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브라질에서 필드 릴리스에 대 한 유전자 변형 Aedes aegypti의 대량 생산
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Mass Production of Genetically Modified Aedes aegypti for Field Releases in Brazil

브라질에서 필드 릴리스에 대 한 유전자 변형 Aedes aegypti의 대량 생산

Full Text
25,720 Views
17:41 min
January 4, 2014

DOI: 10.3791/3579-v

Danilo O. Carvalho1,2, Derric Nimmo1, Neil Naish1, Andrew R. McKemey1, Pam Gray1, André B. B. Wilke3, Mauro T. Marrelli3, Jair F. Virginio4, Luke Alphey1,5, Margareth L. Capurro2,6

1Oxitec Ltd, 2Departamento de Parasitologia, Instituto de Ciências Biomédicas,Universidade de São Paulo, 3Departamento de Epidemiologia,Universidade de São Paulo, 4Moscamed Brasil, 5Deptartment of Zoology,University of Oxford, 6Instituto Nacional de Ciência e Tecnologia em Entomologia Molecular (INCT-EM)

AI Banner

Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

Overview

This article discusses the mass rearing techniques necessary for the population suppression of Aedes aegypti using the RIDL® system. It highlights the importance of producing high-quality male mosquitoes for effective control strategies.

Key Study Components

Area of Science

  • Entomology
  • Genetic Engineering
  • Population Control

Background

  • Aedes aegypti is a major vector for diseases such as dengue and Zika.
  • The RIDL® system involves releasing genetically modified males that produce non-viable offspring.
  • Mass rearing is essential to ensure a sufficient number of males are available for release.
  • Quality control in rearing processes is crucial for the success of population suppression efforts.

Purpose of Study

  • To outline the techniques for mass rearing of genetically modified male mosquitoes.
  • To ensure high quality and fitness of the mosquitoes for effective mating.
  • To provide a reliable system for the production of Aedes aegypti males.

Methods Used

  • Artificial membrane feeding with animal blood to obtain high-quality eggs.
  • Sex sorting of pupae to isolate males for further rearing.
  • Quality control measures during the rearing process.
  • Use of tetracycline in larval trays to optimize survival rates.

Main Results

  • Successful production of high-quality male mosquitoes through optimized rearing techniques.
  • Achieved hatch rates of 80-90% for the eggs produced.
  • Effective methods for counting and managing larvae populations.
  • Demonstrated the feasibility of mass rearing for population suppression strategies.

Conclusions

  • Mass rearing techniques are critical for the success of the RIDL® system.
  • High-quality male mosquitoes can significantly contribute to population control of Aedes aegypti.
  • Continued refinement of these techniques will enhance the effectiveness of genetic control strategies.

Frequently Asked Questions

What is the RIDL® system?
The RIDL® system involves releasing genetically modified male mosquitoes that produce non-viable offspring to control populations.
How are male mosquitoes produced?
Male mosquitoes are produced through mass rearing techniques that include egg production and quality control measures.
What is the significance of high-quality males?
High-quality males are essential for effective mating and successful population suppression of Aedes aegypti.
What methods are used for egg production?
Artificial membrane feeding with animal blood is used to obtain high-quality eggs for rearing.
What is the expected hatch rate for the eggs?
The expected hatch rate for the eggs is around 80-90%.

RIDL ®(지배적인 치명적인 곤충을 운반하는 곤충의 방출) 시스템을 사용하여 Aedes aegypti의 인구 억제를 달성하기 위해 많은 수컷 모기를 풀어야 합니다. 이를 위해서는 대량 사육 기술과 기술을 사용하여 고품질의 남성 모기의 최대 수를 얻기 위해 신뢰할 수 있는 시스템을 제공해야 합니다.

Aegypti의 통제는 자손을 죽이는 유전자 변형을 포함하는 곤충을 사용하여 달성 할 수 있습니다. 수컷이 풀려나면 짝짓기를 하고 이 짝짓기에서 태어난 암컷 자손은 죽습니다. 개체수 조절은 유전적으로 불임인 수컷을 지속적으로 풀어줌으로써 달성될 수 있습니다.

