탈 신경 외과 피부 : 피부 질환의 마우스 모델에서 신경에 대한 요구를 테스트하기위한 방법

이 절차의 전반적인 목표는 정상 및 병리학적 피부에 대한 신경의 영향을 조사하는 것입니다. 이 방법은 피부 신경이 항상성 및 질병에 영향을 미치는지 여부와 같은 정상적인 피부 생물학의 주요 질문에 답하는 데 사용할 수 있습니다. 이 기술의 주요 장점은 동일한 동물의 온전한 피부 샘플과 탈신경 처리된 피부 샘플을 비교할 수 있다는 것입니다.

주변 조직에 대한 최소한의 손상으로 신경을 인식하고 제거하기 어려울 수 있으므로 이 기술을 시각적으로 시연하는 것이 중요합니다. 먼저 마우스를 마취하고 발가락 꼬집기를 사용하여 적절한 진정 수준에 도달했는지 확인합니다. 또한 마우스가 정상적인 호흡과 심장 박동을 보이는지 확인합니다.

이제 무균 수술 구역의 보온 패드에 동물을 놓습니다. 전기 가위를 사용하여 생검을 할 등 쪽의 털을 조심스럽게 제거합니다. 그런 다음 베타다인과 알코올 물티슈를 사용하여 면도한 부위를 닦습니다.

현장에서 모든 머리카락 깎기가 제거되었는지 확인하십시오. 이제 검은색 마커를 사용하여 생검 부위의 윤곽을 그립니다. 모낭의 세로 부분을 얻으려면 생검의 긴 가장자리가 앞쪽에서 뒤쪽 방향으로 등쪽 정중선에 기하부로 이어져야 합니다.

메스를 사용하여 밑에 있는 근육 근막을 손상시키지 않고 전체 두께를 절제합니다. 출혈은 일반적으로 경미합니다. 생검 샘플에는 표피, 진피, 피하 지방 및 panniculus carnosus가 포함되어야 합니다.

절제된 피부 샘플을 마른 종이 타월로 평평하게 펴고 진피 면이 아래로 향하게 합니다. 여분의 종이 타월을 잘라내고 다른 샘플을 수집해야 하는 경우 최대 한 시간 동안 샘플을 차가운 TBS에 보관하십시오. 다시 마우스로 돌아와서, 약 3mm 간격으로 60개의 나일론 봉합사를 사용하여 생검 부위를 봉합합니다.

그런 다음 의식을 회복할 때까지 회복 케이지에서 마우스를 모니터링합니다. 지정된 기관 동물 관리에 따라 진통제를 사용하고 마우스가 괴로워하는 것처럼 보이면 지침을 따르십시오. 수술 후 7일에서 10일 이내에 봉합사를 제거하십시오.

조직학 또는 전체 마운트 염색을 위한 생검 처리를 진행합니다. 동물을 마취하고, 등쪽 피부 전체를 면도하고, 생검 절차와 유사하게 해당 부위를 청소합니다. 이제 멸균 메스를 사용하여 목 기저부에서 꼬리 위 약 50cm까지 등 정중선을 따라 절개합니다.

무균의 뭉툭한 집게를 사용하여 왼쪽 피부를 옆구리에서 부드럽게 집어넣어 목 근처의 견갑골 지방 패드에서 뒷다리 바로 위까지 기본 조직을 시각화합니다. 이제 해부 광학 현미경으로 등쪽 피부 신경을 확인하십시오. 이들은 몸통 벽의 반투명 근막을 통해 꼬리로 이동하는 흰색 가닥으로 나타나 급격히 구부러져 피부 아래의 느슨한 결합 조직으로 들어갑니다.

다음으로, 초미세 겸자를 사용하여 몸통 벽에서 분절이 구부러진 곳에서 피부로 들어가는 부위까지 뽑아서 해부학적 부위 T3에서 T12에 위치한 동물의 왼쪽에서만 신경을 제거합니다. 겸자를 수직으로 향하게 하고 구부러진 부위 아래 약 50cm 아래에 있는 신경을 잡습니다. 일단 잡으면 위로 당겨 신경이 늘어나고 주변 조직에서 분리되어 신경을 제거합니다.

