Name: 개발 배아 마우스 심장 밸브 지역에서 단백질 분리 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-09-23T14:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 55 s
Description: 배우세요 발달 중인 마우스 심장 밸브에서 단백질을 분리하고 추출하는 방법을. 이 프로토콜은 웨스턴 블롯 분석을 통해 단백질 발현 수준을 연구하는 데 필수적인 기술을 제공합니다.

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원고를 비판적으로 읽어준 Andrea Portbury와 Davin Townley-Tilson, 그리고 기금 지원을 해준 NIH(보조금 # R01HL061656)에 감사드립니다.

참고 : 모든 실험 채플 힐 노스 캐롤라이나 대학의 기관 동물 관리 및 사용위원회에 의해 승인되었습니다. 1 소비세 대동맥판 <ol><li> 관심 배아 스테이지 안락사 승인 기술을 사용하여, 개발의 목적 배아 일 (E)에서의 새끼와 임신 마우스를 안락사. </li><li> 임신 여성의 복부를 소독하기 위해 70 % 에탄올을 사용합니다. 멀리 내부 장기에서 낮은 복부 위쪽의 피부와 근육을 들어 올리고 자궁 뿔에 액세스 할 수 있도록 열려있는 여성의 낮은 복강을 절개. </li><li> 자궁 경적을 검색하려면 집게에 집게로 자궁 경부 조심스럽게 잘라 꼬리를 개최합니다. 장소에 혼을 유지하는 결합 조직을 절단, 자궁 경적을 들어 올리고 난관과 자궁 뿔의 접합을 절단하여 제거를 완료합니다. </li><li> 페트리 접시 포함 COL에 해부 자궁 경적을 배치D 0.1 M 트리스 완충액 (pH 7.6) 및 필요에 따라 린스. 그런 다음, 오픈 길이 현명한 배아 주머니를 노출하는 자궁 뿔을 잘라. </li><li> 배아를 표시하려면, 태반 및 태아의 교차점에서 배아 주머니를 열고 잘라 배아를 무료로 제대 혈관을 잘라. 차가운 0.1 M 트리스 버퍼를 가지는 초 페트리 접시에서 해부 배아를 놓습니다. 다음 배아에 대한 준비가 될 때까지 얼음에 나머지 undissected 배아와 첫번째 페트리 접시를 돌려줍니다. </li><li> 배아 내의 흉벽 접근을 개선하기 위해 배아를 참살. 유전자형이 필요한 경우 제거하고 얼음에 배치 된 에펜 도르프 튜브에 여분의 조직 일부를 저장한다. </li><li> 그 뒷면에있는 배아를 놓고 앞다리 근처, 흉곽의 측면을 따라 수직으로 가슴 벽을 잘라 수평 격막 위의 마음을 시각화 할 수 있습니다. 그런 마음을 노출하는 가슴 벽을 엽니 다. </li><li> 대 혈관을 따라 높은 잡아 집게를 사용하여 집게를 사용하여 마음을 들어 올려 아래의 혈관을 잘라.N, 마음을 무료로 집게 위에 잘라. 