Name: 마이크로 소용돌이를 이용한 순차 분자 전달을위한 Electroporator을 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-08-07T20:15:00.000+00:00
Duration: 10 min 51 s
Description: 배우세요 마이크로 소용돌이 전기천공법을 이용한 세포 내 다중 분자 순차 전달 기술입니다. 정밀한 용량 조절과 높은 세포 생존율을 유지하며 효율적인 분자 전달이 가능합니다.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

이 작품은 로우 랜드 주니어 펠로우 프로그램에 의해 지원됩니다. 크리스 스톡스 주문 제작, 컴퓨터를 이용한 압력 제어 설정, 박사 다이앤 Schaak의 개발에 그의 도움을 : 저자는 하버드 로우 랜드 연구소의 과학자들과 직원에게 감사의 말씀을드립니다 생물학적 시료 처리에 대한 그녀의 입력, 윈필드 힐에 대한 전기 설치, 박사 Alavaro 산체스 개발 압력 설정에 필요한 기계 배관 부품 가공에 대한 흐름 cytometer, 스콧 Bevis, 케니 스펜서 돈 로저스에 대한 액세스 권한을 부여합니다. 미세 유체 주인은 하버드 대학 나노 시스템을위한 센터 (CNS)에서 제작 하였다.

1 셀 준비 <ol><li> 접시 1 × 10 10 % (v / v) 소 태아 혈청과 1로 보충 Leibovitz의 L-15 중간에 조직 배양 용 T75 플라스크 당 10 ㎖의 부피 전이성 유방암 세포주 MDA-MB-231의 5 세포 / ml % 페니실린 - 스트렙토 마이신. </li><li> 0 % CO 2 환경과 37 ° C에서 가습 배양기에서 MDA-MB-231 세포를 품어. </li><li> 2 분 동안 0.25 % 트립신-EDTA로 세포를 처리함으로써 이일 파종 후 실험 수확 세포 및 성장 배지 8 ㎖에 첨가함으로써 트립신의 활성 효소를 불 활성화. </li><li> 5 × 105 세포 / ml의 최종 농도 (칼슘 및 마그네슘 2 +없이 DPBS, 1X) 둘 베코 인산염 완충 식염수를 200 × g 및 재현 탁에서 5 분 동안 원심 분리하여 세포 펠렛. </li></ol> 2 장치 설계 및 제작 참고 : 마스크, 마스터 몰드 날조와마이크로 채널 클로징 처리는 폴리 디메틸 실록산 (PDMS) 미세 주조법이 일반 실험실 벤치 탑상에서 수행 될 수있는 동안 클린 룸 안에서 실시하여야한다. <ol><li> AutoCAD를 그림 1에 나타낸 바와 같이 미세 유체 장치를 설계합니다. 이 장치는 (L = 7mm W = 40 μm의, 그리고 H = 70 μm의) 여러 주입 포트, 거친 필터와 두 개의 평행 한 직선 직사각형 관성 중심 채널 입구로 구성되어야합니다. 개별 직선 채널은 알루미늄 전극 구멍을 통해이와 떨어져 800 μm의 배치 5 일렉트로 챔버 (W C = 400 μm의)로 구성되어 있습니다. 두 횡 방향으로 인접하는 일렉트로 챔버 음극 용 구멍을 공유한다. 두 개의 직선 채널은 일렉트로 지역의 하류에있는 콘센트에 병합합니다. </li><li> LinkCAD를 사용하여 GDSII 파일에 마이크로 패턴 CAD 파일을 변환합니다. 빈 5 &quot;× 5&quot;포토 마스크에 미세 패턴을 작성레이저 마스크 라이터. 제조 업체의 프로토콜에 따라 마스크를 개발한다. 참고 : 마스크 개발 프로세스는 포토 레지스트 현상, 크롬 에칭 및 레지스트 제거를 포함한다. 대안 적으로, 마이크로 패턴을 고해상도 투명도에 인쇄 (&gt; 20,000 DPI)를 타사 메이커로부터 구입하고, 포토 마스크로 사용될 수있다. 포토 마스크에 최종 마이크로 기능은 네가티브 포토 레지스트의 극성이 일치하도록 투명해야한다. </li><li> 70 μM의 최종 두께를 갖도록 2000 rpm에서 4 인치 실리콘 웨이퍼 상에 네거티브 포토 레지스트를 스핀 코트 표준 소프트 리소그래피 기술 (23)을 사용하여 장치 설계의 주형을 제조. </li><li> 95 ° C에서 20 분 동안 네가티브 포토 레지스트와 웨이퍼를 프리 베이킹. </li><li> 웨이퍼와 마스크를 연락 마스크 얼 라이너를 사용하여 80 초 동안 UV 소스 (17.4 엠제이 / cm 2)에 노출. </li><li> SU-8 개발에 4 분 동안 노출 된 웨이퍼를 개발한다. </li><li> 측정표면 프로파일로 미터를 사용하여 개발 된 포토 레지스트 두께. </li><li> 제 (실리콘 엘라스토머 키트) 경화 엘라스토머 1 비율 및 PDMS 복제본을 생성하는 주형에 부어 혼합물 : 엄격 10 섞는다. 30 분 동안 주조 엘라스토머를 탈기하고 2 시간 동안 70 ° C의 오븐에서 탈기 엘라스토머 주형을 경화. </li><li> 