Name: 유전자 조작 마우스 모델에서 악성 말초 신경초 종양 식별, 진단 및 등급 지정 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-05-17T13:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 57 s
Description: 학습하세요 유전자 조작 마우스 모델 P0-GGF-beta-3를 활용한 말초 신경초 종양의 조직학적 식별 및 진단 방법을. 이 기법은 신경섬유종증 1형 관련 악성 종양 연구에 필수적입니다.

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이 연구는 국립 신경 질환 및 뇌졸중 연구소(R01 NS048353 및 R01 NS109655 SLC의 보조금으로 지원되었습니다. R01 NS109655-03S1 - D.P.J.), 국립 암 연구소(R01 CA122804 - S.L.C.) 및 국방부(X81XWH-09-1-0086 및 W81XWH-12-1-0164 - S.L.C.).

P 0-GGFβ3 마우스 모델에서 PN-MPNST 진행의 병리학 평가

<ol><li>Carroll, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+mechanisms+promoting+the+pathogenesis+of+Schwann+cell+neoplasms%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Neuropathologica%22%5BJournal%5D)">Molecular mechanisms promoting the pathogenesis of Schwann cell neoplasms.</a> Acta Neuropathologica. 123 (3), 321-348 (2012).</li>
<li>Longo, J. F., Weber, S. M., Turner-Ivey, B. P., Carroll, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recent+advances+in+the+diagnosis+and+pathogenesis+of+neurofibromatosis+type+1+%28NF1%29-associated+peripheral+nervous+system+neoplasms%5BTitle%5D)+AND+%22Advances+in+Anatomic+Pathology%22%5BJournal%5D)">Recent advances in the diagnosis and pathogenesis of neurofibromatosis type 1 (NF1)-associated peripheral nervous system neoplasms.</a> Advances in Anatomic Pathology. 25 (5), 353-368 (2018).</li>
<li>Longo, J. F., Carroll, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+RASopathies%3A+Biology%2C+genetics+and+therapeutic+options%5BTitle%5D)+AND+%22Advances+in+Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">The RASopathies: Biology, genetics and therapeutic options.</a> Advances in Cancer Research. 153, 305-341 (2022).</li>
<li>Boyd, K. P., Korf, B. R., Theos, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neurofibromatosis+type+1%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+American+Academy+of+Dermatology%22%5BJournal%5D)">Neurofibromatosis type 1.</a> Journal of the American Academy of Dermatology. 61 (1), 1-16 (2009).</li>
<li>Rad, E., Tee, A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neurofibromatosis+type+1%3A+Fundamental+insights+into+cell+signalling+and+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Seminars+in+Cell+and+Developmental+Biology%22%5BJournal%5D)">Neurofibromatosis type 1: Fundamental insights into cell signalling and cancer.</a> Seminars in Cell and Developmental Biology. 52, 39-46 (2016).</li>
<li>Brannan, C. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeted+disruption+of+the+neurofibromatosis+type-1+gene+leads+to+developmental+abnormalities+in+heart+and+various+neural+crest-derived+tissues%5BTitle%5D)+AND+%22Genes+and+Development%22%5BJournal%5D)">Targeted disruption of the neurofibromatosis type-1 gene leads to developmental abnormalities in heart and various neural crest-derived tissues.</a> Genes and Development. 8 (9), 1019-1029 (1994).</li>
<li>Jacks, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tumour+predisposition+in+mice+heterozygous+for+a+targeted+mutation+in+Nf1%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Genetics%22%5BJournal%5D)">Tumour predisposition in mice heterozygous for a targeted mutation in Nf1.</a> Nature Genetics. 7 (3), 353-361 (1994).</li>
<li>Zhu, Y., Ghosh, P., Charnay, P., Burns, D. K., Parada, L. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neurofibromas+in+NF1%3A+Schwann+cell+origin+and+role+of+tumor+environment%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Neurofibromas in NF1: Schwann cell origin and role of tumor environment.</a> Science. 296 (5569), 920-922 (2002).</li>
<li>Cichowski, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+models+of+tumor+development+in+neurofibromatosis+type+1%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Mouse models of tumor development in neurofibromatosis type 1.</a> Science. 286 (5447), 2172-2176 (1999).</li>
