Name: 브라질에서 필드 릴리스에 대 한 유전자 변형 Aedes aegypti의 대량 생산 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-01-04T14:00:00.000+00:00
Duration: 17 min 41 s
Description: 학습하세요 브라질에서 유전자 변형 Aedes aegypti 수컷 모기의 대량 생산 기술을. RIDL® 시스템을 활용한 인공 혈액 급여, 성별 분류, 품질 관리 방법을 통해 질병 매개체 개체군 억제를 위한 고품질 수컷을 생산하는 과정을 탐색하세요.

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우리는 비오파브리카 모스 낙타 브라질, Fundação 데 Amparo 페스키사 두 에스타도 데 상파울루 (FAPESP) 및 콘셀호 나시오날 데센볼비멘토 Científico e Tecnologia (CNPq)에 감사드립니다.  우리는 또한 그들의 도움에 대한 다음 사람들에게 감사드립니다; 미리암 도스 산토스, 길딘 실바, 게실레인 도스 산토스, 파비오 곤살베스, 존 폴 올리베이라, 루이자 가르지라, 호세 카를로스 발렌샤.

곤충 요구 사항
1. 개요
<ol><li>질량 사육에는 여러 단계가 있으며, 각각은 질량 양육 장치의 뚜렷한 영역에서 수행됩니다. 도 1은 사육의 주요 단계와 대량 사육 시설에서 발생하는 위치를 나타낸다.</li>
</ol>2. 곤충에 대한 생물 학적 고려 사항
<ol><li>이 프로젝트는 상파울루 대학의 동물 윤리위원회의 승인을 받았으며 브라질은 필요한 모든 허가와 승인을 받았습니다.</li>
	<li>RIDL 시스템은 조건부 치사성을 사용합니다. 식이 보조제(tetracycline)는 곤충을 대량 사육할 수 있도록 하는 RIDL 시스템의 발현을 방지합니다. 테트라사이클린없이 모기는 죽는다. 테트라사이클린은 야생의 Ae. aegypti의 번식지에서 발견되지 않으므로 탈출자들로부터 생산된 자손은 살아남지 못할 것입니다.  이것은 다른 방법 (즉, 방사선)에 의해 살균 된 야생 유형 (WT) 곤충을 사용하는 데 비해 추가 수준의 보안을추가합니다.</li>
	<li>곤충에 이중 문 입구, "공인 인력 만"표지판과 곤충 화면을 사용합니다. 모든 창문은 WT 곤충으로 식민지의 오염을 방지하고 곤충 내부에서 탈출을 방지하기 위해 밀봉해야합니다.</li>
	<li>현지 규정 및 당국에는 구체적인 추가 또는 대체 요구 사항이 있을 수 있습니다. 초기 단계에서 정보/안내를 위해 관계 당국에 연락하여 곤충에 RIDL 균주를 확립하기 전에 필요한 모든 허가 및 승인을 확보하십시오.</li>
	<li>대량 사육 곤충은 RIDL 사육에만 사용되어야합니다. 다른 균주나 곤충은 존재하지 않아야 합니다. 이것은 RIDL 긴장의 오염 및 적정성과 생존에 영향을 미칠 수 있는 병원체에 오염을 피하기 위한 것입니다, 방출된 수컷의 생산성 그리고 효력을 감소시킵니다.</li>
</ol>3. 곤충 디자인
<ol><li>
그림 2는 브라질에 있는 비오파브리카 모스낙드에서 사용되는 곤충의 계획을 보여줍니다.</li>
	<li>모든 객실의 온도는 26°C ± 2)였으며 상대 습도는 약 70~80% 및 12:12시간 광:어두운 사이클을 사용하여 형광광 스트립을 사용하였다.</li>
	<li>이 청사진은 특정 공간 요구 사항에 따라 수정할 수 있습니다.예: 릴리스의 규모는 전체 크기를 결정합니다. 그러나 계란 생산, 사육 및 정렬, 품질 관리 (QC) 및 릴리스는 네 가지 영역으로 분리되어야한다: 계란 생산 식민지, 릴리스 생성, QC, 릴리스성인 스토리지.</li>
	<li>계란 생산 콜로니 룸 (약 20 m2)은방출 생성을위한 계란을 생산하는 데 사용됩니다.</li>
	<li>품질 관리 영역은 해치 속도, 강아지 숫자, 푸파 크기 측정, 선별 및 제거 여성의 효과 측정을 포함하여 RIDL 라인의 절차와 적합성을 확인하기 위한 실험을 수행하는 곳입니다. 또한 치사를 측정하는 오프셋 분석을 사용하여 형광 마커 및 표현형의 존재를 확인하여 WT 오염에 대한 테스트가 수행됩니다.</li>
	<li>릴리스 생성 실(약 36m2)에는트레이와 애벌레와 푸파의 분류를 위한 적절한 공간이 필요합니다. 트레이는 특수 제작된 알루미늄 랙에 보관되어 있습니다. 사육 및 선별을 위해서는 대형 작업 공간과 싱크대가 필요하며 트레이와 케이지를 세척하려면 다른 대형 싱크대가 필요합니다. 필터 캐치 트랩은 하수구를 통해 살아있는 모기의 탈출을 완화하기 위해 싱크대에서 폐수 콘센트에 포함되어 있습니다.</li>
	<li>트레이에 사용되는 모든 물은 배출구를 통해 폐기되며, 개발 단계에서 곤충의 탈출을 방지하는 메쉬가 들어 있는 구획이 있습니다.</li>
	<li>성인이 출시 전에 성숙하는 동안 릴리스 장치를 보유하기 위해 랙을 포함하는 성인의 저장 영역(릴리스용 성인 보관소, 그림 2)이필요합니다.</li>
</ol>대량 사육 RIDL을 위한 생산 방법:
계란 생산 식민지는 성인을 생산하기 위해 릴리스 생성(그림 1)에사용되는 계란을 생산하고 있습니다. 두 양육 방법에는 많은 유사점이 있지만 몇 가지 뚜렷한 차이점도 있습니다. 두 절차에 대해 동일한 양육 프로세스는 계란 생산 콜로니 섹션에만 설명되어 있습니다.
계란 생산 식민지
4화 라발 프로덕션
계란 생산 식민지는 릴리스 생성을 위한 homozygous OX513A RIDL 계란8을 생성합니다. 고품질 관리는 제공된 계란의 생존가능성, 피트니스 및 변형 무결성을 보장합니다.
<ol><li>부화자극은 낮은 수준의 용존 산소로 물에 잠기는 것입니다. 물의 산소 수준을 줄이기 위해 물을 끓일 때까지 가열하고 즉시 400ml를 500ml 유리 항아리 (74mm 개구부)에 넣고 뚜껑을 단단히 고정하고 실온에서 몇 시간 동안 식힙니다.</li>
	<li>달걀 1 g을 끓인 물 항아리에 넣고 다시 밀봉하고 한 시간 동안 기다립니다. 내용물을 2L의 물이 있는 트레이에 옮기고 곤충 조건에서 하룻밤을 둡니다.</li>
	<li>부화 유충을 알려진 양의 물에 넣고 알리쿼트를 복용하기에 충분한 시간 동안 자기 교반기와 벼룩을 사용하여 저어줍니다. 격렬하게 또는 연장 된 시간 동안 애벌레를 손상시키고 최소한으로 유지해야합니다. 애벌레를 부화하는 데 사용되는 표준 부피는 1 L이지만 300 개 이상의 애벌레 / ml의 밀도는 계산하기 어렵고 손상 될 수 있습니다. 따라서 약 300,000 개의 계란 / L 이상의 물을 부화하지 마십시오.</li>
	<li>3 ml 의 알리쿼트 3 ml를 복용하고 흡수 스폰지 위에 1cm 사각형의 격자와 흡수 용지 시트에 배치하여 해치 속도를 결정하여 여분의 물을 흡수합니다.  부화 계란의 누락 된 모자를 찾아 세 사각형에서 부화와 비 해치 계란의 수를 계산합니다. 해치 비율은 약 80~90%가 예상됩니다.</li>
	<li>각각 1 ml의 4 개의 알리쿼트를 가져 와서 4 개의 검은 무게 보트 (유충은 흰색이므로 검은 배경에 대해 더 쉽게 볼 수 있음)에 넣고 눈으로 존재하는 살아있는 유충의 수를 계산합니다. 카운터를 사용하는 것이 좋습니다. ml 당 유충의 평균 수는 트레이 당 애벌레의 원하는 수를 얻기 위해 각 트레이에 추가 하는 물의 양을 계산 하는 데 사용 됩니다.</li>
