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JoVE 신문 생물학
Protein Purification-free Method of Binding Affinity Determination by Microscale Thermophoresis
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蛋白质纯化方法测定结合亲和力微尺度热泳

DOI:
10.3791/50541-v

•

10:22 min

•

August 15, 2013

•

, , , , , ,
1Cancer and Inflammation Program,National Cancer Institute, 2Basic Science Program,SAIC-Frederick, Inc., 3Departments of Oncology and Radiation Medicine,Georgetown University Medical Center, 4Structural Biophysics Laboratory,National Cancer Institute

Chapters

  • 00:05Title
  • 01:43Preparation of Cell Lysate
  • 03:20Determination of Optimal Lysate Dilution
  • 04:02Microscale Thermophoresis Binding Studies
  • 07:05Microscale Thermophoresis Data Analysis
  • 08:25Results: Measuring the Affinity of Non-phosphorylated STAT3 Protein Binding to Oligonucleotides
  • 09:40Conclusion

Summary

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可广泛用于微型热泳（MST）无需纯化从细胞裂解液中的目标蛋白的结合亲和力的测定。该协议涉及过表达GFP融合蛋白，在非变性条件下的细胞裂解，MST信号检测在不同浓度的配体的存在下。

Tags

Protein PurificationMicroscale ThermophoresisBinding AffinityKD DeterminationGFP-fused ProteinSTAT3Cell LysateNon-denaturing ConditionsDrug DiscoveryProtein Interactions

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