나노 제형에도 Limulus Amoebocyte Lysate (LAL) 분석 실험을 사용 하 여

조작된 nanomaterials에 독의 검출 nanomedicine 분야에서 대상 과제 중 하나를 나타냅니다. 여기, 우리는 나노 입자에서 잠재적인 내 오염 추정 세 가지 다른 랄 형식으로 구성 된 프레임 워크를 설명 하는 사례 연구를 제시.

이 방법은 나노 의약품의 안전에 대한 의료 분야에서 대답하는 데 도움이 될 수 있습니다. 이 기술의 장점은 표준이며, 나노 의약품에 제품의 평가를 위해 전 세계적으로 사용된다는 것입니다. 절차의 데모, 배리 Neun 될 것입니다, 나노 기술 특성화 연구소에서.

교정 표준 준비를 위해 리무저 아메보시테 용액 또는 LAL 급수 의 900 마이크로 리터를 사용하십시오. 그리고 100 마이크로리터의 제어 표준 내독소, 필요에 따라 많은 중간 희석제를 제조하고, 밀리리터당 하나의 내독소 단위의 농도로 교정 표준의 준비를 가능하게 한다. 그런 다음 LAL 급수 900 마이크로리터와 밀리리터 교정 표준당 하나의 내독소 단위의 100 마이크로리터를 사용하여 밀리리터당 0.1 엔도독신 단위의 농도로 두 번째 교정 표준을 준비한다.

그런 다음 두 개의 낮은 교정 표준을 준비하기 위해 직렬 열배도 희석을 반복합니다. 밀리리터당 0001에서 1개의 내독소 단위에 이르기까지 총 4개의 교정 표준을 얻으려면. 밀리리터 품질 관리당 05 엔도독신 유닛을 준비하기 위해, 제어 표준 엔도독신 용액의 밀리리터 당 하나의 엔도독소 유닛 의 50 마이크로리터와 LAL 급 수의 950 마이크로리터를 결합합니다.

다음으로 소프트웨어에서 계측기 설정을 선택하고 템플릿을 만듭니다. 데이터 수집을 선택하고 일반 탭에서 테스트 ID 및 데이터 그룹을 입력합니다. 하드웨어 탭에서 계측기 유형 및 LAL 메서드를 선택하고 일련 번호, 시스템 ID 및 직렬 포트 정보가 화면에 나타나는지 확인합니다.

기기 선택 및 계측기와의 통신을 확인하기 위해 두 번 확인을 클릭하고 샘플 ID를 테스트하는 것과 동일한 순서로 샘플 ID를 입력합니다. 그런 다음 기본 단추를 사용하여 음수 제어 표준 곡선을 입력하고 샘플을 테스트합니다. 음의 제어 교정 표준의 적절한 볼륨을 추가하고 품질 관리를 중복 사전 표지 유리 튜브에 추가합니다.

그리고 첫 번째 테스트 사악한에 LAL의 적절한 볼륨을 추가합니다. 사악한 것을 간략하게 소용돌이치게 하고, 유리병을 악기 회전 목마의 적절한 테스트 슬롯에 넣습니다. 시료를 적재하기 전에 입증된 바와 같이 최대 유효 희석 내에서 테스트 나노 물질의 여러 희석을 수행합니다.

억제 강화 제어의 밀리리터 당 05 엔도독신 유닛을 제조하려면, 주어진 희석에서 테스트 나노 물질의 475 마이크로리터와 대조표준 엔도독신 용액의 밀리리터 당 하나의 엔도독소 단위의 25 마이크로리터를 결합한다. 소용돌이 후 적절한 혁신 향상 컨트롤과 비스파이크 스터디 샘플을 계측기에 적재합니다. 그런 다음 알리쿼트 가시가 없는 나노 물질을 특정 희석에서 미리 표지된 튜브로 분리합니다.

소용돌이하기 전에 계측기 회전 목마에 적재하십시오. Gel-Clot LAL을 수행하기 위해 제어 표준 내독소를 4개의 람다의 최종 농도로 준비하고 100마이크로리터의 물 또는 테스트 샘플을 결합하여 제어 표준 내독신 2개의 람다의 최종 농도를 달성한다. 각 람다 희석에 100 마이크로리터의 리신을 추가합니다.

튜브를 잠시 소용돌이쳐 튜브 랙을 섭씨 37도의 수조에 1시간 동안 넣습니다. 인큐베이션의 끝에서, 부드러운 움직임으로 튜브를 반전하고, 수동으로 단단한 응고에 대한 플러스를 사용하여 결과를 기록하고, 응고, 또는 느슨한 응고에 대한 마이너스. 본 대표적인 분석에서, PEGylated 리포소루비신은 희석 5에서 염색체 LAL을 방해했지만, 그러나 이 간섭은 더 높은 희석에서 극복되었다.

스파이크 회수는 식도 및 염색체 LAL에서 50 및 500의 희석성 및 희석 5에서, 그리고 탁도 LAL에서 제형이 시험되었을 때 50과 200% 사이였다. 희석 계수에 의해 조정될 때, 결과는 두 에세이의 망상 사이에서 일치했습니다. 또한, 결과는 세 가지 에세이 형식 사이에 일치했다.

각 샘플에는 자체 희석 범위가 있으며, 각 LAL 형식은 독신및 용해에서 제어 표준을 사용하고, 희석을 준비하고 각 LAL 에세이마다 다른 반응을 수행하는 데 사용되는 튜브를 사용한다는 것을 기억하십시오. 이 절차의 경우 그 개발 후 물질에 대한 추가 질문에 답하기 위해 수행 될 수 있으며,이 기술은 인간에서 제조 된 나노 기술의 의료 응용 프로그램을 탐구하고, 비 인간 영장류, 토끼, 개 및 쥐를 포함하되 이에 국한되지 않는 임상 모델을 모색하기 위해 봉합사 및 나노 의학 분야에 대한 길을 열어주었습니다. 독신을 다루는 것은 매우 위험할 수 있으며 개인 보호 장비를 착용하는 것과 같은 예방 조치는 항상이 절차를 수행하는 동안 취해야한다는 것을 잊지 마십시오.