폐 혈관 포경 남아 있으면, 폐 심장으로 제거 될 수 있고 계속하기 전에 제거되어야한다. </li><li> 잘라 내기 및 밸브의 수준의 위 폐동맥을 제거; 여기에 기술 된 배아 단계에서, 폐동맥 밸브 지역에서의 차별에 도움되는 약간 불투명하다. 그냥 폐동맥 판막 아래 잘라 trabeculated 심실의 심근을 방지하고이 지역이 관심 또한 경우 단계 1.10에 설명 된대로 수집합니다. 여기서 및 다음 단계에서, 종래의 용해 완충액에 수집 어웨이 관심 영역으로부터 과량의 트리스 완충액을 그리 모세관을 사용한다. </li><li> 조심스럽게 그냥 밸브의 수준 이상으로, 대동맥 판막을 대동맥 원위부를 제거; 폐동맥과 같은 대동맥의 제거에 도움을줌으로써 이러한 배아 단계에서 약간 불투명 남아있다. 다시 trabeculated 심실 심근을 피하고, 단지 대동맥판 이하 잘라 및 전송얼음에 단백질 분해 효소와 포스 파타 아제 억제제를 포함하는 (재료 표에 설명) 2 μL 용해 버퍼 에펜 도르프 튜브에 집게를 사용하여 밸브. </li><li> 밸브는 별도의 에펜 도르프 튜브에 각 밸브를 수집, 모든 배아에서 적출 될 때까지 반복 1.6-1.10 단계를 반복합니다. 모든 배아는 동일한 유전자형을 가지고 있다면, 모든 밸브는 단일 에펜 도르프 튜브에 수집 될 수있다. </li><li> 유전자형이 함께 풀에 밸브를 결정하기 위해 수행해야하는 경우, 즉시 더 사용할 때까지 -80 ° C에서 용해 버퍼에 샘플을 배치. 시료 (단계 2.1.1) 유전형 후 풀링 될 수있다. </li></ol> 2 단백질 추출 <ol><li> 1 분은 튜브의 바닥에 용해 완충액에서 조직을 수집하기위한 13100 XG에서 얼음과 원심 분리기에 수집 된 조직을 해동. <ol><li> 배아 유전자형 된 경우, 부드럽게 수집하고 풀 용해 버퍼 유사한 유전자형을 가진 배아에서 밸브 영역을 포함하는 피펫을 사용합니다. 강한 B를 확보하려면샘플이 좋습니다 당과, E13.5 배아에서 3-4 밸브 영역을 풀링. </li><li> 모든 배아는 동일한 유전자형의이었고 모든 밸브 영역은 1.10 단계에서 함께 회수하고 있으면 단계 2.2에 기재된 바와 같이, 전체 샘플을 용해. </li></ol></li><li> 풀링 얻어진 시료의 부피를 점검하고 40 ㎕의 총 부피에 용해 완충액을 추가; 그때, 중단하고 에펜 도르프 튜브에 5mm 스테인리스 비즈를 사용하여 샘​​플을 균질화. 제조업체의 지침에 따라, 50 Hz에서 2-4 분 동안 lyser을 사용하십시오. 간단히 스핀 튜브, 불용성 이물질 남기고 새로운 튜브로 (13100 ~ 1 분간 XG) 및 전송 샘플. </li><li> 준비 및 Eslami 외 9와 같은 프로토콜 다음 SDS-PAGE 이후 서양 얼룩 분석을 위해 전송을위한 별도의 샘플. 로드 제어 단백질 블로 팅하는 단백질 정량에 필수적이다. </li></ol>