<li>Joseph, N. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+loss+of+Nf1+transiently+promotes+self-renewal+but+not+tumorigenesis+by+neural+crest+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Cell%22%5BJournal%5D)">The loss of Nf1 transiently promotes self-renewal but not tumorigenesis by neural crest stem cells.</a> Cancer Cell. 13 (2), 129-140 (2008).</li>
<li>Rhodes, S. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cdkn2a+%28Arf%29+loss+drives+NF1-associated+atypical+neurofibroma+and+malignant+transformation%5BTitle%5D)+AND+%22Human+Molecular+Genetics%22%5BJournal%5D)">Cdkn2a (Arf) loss drives NF1-associated atypical neurofibroma and malignant transformation.</a> Human Molecular Genetics. 28 (16), 2752-2762 (2019).</li>
<li>Chaney, K. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cdkn2a+loss+in+a+model+of+neurofibroma+demonstrates+stepwise+tumor+progression+to+atypical+neurofibroma+and+MPNST%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">Cdkn2a loss in a model of neurofibroma demonstrates stepwise tumor progression to atypical neurofibroma and MPNST.</a> Cancer Research. 80 (21), 4720-4730 (2020).</li>
<li>Mohamad, T., Plante, C., Brosseau, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Toward+understanding+the+mechanisms+of+malignant+peripheral+nerve+sheath+tumor+development%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Molecular+Science%22%5BJournal%5D)">Toward understanding the mechanisms of malignant peripheral nerve sheath tumor development.</a> International Journal of Molecular Science. 22 (16), 8620(2021).</li>
<li>Somatilaka, B. N., Sadek, A., McKay, R. M., Le, L. Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Malignant+peripheral+nerve+sheath+tumor%3A+models%2C+biology%2C+and+translation%5BTitle%5D)+AND+%22Oncogene%22%5BJournal%5D)">Malignant peripheral nerve sheath tumor: models, biology, and translation.</a> Oncogene. 41 (17), 2405-2421 (2022).</li>
<li>Keng, V. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Conditional+inactivation+of+Pten+with+EGFR+overexpression+in+Schwann+cells+models+sporadic+MPNST%5BTitle%5D)+AND+%22Sarcoma%22%5BJournal%5D)">Conditional inactivation of Pten with EGFR overexpression in Schwann cells models sporadic MPNST.</a> Sarcoma. 2012, 620834(2012).</li>
<li>Miettinen, M. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Histopathologic+evaluation+of+atypical+neurofibromatous+tumors+and+their+transformation+into+malignant+peripheral+nerve+sheath+tumor+in+patients+with+neurofibromatosis+1-a+consensus+overview%5BTitle%5D)+AND+%22Human+Pathology%22%5BJournal%5D)">Histopathologic evaluation of atypical neurofibromatous tumors and their transformation into malignant peripheral nerve sheath tumor in patients with neurofibromatosis 1-a consensus overview.</a> Human Pathology. 67, 1-10 (2017).</li>
<li>Lee, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((PRC2+is+recurrently+inactivated+through+EED+or+SUZ12+loss+in+malignant+peripheral+nerve+sheath+tumors%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Genetics%22%5BJournal%5D)">PRC2 is recurrently inactivated through EED or SUZ12 loss in malignant peripheral nerve sheath tumors.</a> Nature Genetics. 46 (11), 1227-1232 (2014).</li>
<li>Zhang, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Somatic+mutations+of+SUZ12+in+malignant+peripheral+nerve+sheath+tumors%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Genetics%22%5BJournal%5D)">Somatic mutations of SUZ12 in malignant peripheral nerve sheath tumors.</a> Nature Genetics. 46 (11), 1170-1172 (2014).</li>
<li>Magallon-Lorenz, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Deep+genomic+analysis+of+malignant+peripheral+nerve+sheath+tumor+cell+lines+challenges+current+malignant+peripheral+nerve+sheath+tumor+diagnosis%5BTitle%5D)+AND+%22iScience%22%5BJournal%5D)">Deep genomic analysis of malignant peripheral nerve sheath tumor cell lines challenges current malignant peripheral nerve sheath tumor diagnosis.</a> iScience. 26 (2), 106096(2023).</li>