핀 바이스를 사용하여 입구, 출구 및 전극 삽입을위한 금형 및 펀치 구멍에서 마이크로 패턴과 경화 된 PDMS 복제를 박리. NOTE : 핀 바이스의 통상 절삭 날 직경 단단히 대신 PEEK 튜빙 (32 분의 OD &quot;) 및 알루미늄 전극 (0.029의 OD&quot;)를 유지하기위한 충분한 0.76 mm이어야한다. </li><li> 각각 75 W, 500 mTorr로의 고주파 전력 및 산소 분압에서 7 초간 산소 플라즈마 클리너로 처리 된 유리 슬라이드에 결합 PDMS 복제본으로 둘러싸인 미세 유체 채널을 생성. </li></ol> 3 흐름 실험 <ol><li> 삽입알루미늄 전극 (0.029 &quot;OD) 및 출구 PEEK 튜빙 (32 분&quot;미세 구멍을 통해 지정된 장소에 OD)는 (그림 3B 참조). </li><li> 알루미늄 전극에 고전압 짧은 구형파 펄스를 발생하기위한 18 담당 전기 기기를 연결 PDMS 몰드에 흐르는 용액과 접촉하는 (도 3c 참조). 참고 :이 장비는 펄스 발생기 및 자체 내장 된 고전압 앰프로 구성한다 (18). </li><li> (도 3a 참조) 세포 및 생체 분자와 네 개의 50 ml의 원심 개별적 DPBS를 함유하는 튜브, 용액을 준비하고, 공기 유량 제어 시스템에 연결된 각각의 바이알 홀더에 각각 끼운다. 18 </li><li> 미세 유체 장치의 각 입구 구멍에 유리 병 홀더에서 유입 PEEK 튜브를 연결합니다. </li><li> 저런 전기를 갖기 위해 100 V로, 구형파 펄스 V의 크기를 설정LD 강도, E = V / L 전자, 전기 천공 챔버 걸쳐 0.7 kV로 / cm 동등. NOTE : 여기서, L 전자는 양극과 음극이 흐르는 용액과 접촉하는 두 점 사이의 거리 (도 1 참조). </li><li> 40 PSI에 압력 조절기를 설정합니다. NOTE :. 단일 수동 조절 질소원 균일 모든 샘플 튜브를 가압하기 위해 사용되며, 고속 매니 폴드 적시 맞춤식 LabVIEW 소프트웨어를 사용하여 각각의 용액 포트를 활성화하기 위해 이용되는 18 </li><li> 밸브 제어의 경우, 밸브 러너 레이블 주문 제작 LabVIEW 소프트웨어를 열고 운영한다라는 제목의 드롭 다운 메뉴에서 실행을 클릭합니다. </li><li> 해당하는 각 밸브 아이콘을 클릭하여 밸브를 켭니다. 참고 :이 활성화 될 때 밸브의 아이콘이 녹색으로 변합니다. 활성화 된 아이콘을 클릭하면 비활성화하고 밸브를 닫습니다. 닫힌 밸브 아이콘이 회색으로 설정해야합니다. </li><li> (DPBS 저수지에 밸브를 열고즉., 1.5 분 동안 안정한 세포 트래핑 와류 발생에 필요한 주요 흐름 속도로 세정액). </li><li> 30 초 (즉, 셀 - 포착 공정)를위한 전기 천공 챔버에서 트랩 세포에 세포 용액으로 세척 용액으로부터 활성 용액 포트 스위치. </li><li> 용액 스위칭 단계 동안 파쇄 흐름을 보장하기 위해 셀 - 포착 단계 이전에 10 초 동안 동시에 장치를 통해 모두 세탁 셀 솔루션을 흐른다. 참고 :이 간단한 공동 흐름 단계는 각 솔루션 전환 단계를 반복해야합니다. </li><li> 세척 포트 켜고 비 오염 포집 세포를 제거하기 위해 20 초 동안 세척 장치. </li><li> 관심 장치로 (3000 다 중성 및 음이온 덱스 트란 분자 또는 1.5 밀리그램 / 70000 다 중성 덱스 트란 분자 ml의 0.2 ㎎ / ㎖)의 제 분자를 함유하는 용액을 주입한다. </li><li> 즉시 주사 후 5 쇼트 펄스 (Δt를 2 초 간격으로 30 밀리 초 =) 적용분자 용액 및 오실로스코프를 사용하여 실시간으로 적용되는 전기 펄스의 크기 및 지속 기간을 모니터링한다. </li><li> 3.10만큼 추가 분자의 수와 같은 단계를 반복 배달 할 수 있습니다. 각 분자 납기 후 분자 용액에 100 초 동안 세포를 배양한다 (100)의 과잉 물질을 제거하기위한 세척 용액으로 세척 장치. </li><li> 5 이하 PSI 작동 압력을 낮춤으로써 하류 분석 용 96 - 웰 플레이트에서 세포를 릴리스. 참고 : 100 셀 솔루션의 약 100 ㎕의 각 릴리스에서 수집됩니다. </li><li> 실험은 유동 세포 계측법을위한 충분한 세포를 수집하는 3.16 세 시간을 통해 3.9 단계를 실행합니다. </li><li> 228 × g에서 5 분 동안 처리 된 세포를 포함하는 96 - 웰 플레이트를 원심 분리기. </li><li> 초과 형광 분자를 포함하는 상층 액을 제거합니다. </li><li> 유동 세포 계측법 분석을 위해 DPBS 세포를 재현 탁. </li><li> 분자 U에 대한 흐름 cytometer에 로드셀효율성 분석 ptake. </li></ol>

