고체 시편에서 기본 난소 암 세포를 얻는 방법

이 절차의 전반적인 목표는 고형 임상 검체에서 원발성 난소암 세포를 분리하고 특성화하는 것입니다. 이것은 먼저 난소 종양 표본을 채취하여 페트리 접시에 넣음으로써 이루어집니다. 두 번째 단계는 샘플을 조각으로 자르고 배양을 위한 분해 시약이 있는 원뿔형 튜브로 조각을 옮기는 것입니다.

다음으로, 세포 슬러리는 세포만 수집되는 필터를 통해 통과됩니다.원심분리를 위해 마지막 단계는 상층액을 버리고 세포를 배지에 재현탁시켜 밤새 배양하는 것입니다. 궁극적으로 상피 난소암 세포는 몇 주 동안 배양에서 성장하여 다운스트림 적용이 가능합니다. 이 방법은 각 개별 환자에게 가장 적합한 치료 옵션이 무엇인지와 같은 난소암 분야의 주요 질문에 답하는 데 도움이 될 수 있습니다.

이 기술의 의미는 유전자 조작에 매우 취약하고 약물 스크리닝 검사에 더 유용한 보다 현실적인 세포 배양을 사용할 수 있기 때문에 난소암 치료로 확장됩니다. 시작하려면 500ml의 델코, 변형 독수리, 미디엄 또는 DMEM에 10%의 소 태아 혈청 또는 FBS와 1%의 페니실린, 스트렙토마이신 또는 ps를 보충합니다. 매체를 섭씨 4도에서 보관하십시오.

수술실에서 샘플을 채취하여 얼음에 담아 운송된 컨테이너 안에 있는 실험실로 운반합니다. 샘플을 생물학적 안전 후드에 넣습니다. 50ml 원추형 튜브에서 10ml의 신선한 얼음처럼 차가운 PBS가 들어 있는 60mm x 60mm 페트리 접시로 샘플을 옮깁니다.

그런 다음 멸균 면도날을 사용하여 샘플을 2mm 이하로 자릅니다. 그런 다음 15리터 원추형 튜브에 디스크 페이스트 튜브로 DMEM을 처리합니다. 다진 조직을 DMEM dispa two mixture tube로 옮깁니다.

그런 다음 5% 이산화탄소와 섭씨 37도에서 30분 동안 샘플을 배양합니다. 최적의 소화를 보장하기 위해 5분마다 세포 슬러리를 수동으로 교반합니다. 배양 후 50ml 원추형 튜브 위에 놓인 70마이크로미터 메쉬 셀 스트레이너를 통해 세포 슬러리를 이동합니다.

주사기 플런저를 사용하여 메쉬에 부드럽게 압력을 가하고, 메쉬 위에 남아 있는 관련 없는 조직을 버리고, 얻어진 세포 현탁액을 50ml 멸균 원뿔형 튜브에 수집합니다. 다음은 원심분리기입니다. 원뿔형 튜브는 섭씨 4도에서 7분 동안 320배 G

상층액을 버리고 10%FBS 및 1%ps를 함유한 10ml의 DMEM에 세포 펠렛을 재현탁합니다. 그런 다음 세포 현탁액을 페트리 접시로 옮기고 5% 이산화탄소와 섭씨 37도에서 현탁액을 배양합니다. 초기 도금 후 24시간 후에 배지를 변경하여 배양물에 존재하는 세포 파편과 대부분의 적혈구를 제거합니다.

마지막으로, 다음 2주 동안 3일마다 배지를 교체한 후 1차 EOC 세포의 배양이 다운스트림 응용 프로그램을 위해 준비됩니다. 도금 직후. 상피 난소암 세포 또는 EOC 세포는 단일 세포 현탁액으로 나타나며 적혈구와 세포 파편이 풍부한 덩어리로 나타납니다.

도금 3일 후 EOC 세포 배양은 반부착 EOC 세포 클러스터와 적혈구 오염이 적은 것을 보여줍니다. 초기 도금 후 일주일 후, EOC 세포 배양은 조직 배양 플라스틱에 퍼지는 세포 클러스터와 같은 소용돌이가 됩니다. 전형적인 상피 조약돌 형태는 배양에서 14일 후에 EOC 세포의 합류 단층에서 볼 수 있습니다.

이 동영상을 시청한 후에는 고체 임상 검체에서 원발성 난소암 세포를 분리하고 특성화하는 방법을 잘 이해하게 될 것입니다.