<li>Longo, J. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Establishment+and+genomic+characterization+of+a+sporadic+malignant+peripheral+nerve+sheath+tumor+cell+line%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">Establishment and genomic characterization of a sporadic malignant peripheral nerve sheath tumor cell line.</a> Scientific Reports. 11 (1), 5690(2021).</li>
<li>Huijbregts, R. P., Roth, K. A., Schmidt, R. E., Carroll, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hypertrophic+neuropathies+and+malignant+peripheral+nerve+sheath+tumors+in+transgenic+mice+overexpressing+glial+growth+factor+beta3+in+myelinating+Schwann+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Hypertrophic neuropathies and malignant peripheral nerve sheath tumors in transgenic mice overexpressing glial growth factor beta3 in myelinating Schwann cells.</a> Journal of Neuroscience. 23 (19), 7269-7280 (2003).</li>
<li>Stonecypher, M. S., Byer, S. J., Grizzle, W. E., Carroll, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Activation+of+the+neuregulin-1%2FErbB+signaling+pathway+promotes+the+proliferation+of+neoplastic+Schwann+cells+in+human+malignant+peripheral+nerve+sheath+tumors%5BTitle%5D)+AND+%22Oncogene%22%5BJournal%5D)">Activation of the neuregulin-1/ErbB signaling pathway promotes the proliferation of neoplastic Schwann cells in human malignant peripheral nerve sheath tumors.</a> Oncogene. 24 (36), 5589-5605 (2005).</li>
<li>Kohli, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+pan+erbB+inhibitor+PD168393+enhances+lysosomal+dysfunction-induced+apoptotic+death+in+malignant+peripheral+nerve+sheath+tumor+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Neuro-Oncology%22%5BJournal%5D)">The pan erbB inhibitor PD168393 enhances lysosomal dysfunction-induced apoptotic death in malignant peripheral nerve sheath tumor cells.</a> Neuro-Oncology. 14 (3), 266-277 (2012).</li>
<li>Eckert, J. M., Byer, S. J., Clodfelder-Miller, B. J., Carroll, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neuregulin-1+beta+and+neuregulin-1+alpha+differentially+affect+the+migration+and+invasion+of+malignant+peripheral+nerve+sheath+tumor+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Glia%22%5BJournal%5D)">Neuregulin-1 beta and neuregulin-1 alpha differentially affect the migration and invasion of malignant peripheral nerve sheath tumor cells.</a> Glia. 57 (14), 1501-1520 (2009).</li>
<li>Kazmi, S. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transgenic+mice+overexpressing+neuregulin-1+model+neurofibroma-malignant+peripheral+nerve+sheath+tumor+progression+and+implicate+specific+chromosomal+copy+number+variations+in+tumorigenesis%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Pathology%22%5BJournal%5D)">Transgenic mice overexpressing neuregulin-1 model neurofibroma-malignant peripheral nerve sheath tumor progression and implicate specific chromosomal copy number variations in tumorigenesis.</a> American Journal of Pathology. 182 (3), 646-667 (2013).</li>
<li>Brosius, S. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neuregulin-1+overexpression+and+Trp53+haploinsufficiency+cooperatively+promote+de+novo+malignant+peripheral+nerve+sheath+tumor+pathogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Neuropathologica%22%5BJournal%5D)">Neuregulin-1 overexpression and Trp53 haploinsufficiency cooperatively promote de novo malignant peripheral nerve sheath tumor pathogenesis.</a> Acta Neuropathologica. 127 (4), 573-591 (2014).</li>
<li>Vogel, K. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+tumor+model+for+neurofibromatosis+type+1%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Mouse tumor model for neurofibromatosis type 1.</a> Science. 286 (5447), 2176-2179 (1999).</li>