<ol><li>Nakamura, H., Funahashi, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Electroporation+Past+present+and+future%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Growth+Diff%22%5BJournal%5D)">Electroporation Past present and future.</a> Dev Growth Diff. 55, 15-19 (2013).</li>
<li>Geng, T., Lu, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microfluidic+electroporation+for+cellular+analysis+and+delivery%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+Chip%22%5BJournal%5D)">Microfluidic electroporation for cellular analysis and delivery.</a> Lab Chip. 13, 3803-3821 (2013).</li>
<li>Shahini, M., van Wijngaarden, F., Yeow, J. T. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fabrication+of+electro-microfluidic+channel+for+single+cell+electroporation%5BTitle%5D)+AND+%22Biomedical+Microdevices%22%5BJournal%5D)">Fabrication of electro-microfluidic channel for single cell electroporation.</a> Biomedical Microdevices. 15, 759-766 (2013).</li>
<li>Neumann, E., Toensing, K., Kakorin, S., Budde, P., Frey, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanism+of+electroporative+dye+uptake+by+mouse+B+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Biophysical+Journal%22%5BJournal%5D)">Mechanism of electroporative dye uptake by mouse B cells.</a> Biophysical Journal. 74, 98-108 (1998).</li>
<li>Jaroszeski, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Toxicity+of+anticancer+agents+mediated+by+electroporation+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Anti-Cancer+Drugs%22%5BJournal%5D)">Toxicity of anticancer agents mediated by electroporation in vitro.</a> Anti-Cancer Drugs. 11, 201-208 (2000).</li>
<li>Buntru, M., Gartner, S., Staib, L., Kreuzaler, F., Schlaich, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Delivery+of+multiple+transgenes+to+plant+cells+by+an+improved+version+of+MultiRound+Gateway+technology%5BTitle%5D)+AND+%22Transgenic+Res%22%5BJournal%5D)">Delivery of multiple transgenes to plant cells by an improved version of MultiRound Gateway technology.</a> Transgenic Res. 22, 153-167 (2013).</li>
<li>Mir, L. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-efficiency+gene+transfer+into+skeletal+muscle+mediated+by+electric+pulses%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+USA%22%5BJournal%5D)">High-efficiency gene transfer into skeletal muscle mediated by electric pulses.</a> Proc Natl Acad Sci USA. 96, 4262-4267 (1999).</li>
<li>Heller, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intradermal+delivery+of+interleukin-12+plasmid+DNA+by+in+vivo+electroporation%5BTitle%5D)+AND+%22DNA+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Intradermal delivery of interleukin-12 plasmid DNA by in vivo electroporation.</a> DNA Cell Biol. 20, 381-381 (2001).</li>
<li>Boukany, P. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nanochannel+electroporation+delivers+precise+amounts+of+biomolecules+into+living+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Nanotechnol%22%5BJournal%5D)">Nanochannel electroporation delivers precise amounts of biomolecules into living cells.</a> Nat Nanotechnol. 6, 747-754 (2011).</li>
<li>Wang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Synergistic+Effects+of+Nanosecond+Pulsed+Electric+Fields+Combined+with+Low+Concentration+of+Gemcitabine+on+Human+Oral+Squamous+Cell+Carcinoma%5BTitle%5D)+AND+%22In+Vitro+PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Synergistic Effects of Nanosecond Pulsed Electric Fields Combined with Low Concentration of Gemcitabine on Human Oral Squamous Cell Carcinoma.</a> In Vitro PLoS One. 7, (2012).</li>
<li>Kim, M. J., Kim, T., Cho, Y. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell+electroporation+chip+using+multiple+electric+field+zones+in+a+single+channel%5BTitle%5D)+AND+%22Appl+Phys+Lett%22%5BJournal%5D)">Cell electroporation chip using multiple electric field zones in a single channel.</a> Appl Phys Lett. 101, (2012).</li>
<li>Wang, S. N., Lee, L. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Micro-%2Fnanofluidics+based+cell+electroporation%5BTitle%5D)+AND+%22Biomicrofluidics%22%5BJournal%5D)">Micro-/nanofluidics based cell electroporation.</a> Biomicrofluidics. 7, (2013).</li>
<li>Sharei, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+vector-free+microfluidic+platform+for+intracellular+delivery%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl+Acad+Sci+USA%22%5BJournal%5D)">A vector-free microfluidic platform for intracellular delivery.</a> Proc. Natl Acad Sci USA. 110, 2082-2087 (2013).</li>
<li>Kim, J. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Direct+reprogramming+of+human+neural+stem+cells+by+OCT4%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Direct reprogramming of human neural stem cells by OCT4.</a> Nature. 461, U649-U693 (2009).</li>
<li>Ozbas-Turan, S., Aral, C., Kabasakal, L., Keyer-Uysal, M., Akbuga, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Co-encapsulation+of+two+plasmids+in+chitosan+microspheres+as+a+non-viral+gene+delivery+vehicle%5BTitle%5D)+AND+%22J+Pharm+Pharm+Sci%22%5BJournal%5D)">Co-encapsulation of two plasmids in chitosan microspheres as a non-viral gene delivery vehicle.</a> J Pharm Pharm Sci. 6, 27-32 (2003).</li>
<li>Okita, K., Ichisaka, T., Yamanaka, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Generation+of+germline-competent+induced+pluripotent+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Generation of germline-competent induced pluripotent stem cells.</a> Nature. 448, U311-U313 (2007).</li>
<li>Hur, S. C., Mach, A. J., Di Carlo, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-throughput+size-based+rare+cell+enrichment+using+microscale+vortices%5BTitle%5D)+AND+%22Biomicrofluidics%22%5BJournal%5D)">High-throughput size-based rare cell enrichment using microscale vortices.</a> Biomicrofluidics. 5, (2011).</li>
<li>Yun, H. Y., Hur, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sequential+multi-molecule+delivery+using+vortex-assisted+electroporation%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+Chip%22%5BJournal%5D)">Sequential multi-molecule delivery using vortex-assisted electroporation.</a> Lab Chip. 13, 2764-2772 (2013).</li>
<li>Gehl, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Electroporation+theory+and+methods%2C+perspectives+for+drug+delivery%2C+gene+therapy+and+research%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Physiol+Scand%22%5BJournal%5D)">Electroporation theory and methods, perspectives for drug delivery, gene therapy and research.</a> Acta Physiol Scand. 177, 437-447 (2003).</li>
<li>Wang, J., Zhan, Y. H., Ugaz, V. M., Lu, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vortex-assisted+DNA+delivery%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+Chip%22%5BJournal%5D)">Vortex-assisted DNA delivery.</a> Lab Chip. 10, 2057-2061 (2010).</li>
<li>Jia, F. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+nonviral+minicircle+vector+for+deriving+human+iPS+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Methods%22%5BJournal%5D)">A nonviral minicircle vector for deriving human iPS cells.</a> Nature Methods. 7, U146-U197 (2010).</li>
<li>Dunbar, C. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gene+transfer+to+hematopoietic+stem+cells+Implications+for+gene+therapy+of+human+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Annual+Review+of+Medicine%22%5BJournal%5D)">Gene transfer to hematopoietic stem cells Implications for gene therapy of human disease.</a> Annual Review of Medicine. 47, 11-20 (1996).</li>
<li>Xia, Y. N., Whitesides, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Soft+lithography%5BTitle%5D)+AND+%22Angew+Chem-Int+Edit%22%5BJournal%5D)">Soft lithography.</a> Angew Chem-Int Edit. 37, 551-575 (1998).</li>
<li>Graziadei, L., Burfeind, P., Barsagi, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Introduction+of+Unlabeled+Proteins+into+Living+Cells+by+Electroporation+and+Isolation+of+Viable+Protein-Loaded+Cells+Using+Dextran+Fluorescein+Isothiocyanate+as+a+Marker+for+Protein-Uptake%5BTitle%5D)+AND+%22Anal+Biochem%22%5BJournal%5D)">Introduction of Unlabeled Proteins into Living Cells by Electroporation and Isolation of Viable Protein-Loaded Cells Using Dextran Fluorescein Isothiocyanate as a Marker for Protein-Uptake.</a> Anal Biochem. 194, 198-203 (1991).</li>
<li>Dimitrov, D. S., Sowers, A. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Membrane+Electroporation-Fast+Molecular-Exchange+by+Electroosmosis%5BTitle%5D)+AND+%22Biochimica+Et+Biophysica+Acta%22%5BJournal%5D)">Membrane Electroporation-Fast Molecular-Exchange by Electroosmosis.</a> Biochimica Et Biophysica Acta. 1022, 381-392 (1990).</li>
<li>Sukharev, S. I., Klenchin, V. A., Serov, S. M., Chernomordik, L. V., Chizmadzhev Yu, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Electroporation+and+electrophoretic+DNA+transfer+into+cells.+The+effect+of+DNA+interaction+with+electropores%5BTitle%5D)+AND+%22Biophysical+Journal%22%5BJournal%5D)">Electroporation and electrophoretic DNA transfer into cells. The effect of DNA interaction with electropores.</a> Biophysical Journal. 63, 1320-1327 (1992).</li>
<li>Glogauer, M., McCulloch, C. A. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Introduction+of+large+molecules+into+viable+fibroblasts+by+electroporation+Optimization+of+loading+and+identification+of+labeled+cellular+compartments%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+Cell+Research%22%5BJournal%5D)">Introduction of large molecules into viable fibroblasts by electroporation Optimization of loading and identification of labeled cellular compartments.</a> Experimental Cell Research. 200, 227-234 (1992).</li>
<li>Verspohl, E. J., KaiserlingBuddemeier, I., Wienecke, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Introducing+specific+antibodies+into+electropermeabilized+cells+is+a+valuable+tool+for+eliminating+specific+cell+functions%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Biochemistry+and+Function%22%5BJournal%5D)">Introducing specific antibodies into electropermeabilized cells is a valuable tool for eliminating specific cell functions.</a> Cell Biochemistry and Function. 15, 127-134 (1997).</li>
</ol>

