Name: 3 차원 Heterotypic 체외에서 모델링 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-08-28T13:00:00.000+00:00
Duration: 12 min 42 s
Description: 배우세요 난소암 연구를 위한 3차원 이종 세포 배양 모델링 방법을. 상피세포와 기질세포의 상호작용을 분석하여 종양 발생 기전을 규명하고 치료 전략 개발에 활용할 수 있습니다.

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이 연구는 의학의 중사 님 학교, 캘리포니아, 미국 대학, 대학 대학 런던, 영국에서 수행되었다. KL는 건강 기금 5 U19 CA148112-02의 국립 연구소에 의해 지원을 받고 있습니다. BG는 이브 어필 부인과 종양학 자선 (UK)에서 프로젝트 교부금으로 운용되었다. UCLH / UCL에서 수행이 작업 중 일부는 부분적으로 건강의 NIHR 바이오 메디컬 연구 센터 자금 제도의학과에서 자금을 대고있었습니다.

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</ol>

관심 없음 충돌이 선언 없습니다.

초기 단계의 상피 난소 암 (EOC)의 생물은 제대로 이해된다. 아마도 몇 년 동안이 분야의 주요 장애물 중 하나는 조직의 특정 질병의 기원과 EOC 개발 microenvironment의 역할의 중요성에 대한 이해의 부족이었다. 지난 몇 년 동안, EOC는 아마 다른 하위 유형에 대해 서로 다른 세포의 기원에 여러 별개의 histophathological 하위 유형과 이기종 질병입니다 분명이되었습니다 있습니다. 예를 들어, 현재의 데이터는 고급 장액 EOCs은 난관의 분비 상피 세포와 난소 표면 상피 세포 모두에서 발생한 수 있다는 제안, 적어도 endometrioid과 명확한 세포 EOCs의 비율은 난소 endometriosis (endometrioma)에서 발생하는 것으로 생각되고, 그리고 mucinous의 EOCs는 paraovarian 또는 paratubal 전환 형 상피 15,16에서 발생할 수 있습니다. 그러나, 체외와 &lt;거기에 제한되어em&gt;는이 histotypes의. ...

<table border="1"><tbody><tr><td> 시약 </td><td> 공급 업체 </td><td> 카탈로그 번호 </td></tr><tr><td> 세포 배양에 적합한 PolyHEMA, </td><td> 시그마 알드리치 </td><td> P3932 </td></tr><tr><td> 분자 생물학 등급 에탄올 </td><td> 시그마 알드리치 </td><td> E7023 </td></tr><tr><td> 세포 배양을위한 멸균 물 </td><td> VWR </td><td> 12001-356 </td></tr><tr><td> MCDB105 </td><td> 시그마 알드리치 </td><td> M6395 </td></tr><tr><td> 보통 199 </td><td> 시그마 알드리치 </td><td> M2154 </td></tr><tr><td> Hyclone 태아 소 혈청 </td><td> 열 과학 </td><td> SH30088.03 </td></tr><tr> &lt;TD&gt; Gentamicin </td><td> 시그마 알드리치 </td><td> G1397 </td></tr><tr><td> Amphotericin B </td><td> 시그마 알드리치 </td><td> A2942 </td></tr><tr><td> pBABE - hygro-hTERT </td><td> Addgene </td><td> 1773 </td></tr><tr><td> PBS </td><td> VWR </td><td> 12001-766 </td></tr><tr><td> 0.25 % 트립신 - EDTA (에틸렌 다이아 민 테트라 초산) </td><td> Invitrogen </td><td> 25200-072 </td></tr><tr><td> 셀 스트레이너 (40 ~ 70 μm) </td><td> VWR </td><td> 21008-949 21008-952 </td></tr><tr><td> 안티 - 섬유 아세포 표면 단백질 항체, 클론 1B10 </td><td> 시그마 </td><td> F4771 </td></tr><tr><td> 안티 팬-cytokeratin 항체 (C11) </td><td> 산타 크루즈 (Santa Cruz) </td><td> SC-8018 </td></tr><tr><td> Polybrene (hexadimethrine 브롬화) </td><td> 시그마 </td><td> 107689 </td></tr><tr><td> TeloTAGGG Telomerase PCR 엘리사 PLUS </td><td> 로슈 </td><td> 12013789001 </td></tr><tr><td> Telomere 길이 분석을 TeloTAGGG </td><td> 로슈 </td><td> 12209136001 </td></tr></tbody></table> 표 1. 시약 및 장비는이 연구에 언급.