<ol><li>Wirrig, E. E., Hinton, R. B., Yutzey, K. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differential+expression+of+cartilage+and+bone-related+proteins+in+pediatric+and+adult+diseased+aortic+valves%5BTitle%5D)+AND+%22J+Mol+Cell+Cardiol%22%5BJournal%5D)">Differential expression of cartilage and bone-related proteins in pediatric and adult diseased aortic valves.</a> J Mol Cell Cardiol. 50, 561-569 (2011).</li>
<li>Chakraborty, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Twist1+promotes+heart+valve+cell+proliferation+and+extracellular+matrix+gene+expression+during+development+in+vivo+and+is+expressed+in+human+diseased+aortic+valves%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">Twist1 promotes heart valve cell proliferation and extracellular matrix gene expression during development in vivo and is expressed in human diseased aortic valves.</a> Dev Biol. 347, 167-179 (2010).</li>
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</ol>

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심장 밸브 영역을 조기에 마우스 배아 단백질 수준을 정량화하고 병아리 능력 밸브 개발에 중요한 세포 신호 전달 사건을 이해하기위한 추가 툴을 제공한다. 여기에 설명 된 우리의 프로토콜은 표준 단백질 분리 과정에서 크게 차이가 없습니다. 그러나, 몇 가지 주요 단계를 수정하여, 우리는 성공적으로 매우 작은 샘플 크기에서 인산화 단백질을 얻을 수있다. 이 결과를 달성하기 위해, 다음 단계가 특히 중요하다. 즉 양질의 단백질이 얻어진다 유지하려면 얼음 여부 필요한 경우, 인산 분해 효소 억제제의 존재하에, 빙냉 버퍼를 사용하여, 시료를 냉장 보관하는 것이 중요하다. 또한, 작은 샘플 볼륨을 처리하도록 설계된 장치는 충분히 균질화 세포막을 방해 필수적이다. 심지어이주의 사항으로, 단백질의 얻어진 수율은 분광 광도계와 브래드 포드 분석을 통해 검출 너무 낮을 수 있습니다또는 정지 단백질 정량 키트 및 후속 분석에 사용할 샘플을 가지고있다. 우리는 각 대동맥 판막 지역은 7 대동맥 판막 영역을 풀링 및 정량 전체 샘플을 사용하여 약 1 ...

단백질 발현 수준을 확인하고 정량 할 수있는 것은 동물성 및 세포 기반 실험을위한 표준 기술이다. 그러나,에도 불구하고 오랜 현재 병아리와 마우스 1, 2 모두에서 면역 조직 화학 염색으로 제한됩니다 개발 과정이 특정 조직에서 단백질 발현을 평가, 초기 배아 심장 밸브 개발에 관심을. 대부분의 모델 유기체 (예, 마우스 및 병아리)의 현상 밸브에서 단백질 발현을 정량화하는 어려움의 일부를 얻을 수있다 단백질의 양을 제한하는 밸브의 작은 크기이다. 따라서, 정량 분석을 위해, 연구원은 일반적으로 다음 정량 PCR이나 마이크로 어레이 분석 2-5 RNA 추출 및 증폭에 의존하고 있습니다. 그러나, RNA 및 단백질 발현 수준은 6 전적으로 상관 아니므 RNA 발현에 집중하면 특정 신호 발생 수많은 변화 엄격한 계정을 제공 할 수 없다개발하는 동안 여러 번 통로입니다. 현재 가능한 방법이 한계에 기초하여,이 절차의 목적은 안정적으로 중요한 다양한 신호 경로에서 발생하는 변화의 정량적 분석을 위해 개발 배아 마우스 심장 밸브 영역에서 단백질의 충분한 양을 획득하기위한 프로토콜을 개발하는 것이었다 이 조직의 성숙. 배아 밸브 이미 일반적으로 RNA 분리 및 후속 유전자 발현 분석을위한 2-5 생쥐 해부된다. 그러나, 이들 연구는 하류 시그널링에 영향을 미칠 수있는 번역 후 단백질 변형을 검출의 검출을 허용하지 않는 경로를 활성화, 신호의 판독으로 유전자 발현을 사용하여 한정 하였다. 출발점으로 RNA 분리 기법을 사용하여, 관심 영역을 해부 시작되었다. 우리의 관심은 인산화 된 단백질을 검출 되었기 때문에 신호 확실 나타내는라고대동맥 판막 개발 (E13.5-14.5)의 특정 기간 동안 hway 활동, 우리는 포스페이트없는 트리스 완충액에서 모두 박리를 수행 프로테아제 및 포스파타제 억제제 트리스 계 용해 완충액에 밸브를 모았다. 우리의 특정 경우에만 대동맥판 영역은 회수하고 있지만, 폐동맥 판막 영역 용이 동시에 얻을 수 있었다. 밸브 영역은 균질화 현재 성인 심장 밸브 (7)의 단백질 발현을 연구하는 데 사용되는 샘플 완충액과 혼합 하였다. 작은 샘플 볼륨 (예를 들어, 2 μL)를 사용하고 동일한 유전자형 배아에서 밸브 영역 풀링함으로써 배아 일 13.5 8에서 인산화 및 비 인산화 된 단백질을 검출 할 수 있었다. 밸브 영역 동결 및 용해 버퍼에 저장 될 수 있기 때문에 풀링하기 전에, 필요한 경우, 배아는 유전자형을 할 수있다. 이 기술은 셀 signalin 평가에 사용할 수있는 툴 세트를 넓게g 개발 중에 경로와 특별히 개발 심장 밸브에 대한 면역 조직 화학 염색에 대한 정량적 칭찬을 제공합니다. 이 기술은 발달 심장병 전문의로뿐만 아니라 제한적인 조직을 포함하는 지역에 관심이있는 초기 단계의 배아에서 작동하는 모든 발달 생물 학자뿐만 아니라 도움이 될 것이다.