	<li>유충이 균주와 종 사이에서 사육 될 수있는 밀도에 큰 차이가있을 수 있습니다. 또한 RIDL 성인 남성 크기를 야생 형 남성에 비교하는 것이 바람직합니다. 이상적으로 당신은 야생 남성과 성공적으로 경쟁 할 수있는 큰 크기의 RIDL 남성과 유사하고 싶습니다. 따라서 각 RIDL 균주에 대해 유충의 이상적인 밀도를 결정해야 하며 사육 및 생산 규모에 대한 공간 제약에 대한 절충안이다. 0.1-2.5 애벌레 /ml에 이르기까지 밀도우리는 생산 출력과 품질의 좋은 조합으로 나타났습니다; 또한 메디치 에 의해 논의23.</li>
	<li>트레이에 애벌레를 넣습니다. 저희 시설에서는 약 53cm x 37cm x 8cm(L x W x H) 및 생산용 유충의 밀도를 달성하기 위해 필요한 양의 물을 측정하는 트레이를 사용합니다.</li>
	<li>1:100 희석시 트레이에 테트라사이클린(3mg/ml)의 스톡 용액을 추가하여 30 μg/ml의 필수 최종 농도를 얻습니다.</li>
	<li>매일 미세 한 분말에 분쇄 된 플레이크 생선 음식<a href="http://www.sera.de">(www.sera.de)으로</a>애벌레를 먹이. 표 1은 하루에 애벌레 당 음식의 mg에 있는 전형적인 먹이 정권을 보여줍니다. 위에서 설명한 곤충 조건하에서 분류하는 적절한 날까지 유충을 먹이세요.</li>
</ol>5. 푸파와 남성/여성 푸파에서 유충 을 분류
<ol><li>부화 후 8일 후에 는 새끼에서 애벌레를 분리하여 파우파에서 유충을 분류한다. 그런 다음 남성용 새끼를 섹스 정렬하십시오. 플레이트분리기(24,25)로 알려진 장치는 수컷 푸파와 암컷 푸파에서 애벌레를 분류할 수 있다. 도 3은 이 플레이트 분리기의 사용을 보여 주며 유충을 남성과 암컷 강아지로부터 분리한다.</li>
	<li>하단에 메쉬가 있는 측정 숟가락을 사용하여 500 pupae 이상으로 보정하고 케이지를 설정하고 생성 된 남성과 여성의 총 양을 추정하는 데 사용합니다.</li>
	<li>분류 첫날(8일째)에 대부분의 강아지는 남성이므로, 분류된 애벌레를 트레이에 다시 넣고 다음 날까지 후면에 놓는다(도4).</li>
	<li>모든 애벌레가 새끼를 당기거나 근로주가 끝날 때까지 2.1-2.3 단계에 설명된 대로 매일 선별 과정을 반복하십시오.</li>
	<li>1,000개의 수컷 푸파(측정 숟가락 사용)를 케이지에 넣고 9일째에는 같은 케이지에 3,000개의 암컷 새끼를 넣습니다(메쉬 탑과 그물 접근 구멍으로 조정된 30cm 높이 및 직경 30cm PVC 파이프를 사용하지만, 30cm x 30cm x 30cm 플라스틱 케이지도 BugDorm에서 사용할 수 있습니다).</li>
	<li>성인이 적어도 2 일 동안 짝짓기를 하고 자당 용액 (10%)을 제공 하도록 허용하십시오. 젖은 면 광고 리비도에 혈액 먹이 전에. 일주일에 두 개의 혈액 공급으로 2 주 동안 계란을 수집 (~두 gonotrophic 주기) 주. 이것은 3,000명의 암컷 (48개의 계란/암컷의 평균)의 케이지에서 평균 143,000개의 계란을 산출합니다. 일주일에 400만 개의 알을 생산하려면 매주 약 28개의 케이지를 설치해야 합니다.</li>
</ol>6. 혈액 먹이주기
<ol><li>알루미늄 플레이트 급지 시스템은 일주일에 두 번 케이지에 혈액을 공급합니다. 파라필름(그림5)이있는 알루미늄 플레이트(10cm x 10cm x 3mm)의 측면에 혈액 포켓이 만들어집니다. 먹이를 장려하기 위해 가열된 콩 백을 플레이트 피더 위에 놓아 혈액을 따뜻하게 합니다. 콩 백은 천 가방에 약 250g의 밀 알갱이로 구성되었으며, 전자레인지에서 약 10초 동안 가열됩니다. 우리가 먹이를 위해 사용하는 혈액은 현지 아바토이르에서 나온 것입니다. 이 동물 (주로 염소와 양)은 병원균의 존재를 피하기 위해 테스트되는 인간의 소비를위한 것입니다.</li>
	<li>혈액 먹이 후 3 일, 그들의 계란을 낳는 여성에 대 한 oviposition 사이트 제공 됩니다. oviposition 사이트는 내부를 덮고 물과 필터 종이약 1/4로 채워진 둥근 플라스틱 용기입니다. 이틀 후 oviposition 사이트가 제거됩니다. 계란 생산을 최대로 하려면 필터 용지가 용기 내부의 사용 가능한 전체 표면을 덮고 젖은 상태로 유지되는지 확인합니다.</li>
	<li>계란 종이를 제거하고 곤충 조건하에서 건조 흡수 성 종이에 배치; 계란은 높은 습도 (70 % 이상)에서 컨디셔닝의 기간을 필요로 적어도 48 시간 후 누워. 달걀은 습도가25도높은 상태로 유지되는 한 해치 율이 최소화되어 최대 3개월 동안 곤충에 남을 수 있다.</li>
	<li>계란 생산 식민지 릴리스 프로그램에 대 한 주간 에 필요한 계란의 수를 제공 하기 위해 충분 한 크기의 필요가. 위에서 설명한 시설은 매주 28개의 케이지가 설치된 약 4백만 개의 알을 생산할 수 있습니다. 방출 생성 및 계란 생산 식민지에 대 한 계란의 적어도 4 주를 보장 하기 위해 저장 하는 충분 한 계란을 유지 하는 것이 좋습니다.</li>
</ol>릴리스 생성
7화 라발 프로덕션
방출 생성을 위한 해칭, 사육 및 정렬 공정은 계란 생산 식민지에 대해 이전에 설명된 방법과 동일합니다. 그러나 생산 규모는 훨씬 더 크며 더 많은 트레이와 더 많은 노력이 필요합니다.
8. 유충, 남성 푸파, 여성 푸파를 분류
<ol><li>애벌레, 남성 강아지 및 암컷 강아지의 정렬은 계란 생산에 대해 설명된 방법과 동일합니다.</li>
	<li>남성 강아지를 정렬 한 후 출시 전에 여성 오염을 확인하는 것이 중요합니다. 1% 이상의 여성이 존재해서는 안됩니다. 500 pupae (3 개의 무작위 강아지 측정 숟가락)의 세 개의 알리쿼트 (3 개의 무작위 강아지 측정 숟가락)를 가져 와서 현재 여성 강아지의 수를 계산합니다. 여성은 일반적으로 남성보다 크고 생식기 엽 모양의 차이로 식별 될 수 있습니다(도 6)27. 1% 이상의 여성이 있는 경우 다시 의지하고 확인해야합니다.</li>
	<li>8일째와 9일째부터 남성만 사용하십시오. 남은 애벌레와 푸파를 오토클레이브하십시오. 브라질에서는 이 폐기물을 의료 폐기물과 동일한 방식으로 처리해야 하지만 다른 국가에서는 규제가 다를 수 있습니다. 품질 관리, 사육 및 오염 위험의 차이, 더 낮은 품질 관리로 인해 계란 생산 식민지에 대한 릴리스 생성에서 여성 강아지와 애벌레를 사용하지 마십시오.</li>
</ol>릴리스를 위한 성인 저장: 출시 전에 등장하고 성숙하기 위해 남성을 릴리스 장치에 배치합니다. 릴리스 장치의 세부 정보는 이 메서드에서 다루지 않습니다. 그러나 우리가 사용하는 릴리스 장치의 용량은 약 1,000 남성입니다. 릴리스 메서드 세부 정보(릴리스 장치 및 릴리스 시스템)는 이 메서드에서 다루지 않습니다.

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<li>Dyck, V., Hendrichs, J., Robinson, A. S., Klassen, W., Curtis, C. History of the Sterile Insect Technique.. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aDyck%2C+V+%22Sterile+Insect+Technique%22">Sterile Insect Technique</a>. , Springer. Netherlands. 3-36 (2005).</li>
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Oxitec에 소속된 저자는 옥시텍(Oxitec Ltd.)과 옥스포드 대학에서 이 논문의 주제와 관련된 지적 재산권을 보유하고 있습니다.