<li>Reuss, D. E., et al. Malignant peripheral nerve sheath tumour (MPNST). <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aReuss%2C+DE+%22WHO+Classification+of+Tumours+of+the+Central+Nervous+System%2C+Revised+4th+Edition%22">WHO Classification of Tumours of the Central Nervous System, Revised 4th Edition</a>. Louis, D. N., et al. , International Agency for Research on Cancer (IARC), Lyon, France. 226-229 (2016).</li>
<li>Landuzzi, L., Ruzzi, F., Lollini, P. L., Scotlandi, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Synovial+sarcoma+preclinical+modeling%3A+integrating+transgenic+mouse+models+and+patient-derived+models+for+translational+research%5BTitle%5D)+AND+%22Cancers%22%5BJournal%5D)">Synovial sarcoma preclinical modeling: integrating transgenic mouse models and patient-derived models for translational research.</a> Cancers. 15 (3), 588(2023).</li>
<li>Cohen, P. R., Rapini, R. P., Farhood, A. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Expression+of+the+human+hematopoietic+progenitor+cell+antigen+CD34+in+vascular+and+spindle+cell+tumors%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Cutaneous+Pathology%22%5BJournal%5D)">Expression of the human hematopoietic progenitor cell antigen CD34 in vascular and spindle cell tumors.</a> Journal of Cutaneous Pathology. 20 (1), 15-20 (1993).</li>
<li>Weiss, S. W., Nickoloff, B. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CD-34+is+expressed+by+a+distinctive+cell+population+in+peripheral+nerve%2C+nerve+sheath+tumors%2C+and+related+lesions%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Surgical+Pathology%22%5BJournal%5D)">CD-34 is expressed by a distinctive cell population in peripheral nerve, nerve sheath tumors, and related lesions.</a> American Journal of Surgical Pathology. 17 (10), 1039-1045 (1993).</li>
<li>Longo, J. F., Brosius, S. N., Carroll, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Defining+gene+functions+in+tumorigenesis+by+ex+vivo+ablation+of+floxed+alleles+in+malignant+peripheral+nerve+sheath+tumor+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Defining gene functions in tumorigenesis by ex vivo ablation of floxed alleles in malignant peripheral nerve sheath tumor cells.</a> Journal of Visualized Experiments. (174), (2021).</li>
<li>Hoffman, G. E., Murphy, K. J., Sita, L. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+importance+of+titrating+antibodies+for+immunocytochemical+methods%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Protocols+in+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">The importance of titrating antibodies for immunocytochemical methods.</a> Current Protocols in Neuroscience. 76, 2.12.1-2.12.37 (2016).</li>
<li>Brossier, N. M., Carroll, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetically+engineered+mouse+models+shed+new+light+on+the+pathogenesis+of+neurofibromatosis+type+I-related+neoplasms+of+the+peripheral+nervous+system%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Research+Bulletin%22%5BJournal%5D)">Genetically engineered mouse models shed new light on the pathogenesis of neurofibromatosis type I-related neoplasms of the peripheral nervous system.</a> Brain Research Bulletin. 88 (1), 58-71 (2012).</li>
</ol>

저자는 공개할 이해 상충이 없습니다.

여기에 제시된 조직학적 및 생화학적 방법은 신경섬유종 및 MPNST 발병기전의 GEM 모델을 진단하고 특성화하기 위한 프레임워크를 제공합니다. 수년에 걸쳐, 우리는 이러한 방법론이 GEM 모델 21,25,26에서 발생하는 말초 신경초 종양의 병리학을 평가하는 데 매우 유용하다는 것을 발견했다. 그러나 여기에 설명된 프로토콜은 GEM 모델의 종양이 인간 종양의 병리를 얼마나 정확하게 재현하는지 결정하는 데 유용하지만 이러한 전략에는 몇 가지 제한 사항이 있습니다. 우선, P 0-GGFβ3 마우스는 종양 표현형의 거의 완전한 침투를 보여주며, 이는 게놈 연구 및 게놈 스케일 shRNA 스크리닝에 사용할 수 있는 신경섬유종 및 MPNST 21,25,26을 가진 많은 수의 마우스를 비교적 쉽게 얻을 수 있도록 합니다. 이 모델에서 표현형의 높은 침투율은 또한 P 0-GGFβ3 마우스를 전임상 시험에 매우 유용하게 만듭니다. 그러나 이것이 모든 GEM 암 모델에 해당되는 것은 아니라는 점을 인식해야 한다. 이것이 우리가 종양 발병을 예측할 수 있는 동물의 비율을 결정하는 것의 중요성을 강조한 이유입니다. 흔하게 종양이 발생하지 않는 동물 모델로 작업할 때 자기 공명 영상 또는 양전자 방출 단층 촬영과 같은 영상 양식을 사용하여 전임상 시험 또는 기타 연구에 들어갈 수 있는 종양을 보유한 동물을 확실히 식별하는 것이 유리하다는 것을 알게 되었습니다. 그러나 이 방법은 반복적인 스캔이 필요한 경우 비용이 많이 들 수 있습니다. 이것이 우리가 관심 GEM 모델26의 평균 생존 시간을 확립하는 것의 중요성을 강조한 이유이며, 동물이 종양이 발생할 것으로 예상되는 시점을 이해하면 원하는 표현형을 가진 동물을 식별하는 데 필요한 스캔 횟수 및 관련 비용을 줄일 수 있습니다.