<table><tbody><tr><td>임산부 마우스</td><td></td><td></td><td>관심 배아 단계에서 해부</td></tr> 실<tr><td>체 현미경</td><td>Nikon</td><td>SMZ645</td><td></td></tr><tr><td>0.1 M Tris, pH 7.6</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Microscissors</td><td>Fine Science Tools</td><td>15003-08</td><td></td></tr><tr><td>Fine Forceps, # 5</td><td>Fine Science Tools</td><td>11251-30</td><td></td></tr><tr><td>해부 바늘 보유자</td><td>: Ted Pella Inc.</td><td>13560</td><td></td></tr><tr><td>해부 바늘</td><td>Ted Pella Inc.</td><td>13561-10</td><td></td></tr><tr><td>마이크로 피펫, 20 &mu; 엘, 팁</td><td></td><td></td><td></td>포함</tr><tr><td>용해 완충액</td><td></td><td></td><td>50 mM Tris-HCl, pH 7.5, 150 mM NaCl, 5 mM EDTA, 1 % Triton</td></tr><tr><td>PhosSTOP</td><td>Roche</td><td>4906845001</td><td>10 ml 용해 완충액에 1 정제 추가</td></tr><tr><td>TissueLyser LT</td><td>Qiagen</td><td>85600</td><td></td></tr><tr><td>스테인레스 스틸 비드</td><td>Qiagen</td><td>69989</td><td></td></tr><tr><td>마이크로 원심 분리기</td><td></td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

개발 배아 마우스 심장 밸브 지역에서 단백질 분리

Protein Isolation from the Developing Embryonic Mouse Heart Valve Region

웨스턴 블롯 분석은 단백질 수준을 감지하고 정량화하는 데 일반적으로 사용되는 기술입니다. 그러나 작은 조직 샘플의 경우 이 분석 방법은 관심 단백질을 검출하기에 충분히 민감하지 않을 수 있습니다. 이러한 어려움을 극복하기 위해 우리는 성인 인간 심장 판막에서 단백질을 얻기 위한 프로토콜을 조사하고 발달 중인 초기 배아 쥐 대응물에 대해 이러한 프로토콜을 수정했습니다. 간단히 말해서, 대동맥 판막과 주변 대동맥 벽을 포함한 마우스 배아 대동맥 판막 영역은 프로테아제 억제제가 포함된 Tris 기반 용해 완충액의 가능한 최소 부피로 수집됩니다. 육종 전략에 따라 필요한 경우, 균질화를 위해 4개의 배아 대동맥 판막 부위를 통합하기 전에 배아를 유전자형화합니다. 균질화 후, SDS 기반 샘플 버퍼를 사용하여 SDS-PAGE 겔에서 실행하고 후속 웨스턴 블롯 분석을 위해 샘플을 변성시킵니다. 단백질 농도가 너무 낮아 분광광도계 단백질 정량화 분석을 사용하여 정량화할 수 없고 후속 분석을 위해 샘플이 남아 있지만, 이 기술은 각각 약 1μg의 단백질을 생성하는 4개의 배아 데이 13.5 마우스 대동맥 판막 영역의 풀링된 샘플에서 웨스턴 블롯을 통해 인산화 단백질을 성공적으로 검출하고 반정량화하는 데 사용할 수 있습니다. 이 기술은 초기 배아 마우스 판막 발달 동안 세포 신호 전달 경로 활성화 및 단백질 발현 수준을 연구하는 데 도움이 될 것입니다.