RIDL은 모기3,29-31을제어하는 효과적이고 환경적으로 안전한 방법입니다. 이 기술은 통합 해충 관리 프로그램에 적용되며, 종아리, 번식 부위 감소 및 성인을 포함한 대부분의 현재 제어 방법은이 기술과 호환됩니다. 이 방법은 Ae의 제어에 사용하기 위해 주당 최대 570,000 RIDL 남성 푸파를 생산하는 방법을 설명합니다. Aegypti와 우리의 지식에 이것은이 규모에 형질 전환 모기의 생산의 첫 번째 설명입니다. 1960년대와 70년대25년에야생형 Ae. aegypti를 위해 일부 유사한 생산 시스템이 개발되었지만, 그 이후로 이 규모에는 비교할 만한 생산이 없었습니다. 브라질에서는 2011년 2월부터 2012년 2월까지 약 1,100만 명의 남성이 석방되었습니다. 주어진 지역에 필요한 남성의 수는 야생 인구의 크기, 방출 된 남성의 분산, 출시 후 남성의 생존 및 짝짓기 경쟁력, 환경 조건을 포함한 여러 가지 요인에 따라 달라집니다.  이전 연구는 RIDL적어도 80%9에의해 모기의 인구를 줄일 수 있습니다 나타났습니다.
생산 규모와 수컷의 품질에 대한 대량 양육 을 최적화하는 것 사이에서 균형이 필요합니다. 예를 들어, 애벌레 밀도를 증가하면 필요한 공간, 노동 및 복근 시간을 감소시킴으로써 생산 능력을 증가시킬 수있다(32) 그러나, 유충의 너무 높은 밀도는 짝짓기 용량이 감소된 더 작고 더 짧은 수컷을 초래할 수 있습니다32,33. SIT 프로그램과 관련하여 남성의 질은 궁극적으로 방출 된 남성이 현장에서 여성과 짝짓기 할 수있는 능력에 의해 평가될 것입니다. 야생 대응9,10에비해 짝짓기 경쟁력을 평가하기 위해서는 광범위한 현장 평가가 필요합니다. 이것은 수시로 '고품질' 남성 모기를 만드는 요인을 정확하게 평가하는 것이 비현실적입니다. 그러나 대규모 매스 리어링에서 일관된 생산 및 품질(일상적으로 평가할 수 있는 범위까지)을 유지하는 것이 가장 중요합니다. 이를 위해서는 작은 변동이 발생할 수 있는 모든 프로세스의 높은 수준의 경계와 표준화가 필요합니다. L1 애벌레의 알리쿼팅은 중요한 단계이며 이 점을 보여줍니다. 트레이에 애벌레의 정확한 수를 알리싱하는 것은 좋은 품질의 생산을 위해 필수적이다. 먹이 정권은 정확하게 유충의 특정 수에 맞게 조정된다. 너무 적은 / 많은 애벌레는 애벌레 생존, 강아지의 크기와 새끼에 시간에 영향을 미치는 과잉 / 아래 먹이 귀착될 것입니다. 대량 사육 의 예술에 대한 비밀이있는 경우 생산 주기의 많은 작은 단계가 일관되고 정확하며 높은 수준의 품질 관리를 수행하도록하는 것입니다.

모기는 인간에 있는 질병의 범위를 일으키는 원인이 될 수 있는 많은 병원체를 전송하고 이 모기를 통제하는 것은 수세기 동안 지속적인 전투되었습니다. 화학 적 및 생물학적 방법에 기초한 곤충을 제어하는 전략은 몇 가지 주목할만한 성공을 거두었지만 많은 경우 제어가 장기적으로 지속 가능하지 않았습니다. 예를 들어, 브라질은 50년대에 Ae. aegypti의 박멸을 달성했지만 모기는 지난 40-50 년 동안 재발했습니다. 이는 살충제 저항, 환경 손상, 열악한 제어 프로그램 구현15-20,적절한 모니터링 또는 대응 없이 신속한 재침공 등 많은 원인에 기인할 수 있다.
모기와의 전쟁에서 승리하기 위해 새로운 기술과 방법이 모색되고 있습니다.  분자 기술의 최근 발전은 멸균 곤충 기술 (SIT)1-3을기반으로 모기 제어의 새롭고 혁신적인 방법의 개발을 주도하고있다. RIDL(지배적인 치명적인 곤충을 운반하는 곤충의방출)4로 알려진 대조방법은 SIT를 중심으로 하지만, 유전적 방법을 사용하여 방사선 멸균의 필요성을 제거한다. RIDL 균주는 Ae. aegypti 5-8을포함하여 몇몇 해충 종을 위해 건설되었습니다, Ae. aegypti의 RIDL 균주는 그랜드 케이맨9,10의필드에서 성공적으로 시험되었습니다; 추가 현장 사용은 계획또는 전 세계 다른 국가에서 진행중입니다.  RIDL을 사용하여 모기 인구를 억제하는 것은3,14를양육하는 고품질의 남성 성인의 다수가 필요합니다.
SIT 프로그램의 경우 남성만 방출하는 것이 바람직한 것으로 간주됩니다. 암컷 모기는 질병을 물고 전염시다. 또한, 방출된 멸균 수컷은 방출된 여성에 의해 프로그램 효과를 감소시킴으로써 '산만'할 수 있다. 남성 전용 방출은 조사 된 지중해 과일 파리(21)와큰 필드 실험에서 혼합 성 방출보다 3-5 배 더 효과적인 것으로 나타났다.
RIDL 대량 양육 프로그램에서는 출시를 위해 남성을 생산하는 몇 가지 단계가 있습니다.  첫 번째는 방출 생성에 필요한 계란을 생산하는것이다(도 1). 다음 단계는 새끼 또는 성인에 계란을 양육하는 것입니다, 강아지와 여성 강아지에서 남성 강아지에서 애벌레를 분리. 여성으로부터 남성의 대규모 분리는 질량분류(22)에적합한 특정 생활 단계에서 남녀 간의 차이를 요구한다. Ae. aegypti (및 기타 모기 종)에는 성 분리 기술에 악용 될 수있는 남성과 여성 pupae 사이에 상당한 크기 차이가 있습니다. 정렬 된 RIDL 남성은 pupae 또는 성인11,12로제어 프로그램에서 출시됩니다.
다음은 Ae의 RIDL 균주인 OX513A의 대량 사육 방법을 설명합니다. 아이집트, 출시. 설명된 방법은 제어 프로그램을 위해 계란과 RIDL 수컷의 생산에 필요한 기술을 다룹니다.

<table><tbody><tr><td> &lt;p&gt;Vipan Premium&lt;/p&gt; </td><td>Sera GmbH</td><td>&lt;p&gt;190&lt;/p&gt;</td><td> &lt;p&gt;&lt;a href=&quot;sera vipan 3

sera vipan 3는 모든 종류의 관상어와 무척추동물에게 필수적인 비타민과 미량 원소를 공급하는 고품질의 비타민 보충제입니다.

어류의 건강과 성장에 있어 비타민은 매우 중요한 역할을 하며, 사료의 제조 및 보관 과정에서 시간이 지남에 따라 분해되거나 손실될 수 있습니다. 특히 냉동 사료나 건조 사료를 주식으로 사용하는 경우, 이러한 필수 영양소가 부족해질 위험이 큽니다.

sera vipan 3는 식단에 부족하기 쉬운 비타민과 미량 원소를 보충하여 다음과 같은 효과를 제공합니다:

* 면역 체계 강화 및 질병 저항력 향상
* 성장 촉진 및 대사 과정 최적화
* 색상 강화 및 활력 증진
* 스트레스 완화 및 건강한 발육 지원

사용 방법:
사료에 직접 섞어 급여하십시오. 권장 용량을 준수하여 정기적으로 급여함으로써 어류와 무척추동물의 전반적인 건강 상태를 유지하고 최적화할 수 있습니다.

특징:
* 모든 담수 및 해수어, 무척추동물에 적합
* 흡수율이 높은 고농축 제형
* 사료의 기호성을 해치지 않음&quot;&gt;sera vipan 3

sera vipan 3는 관상어의 건강 증진과 면역력 강화를 위해 특별히 개발된 고품질의 비타민 및 미네랄 보충제입니다.

물고기가 사료를 통해 섭취하는 비타민은 시간이 지남에 따라 분해되거나, 수조 내의 환경적 요인으로 인해 손실될 수 있습니다. 이러한 비타민 결핍은 물고기의 성장 저하, 색상 퇴색, 그리고 면역 체계 약화로 이어져 질병에 취약해지는 원인이 됩니다.

sera vipan 3는 수용성 비타민과 필수 미네랄의 최적화된 조합을 제공하여 다음과 같은 효과를 기대할 수 있습니다:

- 면역 체계 강화 및 질병 예방
- 신진대사 활성화 및 성장 촉진
- 발색 강화 및 건강한 피부/비늘 유지
- 스트레스 회복 및 전반적인 활력 증진

사용 방법:
sera vipan 3는 사료에 섞어 급여하는 방식의 보충제입니다. 제공된 지침에 따라 적절한 양의 제품을 사료에 혼합하여 물고기에게 급여하십시오.