쥐의 큰 종양은 여전히 실제로는 다소 적은 양의 조직이라는 것을 인식하는 것도 중요합니다. 이 프로토콜에서는 종양 조직을 3등분하고 조직학/면역조직화학, 조기 통과 세포 배양 확립 및 관심 생체 분자(단백질, RNA, DNA)의 분리에 전념하는 프로세스를 권장합니다. 그러나 종양의 크기는 다양하며 종양이 매우 작으면 이러한 방식으로 분열할 수 있는 충분한 조직을 갖지 못할 수 있습니다. 이 경우, 연구자는 종양 진단 또는 종양 조직의 다른 사용이 우선시되는지 여부를 결정해야 한다32. 이러한 상황에서 우리의 편견은 다른 실험을 시작하기 전에 우리가 무엇을 하고 있는지 이해하기 위해 적절한 진단을 받아야 한다는 것입니다. 우리는 종양 진단이 일반적으로 신생물의 1/3 미만을 사용하여 쉽게 확립될 수 있다는 것을 발견했습니다. 작은 종양을 다룰 때는 일반적으로 종양 조직의 작은 조각을 제거하고 조직학 조직으로 싸서 조직 카세트에 넣어 처리 중에 조직이 손실되지 않도록 합니다. 이 접근법의 단점은 WHO 등급이 필요한 경우 연구자가 신생물을 과소 등급화할 수 있다는 것입니다. 이는 암에서 일반적으로 낮은 등급과 높은 등급의 영역이 공존하기 때문이며, 매우 작은 샘플을 채취한 경우 얻은 등급은 종양 샘플을 채취한 위치에 따라 달라집니다.
말초 신경초 종양 식별을 확립하기 위해 설명하는 프로토콜은 면역조직화학에 크게 의존합니다. 일부 세포 유형(예: 비만 세포를 식별하기 위해 Unna 염색 수행)에 사용할 수 있는 간혹 대체 접근법이 있지만, 신경섬유종 및 MPNST에 존재하는 대부분의 세포 유형에는 균일하지 않습니다. 결과적으로, 사용될 면역조직화학적 절차가 적절하게 최적화되었는지 확인하기 위해 세심한 주의를 기울여야 합니다. 우리의 경험에 비추어 볼 때, 몇 가지 문제가 진단 면역조직화학을 손상시킬 수 있습니다. 연구자가 이전에 사용하지 않은 1차 항체로 희석 시리즈를 수행하는 것이 매우 중요합니다. 또한, 희석 계열은 이전에 최적화된 항체의 새로운 배치를 사용할 때 수행되어야 한다33. 또한 신선한 시약 배치를 사용할 수 있도록 주의를 기울여야 합니다. 우리의 경험에 비추어 볼 때, 과산화수소와 DAB는 특히 제대로 작동하지 않는 경향이 있으며, 이로 인해 조사관이 얼룩이 음성이라고 부적절하게 결정할 수 있습니다.