저자가 공개하는 게 없다.

처리량 및 다중 분자 전달 효율의 새로운 병렬화 일렉트로 플랫폼, 10 배 향상된 기능을 통해 이전에 개발 된 단일 챔버 시스템이 제공하는 모든 장점에 부가하여 달성되었다. 18 이전 가능한 장점은의 (ⅰ) 전처리 정제를 포함 생존 능력 향상을위한 균일 한 크기 분포, (ⅱ) 정확한 분자량 및 개별 투여 량 조절, 및 (ⅲ) 낮은 동작 전류와 표적 세포. 그들은 분자량, 공액 형광 유형 및 전하의 넓은 범위에서 용이하게 사용할 수 있기 때문에 형광 표지 덱스 트란의 관심 분자로서 선택되었다. 이러한 매크로 분자. 형광 덱스 트란, 배양 시간의 24 최적의 농도가 본질적으로 아르 살아있는 세포 불 투과성 막과 세포 독성을 나타내지 않기 때문에 이러한 연구에 적합하다, 전기 매개 변수는 현재 시스템 이전 t에 대한 확인되었다일렉트로 실험 오. 최적화 프로세스 의한 실시간 흡수 분자 프로세스를 모니터링하는 플랫폼의 능력에 비교적 간단하고 효율적이었다. 이 프로세스의 시각화 작은 투 아니 일렉트...

최근, 세포 분자의 세포 내 전달을 용이하게하는 전기 펄스의 사용은 포유 동물 세포를 조작 매력적인 수단이되었다. 일 또한 일렉트로이라고하는이 과정은, 가역적으로 액세스하는 본래 세포막 투과성 분자를 허용 세포막을 permeabilizes 세포의 세포 적 환경이다. 거의 모든 분자 일렉트로를 이용한 세포의 모든 종류의 막으로 임시 만들어진 기공을 통해 세포질 내로 도입 될 수 있기 때문에, 기술이보고 된 것으로, 더욱 재현성 보편적으로 적용하고, 바이러스 - 매개 화학을 포함하는 다른 방법에 비해보다 효율적 세포 생존은 그대로 유지하면서, 광학 접근법. 2-3이 기술은, 형광 물질을 도입하는 약물 4 5 핵산 6-7을 이용하고있다. 이러한 이점을 감안할 때, 일렉트로는 일반적인 노동으로 채택되었다DNA 형질 atory위한 기술, 생체 내 유전자 치료 8 세포 접종 연구. 성공적인 일렉트로 필요한 전계 강도가 밀접 셀의 직경과 상관하기 때문에 종래의 전기 천공 시스템은 동시에 대형화와 이질 샘플 실용적인 효율 및 생존 가능성을 달성하는 것은 여전히​​ 그러나 어렵다. 더욱이, 이러한 시스템은 다수의 분자 양의 정밀한 제어가 벌크 스토캐스틱 분자 전달 프로세스에 대한 의존도로 인해 전달되는 것을 허용하지 않는다. 9는 이러한 문제를 해결하기 위해, 많은 그룹은, 저급 CORPORATION에서 전압의 이점을 제공하고, 미세 유체 일렉트로 플랫폼 개발 더 형질 감염 효율, 세포 사망의 큰 감소, 및 복합 분자를 제공하는 능력. 10-13 이러한 장점은 그 전극 피치 마이크로 전기 천공 시스템의 작은 풋 프린트에 의해 가능하게되었다길이 극적 성공적인 전달을 위해 필요한 전압을 감소시키는, 서브 밀리미터이다. 더욱이, 이들 마이크로 일렉트로 시스템은 전달 효율을 향상하면서 감소 된 세포 사망을 산출, 생성 된 열을 방출 빠르게 균일 한 전계 분포를 달성 할 수있다. 추가적으로 이러한 마이크로 투명 재료 사용률 프롬프트 파라미터 변경에 대한 전기 천공 과정 시츄 관찰에 있습니다. 2,12을 그러나 정확한 투여 량 제어 및 연구 및 치료 적 응용, 6 신흥 필요한 분자 - 및 세포 - 의존 파라미터 제어를, 14-16는 여전히 해결되지 못한 상태로 남아있다. 이 작업은 순차적으로 표적 세포의 미리 선택된 동일한 집단에 여러 분자를 전달할 수있는 미세 유체 와류를 이용한 전기 천공 시스템을 제공한다. 균일 한 크기 분포를 가진 세포는 이전에보고 된 실리콘을 사용하여 이전에 전기 천공 법 (electroporation)에 격리되어제 &#39;선택적 트래핑 메커니즘. 17-18 균일 한 크기 분포, 적은 편차 일렉트로 효율 및 달성 하였다 주어진 전계 강도 당 강화 가능성을 갖는 바이. 19 또한, 연속 마이크로 와류를 사용하여 포획 세포를 교반을 통해 분자의 균일 한 전달 허용 결과와 일치하여 전체 세포질은, 이전에,이 시스템은 일반적으로 생물학적 인 응용에 이용 분자의 넓은 범위에 적용될 수 있음을 입증하기 위해. 다른 와류 이용한 일렉트로 플랫폼을 사용하여 (20)을보고로 전달 된 분자량 광범위한 고분자 전이성 유방암 세포. 또한, 실시간 프로세스 모니터링의 도움으로,이 작품은 주로 확산 매개. 14 대 전기 매개되고, electrporation 동안 분자 전달의 메커니즘에 관한 오랜 논쟁에 종지부를 찍을 더 많은 증거를 제공 </sup&gt; 다른 전기 천공 시스템과는 달리,이 플랫폼 고유 일렉트로의 정확한 멀티 분자 전달, 고분자 전달 효율, 최소의 세포 사망, 크기 및 전달 분자의 전하의 넓은 범위뿐만 아니라 실시간 시각화 결합 된 장점을 제공한다 과정. 이러한 기능을 감안할 때, 개발 된 일렉트로 시스템은 일렉트로 분자 전달 메커니즘에 대한 깊이있는 이해를 필요로하는 세포 리 프로그래밍 연구, 6,14,21-22 약물 전달 응용 프로그램 10,19 및 애플리케이션을위한 다양한 도구로 실제적인 가능성이있다.