3 차원 heterotypic<em&gt; 체외에서</em난소 암 개시 및 진행하는 동안 stromal - 상피 조직의 상호 작용&gt; 모델링

Heterotypic Three-dimensional In Vitro Modeling of Stromal-Epithelial Interactions During Ovarian Cancer Initiation and Progression

상피 난소 암 (EOCs)는 서양 사회에서 부인과 종에서 죽음의 주요 원인입니다. 수술 치료 및 향상된 백금 기반 chemotherapies의 발전에도 불구하고, 이상 40 년의 1,2에 대한 EOC 생존 요금에 약간의 개선이있었습니다. 무대하는 동안 I 종양은 5 년 생존 율이&gt; 85 %, 스테이지 III / IV 질환의 생존 요금은 &lt;40% 있습니다. 종양은 이전보다 치료할 수, 단계 3-5에서 감지 된 경우 따라서, EOC에 대한 사망률의 높은 비율이 크게 감소 될 수 있습니다. 현재 초기 단계의 질병 개발의 분자 유전 및 생물학적으로는 제대로 이해된다. 더 구체적으로, 작은은 종양 개시시 microenvironment의 역할에 대해 잘 알려져 있습니다,하지만 EOCs (예 : 나이와 패리티)에 대한 알려진 위험 요소는 microenvironment이 EOCs의 초기 기원에 중요한 역할을하는 것이 좋습니다. 따라서 입체 heterotypic 모델을 개발정상적인 난소 모두와 초기 단계의 난소 암의. 정상 난소를 들어, 공동 교양 일반 난소 표면 상피 (잃을)와 문화에서 이러한 세포의 수명을 연장하기 위해 인간의 telomerase의 holoenzyme (hTERT)의 촉매 subunit의 retrovrial 도입에 의해 불후의 일반 stromal 섬유 아세포 (INOF) 세포. 난소 상피 세포의 변형, 잃을 셀의 CMYC 종양 유전자의 overexpression, 다시 INOF 세포와 공동 배양의 초기 단계를 모델링합니다. 이 heterotypic 모델은 상피 세포의 변화와 침략에 노화와 노화의 효과를 조사하는 데 사용되었다. 여기 이러한 3 차원 모델의 개발 방법론 단계를 설명 할 수있다;이 방법은 정상 난소와 난소 암 조직의 발전에 해당하지 않습니다, 그리고 stromal 및 상피 세포의 상호 작용이 기본 위치를 다른 조직 유형을 연구하는 데 사용할 수 있습니다 조직 유지 보수 및 디의 측면sea​​se 개발.

우리는 구축 방법을 설명<em&gt; 체외에서</em&gt; 난소 섬유 아세포 및 일반 난소의 표면이나 난소 암 상피 세포를 포함하는 heterotypic 입체 모델. 우리는 난소 암 개발하는 동안 발생하는 stromal-상피 상호 작용을 연구하기 위해 이러한 모델의 사용에 대해 설명합니다.

3 차원 Heterotypic<em&gt; 체외에서</em난소 암 개시 및 진행하는 동안 Stromal - 상피 조직의 상호 작용&gt; 모델링

상피성 난소암(EOCs)은 서구 사회에서 부인과 악성 종양으로 인한 사망의 주요 원인입니다. 외과적 수술의 발전에도 불구하고...