죽음을 일으키는 유전자는 식단에 해독제를 첨가하여 유전자 변형을 가진 곤충이 생존할 수 있도록 함으로써 통제할 수 있습니다. 이집트의 인구 억제를 달성하기 위해. 유전자 변형 모기 계통을 사용하여 많은 수의 수컷 모기를 풀어 주어야합니다.

이를 위해서는 가능한 최고의 품질과 적합성을 가진 수컷 모기의 수를 최대한 얻기 위해 대량 사육 기술을 사용해야 합니다. OX 5 1 3 A의 대량 사육은 알 생산, 수컷 생산, 방출 전 수컷의 출현 및 성숙의 세 가지 주요 영역으로 나눌 수 있습니다. 이것은 브라질 Moscamed의 OX 5 1 3 A.Males 생산에 사용되는 후방 시설의 개략도이며, 계란 생산 식민지 방에서 고품질 계란이 지속적으로 생산됩니다.

그런 다음 이 알은 수컷 생산 지역에서 번데기로 사육되고 번데기는 성별로 분류됩니다. 남성의 경우 품질 관리 작업을 위한 전용 공간이 제공됩니다. 그런 다음 수컷을 방출 장치에 넣고 방출 전에 나오고 성숙할 수 있도록 합니다.

이 비디오에 표시된 기술은 계란 생산 및 남성 생산 분야에 적용할 수 있습니다. 달걀을 얻기 위해 수컷 생산을 위해 지역 도살장에서 나온 동물의 혈액을 사용하여 인공 멤브레인 사료를 사용합니다. 이 공정에 필요한 재료는 돌출된 트레드 패턴이 있는 약 10cm의 생물막과 anin 플레이트입니다.

한쪽에는 약간의 피와 약 250g의 밀알이 채워진 콩 주머니가 있습니다. 플레이트 공급 시스템은 모기가 먹이를 먹도록 장려하기 위해 파라폼을 멤브레인으로 사용합니다. param은 인간의 피부를 강탈당합니다.

그런 다음 매개변수를 조심스럽게 늘려 두께를 줄입니다. 그런 다음 알루미늄 판의 패턴 면은 3면에 파라폼으로 덮여 있으며 파라폼이 손상되지 않도록 주의하고 가장자리를 잘 밀봉합니다. 그런 다음 플레이트와 파라폼의 열린 면을 통해 혈액이 추가됩니다.

먹이통은 약 1/3까지 혈액으로 채워져 있습니다. 그런 다음 혈액이 빠져나가는 것을 방지하기 위해 생물막을 조심스럽게 밀봉합니다. 그런 다음 혈액 공급기 플레이트를 성체 케이지 상단에 놓습니다.

콩 주머니는 전자 레인지에서 10 초 동안 가열하고 접시에 올려 혈액을 가열합니다. 필요한 경우 콩 주머니를 10-15분마다 다시 데울 수 있습니다. FU 위치 부위는 혈액 공급 3일 후에 제공됩니다.

난소 위치 부위는 반쯤 물이 채워진 둥근 플라스틱 용기 안의 여과지입니다. 암컷이 알을 낳을 수 있도록 반대 위치 부위를 성체 케이지에 놓습니다. 이틀 후, 달걀 종이를 제거하고 흡수성 종이에 올려 곤충 조건에서 건조시킵니다.

건조되면 계란을 종이에서 꺼냅니다. 붓을 사용하여 계란이 손상되지 않도록 주의하면서 큰 쟁반에 계란을 부드럽게 솔질합니다. 너무 세게 솔질하면 계란이 체를 통과하여 죽은 곤충과 기타 파편을 제거하여 곰팡이가 생기는 것을 방지합니다.