<table><tbody><tr><td>MDA-MB-231 암 세포주</td><td>미국형 배양 컬렉션(ATCC)</td><td>HTB-26</td><td></td></tr><tr><td>레보비츠' s L-15 매체</td><td>Cellgro, Mediatech, Inc.</td><td>10-045-CV</td><td></td></tr><tr><td>소 태아 혈청(FBS)</td><td>Gibco, Life Technologies</td><td>16000-044</td><td></td></tr><tr><td>페니실린-스트렙토마이신</td><td>시그마-알드리치</td><td>P4333</td><td></td></tr><tr><td>둘베코의 인산염 완충 식염수(DPBS)</td><td>Cellgro, Mediatech, Inc.</td><td>21-030</td><td></td></tr><tr><td>Trypsin</td><td>Gibco, Life Technologies</td><td>25200-056</td><td></td></tr><tr><td>유세포 분석기 easyCyte HT</td><td>Millipore</td><td>0500-4008</td><td></td></tr><tr><td>산소 플라즈마 클리너</td><td>Technics Micro-RIE</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Dektak 6M 표면 프로파일러</td><td>Veeco</td><td></td><td></td></tr><tr><td>KMPR 1050</td><td>Microchem</td><td></td><td></td></tr><tr><td>SYLGARD 184 실리콘 엘라스토머 KIT</td><td>Dow Corning</td><td></td><td></td></tr><tr><td>압축 질소 가스</td><td>Airgas</td><td>NI 300</td><td></td></tr><tr><td>고압 레귤레이터</td><td>McMaster-Carr</td><td>6162K22</td><td></td></tr><tr><td>다운스트림 레귤레이터</td><td>McMaster-Carr</td><td>4000K563</td><td></td></tr><tr><td>고속 3/2way-8 밸브 매니폴드</td><td>Festo</td><td></td><td></td></tr><tr><td>인라인 체크 밸브</td><td>Idex Health and Science</td><td>CV3320</td><td></td></tr><tr><td>5/32" OD x 3/32" ID 폴리우레탄 튜브</td><td>Pneumadyne</td><td>PU-156F-0</td><td></td></tr><tr><td>1/4" OD X 0.17" ID 폴리우레탄 튜브</td><td>Pneumadyne</td><td>PU-250PB-4</td><td></td></tr><tr><td>1/16" PEEK 튜빙</td><td>Festo</td><td>P1533</td><td></td></tr><tr><td>1/32" PEEK 튜빙</td><td>Idex Health and Science</td><td>P1569</td><td></td></tr><tr><td>PEEK 튜빙 유니온</td><td>Idex Health and Science</td><td>P881</td><td></td></tr><tr><td>펄스 발생기</td><td>HP</td><td>8110A</td><td></td></tr><tr><td>알루미늄 와이어</td><td>Bob Martin Company</td><td>6061 ALUM</td><td></td></tr><tr><td>오실로스코프</td><td>애질런트</td><td>DSO3062A</td><td></td></tr><tr><td>50ml 원심분리기 튜브</td><td>VWR</td><td>21008-178</td><td></td></tr><tr><td>15ml 원심분리기 튜브</td><td>VWR</td><td>21008-216</td><td></td></tr><tr><td>T75 배양 플라스크</td><td>VWR</td><td>82050-862</td><td></td></tr><tr><td>Dextran, Tetramethylrhodamine, 3,000 MW, 음이온</td><td>Gibco, Life Technologies</td><td>D3307</td><td></td></tr><tr><td>Dextran, Tetramethylrhodamine, 70,000 MW, 중립&nbsp;</td><td>Gibco, Life Technologies</td><td>D1819</td><td></td></tr><tr><td>Dextran, 텍사스 레드, 3,000MW, 중립</td><td>Gibco, Life Technologies</td><td>D3329</td><td></td></tr></tbody></table>