이러한 준비의 기술을 사용하여, 우리는 E13.5 배아에서 하나의 대동맥 판막 지역에서 인산화 TGF 계통 1,5,8 (pSmad)을 감지 할 수 있었다. 도 1a에 도시 된 바와 같이, 심지어 단일 밸브 영역으로부터 분리 된 단백질은 희미한 pSmad 밴드를 검출하기에 충분하다. 신호 강도는 풀링 밸브 영역의 개수에 비례하여 증가한다. 중요한 것은, pSmad / β-액틴 비율은 서로 다른 샘플 크기 (그림 1C)에 걸쳐 거의 일정하게 유지된다. 인해 가능한 단백질의 낮은 수준으로, 동일한 오점이 박탈 될 수없고 전체 TGF 계통 위해 reprobed. 그러나, 별도의 총 TGF 계통으로 한 보여주는 오와 β-액틴 같은 표현 패턴 (그림 1B)를 보여줍니다. 이 밸브 영역은 심실 심근 오염의 거의없는 상태이다. 우심실의 샘플과 함께이 준비 기술을 사용하여, 우리는 ...

어린 배아 마우스 판막의 단백질 발현 분석은 이용 가능한 조직의 한계로 인해 방해를 받았습니다. 이 원고는 웨스턴 블롯 분석을 위해 발달 중인 배아 마우스 판막 영역에서 단백질을 준비하기 위한 프로토콜을 제공합니다.

Western blot analysis is a commonly employed technique for detecting and quantifying protein levels. However, for small tissue samples, this analysis ...

