고체 표본에서 원발성 난소암 세포 채취: 난소 종양 표본에서 상피 난소암 세포를 배양하는 방법

난소의 외부 표면에 존재하는 상피 세포는 난소 종양으로 성장할 수 있는 암세포로 악성 변형될 수 있습니다.

이러한 상피성 난소암 세포 또는 EOC를 분리하려면 먼저 난소 종양 표본을 채취하여 작은 조각으로 잘게 썬다. 다진 조각을 원하는 프로테아제 효소가 보충된 분해 완충액이 들어 있는 튜브로 옮깁니다.

이러한 프로테아제는 조직 내의 세포외 기질 단백질을 분해하여 EOC 세포, 적혈구 및 소수의 해리된 섬유아세포를 현탁액으로 방출합니다.

스트레이너를 통해 세포 슬러리를 여과하여 해리되지 않은 조직 조각에서 부유 단일 세포를 분리합니다. 현탁액을 원심분리하여 EOC 세포, 적혈구 및 섬유아세포를 펠릿화합니다. 효소 함유 상청액을 버립니다.

세포 펠릿을 상피 성장 배지에 재현탁하고 배양 접시로 옮깁니다. 적혈구가 배지에 떠 있는 동안 EOC 세포와 섬유아세포가 접시 바닥에 부착되도록 배양을 배양합니다.

배지를 새로 고쳐 부유 적혈구를 제거합니다. 시간이 지남에 따라 배지는 섬유아세포에 대한 EOC 세포의 선택적 성장을 촉진하여 원발성 난소암 세포의 단층을 형성합니다.

수술실에서 샘플을 수집하여 얼음 위에서 실험실로 운반합니다. 운송된 용기 내부에서 샘플을 생물학적 안전 후드에 넣으십시오. 샘플을 50밀리리터 원추형 튜브에서 10밀리리터의 신선한 얼음처럼 차가운 PBS가 들어 있는 60밀리미터 x 60밀리미터 페트리 접시로 옮깁니다.

다음으로, 멸균 면도날을 사용하여 샘플을 2mm 이상의 작은 조각으로 더 자릅니다. 그런 다음 15밀리리터 원뿔형 튜브에서 디스파제 II로 DMEM을 처리합니다. 다진 조직을 DMEM 디스파제 II 혼합물 튜브로 옮깁니다. 그런 다음 샘플을 5% 이산화탄소 및 섭씨 37도에서 30분 동안 배양합니다. 최적의 소화를 보장하기 위해 5분마다 세포 슬러리를 수동으로 교반합니다.

배양 후, 50밀리리터 원추형 튜브 위에 놓인 70마이크로미터 메쉬 세포 스트레이너를 통해 세포 슬러리를 옮깁니다. 주사기 플런저를 사용하여 메쉬에 부드럽게 압력을 가합니다. 메쉬 위에 남아 있는 해리되지 않은 조직을 버리고 얻은 세포 현탁액을 50밀리리터 멸균 원추형 튜브에 수집합니다.

다음으로, 원추형 튜브를 섭씨 4도에서 7분 동안 320 x g으로 원심분리합니다. 상청액을 버리고 세포 펠릿을 10% FBS 및 1% PS를 함유하는 DMEM 10밀리리터에 재현탁합니다. 그런 다음 세포 현탁액을 페트리 접시로 옮기고 현탁액을 5% 이산화탄소 및 섭씨 37도에서 배양합니다. 초기 도금 후 24시간 후에 배지를 교체하여 세포 파편과 배양에 존재하는 대부분의 적혈구를 제거합니다.

마지막으로, 다음 2주 동안 3일마다 배지를 교체한 후 1차 EOC 세포의 배양이 다운스트림 적용을 위해 준비됩니다.

• Ovarian Tumor Sample - The tissue of origin from an ovarian tumor, used for lab analysis.
• Epithelial Ovarian Tumor Sample - A subtype of ovarian tumor sourced from epithelial cells.
• Ovarian Cancer Sample - Biopsy or excision sample of an ovarian malignant growth.
• DMEM - Standard cell culture medium used for growing mammalian cells.
• FBS - Fetal Bovine Serum, a supplement used in cell cultures to promote growth and survival.

• Introduce Ovarian Tumor Sample – The sample retrieved from patients, used for cellular analyses (e.g., epithelial ovarian tumor sample).
• Key Concepts – Overview of sample processing techniques (e.g., mincing, digestion).
• Underlying Mechanisms – Dissecting the biochemical processes during sample handling, e.g., enzymatic digestion and cell plating.
• Connect to Experiment – The cultivation of epithelial ovarian cancer cells paves the way for further cancer research.

• What is an ovarian tumor sample and how to process it?
• How does the sample processing facilitate downstream applications?
• Why does cell slurry need to be strained and centrifuged?

• Practical Applications – Ovarian cancer research and possible therapeutic development (e.g., drug screening).
• Industry Impact – Used in biomedical research and pharmaceutical industry (e.g., cancer drug development).
• Societal Importance – Advances in ovarian cancer treatment can increase survival rates (e.g., patient prognosis).
• Link to scientific Advancements – Adoption of this methodology contributes to cancer research advancements.