마이크로 소용돌이를 이용한 순차 분자 전달을위한 electroporator을

Microscale Vortex-assisted Electroporator for Sequential Molecular Delivery

물리적으로 세포에 비 - 투과 외인성 분자 프로브를 도입하기위한 아주 강력한 기술이기 때문에 전기 천공은, 과거 몇 년 동안 증가 주목을 받아왔다. 이 작업은 정밀한 분자 종속 매개 변수 컨트롤과 함께 포유 동물 세포에 여러 분자 전달을 수행 할 수있는 마이크로 유체 일렉트로 플랫폼을보고한다. 균일 한 크기 분포와 세포를 분리하기위한 시스템의 능력은 주어진 전계 강도 당 전기 천공 효율 적은 편차를 허용; 따라서 샘플 생존력을 향상. 또한, 그 공정 시각화 기능 효율 향상을위한 반응계에서 프롬프트 분자 전달 파라미터 조정을 허용 실시간 형광 분자 흡수 과정의 관찰을 허용한다. 보고 된 플랫폼의 광대 한 능력을 보여주기 위해, 서로 다른 크기와 전기 요금과 거대 분자 (예를 들면, 덱스 트란은 3000 및 70000 다의 MW로)했다테스트 된 모든 분자 높은 전달 효율 (&gt; 70 %)로 전이성 유방암 세포로 전달. 개발 플랫폼은 온 - 칩 기술은 일렉트로 유리할 수있다 연구 분야의 확장에 사용 가능성을 증명했다.

개발 병렬 미세 electroporator 전이성 유방암 살아있는 세포로 다양한 크기 및 전하와 거대 분자를 전달. 성공적인 전달 분자는 질적 인 시츄 electroporation하여 선회 세포의 형광 강도의 변화를 모니터링함으로써 결정과 유세포 분석을 통해 정량 측정에 의해 확인되었다. 4A가 처리 된 세포의 90 %가 중성 70000 다 덱스 트란 통풍 관 것을 보여준다. 통계적인 분석을 위해, 각각의 형광 물질에 대한 강도 임계치가 처리되지 않은 살아있는 세포의 대부분 (&gt; 99 %)이 임계 값 미만으로 계산되도록 설정 하였다 (도 4 (c) 참조). 효율은 셀의 수의 비율로 정의된다 성공적으로 처리 된 세포의 총 수에 관심 분자를 차지.도 4b는 효율이 실질적으로 분자에 따라 변화하지 않는 것을 나타낸다중량 전기 요금 (&gt; 0.1 P). 모든 테스트 덱스 트란 분자는 70 ...

미세 유체 와류를 이용한 일렉트로 플랫폼은 정확하고 독립적 인 투여 량 제어와 동일한 세포 집단에 여러 분자의 순차적 전달을 위해 개발되었다. 시스템의 크기에 기초하여 목표 셀 정제 단계 이전 일렉트로 분자 전달 효율 및 처리 된 세포의 생존 능력을 향상시키는 데 도움.

마이크로 소용돌이를 이용한 순차 분자 전달을위한 Electroporator을

Electroporation has received increasing attention in the past years, because it is a very powerful technique for physically introducing non-permeant ...