특징:
- 모든 종류의 관상어에 적합
- 흡수가 빠른 고효율 성분 구성
- 사료의 기호성을 유지하면서 영양 성분 보강&lt;/a&gt;&lt;/p&gt; </td></tr><tr><td> &lt;p&gt;테트라사이클린&lt;/p&gt; </td><td>Sigma Aldrich</td><td>&lt;p&gt;T7660&lt;/p&gt;</td><td> &lt;p&gt;&lt;a href=&quot;http://www.sigmaaldrich.com/catalog/ProductDetail.do?D7=0&amp;amp;N5=SEARCH_CONCAT_PNO|BRAND_KEY&amp;amp;N4=T7660|SIGMA&amp;amp;N25=0&amp;amp;QS=ON&amp;amp;F=SPEC&quot;&gt;http://www.sigmaaldrich.com/catalog/ProductDetail.do?D7=0&amp;amp;N5=검색_결합_PNO|브랜드_키&amp;amp;N4=T7660|SIGMA&amp;amp;N25=0&amp;amp;QS=ON&amp;amp;F=SPEC&lt;/a&gt;&lt;/p&gt; </td></tr><tr><td> &lt;p&gt;플레이트 분리 도구&lt;/p&gt; </td><td>J.W. Hock</td><td>&lt;p&gt;5412&lt;/p&gt;</td><td> &lt;p&gt;&lt;a href=&quot;분리기의 사용 지침서입니다.

분리기(Separator)는 상층액(supernatant)으로부터 펠릿(pellet)을 분리하기 위해 사용됩니다.

분리기의 사용 방법은 다음과 같습니다.

1. 분리기를 튜브의 상단에 위치시키고, 펠릿이 튜브의 바닥에 위치하도록 튜브를 고정합니다.
2. 튜브의 캡을 엽니다.
3. 분리기를 천천히 튜브 안으로 내려 상층액을 빨아들입니다.
4. 상층액을 다른 용기에 옮깁니다.
5. 분리기를 튜브에서 조심스럽게 꺼냅니다.

분리기를 사용한 후에는 다음 방법으로 세척하십시오.

1. 분리기를 세제와 물을 사용하여 세척합니다.
2. 증류수로 헹굽니다.
3. 공기 중에서 건조시킵니다.&quot;&gt;**5412 분리기(Separator) 사용 설명서**

**제품 개요**
5412 분리기는 혼합물에서 특정 성분을 효율적으로 분리하도록 설계된 정밀 기기입니다. 본 장비는 연구 및 산업 환경에서 높은 재현성과 정확성을 제공하여 분석 및 공정 효율을 최적화합니다.

**안전 지침**
본 장비를 작동하기 전, 다음 안전 수칙을 반드시 숙지하십시오.
* **전기 안전:** 전원 공급 장치가 장비의 전압 요구 사항과 일치하는지 확인하십시오. 젖은 손으로 전원 스위치나 케이블을 만지지 마십시오.
* **개인 보호 장구(PPE):** 시료 처리 시 적절한 실험복, 보호 장갑 및 보안경을 착용하십시오.
* **화학적 호환성:** 분리기에 사용하는 모든 용매 및 시료가 장비의 재질과 화학적으로 호환되는지 확인하십시오. 부적절한 화학 물질 사용 시 장비 손상 및 누출이 발생할 수 있습니다.
* **압력 주의:** 고압 시스템을 사용하는 경우, 압력이 완전히 제거되기 전까지는 연결 부위를 분리하지 마십시오.

**장치 구성 및 부품**
* **유입구(Inlet):** 시료 혼합물이 유입되는 지점입니다.
* **분리 챔버(Separation Chamber):** 실제 분리 공정이 일어나는 핵심 구역입니다.
* **제어 패널(Control Panel):** 유속, 온도 및 압력을 조절하는 인터페이스입니다.
* **배출구(Outlets):** 분리된 각 성분이 각각 배출되는 포트입니다.
* **필터 유닛(Filter Unit):** 불순물을 제거하여 시스템 내부의 오염을 방지합니다.

**작동 절차**
1. **준비 단계:** 장비의 모든 연결 부위가 견고하게 고정되었는지 확인하고, 전원을 켭니다.
2. **시스템 설정:** 제어 패널을 사용하여 해당 프로토콜에 맞는 온도와 압력 매개변수를 설정합니다.
3. **시료 주입:** 유입구를 통해 시료를 천천히 주입합니다. 이때 기포가 유입되지 않도록 주의하십시오.
4. **분리 공정:** 설정된 조건 하에 분리가 진행됩니다. 제어 패널의 모니터를 통해 실시간으로 상태를 확인하십시오.
5. **회수:** 분리된 성분이 각 배출구를 통해 지정된 수집 용기에 담기도록 합니다.

**유지보수 및 세척**
* **정기 세척:** 사용 후에는 적절한 세척 용매를 사용하여 시스템 내부의 잔류물을 완전히 제거하십시오.
* **소모품 교체:** 필터 및 씰(seal)은 마모될 수 있으므로, 권장 교체 주기 또는 성능 저하 징후가 보일 때 즉시 교체하십시오.
* **보관:** 장기간 사용하지 않을 때는 시스템을 완전히 건조시킨 후 먼지가 유입되지 않도록 덮개를 씌워 보관하십시오.

**문제 해결(Troubleshooting)**
* **유속 저하:** 필터가 막혔는지 확인하거나 라인의 누출 여부를 점검하십시오.
* **분리 효율 감소:** 설정 온도가 정확한지 확인하고, 분리 매질의 상태를 점검하십시오.
* **전원 불량:** 전원 케이블 연결 상태 및 퓨즈 단락 여부를 확인하십시오.

**기술 사양**
* **운영 온도 범위:** [해당 값 삽입]
* **최대 작동 압력:** [해당 값 삽입]
* **처리 용량:** [해당 값 삽입]
* **전원 요구 사항:** [해당 값 삽입]&lt;/a&gt;&lt;/p&gt; </td></tr><tr><td> &lt;p&gt;Parafilm M&lt;/p&gt; </td><td>Pechiney 플라스틱 충전물</td><td>&lt;p&gt;PM-996&lt;/p&gt;</td><td> &lt;p&gt;&lt;a href=&quot;http://www.parafilm.com&quot;&gt;www.parafilm.com&lt;/a&gt;&lt;/p&gt; </td></tr><tr><td> &lt;p&gt;방사 세대용 사육 팬 (53 cm x 38 cm x 8 cm)&lt;/p&gt; </td><td>플라이온</td><td>&lt;p&gt;0757&lt;/p&gt;</td><td> &lt;p&gt;&lt;a href=&quot;제공해주신 링크는 외부 웹사이트(Pleion)의 제품 페이지입니다. 번역할 소스 텍스트를 제공해주시면, 요청하신 지침에 따라 연구자, 임상의, 교육자 및 대학생을 위한 전문적인 학술 한국어로 정밀하게 번역해 드리겠습니다.&quot;&gt;제공된 링크의 내용을 한국어로 번역합니다:

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**Pleion**은 정밀 의료 및 진단 솔루션 분야의 선도 기업으로서, 최고 수준의 품질과 신뢰성을 보장하는 광범위한 제품 포트폴리오를 제공합니다. 당사는 최신 기술과 엄격한 품질 관리 기준을 결합하여 연구자와 임상의가 최적의 결과를 얻을 수 있도록 지원합니다.

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상세 제품 목록 및 사양 확인, 또는 견적 요청을 원하시면 당사 영업팀으로 문의하시기 바랍니다.&lt;/a&gt;&lt;/p&gt; </td></tr><tr><td> &lt;p&gt;형광 현미경&lt;/p&gt; </td><td>Leica Microsystems</td><td>&lt;p&gt;MZ FLIII&lt;/p&gt; &lt;p&gt;&lt;/p&gt;</td><td> &lt;p&gt;&lt;a href=&quot;**Leica MZ FL III**
**형광 현미경 시스템**

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Leica MZ FL III는 정밀한 광학 설계와 유연한 구성을 통해 세포 및 조직 연구에 최적화된 고성능 형광 현미경 시스템입니다. 이 시스템은 생물학적 샘플의 미세 구조를 높은 대비와 선명도로 관찰할 수 있도록 설계되었으며, 연구자의 필요에 따라 다양한 모듈형 옵션을 제공합니다.

