을 청소하기 시작합니다. 그런 다음 사이드 스와이프 또는 소독 물티슈로 수술대 표면을 닦습니다. 수술 기구는 수술 전에 오토클레이브에서 멸균해야 합니다.

사용 직전에 70% 에탄올로 기구를 닦고 개별 수술 사이에 뜨거운 비드 살균기로 다시 멸균하십시오. 30게이지 바늘에 부착된 100마이크로리터 해밀턴 주사기를 절대 알코올을 반복적으로 흡인하여 세척한 다음 멸균된 인산염 완충 식염수를 세척합니다. 마취된 동물을 누운 자세로 따뜻한 패드에 올려 놓으면 정상적인 체온을 유지하는 데 도움이 됩니다.

기화된 불소가 들어 있는 노즐에 동물 주둥이를 넣어 충분한 수준의 마취를 유지하십시오. 그런 다음 클리퍼로 복부 피부의 털을 제거합니다. 수술 중 대변 오염을 방지하기 위해 일회용 멸균 수술용 드레이프를 사용하여 항문을 덮습니다.

하복부에 두 번째 수술용 드레이프를 놓고 수술 창을 노출시킵니다. 확대를 위한 해부 현미경을 사용하여 베타딘과 알코올을 반복적으로 도포하여 수술 부위를 살균합니다. 가위로 복부 아래쪽 정중선을 절개합니다.

복부를 부드럽게 눌러 방광을 노출시킵니다. 방광은 일반적으로 부분적으로 또는 완전히 가득 차있기 때문에 복부에 가해지는 압력은 우선적으로 다른 장기를 밀어내고 절개 부위가 방광으로 나오도록 합니다. 방광이 가득 차면 돔에서 부드럽게 아래쪽으로 압력을 가하여 부분적으로 감압을 해제합니다.

멸균 Hamilton 주사기에 50마이크로리터의 시료 용액을 채웁니다. 베벨이 위를 향하도록 바늘 끝을 방광 벽에 삽입하고 s를 주입합니다.amp르 용액. 성공적인 주입은 유체가 누출되지 않고 안정적인 크기를 유지하는 잘 국소적인 블렙으로 표시됩니다.

주입 후 상처 클립으로 절개 부위를 봉합합니다. 마스터가 보온 패드에서 회복할 수 있도록 합니다. 이 기술은 제대로 수행되면 10-15 분 안에 완료 할 수 있습니다.

성공 여부는 주사 후 연속적인 시점에서 방광의 조직학적 분석을 통해 확인할 수 있습니다.