이 절차의 전체적인 목표는 Vortex 보조 미세유체 포어러(Vortex assisted microfluidic porer)를 사용하여 생물학적으로 유의미한 다양한 종류의 분자들을 고효율로, 순차적이며 용량 조절이 가능한 방식으로 전달하는 것입니다. 이는 먼저 세포와 생체 분자가 포함된 DPBS 용액을 각각 담은 4개의 50 milliliter 원심분리 튜브를 준비하고, 각 튜브를 공압 유량 제어 시스템에 연결된 해당 바이알 홀더에 부착함으로써 수행됩니다. 두 번째 단계는 각 바이알의 유입 튜브를 15핀 전극이 내장된 미세유체 장치에 삽입하는 것입니다. 다음으로, 세포를 장치 내부로 흘려보내면 전기천공 챔버 내에 형성된 마이크로 규모의 와류(vortex)에 세포들이 포획됩니다.마지막 단계는 포획된 세포에 짧은 전기 펄스를 가한 직후, 세포질로 전달할 생체 분자가 포함된 용액을 주입하는 것입니다. 최종적으로, 이 과정을 통해 얻은 세포를 방출시켜 후속 분석을 위해 수집할 수 있습니다. 기존 방법과 비교하여 이 기술의 주요 장점은, 제안된 기술이 미리 선택된 동일한 세포 집단에 여러 분자를 정해진 양만큼 순차적으로 고효율 및 높은 생존율로 전달할 수 있다는 점입니다.각 용액 단계에서 콜드 플로우(cold flow) 단계의 타이밍이 세포 트래핑의 안정성을 결정하므로, 유체 교환 단계가 학습하기 어렵기 때문에 이 방법의 시각적 시연이 매우 중요합니다. 본 실험에서는 전이성 유방암 세포주 M-D-A-M-B 2 31을 사용할 것이며, 10% v/v 태아 송아지 혈청과 1% penicillin이 첨가된 Leibovitz's L 15 배지가 담긴 T 75 조직 배양 플라스크당 10 mL 부피에 1 × 10⁵ cells/mL 농도로 배양합니다.Streptomycin과 함께 세포를 37 °C의 가습 배양기 내 0% 이산화탄소 환경에서 배양합니다. 세포 파종 2일 후, 실험을 위해 세포를 수확합니다. PBS 또는 DPBS로 세포를 세척한 후, 0.25% trypsin EDTA로 2분 동안 처리합니다.8 mL의 성장 배지를 추가하고, 200 ×g에서 5분 동안 원심분리하여 효소 활성을 불활성화시킨 후 펠릿 세포를 재현탁하여 최종 농도를 5 × 10⁵ cells/mL로 맞춥니다. 미세유체 전기천공 장치의 설계 및 제작 과정은 본 영상에서 보여주지 않으나, 동반된 논문에 상세히 기술되어 있습니다. 이 시스템은 세포, 분자 및 세척액을 위한 입구들로 구성됩니다.관성 집중(inertial focusing)이 일어나는 두 개의 직선 채널입니다. 유동 실험 설정을 위한 전극이 포함된 10개의 전기천공 챔버와 배출구가 있습니다. 마이크로채널의 구멍을 통해 지정된 위치에 배출구, 폴리에테르에테르케톤(PEEK) 튜빙, 그리고 단펄스 고전압 인가를 위한 15핀 알루미늄 전극을 삽입하십시오.15핀 전극은 10개의 양극과 5개의 음극으로 구성됩니다. 각 양극은 음극과 1.5 millimeters 간격을 두고 배치되며, 동일한 극성의 전극 간 간격은 1.35 millimeters입니다. 고전압 단일 사각파 펄스를 생성하는 전기 장비를 유동 용액과 접촉해 있는 알루미늄 전극에 연결하십시오.PDMS 몰드의 경우, 장비는 펄스 발생기와 자체 제작한 고전압 증폭기로 구성되어야 합니다. DPBS와 세포 및 분자가 포함된 용액을 각각 담은 50 milliliter 원심분리 튜브 4개를 준비합니다. 각 튜브를 공압 유량 제어 시스템에 연결된 해당 바이알 홀더에 부착합니다.바이알 홀더의 유입 피크 튜빙을 마이크로유체 장치의 각 유입 홀에 연결합니다. 다음으로, 사각파 펄스의 전압 크기를 100 volts로 설정합니다.전기천공 챔버 전체의 전계 강도가 0.7 kilovolts per centimeter가 되도록 설정합니다. 압력 조절기를 40 PSIA로 설정하며, 수동으로 조정 가능한 단일 질소 공급원을 사용하여 모든 샘플 바이알에 균일하게 가압하고, 고속 매니폴드를 이용하여 개별 용액 포트를 적시에 활성화합니다. 밸브 제어에는 맞춤 제작된 LabVIEW 소프트웨어를 사용합니다.Valve runner라고 표시된 lab view 소프트웨어를 열고 Operate라는 드롭다운 메뉴에서 run을 클릭하십시오. DPBS 리저버의 밸브를 열기 위해 해당 밸브 아이콘인 valve one을 클릭하여, 안정적인 세포 트래핑을 위한 와류 생성에 필요한 유속을 1.5분 동안 프라이밍하십시오. 밸브가 활성화되면 밸브 아이콘이 회색에서 녹색으로 변해야 하며, 세포 트래핑 단계 이전에 세척액과 세포 용액을 모두 10초 동안 장치에 동시에 흘려주십시오.용액 교체 단계 동안 흐름이 중단되지 않도록 하려면, 이 짧은 공동 흐름 단계를 각 용액 교체 단계마다 반복해야 합니다. 활성 용액 포트를 세척액에서 세포 용액으로 전환하여 전기천공 챔버에 세포를 30초 동안 포획하십시오. 이 영상에서 파란색 형광 신호는 생존 가능한 훅(hook)을 나타냅니다.3, 3, 3, 4, 5 단계 세포입니다. 세척 포트를 켜고 장치를 20초 동안 플러싱하십시오. 포획되지 않은 오염 세포를 제거하기 위해 관심 대상의 첫 번째 분자가 포함된 용액을 흘려보냅니다.시각화를 위해 Propidium iodide를 장치에 넣습니다. 이번 시연에서는 염료의 신호 대 잡음비가 더 우수하기 때문에 형광 표지된 DExT 가닥 대신 핵산 염료를 사용합니다. 분자 용액을 주입한 직후 5회의 짧은 펄스를 즉시 가하고, 오실로스코프를 사용하여 인가된 전기 펄스의 크기와 횟수를 실시간으로 모니터링합니다. 분자의 형광 신호는 현미경 하에서 관찰할 수 있으며, 세포를 분자 용액에서 100초 동안 배양합니다. 다음으로, 두 번째 분자인 핵산 염료 yo-yo one이 포함된 용액을 장치 내로 흘려보냅니다.이 시연에서는 추가적인 전기 펄스 인가 없이 두 번째 분자가 전달됩니다. 이 영상은 세포가 이제 세 가지 형광 신호를 모두 발현함을 확인시켜 줍니다. yo-yo-1은 녹색, propidium iodide는 적색, hooks는 청색으로 나타납니다.3, 3, 3, 4, 5. 작동 압력을 5 PSI 미만으로 낮추어 세포를 96웰 플레이트에 방출하고 후속 분석을 진행합니다. 각 방출 시 약 100 µL의 용액과 100개의 세포가 수집됩니다.유세포 분석 원심분리에 충분한 수의 세포를 수집하려면 전기천공법 과정을 최소 3회 반복해야 합니다. 가공된 세포가 담긴 96-웰 플레이트를 228 ×g에서 5분간 원심분리합니다. 상온에서 과잉 형광 분자가 포함된 상층액을 제거하고 세포를 DPBS에 재현탁합니다.형광 표지된 DExT 가닥이 전달된 경우, 이후 세포의 분자 흡수 여부를 분석합니다. 유세포 분석법을 통해 효율성을 측정합니다. 전기천공된 궤도 세포의 형광 강도 변화를 모니터링하여 분자 전달 성공 여부를 정성적으로 결정하였으며, 그 결과 처리된 세포의 90%가 70, 000 Dalton의 음이온성 DExT 가닥 분자를 흡수했음을 확인하였습니다.관심 분자를 성공적으로 흡수한 세포 수와 처리된 총 세포 수의 비율로 정의된 각 전이 덱스트란 분자의 효율은 분자량이나 전기 전하에 따라 크게 달라지지 않았습니다. 테스트한 모든 덱스트란 분자는 70% 이상의 효율로 세포질 내로 전달되었습니다. 여기 제시된 데이터는 전기천공법을 처리하지 않은 세포의 대표적인 유세포 분석 프로필입니다. 성공적인 분자 전달을 나타내는 형광 임계값은 대조군 샘플의 신호가 임계값 아래에 위치하도록 데이터에 따라 설정되었습니다.순차적으로 전기천공법을 적용한 세포의 대표적인 유세포 분석 데이터로, 유세포 분석 플롯과 형광 스트라이프 이미지를 함께 보여줍니다. 녹색 상자는 3000 Dalton 중성 덱스트란만 흡수한 세포의 신호를 나타내며, 빨간색 상자는 3000 Dalton 이온성 DExT 가닥만 흡수한 세포의 신호를 나타냅니다. 노란색으로 표시된 두 가지 DExT 가닥 분자를 모두 흡수한 세포의 형광 신호는 56%의 이중 분자 전달 효율을 나타냅니다. 개발된 이 기술은 의학, 생명공학 및 약리학 분야의 연구자들이 복합 질환 치료에서 시너지 효과를 거두기 위한 치료제 조합을 탐구하는 데 유용하게 활용될 것입니다.고전압 전기 펄스를 사용하는 작업은 매우 위험할 수 있으므로, 이 절차를 수행하는 동안에는 항상 접지를 확인하는 등의 예방 조치를 취해야 함을 잊지 마십시오.

microscale-vortex-assisted-electroporator-for-sequential-molecular

Research

연구

JoVE Journal

Bioengineering

생명공학

소설 microfluidic 시스템을 수동 펌프의 현상과 사용자가 제어 유체 전달 시스템을 사용하여 개발되었습니다. 이 microfluidic 시스템의 사용의 저렴한 비용으로, 쉽게, 체적 정밀, 고속, repeatability 및 자동화 주어진 생물 학적 응용 프로그램의 다양한에서 사용될 수있는 잠재력이있다.

