持続的な障害と皮質虚血を研究するために高齢ラットにおける一般的な頸動脈閉塞と永久遠位中大脳の実行

この手順の全体的な目標は、高齢ラットモデルで永久的な中大脳動脈、またはMCA閉塞を行うことです。これは、最初に頸動脈を露出させ、後で結紮するために緩くループさせることによって達成されます。2番目のステップでは、頭蓋骨に穴を開けてMCAを明らかにします。

次に、血管を鉗子で凝固させて閉塞を開始します。最後のステップでは、右頸動脈が永久に結ばれ、左頸動脈が一時的に閉塞します。最終的に、T2 強調磁気共鳴画像法を使用して、病変のサイズを観察し、手順の成功を確認します。

このモデルは、中大脳動脈領域における再現可能なサイズの梗塞と、高齢ラットにおける持続的な行動障害を可能にする。手順を開始する前に、16〜18か月齢の雌のリスターフードラットのつま先のつま先つまみに対する反応の欠如による適切な鎮静レベルを確認し、適切な鎮痛剤を投与します。.次に、動物の腹側頸部と右半球側頭領域の毛皮を剃り、エタノール綿棒を使用して露出した皮膚を消毒します。

加熱パッドの上に滅菌ドレープで覆われたコルクボードの上にラットを仰臥位に置き、頭と首の剃った部分にリドカインクリームを塗ります。.直腸プローブを挿入して体温を摂氏36.5度から37.5度に維持し、動物の目に軟膏を塗ります。次に、ラットに0.05ミリリットルの硫酸アトロピンを注入して気管分泌を減らし、動物を実体顕微鏡下に置きます。

露出した首に2センチメートルの中央正中線切開から外科的処置を開始し、動物の両側の気管に対して唾液腺を穏やかに外側に動かします。次に、首の右側で、露出した領域を覆う皮膚に非吸収性のシルク5-0縫合糸を通し、縫合糸を使用して皮膚を切開部からそっと引き離します。サージカルテープを使用して、縫合糸をコルクボードに取り付けて、総頸動脈を露出させます。

次に、鉗子を使用して、周囲の筋膜から動脈を慎重に鈍く解剖します。総頸動脈が露出したら、細い鉗子を使用して迷走神経から動脈を逆解剖し、神経に接触しないように注意します。非吸収性の縫合糸で血管をループし、縫合糸の端をサージカルテープで一緒にテープで留めます。

次に、頸動脈の周りにループする縫合糸に干渉しないように、上にある皮膚を固定している縫合糸を取り外します。先ほど示したように、左側で手順を繰り返します。両方の動脈をループさせ、余分な縫合糸を取り除いた後、無菌の生理食塩水に浸したガーゼを傷口に入れて組織の湿潤を保ち、皮膚をゆるく縫合します。

さらなる脱水を防ぐために、生理食塩水に浸した別のガーゼをその領域に置き、ラットを横向きの位置に変更します。右眼窩と外耳道の中点で皮膚を切開します。次に、側頭筋を鈍く解剖して頭蓋骨を明らかにします。

次に、最大5つの伸縮性のある3mmフックリトラクターを使用して、スキンを引っ込めてコルクボードに固定します。次に、サムホイールを調整した重力駆動の生理食塩水点滴を、耳の近くの頭蓋骨の最高点にある開いた部位の上に置き、ノズルを最も低い位置に置いて吸引器システムを設置して、骨の破片を取り除き、露出した部位からの軽度の出血を取り除きます。必要に応じて、ホイールを調整して出血の原因を視覚化します。

今度は、露出した領域に5ミリメートル×5ミリメートルの開頭術を行うために、約8, 000 rpmで粗い1.6ミリメートルダイヤモンドコーティングドリルバリを備えた歯科用ドリルを使用します。円と横方向を適用するように注意しますが、穴あけ中に下向きの圧力をかけないように注意してください。完全に透明になったら、鉗子を使って骨を取り除きます。次に、自家製の硬膜フックを使用して、大きな表面の血管が破裂しないように注意しながら、硬膜を慎重に開きます。

次に、先端が0.25ミリメートルの尖った角度のついた宝石商のジアテルミー鉗子を使用して、下脳静脈が動脈分岐点まで交差するところからMCAを凝固させ、次に血管が完全に閉塞するまでMCAの尾側枝に沿って凝固させます。次に、閉塞が完了したことを確認するには、微小血管ハサミを使用して、下大脳静脈がMCAと交差する場所の下にある閉塞したMCAのセクションを切断します。次に、露出した領域を生理食塩水に浸したガーゼパッドで覆い、ラットを仰臥位に戻します。

首のゆるく結ばれた縫合糸を再度開いて頸動脈を再露出させ、閉塞したMCAと同じ側の動脈の周りの縫合糸に結び目を結び、血管を永久に結紮します。次に、約125グラムの圧力で13ミリメートルのステンレス鋼の動脈クリップを使用して、左頸動脈を1時間一過性に結紮します。一時的な閉塞中に、首の切開部をゆるく縫合し、切開部に別の滅菌済みの生理食塩水に浸したガーゼを置きます。

次に、側頭部の切開部を縫合し、続いて生理食塩水を5ミリリットルの皮下注射を4回行います。一時的な閉塞期間の終わりに、クリップを取り外し、生理食塩水を周囲の筋肉に局所的に塗布します。.次に、吸収性4-0縫合糸の皮下連続縫合を使用して、首の切開部を閉じ、動物が摂氏31度のインキュベーターで4時間麻酔から回復するのを待ちます。

手術後にラットが体重減少を示した場合は、上下の歯を検査してください。次に、動物を仰臥位にして、軟部組織を保護するために歯の後ろに1ミリメートルの注射器バレルを置き、ハンドヘルド丸鋸を高速回転速度でゆっくりとしっかりと動かして動物の歯を整えます。梗塞の体積を測定するには、中大脳動脈閉塞の誘導から 24 時間後に構造 MRI を使用して T2 強調スキャンを取得します。

次に、梗塞の断面積を20体積で測定して、医用画像表示パッケージで病変体積を取得し、これらの領域の合計に厚さを掛けて、梗塞の総体積を求めます。病変体積の割合を計算するには、イプシレシオナル半球とコントラレシオナル半球の体積も取得します。将来の研究のためにサンプルサイズを計算するには、検出力解析ソフトウェアを使用して、さまざまな大きさの治療効果を特定するために必要なグループサイズを推定するためのサンプルサイズ計算を決定します。

この実験では、脳卒中の転帰は、先ほど実証されたようにMCA閉塞の24時間後と8週間後に評価され、梗塞容積はラットの脳の領域が超高強度の信号を示すと特定されました。この代表的な実験では、24時間後の未調整の生の病変体積は62.8ミリメートルの3乗であり、病変は影響を受けた半球の9.8%を占めていました。Gerrietsの公式を使用して脳の腫れを補正すると、この値は4.5%に減少しました。

脳卒中の重症度は、モントーヤ階段試験を使用しても測定され、MCA閉塞脳卒中動物で観察された糖ペレットの回収が約40%減少しました。この手順を試みるときは、結紮のために頸動脈を操作するときに迷走神経を慎重に解剖することを覚えておくことが重要です。この手順に続いて、神経保護が梗塞のサイズにどのように影響するか、脳卒中後の転帰を改善できる可能性のある治療法など、追加の質問に答えるために治療を行うことができます。