이 절차의 전반적인 목표는 배아 심장 판막에서 단백질을 분리하고 추출하는 것입니다. 이것은 먼저 임신한 쥐에서 배아를 분리함으로써 달성됩니다. 두 번째 단계에서는 배아에서 심장을 절개한 다음 마지막 단계에서 심장 판막을 수집합니다.조직을 용해시키고 생성된 단백질 샘플을 후속 분석을 위해 준비합니다. 궁극적으로 웨스턴 BLO 분석은 단백질 발현 수준을 평가하는 데 사용할 수 있습니다. 이 방법의 시각적 시연은 발달 중인 심장의 작고 조밀한 모양 때문에 해부 단계를 배우기 어렵기 때문에 매우 중요합니다.원하는 배아 발달 당일에 70% 에탄올을 사용하여 임산부의 복부를 살균합니다. 그런 다음 하복부의 피부와 근육을 들어 올려 내부 장기에서 멀리 떨어뜨리고 하복부를 절개하여 자궁 뿔에 접근할 수 있도록 합니다. 다음으로 집게로 자궁 경부를 잡고 끝까지 조심스럽게 자릅니다.그런 다음 자궁 뿔을 들어 올려 뿔을 제자리에 유지하는 결합 조직을 절단하고 자궁 뿔과 요실의 접합부를 절단하여 제거를 완료합니다. 절개된 자궁 뿔을 차가운 0.1 어금니 트리스 완충액이 들어 있는 페트리 접시에 넣고 필요에 따라 헹굽니다. 그런 다음 자궁 뿔을 자릅니다.배아 자루가 드러나도록 세로로 벌립니다. 배아를 노출시키려면, 태반과 배아의 접합부에 있는 배아 자루를 절단하고, 배꼽 혈관을 잘라 배아를 빼낸다. 절개된 배아를 차가운 0.1 어금니 트리스 완충액이 있는 두 번째 페트리 접시에 넣고, 해부되지 않은 나머지 배아와 함께 첫 번째 페트리 접시를 다음 배아 해부까지 얼음에 되돌려 놓습니다.참수 후 배아를 등에 눕히고 흉벽을 흉곽 측면을 따라 절뚝거리기 위해 수직으로 절단하고 횡격막 위로 수평으로 자릅니다. 심장을 시각화하려면 흉벽을 엽니다. 그런 다음 집게를 큰 혈관을 따라 높이 들고 심장을 들어 올리고 아래의 혈관을 잘라냅니다.다음으로, 집게 위를 잘라 심장을 빼냅니다. 폐혈관이 절단되지 않은 상태로 남아 있는 경우, 본원에 기술된 배아 단계에서 계속하기 전에 심장과 함께 폐를 제거하고, 폐동맥은 약간 불투명합니다. 동맥을 확인한 후 판막 수준 이상으로 절개하여 제거하십시오.이제 ECD 심실 심근을 피하고 폐 판막 바로 아래를 자르고 관심 영역에서 과도한 트리스 버퍼를 제거합니다. 폐동맥과 같이 2마이크로리터의 용해 완충액이 들어 있는 einor 튜브에 판막을 삽입하기 전에 대동맥이 약간 불투명하게 보일 것입니다. 식별 후 대동맥 판막 바로 아래를 절단합니다.다시 말하지만, 섬유주화된 심실 심근을 피해야 합니다. 여분의 삼중 용액을 제거한 다음 밸브를 용해, 완충액 및 폐동맥 조직이 포함된 einor 튜브로 옮깁니다. 모든 조직을 채취한 후 즉시 샘플을 섭씨 영하 80도까지 놓습니다.단백질 적출을 위해 사용하고, 얼음에 모은 조직을 녹이고, 그 후에 13, 4 섭씨 온도에 100 Gs에 1 분 동안 표본을 펠릿으로 만듭니다. 결과 샘플의 부피를 확인하고 용해 버퍼를 사용하여 총 부피를 최대 40마이크로리터까지 가져옵니다. 그런 다음 5mm 스테인리스강 비드를 추가하여 제조업체의 지침에 따라 50Hz에서 2-4분 동안 lyr의 샘플을 파괴하고 균질화합니다.균질화 후 튜브를 잠시 회전시키고 샘플을 새 튜브로 옮겨 추가 실험 분석을 위해 불용성 파편을 남깁니다. 이 제제 기술을 사용하여 E 13.5 배아의 단일 대동맥 판막 영역에서 인산화된 smad 1 5 8을 검출할 수 있습니다. 예를 들어, 단일 판막 영역에서 분리된 단백질만으로도 풀링된 판막 영역의 수에 비례하여 신호 강도가 증가하는 희미한 p smad 대역을 감지하기에 충분합니다.중요한 것은 p smad 베타 액틴 비율이 사용 가능한 단백질 수준이 낮기 때문에 다양한 샘플 크기에서 명확하게 일정하게 유지되며, 동일한 블롯을 벗겨내고 총 smad에 대해 다시 프로브할 수 없다는 것입니다. 그러나 total smad one과 beta actin을 보여주는 별도의 블롯은 동일한 발현 패턴을 나타냅니다. 이러한 판막 영역에는 우심실의 샘플인 심실 심근 마커와 함께 이 준비 기술을 사용하여 심실 심근을 오염시키는 것이 거의 전혀 없으며, NP는 대동맥 판막 영역에서 검출되지 않는 반면, 이 마커는 심실에서 쉽게 검출됩니다.또한, 심실 심근 마커인 미오신 경쇄 2 V도 심실 샘플에서 쉽게 검출할 수 있지만 대동맥 판막 영역에서는 거의 검출되지 않아 이 박리의 정확성을 강조합니다. QPCR 또는 RN AIC와 같은 다른 mes는 다른 발달 단계에서 어떤 다운스트림 유전자가 영향을 받는지와 같은 추가 질문에 답하기 위해 수행할 수 있습니다.

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연구

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Biology

생물학

이 문서는 분리를위한 방법과 culturing 퀘일 또는 닭고기 HH14를...

조류 배아 판막병 전구 세포의 분리 및 문화

이 프로토콜에서는 전자 와트 심방 부정맥 쥐에 트리거에 기여 쥐와 인간의 마음에서 (또한 심장 멜라닌 세포라고도 함) 멜라닌 세포와 같은 세포의 새로운 인구를 확인했다.

