Denne protokol beskriver berigelsen af indfødte mykobakterielle ekstracellulære vesikler (mEV'er) fra axeniske kulturer af Mycobacterium smegmatis (Msm), og hvordan mCherry (en rød fluorescerende reporter) -indeholdende rekombinante MsmEV'er kan designes og beriges. Endelig verificerer den den nye tilgang med berigelse af MsmEV'er, der indeholder EsxA-proteinet fra Mycobacterium tuberculosis.