**주요 특징 및 장점**

* **탁월한 광학 성능:** 고품질의 대물렌즈와 정밀하게 보정된 광학계를 통해 구면 수차를 최소화하고 이미지의 해상도를 극대화하였습니다.
* **효율적인 형광 필터 큐브:** 신속하고 정확한 필터 교체가 가능한 시스템을 통해 다양한 형광 표지자를 효율적으로 관찰할 수 있습니다.
* **강력한 조명 시스템:** 균일한 광분포를 제공하는 광원을 통해 배경 노이즈를 줄이고 신호 대 잡음비(S/N비)를 향상시켜 희미한 형광 신호도 명확하게 포착합니다.
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**주요 응용 분야**

* **세포 생물학:** 세포 내 소기관의 분포, 단백질 국소화 및 세포 간 상호작용 분석.
* **조직학 및 병리학:** 조직 절편 내의 특정 항원 발현 확인 및 구조적 변화 관찰.
* **발생 생물학:** 배아 발달 과정에서의 유전자 발현 패턴 및 세포 이동 추적.
* **약물 스크리닝:** 약물 투여에 따른 세포 내 반응 및 생존율 변화의 형광 이미지 분석.

**시스템 구성 요소**

* **현미경 본체:** 견고한 프레임과 정밀한 스테이지 이동 제어 장치.
* **대물렌즈 세트:** 다양한 배율과 개구수(NA)를 갖춘 Plan Apo 렌즈 옵션.
* **형광 광학 유닛:** 특정 파장대의 여기광과 방출광을 선택하는 고효율 필터 세트.
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* **이미징 소프트웨어:** 이미지 획득, 처리 및 정량적 분석을 위한 전용 소프트웨어 솔루션.

Leica MZ FL III는 최첨단 광학 기술과 사용자 중심의 설계를 결합하여, 복잡한 생물학적 샘플의 시각화 과정에서 신뢰할 수 있는 결과와 최상의 편의성을 제공합니다.&quot;&gt;라이카 마이크로시스템즈(Leica Microsystems)
STELLARIS
공초점 현미경의 새로운 시대

완벽함 그 이상의 성능. STELLARIS는 라이카 마이크로시스템즈의 최신 기술력을 결집하여, 사용자에게 유연한 구성과 강력한 성능, 그리고 직관적인 조작성을 제공함으로써 생물학적 연구의 한계를 넓힙니다.

핵심 특징 및 이점:

단일 빔 경로 설계:
단일 레이저 빔 경로를 통한 최적화된 광학 설계를 통해 신호 손실을 최소화하고 이미지 품질을 극대화했습니다.

지능형 스캔 제어:
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최신 세대의 GaAsP 검출기를 탑재하여 극소량의 형광 신호도 정밀하게 포착함으로써, 더 낮은 레이저 출력으로도 고해상도 이미지를 얻을 수 있습니다.

사용자 중심의 인터페이스:
복잡한 설정 과정을 간소화한 소프트웨어를 통해, 초보자부터 전문가까지 누구나 쉽고 빠르게 최적의 이미징 조건을 설정할 수 있습니다.

확장 가능한 모듈형 구조:
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연구실 및 산업 현장에서 사용되는 원심분리기는 밀도 차이를 이용하여 혼합물에서 입자를 분리하거나 액체 성분을 분리하는 데 필수적인 장비입니다. 저희는 다양한 응용 분야와 요구 사항에 맞춘 고성능 원심분리기 제품군을 제공합니다.

제품 라인업:

- 마이크로원심분리기 (Microcentrifuges): 소량의 샘플(마이크로 튜브)을 빠르게 분리해야 하는 분자 생물학 및 생화학 실험에 최적화되어 있습니다.
- 냉장 원심분리기 (Refrigerated Centrifuges): 온도에 민감한 샘플의 안정성을 유지하기 위해 정밀한 온도 제어 기능을 갖추고 있습니다.
- 고속 원심분리기 (High-Speed Centrifuges): 높은 원심력을 통해 미세 입자나 세포 소기관을 효율적으로 침전시킵니다.
- 저속/대용량 원심분리기 (Low-Speed/Large Capacity Centrifuges): 대량의 샘플이나 큰 용기를 사용하여 거친 분리 공정을 수행할 때 사용합니다.

주요 특징:

- 정밀한 속도 및 시간 설정 기능
- 다양한 로터(Rotor) 옵션 제공 (고정각 로터 및 스윙 버킷 로터)
- 사용자 안전을 위한 도어 잠금 장치 및 불균형 감지 시스템
- 내구성이 뛰어난 소재 및 소음 저감 설계
- 직관적인 디지털 인터페이스

응용 분야:

- 혈청 및 혈장 분리
- 세포 배양 및 수확
- DNA/RNA 추출 및 정제
- 단백질 분리 및 분석
- 화학 물질 및 나노 입자 정제

귀하의 연구 목적에 가장 적합한 모델을 선택하시려면 상세 사양을 확인하시거나 당사 전문가에게 문의하시기 바랍니다.&lt;/a&gt;&lt;/p&gt; </td></tr></tbody></table>

브라질에서 필드 릴리스에 대 한 유전자 변형 aedes aegypti의 대량 생산

Mass Production of Genetically Modified Aedes aegypti for Field Releases in Brazil

모기와의 전쟁에서 승리하기 위해 새로운 기술과 방법이 모색되고 있습니다. 분자 기술의 최근 발전은 멸균 곤충 기술 (SIT)1-3을기반으로 모기 제어의 새롭고 혁신적인 방법의 개발을 주도하고있다. RIDL(지배적인 치명적인 것을 운반하는 곤충의 방출)4로알려진 대조군 방법은 SIT를 중심으로 하지만, 유전적 방법을 사용하여 방사선 멸균5-8의필요성을 제거한다. Ae. aegypti의 RIDL 균주는 그랜드 케이맨9,10의필드에서 성공적으로 테스트되었습니다. 추가 현장 사용은 계획또는 전 세계 다른 국가에서 진행중입니다.
곤충의 대량 사육은 여러 곤충 종과 일주일에 수십억 의 수준에 설립되었습니다. 그러나, 모기에서, 양육은 일반적으로 1970 년대와 80 년대에 수행되는 대부분의 대규모 양육과 함께, 훨씬 작은 규모로 수행되었습니다. RIDL 프로그램의 경우 질병을 물고 전염시킬 때 가능한 한 적은 여성을 방출하는 것이 바람직합니다. 대량 양육 프로그램에서 출시 될 수 있는 남성을 생산 하는 몇 가지 단계가 있다: 계란 생산, 새끼까지 계란을 양육, 다음 출시 하기 전에 여성에서 남성을 정렬. 이 남성은 다음 RIDL 제어 프로그램에 사용됩니다, 푸파 또는 성인으로 출시11,12.
RIDL을 사용하여 모기 인구를 억제하기 위해 많은 수의 고품질 남성 성인을 양육해야13,14. 다음은 Ox513A의 대량 사육 방법을 설명하며, Ae. aegypti 8의RIDL 균주인 OX513A를 방출하고 제어 프로그램에대한 계란 및 대량 사육 RIDL 수컷의 생산에 필요한 기술을 다룹니다.

생산에 대한 예상 새끼 결과는 그림 4에표시됩니다. 수컷은 먼저 강아지, 8 일째에 피크와 여성은 부화 후 9 일에 피크. 여성에서 남성을 정렬하는 가장 좋은 시간을 알고이 새끼 곡선을 측정하는 것이 중요합니다.
6개월 이상 남성과 여성 강아지를 선별한 결과, 여성 오염이 평균 0.02%임을나타낸다(그림 5; SEM = 0.004%). 이 오염율은 릴리스 의 한 달 동안 발표 된 단지 400 여성을 나타냅니다 (약 2 백만 남성). 현재 주당 계란 생산량은 4백만 개입니다. 이 중 350만 명이 달걀 식민지와 생산을 위해 부화되고 나머지는 백업용으로 저장됩니다. 계란의 약 11%는 계란 생산 식민지에 사용되며 방출 생성을 위해 나머지는 사용됩니다. 달걀 해치 비율은 평균 87.3 %(SEM = 0.5%) L1 애벌레에서 수컷 푸파의 수율은 평균 29.5%(SEM = 1.2)이다. 약 571,000마리의 수컷 푸파(SEM = 14,000)를 생산하는 릴리스 생성 식민지를 위해 매주 2백만 개의 유충이 사육됩니다. 출현 및 방출 기간 동안 Pupae및 성인 사망률은 평균 5%, 주당 약 543,000 (SEM = 13,000)이 방출됩니다. 현재 주당 400만 개의 계란 생산량이 ~300만 달러로 줄어들 것으로 예상되며, 낭비및 저장손실의 손실을 줄이기 위해 추가최적화가 이루어질 것으로 예상됩니다. 설명된 생산에 총 6명의 직원이 필요합니다. 4 릴리스 생성에 작업 하 고 계란 식민지에 나머지 두.

품질 관리

품질 관리는 성인의 품질, 양육의 효율성, 인건비 및 비용을 유지하는 데 필수적입니다. 