망상신경섬유종, MPNST 및 MPNST의 감별 진단에서 고려되는 다양한 유형의 신생물에 대해 설명하는 면역조직화학적 프로파일은 우리가 가장 일반적으로 접하는 것입니다 21,25,26,34. 그러나 MPNST 및 이러한 다른 악성 종양에서 발산 분화가 드문 일이 아니기 때문에 연구자는 여기에서 설명하는 것과 다소 다른 염색 프로파일을 접할 수 있습니다. 이러한 뉘앙스로 인해 종양 형성의 새로운 GEM 모델을 특성화하는 팀에 경험이 풍부한 인간 또는 수의학 병리학자를 포함할 것을 강력히 권장합니다. 이 프로토콜에서는 GEM 및 인간 MPNST에 WHO 등급을 적용했습니다. 등급 기준이 비교적 잘 정의되어 있고 인간과 마우스 MPNST를 비교하기 쉽기 때문에 이 등급 시스템을 선호합니다 2,28. 그러나 우리는 WHO 등급 기준이 병리학자들에 의해 균일하게 받아들여지지 않는다는 점에 유의해야 합니다. 이는 MPNST에 적용되는 세 가지 WHO 등급이 환자의 임상 결과를 예측하는지 명확하지 않기 때문입니다. 이 때문에 많은 병리학자들은 MPNST를 단순히 저등급 또는 고등급 악성 종양으로 분류하는 것을 선호합니다. 이 접근법을 사용하면 MPNST의 약 85%가 활발한 유사분열 활성, 현저한 세포 이형성 및 종양 괴사를 동반할 수 있는 과색증을 특징으로 하는 고급 악성 종양으로 간주됩니다. 낮은 등급의 MPNST는 세포성, 과색증 및 유사분열 활성이 적습니다.
우리는 조기 통과 MPNST 세포의 동종이식이 이러한 배양의 종양원성을 검증하는 간단한 방법이라는 것을 발견했습니다. 그러나, 세포가 동종이식편(32)을 확립하지 않을 때 몇 가지 문제가 고려되어야 한다. 우리의 경험에 비추어 볼 때, 초기 통로 MPNST 세포의 압도적 다수가 동종이식편을 확립하지만, 때때로 그렇지 않은 초기 통로 배양을 접하게 됩니다. 이러한 실패에도 불구하고, 어레이 비교 게놈 하이브리드화(aCGH) 및 전체 엑솜 시퀀싱은 이러한 초기 통로 배양이 종양 세포인 것과 일치하는 여러 게놈 이상을 가지고 있음을 보여주었습니다25,26. 우리는 또한 건강하지 않은 초기 통로 배양을 발견했는데, 일반적으로 접목을 위해 배양물을 수확하기 전에 배양물이 합류하도록 허용되었기 때문입니다. 거친 취급으로 손상된 세포(예: 비효소적 세포 해리 용액을 위아래로 과도하게 여러 번 피펫으로 과도하게 오래 배양한 경우)도 이식 시 성능이 저하됩니다. 또한 이식편 설립을 위해 표시한 시간은 우리의 경험을 바탕으로 한 추정치입니다. 때때로, 우리는 동종이식을 성공적으로 확립할 수 있지만 그렇게 하는 데 더 오랜 시간이 걸리는 초기 통로 배양을 접했습니다.
위에서 설명한 접근법은 새로 개발된 말초 신경계 종양의 GEM 모델의 주요 측면을 특성화하고 이러한 동물이 발병하는 신경섬유종 및 MPNST를 적절하게 진단하는 포괄적인 수단을 제공합니다. 조기 통과 MPNST 배양을 확립하고 이러한 배양을 동종 이식에 사용하기 위해 간략하게 설명하는 방법은 GEM 모델에서 확인된 신생물의 종양원성에 대한 명확한 증거를 제공합니다. 우리는 초기 통로 배양을 확립할 때 개별 클론의 선택을 수행하지 않는다는 것을 강조할 것입니다. 종양 세포를 배양에 넣을 때 일부 선택이 불가피하다는 것을 알고 있지만, 이러한 초기 발견은 초기 통과 GEM MPNST 배양에서 확인된 돌연변이가 모종양에 존재하는 돌연변이와 매우 유사하게 유지됨을 시사합니다. 그러나, aCGH를 사용하여, 우리는 또한 더 긴 통로를 위해 이러한 초기 통로 배양을 계속 운반하는 것이 이러한 종양 세포의 초기 통로에서 볼 수 있는 것과 다른 게놈 변화를 초래한다는 것을 발견했습니다.