Microfluidic 장치에 수동 펌핑을위한 고속 비말 기반 전달 시스템

이 프로토콜은 미세유체 소자를 사용하여 자동화된 소량(0.15–1.5ml) 입자 분리를 수행하기 위한 시스템 아키텍처를 설명하고 음향 유체 소자 성능 및 작동을 최적화하는 방법에 대해 설명합니다.

미세 유체 정밀 작은 볼륨 샘플 처리를위한 플랫폼 및 음향 마이크로 디바이스로 구분 생물 입자 크기의 사용

단일 셀 시퀀싱 생물 학적 시스템, genotypic이 보여 하지만 현재 기술 커뮤니티 구성 및 기능의 깊은 프로 파일링에 필요한 처리량 부족. 여기, 우리는 미세 워크플로 시퀀싱에 대 한 설명 &gt; 다양 한에서 50000 단일 셀 게놈 세포 인구.

단일 셀 게놈 시퀀싱 초고 처리량 미세 플랫폼

이 작품에는 미세 물방울 기반 플랫폼의 제조와 스피어 PCR 확대를 위한 polyacrylamide 스피어의 응용 프로그램에 대 한 방법을 제공 한다. 스피어 PCR 방법 단일 가닥 DNA amplicons 이중 가닥 DNA를 분리 하지 않고 얻을 수 있습니다.

드롭릿 기반 미세 접근 및 단일 가닥 DNA Amplicons 위한 스피어 PCR 증폭

나노 소재 기초 과학 및 변환 응용 프로그램에 대 한 제어 치료 납품의 다양 한 메커니즘을 제공 하지만 그들의 제조를 종종 가장 생물 의학 연구소에서 제공 하는 전문. 여기, 우리가 현재 확장 가능한 제조 및 플래시 nanoprecipitation를 사용 하 여 다양 한 자기 조립된 nanocarriers의 치료 로드에 대 한 프로토콜.

급속 하 고, 확장 가능한 어셈블리 및 플래시 Nanoprecipitation 통해 다양 한 합성 Nanocarriers에 생리 활성 단백질의 Immunostimulants 로드

이 프로토콜은 음향 액적 배출 기술을 사용하여 384 웰 플레이트에서 포유류 세포의 고처리량 플라스미드 형질 감염을 설명합니다. 시간이 많이 소요되고 오류가 발생하기 쉬운 DNA 디스펜싱과 트랜스펙션 시약 디스펜싱은 나노 에스터디터 장치에 의해 소프트웨어 구동 및 수행됩니다. 세포는 다음 이 미리 채워진 우물에서 파종됩니다.

음향 나노 디스펜싱 기술을 사용한 고처리량 DNA 플라스미드 멀티플렉싱 및 트랜스펙션

전기 습윤 기반 디지털 미세 유체는 마이크로 리터 볼륨 액적의 명백한 접촉 각도에서 전압 구동 변화를 활용하여 조작을 용이하게하는 기술입니다. 이를 기능화된 자기 비드와 결합하면 효소 연결 면역흡착 분석(ELISA)을 사용하여 병원균의 시료 준비 및 식별을 위한 여러 실험실 단위 작업의 통합이 가능합니다.

자동화된 효소 연계 면역흡착제 분석기용 전기습식 기반 디지털 미세유체 분석 플랫폼

후성 유전학 마커는 DNA 메틸화 패턴의 정량화를 통해 백혈구 (WBC) 과형을 위해 사용됩니다. 이 프로토콜은 WBC 차동 수의 정밀하고 멀티플렉스 메틸화 특이적 표적 정량화를 허용하는 방울 생성을 위한 열가소성 탄성동체(TPE) 기반 미세 유체 장치를 사용하여 멀티플렉스 액적 폴리머(mdPCR) 방법을 제시한다.

혈액학적 진단을 위한 폴리머 물방울 발생기 장치를 사용하여 메틸화 특정 멀티플렉스 물방울 PCR

이 프로토콜은 랩온어칩, 마이크로유체 전기천공 장치를 구축하는 데 필요한 미세 가공 기술을 설명합니다. 실험 설정은 연속 흐름에서 제어된 단일 세포 수준 형질주입을 수행하며 집단 기반 제어를 통해 더 높은 처리량으로 확장할 수 있습니다. 세포막 투과 정도를 실시간으로 전기적으로 모니터링하는 기능을 보여주는 분석이 제공됩니다.

연속 흐름의 제조 및 작동, 투과화 감지 기능이 있는 미세 전기 천공 시스템

세포외 소포체는 생물의학 응용 분야에 엄청난 가능성을 가지고 있지만, 현재의 분리 방법은 시간이 많이 걸리고 임상적으로 사용하기에는 비실용적입니다. 이 연구에서는 최소한의 단계로 연속적으로 많은 양의 생체 유체에서 세포외 소포체를 직접 분리할 수 있는 미세유체 장치를 제시합니다.

분기된 A4F 미세유체 장치를 사용한 대용량 시료에서 세포외 소포의 단일 단계 분리

배우세요 마이크로 소용돌이 전기천공법을 이용한 세포 내 다중 분자 순차 전달 기술입니다. 정밀한 용량 조절과 높은 세포 생존율을 유지하며 효율적인 분자 전달이 가능합니다.

마이크로 소용돌이를 이용한 순차 분자 전달을위한 Electroporator을

더 많은 동영상 탐색