트랜스진 표현형 제어
RIDL 유전자 발현을 확인하기 위해 두 가지 대조군이 수행되고, 먼저 형광 마커의 발현을 확인하고 둘째로 테트라사이클린이 없는 경우 RIDL 치사성 특성의 발현을 확인한다. 모든 애벌레는 형광 마커를 표현해야합니다. 형광 마커가 예상대로 표현되고 있는지 확인하기 위해, 2,000 최초의 인스타 애벌레는 DsRed2 필터 (텍사스 레드)와 라이카 MZFLIII 스테레오 현미경으로 검사되어 불형인 개인이 존재하는지 확인합니다. tetracycline 없이 RIDL 유전자는 발현되고 우리는성인8에게3-4% 생존을 기대합니다. 이를 확인하려면 테트라사이클린 없이 각 릴리스 배치에 대해 추가 트레이가 설정됩니다. 정상적인 양육에 대한 유일한 차이점은 죽은 유충으로 인한 과잉 식품의 축적이 과도한 세균 성장을 초래할 수 있기 때문에 6 일째부터 음식이 2/3 감소한다는 것입니다.

후방 제어
릴리스 생성에서 4개의 트레이를 무작위로 선택하여 별도로 정렬하고 계산합니다. 남성과 여성 강아지의 수는 매일 각 트레이에서 기록됩니다(그림 4). 남성과 여성의 예상 된 수에서 어떤 편차는 생산 및/또는 피트 니스에 영향을 미칠 수 있는 잠재적인 문제를 나타냅니다 및 문제의 원인을 결정 하는 데 도움이 계란 식민지에 비교될 수 있습니다.

푸파 측정
푸파 사이즈는 성인 사이즈28과상관관계가 있는 것으로 나타났다. 성인 크기에 대한 품질 관리로서 세팔로포락스 폭은 릴리스 생성으로부터 각 선별 일에 대해 적어도 30개의 수컷 푸파로 측정됩니다. 계란 생산 식민지 암컷 푸파에 대한 또한 측정된다. 평균 세팔로토락스 폭은 방출된 수컷의 경우 1.05mm(SEM 0.005)이고 1.04mm(SEM = 0.006) 및 1.29mm(SEM = 0.006) 각각 남성과 여성의 계란 생산, 콜로니; Ae. albopictus 질량 사육24에대해 유사한 결과를 얻었다.
<img alt="Figure 1" fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/3579/3579fig1highres.jpg" src="/files/ftp_upload/3579/3579fig1.jpg"> 그림 1. RIDL/SIT 프로그램에서 사용하기 위해 모기를 대량 사육하는 단계. 계란 생산 식민지는 방출 생성에 공급 된 계란의 품질을 보장하기 위해 품질 관리의 높은 수준을 가지고있다.  계란은 수컷이 암컷에게서 분류되는 방출 식민지에 있는 pupae를 통해 사육됩니다.  남성 성인은 RIDL 제어 프로그램에 사용됩니다.
<img alt="Figure 2" fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/3579/3579fig2highres.jpg" src="/files/ftp_upload/3579/3579fig2.jpg"> 그림 2. 릴리스 프로그램에 대한 RIDL 남성의 생산을위한 양육 시설의 회로도. 고품질 계란은 계란 생산 식민지 방에서 지속적으로 생산되고 릴리스 생성 룸에서 푸파에 사육됩니다. 애벌레와 강아지는 다음 분리하 고 새끼 는 남성에 대 한 섹스 정렬. 수컷은 다음 릴리스 장치에 배치하고 성인 저장 및 릴리스 룸에서 출시 성인에게 성숙 할 수 있습니다. 
<img alt="Figure 3" fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/3579/3579fig3highres.jpg" src="/files/ftp_upload/3579/3579fig3.jpg"> 그림 3. 접시분리기(26)를사용하여 애벌레, 수컷 푸파 및 암컷 푸파를 분리한다.  플레이트 분리기는 유충, 남성 강아지 및 여성 강아지의 크기 차이를 사용하여 이 세 가지 다른 삶의 단계를 정렬합니다. 애벌레는 차례로 여성 강아지보다 작은 남성 pupae보다 작은 경향이있다.  계측기는 두 개의 유리 판을 포함한다. 하나는 비스듬한 금속 프레임에 고정되고 다른 하나는 첫 번째 플레이트 의 상단에 앉아 있으며 4 개의 조정 나사(A)를사용하여 첫 번째 플레이트를 기준으로 이동할 수 있습니다.  4개의 조정 나사를 사용하면 외부 플레이트를 백 플레이트에 비스듬히 설정하여 플레이트 사이에 쐐기 모양의 공간이 형성되어 아래쪽으로 가늘어질 수 있습니다.  애벌레와 푸파는 유리 판(B)사이에 부어 물 호스(C)를사용하여 부드럽게 세척된다.  플레이트의 각도를 조절함으로써 애벌레, 수컷 푸파 및 암컷 푸파를 분리할 수있다(D).  연속 홍조와 플레이트 각도를 증가하면 애벌레가 먼저 (체로) 플러시 될 수 있으며 수컷 강아지와 마지막으로 여성 강아지가 뒤따릅니다. 
<img alt="Figure 4" fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/3579/3579fig4highres.jpg" src="/files/ftp_upload/3579/3579fig4.jpg"> 그림 4. 대량 사육 RIDL Ae. aegypti에대한 새끼 곡선 .  이 그래프는 주당 회복된 ~135,000 pupae와 함께 23주 동안 대량 사육 된 RIDL 남성과 여성 강아지의 평균 백분율 강아지를 보여줍니다.  오류 막대 = 평균의 표준 오류, n = 23. 첫 번째 컬렉션(8일차)에서는 5일 동안 트레이에서 회수한 총 새끼에서 평균 59%, 암컷 새끼를 30% 회수했습니다. 
<img alt="Figure 5" fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/3579/3579fig5highres.jpg" src="/files/ftp_upload/3579/3579fig5.jpg"> 그림 5. 선별 된 남성 강아지의 평균 여성 오염. 이 그래프는 6개월 동안 부화한 후 8일째 남성 분류 중 월평균 여성 오염률을 보여줍니다. 
<img alt="Figure 6" fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/3579/3579fig6highres.jpg" src="/files/ftp_upload/3579/3579fig6.jpg"> 그림 6. 알루미늄 플레이트 혈액 피더 시스템. 플레이트(B)는파라필름(A)으로 덮여 있고, 혈액은 주머니에 들어간 다음 밀봉(D)한다. 플레이트는 케이지에 놓고 따뜻한 콩백(C)을위에 올려 놓아 가열합니다(E). 
<img alt="Figure 7" fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/3579/3579fig7highres.jpg" src="/files/ftp_upload/3579/3579fig7.jpg"> 그림 7. 구별 남성과 여성 Ae. aegypti pupae. Ae. aegypti pupae는 생식기 엽 모양의 차이에 의해 안정적으로 성별 될 수 있습니다 (패들 바로 아래 pupal 복부 세그먼트의 끝에). 또한, 남성은 또한 여성 보다 작은 경향이 있다.   
<img alt="Table 1" fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/3579/3579table1highres.jpg" src="/files/ftp_upload/3579/3579table1.jpg"> 표 1.  Ae. aegypti RIDL 애벌레 (하루에 애벌레 당 음식의 mg)에 대한 일반 먹이 정권. 트레이당 총 유충 수를 곱하여 필요한 실제 음식의 양을 계산합니다.

RIDL ®(지배적인 치명적인 곤충을 운반하는 곤충의 방출) 시스템을 사용하여 Aedes aegypti의 인구 억제를 달성하기 위해 많은 수컷 모기를 풀어야 합니다. 이를 위해서는 대량 사육 기술과 기술을 사용하여 고품질의 남성 모기의 최대 수를 얻기 위해 신뢰할 수 있는 시스템을 제공해야 합니다.

브라질에서 필드 릴리스에 대 한 유전자 변형 Aedes aegypti의 대량 생산

모기와의 전쟁에서 승리하기 위해 새로운 기술과 방법들이 모색되고 있습니다. 최근 분자 생물학적 기술의 발전은 ...