지난 30년 동안 수많은 실험실에서 인간 암 관련 돌연변이를 마우스 게놈에 도입하거나 인간 암에서 과발현되는 유전자 산물을 과발현하여 인간 암의 마우스 모델을 만들려고 시도했습니다. 그 결과 유전자 조작 마우스(GEM) 모델은 새로 도입된 게놈 변형이 종양 형성을 시작한다는 것을 확립하고, 종양 진행에 기여하는 다른 후속 유전적 또는 후성유전학적 변화를 식별하고, 종양 시작 및 진행을 유도하는 주요 신호 전달 경로를 정의하는 등 다양한 목적으로 사용할 수 있습니다. 면역 결핍 마우스의 사용에 의존하는 orthotopic 이종이식 모델과 달리 GEM 암 모델은 완전한 기능을 갖춘 면역 체계를 가지고 있으므로 후보 치료제에 대한 반응을 보다 정확하게 모델링할 수 있습니다. 그러나 이와 같은 목적으로 GEM 암 모델을 사용할 때는 조사관이 GEM 신생물로 관찰한 것이 인간 신생물과 관련이 있는지 확인하는 것이 중요합니다. 이 검증에는 GEM 신생물의 병리학에 대한 철저한 평가와 GEM 신생물의 병리학적 특징이 해당 인간 종양 유형의 병리를 재현하는지 여부에 대한 결정이 포함되어야 합니다.
종양 감수성 증후군 신경섬유종증 1형(NF1)은 인간 신경계에 영향을 미치는 가장 흔한 유전 질환으로, 출생아 3,000-3,500명당 약 1명꼴로 발생합니다 1,2,3. NF1에 감염된 개인은 피부(피부 신경 섬유종)와 큰 신경 및 신경총(망상 신경 섬유종)에 신경 섬유종으로 알려진 여러 양성 말초 신경초 종양이 발생합니다. 진피 신경섬유종과 망상신경섬유종은 모두 신체적, 행동적, 사회적 장애를 일으켜 환자의 삶의 질을 악화시키지만, 망상신경섬유종(PN)은 특히 위험하다 4,5. 이는 PN이 생존율이 매우 낮은 공격적인 방추세포 신생물인 악성 말초신경초종양(MPNST)으로 자주 변형되기 때문입니다 1,2. 이러한 낮은 생존율은 대부분 현재 MPNST를 치료하는 데 사용되는 방사선 및 화학 요법이 효과가 없기 때문입니다. 그러나 새롭고 더 효과적인 치료법을 개발하는 것은 어려운 일이었습니다. 이는 NF1 환자에서 MPNST가 얼마나 흔하게 발생하는지에도 불구하고 여전히 희귀한 신생물이기 때문입니다. 결과적으로, 연구를 위해 많은 수의 인간 종양을 얻는 것은 매우 어렵습니다. 임상시험을 위해 MPNST를 가진 충분한 환자를 모집하는 것도 어렵습니다. 이러한 한계를 극복하기 위해 신경섬유종 발병기전 및 PN-MPNST 진행을 유발하는 이상에 대한 추가 통찰력을 얻고 후보 치료제에 대한 전임상 시험을 촉진하는 것을 목표로 여러 GEM 모델이 생성되었습니다.