다음 실험의 전반적인 목표는 초기 단계 난소암 발생의 3차원 전형적 모델을 생성하는 것입니다. 먼저, 일차 정상 난소 상피 및 섬유아세포 조직에서 유래된 H turt 불멸화 세포주를 생성합니다. 그 다음, 난소에 존재하는 생체 내 구조와 복잡한 세포 간 상호작용을 재현하기 위해 상피 및 기질 세포주를 3차원 S 스페로이드 모델로 공배양합니다. 이어서 오가노이드 배양물을 고정 및 염색하고 특정 마커의 발현을 분석하여 기질-상피 상호작용의 분자적 특성을 연구합니다.얻어진 결과는 3D 정형 모델의 기질 세포 구획의 변화가 공배양된 상피 세포의 표현형에 어떻게 영향을 미칠 수 있는지를 보여줍니다. 3차원 정형 모델은 이 질환의 기원을 탐구하고 종양의 발생 및 발달에서 기질 미세환경의 역할을 규명하는 것과 같이, 난소암 연구 분야의 핵심적인 질문들에 답하는 데 도움을 줄 수 있습니다. 이러한 기술의 응용은 다른 3D 배양 방법들과 비교하여 질병 진단 및 치료로까지 확장됩니다.이 기술은 더 넓은 범위의 세포 배양 부피와 후속 응용 분야에 적용될 수 있습니다. 예를 들어, 3D 동종 및 유형 배양은 인비트로(in vitro) 약물 테스트에 사용될 수 있습니다. 또한 이 접근 방식은 다른 고형암 유형이나 양성 질환 연구와 같은 다른 모델 시스템에도 적용 가능합니다.신선한 난소 조직을 추가 항생제와 항진균제가 첨가된 불멸화 정상 난소 섬유아세포 성장 배지에 담아 세포 배양실로 운반합니다. 조직에 느슨하게 부착되어 남아 있는 상피 세포를 제거하기 위해 5 mL의 PBS로 샘플을 세 번 세척합니다. 그 다음, 샘플과 PBS를 깨끗한 P 100 배양 접시로 옮깁니다. 멸균된 기구를 사용하여 조직을 두 번째의 건조하고 깨끗한 P 100 배양 접시로 옮깁니다.조직을 0.5 square centimeter 크기의 조각으로 자르고, 각 조각을 별도의 P 100 dish로 옮깁니다. 조직을 1 square millimeter 미만 크기의 조각이 될 때까지 계속 자릅니다. 그 후 20 milliliters의 INOF GM media를 첨가하고 배양합니다. 위상 현미경을 사용하여 세포 성장을 관찰합니다.24시간 이내에 세포가 디쉬에 부착되었는지 확인하십시오. 위상차 현미경을 사용하여 세포 성장을 관찰하십시오. 세포는 일반적으로 24시간 이내에 디쉬에 부착됩니다. 일주일 후, 흡입법으로 부착되지 않은 조직을 제거하고 배지를 보충하십시오. 그 후

heterotypic-three-dimensional-vitro-modeling-stromal-epithelial

Research

연구

JoVE Journal

Medicine

의학

여기에 설명된 mesothelial 통관 분석은 fluorescently 표시된 셀 및 촬영된 비디오 현미경 시각화하고 양적 난소암 다세포 spheroids 및 mesothelial 세포 monolayers의 상호 작용을 측정하기 위해 활용합니다. 이 분석은 난소 암 전이의 초기 단계를 모델.

체외 Mesothelial 정리 분석에서는 그것이 난소 암 전이의 초기 단계 모델

이 비디오에서는 복막강 내막의 체외 3차원 모델 개발을 보여줍니다. 이 유기형 배양은 난소암 세포의 부착, 침입 및 증식을 조사하는 데 도움이 될 수 있습니다.

복강내막의 난소암 전이 모델링: 복막강 내막의 체외 3D 모델을 확립하는 방법

여기에서는 다세포 상호 작용 및 암세포 행동의 세포 외 기질 의존적 조절을 조사하는 데 유용한 3차원에서 공동 배양하는 프로토콜을 제시합니다. 이 실험 모델에서는 인간 암 관련 섬유아세포가 내장된 콜라겐 겔에서 암세포를 배양합니다.