Aegypti의 제어는 후손을 죽게 만드는 유전자 변형을 가진 곤충을 사용하여 달성할 수 있습니다. 수컷을 방사하면 이들이 암컷과 교미하며, 이러한 교미를 통해 생성된 후손은 죽게 됩니다. 유전적으로 불임인 수컷을 지속적으로 방사함으로써 개체군 조절이 가능합니다.사망을 유발하는 유전자는 식단에 해독제를 추가함으로써 제어할 수 있으며, 이를 통해 유전자 변형된 곤충이 생존할 수 있게 됩니다. aegypti의 개체군 억제를 달성하기 위해서는 유전자 변형 모기 라인을 사용하여 다수의 수컷 모기를 방출해야 합니다.이를 위해서는 가능한 한 가장 높은 품질과 적응도를 가진 수컷 모기를 최대 수로 확보하기 위한 대량 사육 기술의 사용이 필요합니다. OX 5 1 3 A의 대량 사육은 알 생산, 수컷 생산, 그리고 방사 전 수컷의 우화 및 성숙이라는 세 가지 주요 영역으로 나눌 수 있습니다. 이것은 OX 5 1 3 A 생산에 사용되는 사육 시설의 도식도입니다. 브라질 Moscamed의 수컷 생산 시설에서는 알 생산 군집실에서 고품질의 알이 지속적으로 생산됩니다.이 알들은 수컷 생산 구역에서 번데기 단계까지 사육되며, 이후 번데기의 성별을 분류합니다. 수컷의 경우, 품질 관리 작업을 위한 전용 구역이 제공됩니다. 그 후 수컷들을 방사 장치에 넣고, 방사 전까지 우화하여 성숙하도록 합니다.이 영상에서 보여주는 기술은 난자 생산 및 정자 생산 영역에 적용 가능합니다. 정자 생산을 위한 난자를 얻기 위해, 지역 도축장에서 얻은 동물 혈액을 이용한 인공 막 공급법을 사용합니다. 이 과정에 필요한 재료는 바이오필름과 돌출된 트레드 패턴이 있는 약 10 cm² 크기의 아닌 플레이트(anin plate)입니다.한쪽에는 소량의 혈액과 약 250 g의 밀알로 채워진 빈백이 있습니다. 플레이트 급이 시스템은 모기가 원활하게 흡혈할 수 있도록 파라폼을 막으로 사용하여 급이를 유도합니다. 파라폼은 사람의 피부 위에 씌워집니다.그 다음 파라필름(paraform)을 조심스럽게 늘려 두께를 줄입니다. 알루미늄 플레이트의 패턴 면의 세 면을 파라필름으로 덮으며, 이때 파라필름이 손상되지 않도록 주의하고 가장자리를 잘 밀봉합니다. 그런 다음 플레이트와 파라필름의 열려 있는 면을 통해 혈액을 주입합니다.피더의 약 3분의 1까지 혈액을 채웁니다. 그다음 혈액이 새어 나가는 것을 방지하기 위해 바이오필름을 조심스럽게 밀봉하여 고정합니다. 이렇게 준비된 혈액 피더 플레이트를 성충 케이지 상단에 배치합니다.콩주머니를 전자레인지에서 10초 동안 가열한 후, 혈액을 데우기 위해 플레이트 위에 놓습니다. 필요한 경우, 10~15분마다 콩주머니를 다시 가열할 수 있습니다. 흡혈 3일 후에 FU 위치 사이트가 제공됩니다.난소 산란지는 물이 절반 정도 채워진 원형 플라스틱 용기 안의 거름종이입니다. 암컷이 알을 낳을 수 있도록 산란지를 성충 케이지 안에 넣습니다. 이틀 후, 알이 낳아진 종이를 꺼내 흡수지에 올려놓고 곤충 사육 조건하에서 건조시킵니다.알이 마르면 종이에서 제거합니다. 붓을 사용하여 알이 손상되지 않도록 주의하며 조심스럽게 큰 트레이로 옮깁니다. 너무 세게 쓸지 않도록 주의하며, 알을 체에 걸러 죽은 곤충과 기타 이물질을 제거함으로써 곰팡이 발생을 방지합니다.무게를 통한 더욱 정확한 알 계수를 위해, 건조된 알을 1g씩 소분합니다. 이는 알 100,000개에 해당합니다. 분석 저울을 사용하여 작은 플라스틱 용기에 담아, 이 용기들을 곤충 사육실 조건에서 최대 6주 동안 보관할 수 있습니다.알을 부화시키기 위해, 끓인 물을 넣고 뚜껑을 밀봉하여 식힘으로써 병을 준비합니다. 이는 물속의 산소 농도를 낮추어 알의 부화를 유도하기 위함입니다. 1 g의 알을 병에 넣고 뚜껑을 다시 밀봉합니다.병의 내용물을 2L의 물이 담긴 트레이로 옮겨 1시간 동안 둔 후, 곤충 사육실 조건에서 하룻밤 동안 방치합니다. 부화 다음 날, 200메시 스테인리스 스틸 체를 이용해 트레이에서 유충을 걸러냅니다.체에 있는 구멍의 지름은 약 0.075 millimeters입니다. 그 후 유충을 2 liter 비커에 넣습니다. 그런 다음 비커의 2 liter 표시선까지 물을 채웁니다.비커를 마그네틱 교반기 위에 놓고 커다란 마그네틱 바를 넣습니다. 유충이 적절히 혼합될 수 있도록 교반 속도를 설정하되, 너무 빠르게 설정하지 마십시오. 과도한 교반은 손상을 유발할 수 있으므로, 품질 관리를 위해 손상을 방지하려면 유충 교반은 가능한 최소한의 시간 동안 수행해야 합니다.부화율은 알을 draw에서 1시간 동안 부화시킨 후 결정하며, 다음 날에도 동일하게 측정합니다. 세 개의 1 mil 분주액을 흡수성 스펀지가 포함된 흰색 흡수지 위에 올립니다. 흡수지 아래에는 계수를 위해 사용되는 격자무늬 사각형이 있습니다. 서로 다른 세 개의 격자 사각형에서 부화한 알과 부화하지 않은 알의 수를 측정합니다.부화한 알은 쉽게 식별할 수 있습니다. 알 윗부분의 알 껍데기 캡이 사라지므로, 부화율은 약 80에서 90% 정도로 예상됩니다. 1ml당 평균 유충 수를 사용하여 각 트레이에 추가할 물의 부피를 계산합니다. 트레이당 원하는 유충 수를 얻으려면, 1ml씩 세 개의 분주액을 취해 각각 별도의 페트리 접시에 넣으십시오.더 쉬운 계수를 위해 물 10~20 mL를 추가하여 유충을 분산시킵니다. 유충의 외형이 흰색이므로 검은색 배경을 사용하여 계수하면 더 수월합니다. 기록 시에는 카운터, 피펫을 사용하고 손을 안정적으로 유지하는 것이 권장됩니다.1,000마리당 유충의 총 수를 계산한 후, 적절한 부피의 물과 유충을 컵에 분주합니다. 매번 비커의 동일한 위치에서 유충을 취하도록 주의하십시오. 그 후, 미리 물을 채워둔 트레이에 유충을 추가합니다.트레이에는 30 µg/mL 농도의 해독제 tetracycline이 들어 있습니다. 트레이 내 유충의 밀도는 깊이, 표면적 및 성체의 크기에 따라 최적화해야 합니다. 분석 결과, 최적 밀도는 mL당 1~3마리의 유충인 것으로 나타났습니다.유어 먹이 공급을 위해 플레이크 형태의 물고기 사료를 사용합니다. 물고기 사료는 블렌더로 분쇄합니다. 일관된 고운 분말 형태를 얻기 위해, 각 성장 단계별로 약간씩 다른 양의 사료가 필요합니다.따라서 각 날짜에 맞춰 식단이 최적화되었으며, 노동력을 줄이기 위해 트레이당 특정 중량이 사용됩니다. 필요한 양의 먹이를 쉽고 효율적으로 배분할 수 있도록 부피 측정용 스푼을 설계 및 제작하였습니다. 7일째부터 수컷의 음모가 나타나기 시작하며, 8일째가 되면 수컷의 약 70%가 발정기에 도달합니다.암컷은 수컷보다 늦게 변태하지만, 8일째에도 여전히 상당한 비율의 암컷이 존재합니다. 수컷 Pube의 선별은 8일과 9일에 수행됩니다. 가능한 최대 수의 수컷 PPE를 회수하기 위해, 트레이의 내용물을 체로 걸러 선별 준비가 된 저그에 담습니다.분리기는 유충과 수컷 및 암컷 성충 사이의 형태학적 및 크기 차이를 이용하여 이들을 분리합니다. 이 장치는 두 개의 평행한 유리판으로 구성되어 있습니다. 외부 플레이트는 4개의 조절 나사를 사용하여 앞뒤로 이동시킬 수 있습니다.조정 나사를 통해 외부 플레이트를 각지게 설정할 수 있으며, 이를 통해 플레이트 사이에 아래로 갈수록 좁아지는 쐐기 모양의 공간을 형성할 수 있습니다. 플레이트 분리기는 물을 받기 위해 하단에 컨테이너를 배치하여 설치합니다. 트레이에 담긴 유충과 피피(peepee)를 유리 플레이트 사이의 플레이트 분리기 상단으로 붓습니다.암컷 pube는 수컷 pube보다 크기가 더 크며, 상단에서 분리됩니다. 유충은 수컷 pube보다 더 얇고 납작한 형태를 띠며, 물로 세척하고 각도를 조절하여 더 아래쪽에서 분리할 수 있습니다. 지속적인 세척과 플레이트 각도 조절을 통해 유충과 수컷 및 암컷 pube를 더욱 세밀하게 분리할 수 있습니다. 하단 조절 나사를 사용하여 유충을 컨테이너로 씻어 내릴 수 있습니다.유충이 들어 있는 용기를 제거한 후, 플레이트 분리대 아래에 새 용기를 놓습니다. 그런 다음 수컷 puy를 새 용기로 씻어 내립니다. 이때 암컷 puy가 수컷과 함께 씻겨 내려가지 않도록 주의하십시오.수컷 pupi가 들어 있는 용기를 제거하고 새 용기로 교체합니다. 마지막으로, 암컷 PPE를 새 용기로 옮깁니다. 수컷 pupi에 암컷 오염이 있는지 품질 관리를 수행합니다.분류 후, 수컷 번데기 500마리씩 세 개의 분주액을 취하여 현미경으로 암컷 번데기의 수를 측정합니다. 암컷은 생식엽의 모양을 통해 식별할 수 있습니다. 암컷의 생식엽은 수컷보다 훨씬 작고 둥근 형태입니다.암컷 비율이 1%를 초과하는 경우, 해당 배치를 다시 분류하고 재확인해야 합니다. 분류된 수컷 유충은 야외 방사 전 부화 및 성숙을 위해 방사 장치에 배정됩니다. 6개월 이상의 암수 분류 결과입니다.Pupi는 암컷 오염률이 평균 0.02%임을 보여줍니다. 이 오염률은 매달 방출되는 암컷이 400마리에 불과함을 나타냅니다. 이 그래프는 6개월의 생산 기간 동안의 평균 수컷 및 암컷 번데기 형성 데이터를 보여줍니다. 수컷은 주로 8일째에, 암컷은 9일째에 번데기가 됩니다.물에 떠 있는 번데기의 사진을 찍고 그리스자를 척도로 사용하여 흉곽 너비를 측정함으로써 번데기의 크기를 측정하고 비교하였습니다. 수컷은 암컷보다 일관되게 작았으며 크기의 겹침이 거의 없었는데, 이는 알 생산 시설에서 일관된 사육 매개변수가 달성되었음을 보여줍니다. 수컷 생산 구역의 약 19 m² 면적에서 매주 400만 개 이상의 알이 생산되었습니다.주당 평균 571,000마리의 수컷이 생산되었습니다. 알에서 선별된 수컷 번데기까지의 생산 효율은 약 26%였습니다. 우화 과정에서 일부 수컷의 손실이 발생하였으며, 주당 방사된 수컷의 총 평균 수는 543,000마리였습니다.