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Isolation of Mouse Valve Interstitial Cells: 마우스 대동맥 판막에서 VIC를 분리하고 배양하는 효소 방법

기본 세포 배양은 특히 특정 발달 단계에서 유전자 변형 마우스 배아에서 세포의 특정 인구를 분석하기위한 유용한 기술이다. 여기서, 배아 심실는 해부와 해리, 항체가 결합 된 구슬 인식하고 자세한 분석을 위해 내피 세포를 분리한다.

배아 심실 내피 세포의 분리

심장 판막 내피 세포(VEC)를 분리하는 능력은 판막 발달, 유지 및 질병의 메커니즘을 이해하는 데 매우 중요합니다.  여기에서는 FACS를 사용하여 배아 및 성인 Tie2-GFP 마우스에서 VEC를 분리하는 방법을 설명하며, 이를 통해 발달 및 질병 과정에서 VEC의 기여도를 결정하는 연구를 수행할 수 있습니다.

쥐과 밸브 내피 세포의 분리

이 프로토콜은 높은 수율, 순도 및 생존력을 가진 성체 마우스 심근세포의 재현 가능한 분리 및 장기 배양을 위한 단계별 방법을 설명합니다.

격리, 문화 및 성인 마우스 심근 세포의 형질 도입

관상 동맥 혈관신생의 시험관내 모델은 관상 동맥 혈관신생의 세포 및 분자 기전의 발견을 위해 이용될 수 있다. 부비동 및 심내막 조직의 체외 배원 배양은 VEGF-A에 반응하여 견고한 성장을 나타내고 생체 내에서와 같이 COUP-TFII 발현의 유사한 패턴을 표시한다.

관상 동맥 혈관 신생의 체외 모델

우리는 선행 관류 기술에 의해 고품질의 개별 마우스 심장 세포를 격리하기위한 simple 방법을 개발했습니다. 이 방법은 Langendorff가 없으며 심실 및 심방 심근 세포 또는 심장 섬유아세포 또는 선조와 같은 간질 세포를 분리하는 데 유용합니다.

마우스에서 심근세포 절연을 위한 영양 관류 방법

이 문서에서는 2단계 콜라게나아제 절차에 의한 마우스 대동맥 판막 세포의 분리에 대해 설명합니다. 격리된 마우스 밸브 세포는 체외 석회화 분석과 같은 상이한 분석체를 수행하고 대동맥 판막 광물화로 이어지는 분자 경로를 조사하는 데 중요합니다.

시험관 내 대동맥 판막의 석회화를 연구하기 위해 마우스 간막판 세포의 격리

본 프로토콜은 전기생리학적 연구에 적합한 성체, 청소년, 유충 및 배아 제브라피쉬(Danio rerio)로부터 생존가능한 심장 및 혈관 평활근 세포의 급성 단리를 기술한다.

전기 생리 학적 연구를위한 성체, 청소년, 애벌레 및 배아 제브라 피쉬에서 심장 및 혈관 평활근 세포 분리

여기에서 우리는 세포핵 준비를 설명하는 프로토콜을 제시합니다. 심장 조직을 단일 세포로 미세 해부 및 효소 해리한 후, 전구 세포를 동결한 다음, 순수 생존 세포를 분리하여 단일 핵 RNA 시퀀싱 및 고처리량 시퀀싱 분석을 통한 전이효소 접근 가능한 염색질에 대한 단일 핵 분석에 사용했습니다.

단일 세포 분해능에서 후성유전체 및 유전자 발현 프로파일링을 위한 마우스 심장 전구 세포에서 핵 분리

배우세요 발달 중인 마우스 심장 밸브에서 단백질을 분리하고 추출하는 방법을. 이 프로토콜은 웨스턴 블롯 분석을 통해 단백질 발현 수준을 연구하는 데 필수적인 기술을 제공합니다.

개발 배아 마우스 심장 밸브 지역에서 단백질 분리

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