쥐의 복부 대동맥의 수축을 통해 심장 리모델링의 모델

수술 절차의 전반적인 목표는 심근 비대, 리모델링 및 기능 장애를 연구하기 위한 간단한 플랫폼을 제공하는 것입니다. 이 방법은 심장 비대 및 리모델링과 관련된 신호와 같은 심혈관 분야의 주요 질문에 답하는 데 도움이 될 수 있습니다. 고혈압성 심장 질환에서 새로운 치료 표적을 발견했습니다.

이 기술의 가장 큰 장점은 매우 간단한 수술 기술이 필요하지만 결과의 재현성이 높은 최소 침습 방법이라는 것입니다. 이러한 기술의 의미는 고혈압성 심장 질환 치료로 확장됩니다. 복부 대동맥의 수축은 압력 과부하를 유발하고 결국 심장 비대, 리모델링 및 심부전으로 이어지기 때문입니다.

시작하려면 호닝 스톤을 사용하여 팁을 무디게 하여 22게이지 주사기 바늘을 준비합니다. 그런 다음 펜치를 사용하여 바늘을 직각으로 자극하십시오. 회복 케이지를 포함하여 필요한 수술 재료를 준비하고 수술 기구를 고압멸균합니다.

쥐를 약 200g으로 유지하고 음식과 물을 자유롭게 이용할 수 있는 통제된 온도에서 12시간 명암 주기 미만으로 유지하십시오. 체온을 유지하기 위해 발열 패드가 있는 수술 플랫폼에 쥐를 누운 자세로 놓습니다. 털과의 접촉으로 인한 상처의 오염을 방지하기 위해 수술 부위를 완전히 면도하십시오.

그런 다음 베타딘 또는 다른 클라이징 시약으로 깨끗하게 면도한 복부를 문지릅니다. 그런 다음 메스를 사용하여 복부 정중선을 따라 2cm 절개를 만듭니다. 그런 다음 생리식염수를 사용하여 복부 장기를 촉촉하게 하고 수술 중에 장기를 촉촉하게 유지한다.

면봉을 사용하여 소화 기관을 조심스럽게 옆으로 옮겨 하대정맥과 후복막 부위를 노출시킵니다. 그런 다음 하대정맥(inferior vena cava)의 왼쪽에 병치되어 있는 복부 대동맥(abdominal aorta)을 확인합니다. 이제 집게로 복막을 뚫어 아래에 있는 혈관을 드러냅니다.

신장 동맥에 인접한 복부 대동맥을 부드럽게 분리하고 좌우 신장 동맥의 기원 사이의 혈관 아래에 8cm 길이의 4/0 실크 봉합사를 통과시킵니다. 봉합사로 느슨한 이중 매듭을 만들고 직경 3mm의 고리를 남겨 둡니다. 그런 다음 무뎌지고 구부러진 22 게이지 바늘을 루프 내부에 넣습니다.

대동맥과 바늘 주위의 매듭을 조인 다음 즉시 바늘을 제거하여 직경 0.7mm의 수축을 얻습니다. 6/0 봉합사로 복강을 닫습니다. 그런 다음 간단한 단속 봉합사를 사용하여 근육과 피부 절개 부위를 봉합합니다.

요오드 팅크를 사용하여 수술 부위를 문질러 감염을 예방합니다. 수술 후 통증을 예방하기 위해 동물에게 아세트아미노펜을 투여하고 동물이 자유로운 움직임과 음식 섭취로 알 수 있듯이 충분한 의식을 회복하고 흉골 누운 자세를 유지할 때까지 동물을 면밀히 관찰합니다. 수술 후 10주가 되면 쥐의 체중을 잰다.

동물을 마취하고 마취 깊이를 확인한 후 쥐를 금속 쟁반에 놓습니다. 이제 xiphoid process의 정중선 주위의 흉부 부위를 5cm 절개합니다. 날카로운 집게를 사용하여 횡격막을 뚫습니다.

그런 다음 가위로 양쪽의 쇄골 중간 선을 따라 흉곽을 자르고 제거하여 심장을 노출시킵니다. 심장과 혈관 경계를 따라 심장을 조심스럽게 절제합니다. 그런 다음 조직을 잡지 않고 심장을 부드럽게 제거합니다.

대동맥 줄기를 관류 바늘에 묶어 개조된 Langendorff 관류 장치에 심장을 장착합니다. 그런 다음 크렙스 버퍼를 사용하여 심장을 관류하고 혈액을 씻어냅니다. 심장의 무게를 측정하고 체중 대 체중 비율을 계산합니다.

그런 다음 마스크를 착용한 상태에서 장기에 파라포름알데히드 4%를 넣고 밤새 얼음 위에 고정합니다. 심장 조직을 고정한 후 조직 절편 장치에 놓고 2mm 두께의 조각으로 자른 다음 절편을 임베딩 카세트에 넣습니다. 텍스트 프로토콜에 따라 파라핀 임베딩 및 추가 절편 후, 슬라이드를 자일렌이 함유된 탱크에 30분 동안 배치하여 파라핀을 제거합니다.

그런 다음 순차적으로 희석된 알코올 시리즈로 조직을 재수화한 다음 증류수를 공급합니다. 다음으로 적절한 피크로시리우스 레드 용액을 사용하여 조직 부분을 완전히 덮고 1시간 동안 배양합니다. 그런 다음 0.5% 아세트산 용액을 사용하여 슬라이드를 두 번 헹굽니다.

그리고 샘플을 절대 알코올로 두 번 헹굽니다. 샘플을 자연 건조하고 커버 슬립으로 합성 수지에 장착합니다. 그런 다음 200X 배율의 현미경으로 가시광선을 사용하여 슬라이드를 이미지화합니다.

마지막으로, 섬유증의 정도를 나타내는 전체 면적에 대한 picrosirius red positive zone의 백분율을 계산합니다. 여기에서 볼 수 있듯이 복부 대동맥 수축 수술 후 심박 용적이 증가했습니다. 심장 비대의 지표인 체중 대비 심장 체중 비율이 더 높은 것으로 입증되었습니다.

피크로시리우스 레드 염색을 사용하면 콜라겐 함량이 증가한 섬유성 심근을 정상 부위와 구별할 수 있습니다. 이 염색된 샘플에서 입증된 바와 같이, 복부 대동맥 수축 수술 후 심장 섬유증은 대조군에 비해 증가했습니다. 일단 숙달되면 수술이 제대로 수행되면 30분 안에 완료할 수 있습니다.

이 절차에 따라 심장 기능에 대한 추가 질문에 답하기 위해 에코 심장 조영술과 같은 다른 방법을 수행할 수 있습니다. 개발 후 이 기술은 고혈압성 심장 질환 분야의 연구자들이 심폐비대, 리모델링 및 실패와 관련된 메커니즘을 탐구할 수 있는 길을 열었습니다. 이 비디오를 시청한 후에는 쥐에서 심근비대와 심근 리모델링을 유도하기 위해 복부 대동맥 수축을 수행하는 방법을 잘 이해하게 될 것입니다.