종양 기질 상호 작용에 대한 세 가지 차원의 공동 문화 모델

여기에서는 난소암 세포의 부착, 침습 및 증식을 조사하기 위한 도구로서 일차 인간 중피 세포와 세포외 기질로 층을 이룬 섬유아세포로 구성된 복막강 내막의 3차원 체외 모델을 구성하는 프로토콜을 제시합니다.

인간의 복강의의 Organotypic 문화 난소 암 보급의 초기 단계 모델링

우리는 산소와 영양분을 전달하기 위해 관류 생물 반응기 시스템을 사용하여 배양할 수 있는 3D 유방암 대리모를 생성하는 방법을 시연합니다. 성장 후, 대리모는 관심 매개변수의 평가를 위해 고정되고 파라핀으로 처리됩니다. 이러한 매개 변수 중 하나 인 세포 밀도의 평가가 설명됩니다.

준비 및 분석<em&gt; 체외</em&gt; 3 차원 유방 암 서로 게이트

생리 관련 모델에서 난소 종양의 진행을 연구하기 위해, 다세포 회전 타원체는 시뮬레이션 된 유체의 흐름에 따라 마이크로 디바이스에서 배양 하였다. 이 동적 3D 모델은 난소 암 전이가 발생 셀룰러 및 기계 부품과 복강 환경을 에뮬레이트합니다.

동적 3D 복막의 마이크로 디바이스의 모델링 난소 암 다세포 회전 타원체 동작

난소암 줄기세포(OCSC)는 암 시작, 재발, 치료 내성 및 전이를 담당합니다. OCSC 혈관 틈새는 OCSC의 자가 재생을 촉진하여 화학 내성을 유발하는 것으로 간주됩니다. 이 프로토콜은 시험관 내에서 재현 가능한 OCSC 혈관 틈새 모델을 구축하기 위한 기초를 제공합니다.

3차원 공동배양시스템을 이용한 난소암 줄기유사세포의 혈관신생적 특성 평가 NICO-1

이 프로토콜은 암세포-omentum 상호 작용의 3차원(3D) 생체 외 모델의 확립을 설명합니다. 이 모델은 지방 틈새 시장 내에서 종양 유발 기전을 규명하고 새로운 치료법을 테스트하기 위한 플랫폼을 제공합니다.

인간 Omentum을 사용한 난소암 복막 전이의 생체 외 모델

암 전이를 연구하기 위해 이세포성 누화를 캡처하는 3D 암 모델이 매우 필요합니다. 우리의 연구는 침입 및 세포 공간 분포를 연구하는 데 사용할 수 있는 골격 및 골격이 없는 환경에서 이종 다세포 기질-상피의 생성을 제시합니다.

상피암 세포의 스캐폴드가 없는 3D 배양에서 이종다세포 기질 세포(Heteromulticellular Stromal Cells in Scaffold-free 3D Cultures of Epithelial Cancer Cells to Drive Invasion)

이 프로토콜은 시험관 내 및 생체 내에서 고급 장액성 난소 암종(HGSOC) 마우스 모델의 개발을 자세히 설명합니다. 쥐 나팔관 오가노이드의 파생, 인간 HGSOC 유전학을 요약하기 위한 유전자 변형, 종양의 생체 내 발달을 위한 동계 마우스의 난소 활액낭에 도입.

고급 장액성 난소 암종 모델링을 위한 나팔관 상피 세포의 마우스 유래 오가노이드 라인 개발

배우세요 난소암 연구를 위한 3차원 이종 세포 배양 모델링 방법을. 상피세포와 기질세포의 상호작용을 분석하여 종양 발생 기전을 규명하고 치료 전략 개발에 활용할 수 있습니다.

3 차원 Heterotypic

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