인접한 혈관이 손상되지 않도록 하십시오. 0.9%의 스틸 식염수 용액을 주기적으로 방울 떨어뜨려 시술 내내 조직을 촉촉하게 유지하십시오. 몸통 벽에서 피부로 뻗어 있는 모든 신경을 계속 제거하되 몸통 벽의 빽빽한 근막 내의 신경을 방해하지 마십시오.

다음으로, 노출된 피부 피판에서 신경을 제거합니다. 이 섬유는 등쪽 피부 신경의 원위 가지를 구성하며 피부 피판의 진피 쪽에 있는 결합 조직 내에 산발적으로 위치한 흰색 분기 가닥으로 나타납니다. 이 미세한 가지를 제거하려면 겸자를 피부 표면과 대략 평행하게 놓고 신경을 잡고 위쪽으로 뽑습니다.

이런 식으로 눈에 보이는 모든 신경을 제거하십시오. 혈관과 피부에 구멍을 뚫지 마십시오. 이 단계에서는 주변 혈관이 파열되지 않도록 하는 것이 중요하다.

인접한 혈관이 있는 신경을 발견하면 인접 혈관이 없는 부위까지 따라가서 뽑아 제거합니다. 이제 등쪽 정중선 절개 부위의 오른쪽 피부를 느슨하게 하되 신경을 제거하지 마십시오. 이것은 반대쪽 가짜 작동 통제로 작용할 것입니다.

마지막으로, 동물을 봉합하고 이전과 같이 수술 후 모니터링합니다. 나중에 안정적인 신경 손실을 확인하기 위해 수술 후 몇 주 후에 멸균 피하 주사 바늘을 사용하여 탈신경 부위를 부드럽게 찌릅니다. 동물이 일반적으로 몸을 떨거나 고개를 돌리는 등의 반응을 보이는지 주목하십시오.

피부 부위가 안정적으로 탈신경된 경우, 동물은 거의 또는 전혀 반응을 보이지 않을 것입니다. 반응이 없는 영역과 반대쪽 가짜 쪽에서 일치하는 실험 및 대조 샘플에 대한 피부 생검을 수집합니다. 생검에서 여러 조직학적 단면을 샘플링하여 가짜 표본과 탈신경화된 표본 사이의 터치 돔 풍부도 또는 형태학의 잠재적인 차이를 식별하는 것이 중요합니다.

glebe one cree ERT2 마우스 균주는 터치 돔 상피와 같은 높은 고슴도치 경로 활성을 나타내는 피부 부위에 대한 타목시펜 유도 유전자 재조합을 표적으로 할 수 있습니다. 이 마우스는 abolaxi reporter 마우스가 터치 돔 상피를 시각화하도록 유도하기 위해 교배되었습니다. 노드는 일반 터치 돔과 관련 Merkel 세포를 모두 유지하는 데 중요합니다.

이것은 정상적인 터치 돔 형태의 점진적인 손실과 탈신경 후 8개의 침착된 케라틴 세포의 손실에 의해 실험적으로 입증되었습니다. 신경은 또한 Glebe one cree ERE2 발현과 가짜 및 탈신경화된 피부 모두에서 가정용 베타 집단 측면 염색으로 모니터링되는 터치 돔에서 고슴도치 신호를 촉진하는 데 중요합니다. 이 동영상을 시청한 후에는 등쪽 피부 신경이 정상적인 피부 기능에 관여하는지 또는 질병을 조절하는지 테스트하기 위해 등쪽 피부 신경을 외과적으로 제거하는 방법을 잘 이해하게 될 것입니다.

일단 숙달되면 이 기술은 동물에게 최소한의 스트레스로 일상적이고 안정적으로 수행할 수 있습니다. 이 절차에 따라 아미노 형광 염색과 같은 방법을 사용하여 피부에서 신경이 완전히 절제되었는지, 유전자 발현이 영향을 받고 있는지 여부를 확인할 수 있습니다.