그리고 계란의 보다 정확한 계수를 위해 무게별로 말린 계란을 1g의 부분 표본으로 설정합니다. 이것은 100, 000 개의 달걀에 해당합니다. 분석 저울을 사용하여 작은 플라스틱 용기에 난자를 곤충 상태로 최대 6주 동안 보관할 수 있습니다.

알을 부화시키기 위해 끓인 물을 넣고 뚜껑을 밀봉하고 식히는 방식으로 항아리를 설정합니다. 이것은 알의 부화를 유도하기 위해 물 속의 산소를 감소시킵니다. 항아리에 계란 1g을 넣고 뚜껑을 다시 밀봉합니다.

1시간 동안 항아리의 내용물을 2리터의 물이 담긴 트레이에 옮기고 하룻밤 동안 그대로 두십시오. 곤충 조건에서. 부화 다음 날, 유충은 트레이에서 200 등급 스테인리스 스틸 체를 통해 시드입니다.

체의 구멍 직경은 약 북쪽 0.075mm입니다. 그런 다음 유충을 2리터 비커에 넣습니다. 그런 다음 비커에 최대 2리터의 물을 채웁니다.

비커를 자석 교반에 놓고 큰 자석 벼룩을 추가합니다. 유충을 적절하게 혼합하도록 교반 속도를 설정하되 너무 빠르지 않도록 하십시오. 이로 인해 손상이 발생할 수 있으므로 품질 관리를 위해 손상을 방지하기 위해 가능한 한 최소한의 시간 동안 유충을 수행해야 합니다.

부화율은 추첨에서 알이 1시간 동안 부화한 후 결정되며, 다음 날에도 3개의 1밀 분취액을 흡수성 스펀지로 흰색 흡수성 종이 조각에 놓습니다. 흡수성 종이 아래에는 계산에 사용되는 사각형 격자가 있습니다. 세 개의 서로 다른 그리드 사각형에서 부화한 알과 부화하지 않은 알의 수를 세십시오.

부화한 알은 쉽게 식별할 수 있습니다. 알 뚜껑이 알 상단에서 누락되어 있기 때문에 약 80-90%의 부화율을 예상할 수 있습니다.밀당 평균 유충 수는 각 트레이에 추가할 물의 양을 계산하는 데 사용됩니다. 트레이당 원하는 수의 유충을 얻으려면 각각 1mil의 부분 표본 3개를 별도의 페트리 접시에 넣으십시오.

더 쉽게 계산할 수 있도록 유충을 분산시키기 위해 10-20mil의 물을 더 추가하십시오. 유충은 외형이 흰색이므로 검은색 배경을 사용하여 유충을 세면 계산이 더 쉬워집니다. 카운터, 피펫 및 꾸준한 손의 사용은 권장되는 기록입니다.

mil 당 유충의 총 수, 적절한 양의 물과 유충은 컵으로 분취됩니다. 비커의 같은 위치에서 유충을 가져 오도록주의하십시오. 매번 유충은 물로 미리 채워진 쟁반에 추가됩니다.

트레이에는 mil당 30마이크로그램의 농도로 해독제 테트라사이클린이 있습니다. 트레이에 있는 유충의 밀도는 성충의 깊이, 표면적 및 크기에 맞게 최적화되어야 합니다. 우리는 최적의 밀도가 mil당 1마리에서 3마리 사이의 유충임을 발견했습니다.

우리는 유충에게 먹이를 주기 위해 플레이크 생선 먹이를 사용합니다. 생선 음식은 믹서기에 으깬다. 일관된 미세 분말을 얻으려면 각 생애 단계에 따라 약간 다른 양의 음식이 필요합니다.

따라서 식단은 매일 최적화되었으며 노동력을 줄이기 위해 트레이당 특정 무게가 사용됩니다. 우리는 필요한 양의 음식을 쉽고 효율적으로 분배하는 부피 측정 스푼을 설계하고 제작했습니다. 수컷 pube는 7일째부터 나타나기 시작하고 8일째에는 약 70%의 수컷이 먹습니다.