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Research

연구

JoVE Journal

Environment

환경

이 비디오에서는 Nijole Jasinskiene는 뎅그열 발열에 대한 벡터 아르 유전자 변형 Aedes aegypti 모기를 생성하기 위해 사용된 방법을 보여줍니다. 정확하게, microinjection의 바늘을 준비하는 배아를 d​​essicating, 그리고 microinjection을 수행하기위한 기술은 증명됩니다.

트렌스 제닉 모기를 구하는 A. aegypti의 태아의 Microinjection

이 솔직한 인터뷰에서, 안토니 A. 제임스 모기 유전이 말라리아와 뎅그열 전송을 제어하기 위해 악용될 수있는 방법을 설명합니다. 인구 교체 전략, 형질 전환 모기가 질병 전송을 제어하기 위해 야생으로 출시 될 수있다는 생각은, 유전 드라이브 및 효과적인 유전자 드라이브 시스템에 대한 설계 기준의 개념뿐만 아니라 도입입니다. 야생으로 유전자 - 수정된 생물을 발표의 윤리적 고려 사항도 설명합니다.

유전자 변형 모기를 사용하여 말라리아와 뎅그열 피버의 확산을 방지

지중해초파리(medfly) Ceratitis capitata(Diptera: Tephritidae)는 전 세계 농업 해충입니다. 이 식물의 생물학에 대한 깊은 이해는 메드플라이 개체군을 통제하여 경제적 영향을 줄이는 데 중요합니다. 배아 미세주입(embryo microinjection)은 이 종에서 생식세포 형질전환(germ-line transformation)과 역유전학(reverse genetics) 연구를 모두 가능하게 하는 근본적인 도구입니다.

세계적인 농업 해충 곤충의 배아 미세 주입을 통해 핵산 배달,<em&gt; Ceratitis의 capitata</em

Aedes aegypti 모기 Wolbachia 감염 arboviruses의 전송을 억제 하는 자연적인 인구에 발표 되는. 우리 실험실 적응 및 선택 최소화 하기 위해 예방 조치를 복용 실험 및 필드 릴리스, 후면 Ae aegypti Wolbachia 감염 실험실에서 하는 방법을 설명 합니다.

Aedes aegypti 모기 감염 Wolbachia 유지

무균 곤충 기술 (SIT)은 화학적 통제에 내성이있을 수있는 의학적으로 중요한 특정 모기 개체군을 통제하는 데 사용됩니다. 여기에서는 Aedes aegypti 모기를 표적으로 하는 운영 SIT 프로그램에서 방출하기 위해 무균 수컷 모기를 대량 사육하고 준비하는 방법을 설명합니다.

운영 멸균 곤충 기술 프로그램에서 방출하기 위해 조사되고 표시된 수컷 Aedes aegypti 모기 준비

여기서는 형광염을 마커로 사용하여 남성 Aedes aegypti의 짝짓기 경쟁력을 연구하기 위한 프로토콜을 제시합니다. 여성 모기는 교화를 위해 표시되고 표시되지 않은 수컷 모두에 노출됩니다. 후 짝짓기, 그들의 정자는 그들의 짝짓기 파트너를 결정하기 위하여 형광 현미경의 밑에 검토됩니다.

형광염염을 사용하여 로다민 B, 남성 Aedes aegypti 모기에서 짝짓기 경쟁력을 연구하기 위해

여기에서 보고된 프로토콜은 실험실에 포함된 작은 케이지 예심에서 벡터 통제를 위한 유전으로 조작된 모기의 성능을 평가하는 세 가지 대안을 보여줍니다. 각 프로토콜은 모기 균주 곰 (유전자 드라이브 또는 비 유전자 드라이브)과 측정 된 매개 변수의 유형을 특정 수정에 맞게 조정됩니다.

유전자 조작 된 아노펠리인 모기의 작은 케이지 실험실 시험

미세 주입 기술은 모기의 게놈에 외인성 유전자를 소개하는 데 필수적입니다. 이 프로토콜은 제임스 실험실에서 DNA 구조를 Anopheles 감비아아에 미세 주입하여 변형된 모기를 생성하는 방법을 설명합니다.

아노펠레 감비아에 배아를 위한 미세 주입 방법

Entomopathogenic 진균은 농업 곤충 해충의 생물학적 방제제로서 중요성을 얻고있다. 이 연구에서, 곤충 해충에 대한 상업적 적용을 위해 Metarhizium robertsii 및 M. pinghaense 둘 다의 남아프리카 단리물의 충분한 수의 탄력적 감염성 프로파굴레의 대량 생산은 농산물 곡물 제품을 사용하여 성공적으로 수행되었다.

곤충 해충에 대한 상업적 적용을위한 Entomopathogenic Fungi, Metarhizium robertsii 및 Metarhizium pinghaense의 대량 생산

본 프로토콜은 Aedes aegypti 모기의 생식력, 날개 크기, 생식력, 성비, 생존 능력, 발달 시간, 수컷 기여도 및 성체 수명을 포함한 일반적인 생명 매개 변수 데이터를 측정하는 방법을 설명합니다. 이러한 측정은 유전자 변형 모기의 적합성을 평가하는 데 사용할 수 있습니다.

형질전환 Aedes aegypti 모기의 피트니스 비용 정량화

여기에서는 CRISPR-Cas9 기술을 사용하여 모기 A. aegypti 에서 배아 미세주입을 통한 게놈 편집을 위한 자세한 프로토콜에 대해 설명합니다.

CRISPR-Cas9을 이용한 황열병 모기 이집트숲모기(Mosquito Aedes aegypti )의 게놈 편집

학습하세요 브라질에서 유전자 변형 Aedes aegypti 수컷 모기의 대량 생산 기술을. RIDL® 시스템을 활용한 인공 혈액 급여, 성별 분류, 품질 관리 방법을 통해 질병 매개체 개체군 억제를 위한 고품질 수컷을 생산하는 과정을 탐색하세요.

브라질에서 필드 릴리스에 대 한 유전자 변형 Aedes aegypti의 대량 생산

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