암컷은 수컷보다 늦게 태식하지만, 여전히 암컷의 비율이 8일째에 상당히 높습니다. 수컷 Pube의 분류는 8일과 9일에 수행됩니다. 가능한 최대 남성 PPE를 회수하기 위해 트레이의 내용물을 체로 쳐서 접시를 분류할 준비가 된 용기에 넣습니다.

분리기 : 유충과 수컷과 암컷 pube 사이의 형태 학적 및 크기 차이를 사용하여 분리합니다. 기기는 두 개의 평행 유리판으로 구성됩니다. 외부 플레이트는 4개의 조정 나사를 사용하여 앞뒤로 이동할 수 있습니다.

조정 나사를 사용하면 외부 플레이트를 비스듬히 설정할 수 있으므로 아래쪽으로 가늘어지는 플레이트 사이에 쐐기 모양 공간을 형성할 수 있습니다. 플레이트 분리기는 물을 잡기 위해 아래에 용기가 설치되어 있습니다. 트레이의 유충과 삐를 유리판 사이의 판 분리기 상단에 붓습니다.

여성 교황은 남성 교황보다 크며 그들 위에서 분리됩니다. 유충은 수컷 치골보다 얇은 납작한 모양을 가지고 있으며, 물로 씻어내고 각도를 조정하여 더 아래로 분리됩니다 유충과 수컷과 암컷 pube는 지속적인 플러싱 및 플레이트 각도 조정으로 더 분리할 수 있습니다. 하단 조정 나사를 사용하여 유충을 용기로 씻어낼 수 있습니다.

유충이 있는 용기를 제거하고 새 용기를 플레이트 분리기 아래에 놓습니다. 그런 다음 수컷 puy를 새 용기로 씻어낼 수 있습니다. 암컷 puy가 수컷과 함께 흘러 나오지 않도록주의하십시오.

수컷 똥이 든 용기를 제거하고 새 것으로 교체하십시오. 마지막으로 여성 PPE를 새 용기에 넣습니다. 수컷 번데기는 암컷 오염에 대해 품질 관리됩니다.

분류 후 500마리의 수컷 번데기로 구성된 3개의 분취량을 취하고 존재하는 암컷 pube의 수를 현미경으로 카운트다운합니다. 암컷은 생식기 엽 모양을 보고 식별할 수 있습니다. 여성의 생식기는 남성보다 훨씬 작고 둥글다.

1% 여성 이상이 있는 경우 배치를 재정렬하고 다시 확인해야 합니다. 분류된 수컷 번데기는 들판으로 방출되기 전에 나오고 성숙하기 위해 방출 장치에 할당됩니다. 6개월 이상 남성과 여성을 분류한 결과.

Pupi는 암컷의 평균 오염률이 0.02%임을 보여주며, 이 오염률은 매달 400명의 암컷만 방출됨을 나타냅니다. 이 그래프는 6개월 동안의 평균 수컷 및 암컷 번식 데이터를 보여줍니다. 수컷의 번데기는 주로 8일째에, 암컷은 9일째에 번데기가 됩니다.

번데기의 크기는 물 속에 떠 있는 번데기의 사진을 찍고 greico를 저울로 사용하여 측정한 celo 흉부 너비를 사용하여 측정하고 비교했습니다. 수컷은 암컷보다 일관되게 작으며 크기가 거의 겹치지 않아 계란 생산 시설에서 일관된 양육 매개변수가 달성되었음을 보여줍니다. 약 19제곱미터의 면적에서 매주 400만 개 이상의 알이 수컷 생산 지역에서 생산되었습니다.

주당 평균 571,000 마리의 수컷이 생산되었습니다. 알에서 분류된 수컷 번데기까지의 생산 효율성은 약 26%였으며 출현 중에 수컷의 일부 손실이 발생했으며 주당 방출된 총 수컷 수는 평균 543,000마리였습니다.

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