NF1 환자는 NF1 유전자의 한 사본에 불활성화 돌연변이가 있습니다. 신경섬유종 발병기전은 Schwann 세포 계통의 세포에서 나머지 기능적 NF1 유전자의 불활성화 돌연변이가 발생할 때 유발됩니다. 그러나 놀랍게도, 생식세포가 Nf1 돌연변이를 비활성화한 마우스를 생성했을 때, 그들은 신경섬유종 6,7을 개발하지 않았다. 다른 모든 세포 유형에서 Nf1-null Schwann 세포 및 Nf1 하플로불충분을 가진 마우스(Krox20-Cre;Nf1flox/- 마우스)가 발달한 망상형 신경섬유종(plexiform neurofibromas)은 신경섬유종 발병기전을 위해 추가적인 세포 유형에서 감소된 Nf1 유전자 투여량이 필요하다는 것을 시사했다8. 그럼에도 불구하고 Krox20-Cre의 망상 신경 섬유종; Nf1flox/- 마우스는 MPNST로 진행되지 않았으므로 인간 마우스의 생물학을 부분적으로만 모방했습니다. MPNST 발병기전은 Nf1 돌연변이가 Trp539 또는 Cdkn2a10과 같은 추가 종양 억제 유전자의 돌연변이와 짝을 이룰 때 발생했지만, 이러한 GEM 모델의 MPNST는 기존의 양성 신경총형 신경섬유종(benign plexiform neurofibromas)이 아닌 불확실한 생물학적 전위(ANNUBP)의 비정형 신경섬유종 신생물(atypical neurofibromatous neoplasm)에서 발생하거나 발생했다(13,14 참조). Suz12 및 Pten15와 같은 유전자에서 추가적인 MPNST 관련 기능 돌연변이를 도입하는 다른 모델뿐만 아니라 이러한 모델에 대한 우수한 검토를 위해).
이러한 마우스 모델은 NF1, TP53 및 CDKN2A와 같은 유전자가 NF1 관련 말초 신경계 신생물의 발병기전에서 수행하는 역할을 규명하고 후보 치료제를 테스트하는 전임상 시험에 매우 중요합니다. 그러나 우리는 여전히 망상형 신경섬유종이 불확실한 생물학적 잠재력(ANNUBPs16)의 비정형 신경섬유종성 신생물이 된 다음 MPNST가 되는 과정에 대해 불완전하게 이해하고 있습니다. Nf1 및 Arf에서 결실이 있는 마우스가 MPNST로 진행되는 ANNUBP를 개발한다는 최근 보고와 함께 이 과정을 이해하는 데 약간의 진전이 있었습니다11. 그러나 인간에서 볼 수 있는 망상형 신경섬유종-MPNST 진행 과정을 완전히 재현하는 Nf1 돌연변이 기반 마우스 모델은 아직 존재하지 않습니다. 또한 MPNST의 개발로 이어지는 여러 가지 뚜렷한 경로가 있는지 여부도 명확하지 않습니다. 이를 감안할 때, 위에서 설명한 GEM은 신경섬유종-MPNST 진행 및 MPNST 발병기전으로 이어지는 여러 다른 경로의 하위 집합만 모델링할 수 있습니다. 이 점은 MPNST가 또한 산발적으로 발생한다는 사실과 일부 산발적인 MPNST는 명백히 NF1 돌연변이를 가지고 있지 않다는 사실에 의해 강조된다17,18.
NF1 돌연변이가 결핍된 적어도 일부 산발성 MPNST는 흑색종 또는 다른 유형의 육종이라는 Magollon-Lorenz et al.의 최근 제안에 의해 이 후자의 주장에 도전받았지만, 우리는 최근에 산발적인 MPNST와 NF1 야생형20인 이 종양(2XSB 세포)에서 유래한 세포주를 보고했습니다. 모종양과 2XSB 세포주를 특성화하는 동안, 흑색종 및 산발성 악성 말초신경초 종양의 감별 진단에서 일상적으로 고려되는 여러 다른 육종 유형을 포함한 대체 진단 가능성을 체계적으로 배제했다20. 또한, Magollon-Lorenz 등은 그들이 연구한 3개의 산발적인 MPNST 세포주에서 발견한 결과가 산발성 MPNST로 확인된 모든 종양이 MPNST가 아니라는 것을 나타내기 위해 일반화할 수 없다는 것을 인정했습니다.
신경섬유종과 MPNST 발병기전이 특정 종양 억제 유전자 돌연변이에 반드시 의존하지 않는 GEM 모델을 구축하기 위해, 슈반(Schwann) 세포 특이적 미엘린 단백질 제로(P0) 프로모터(P 0-GGFβ3 마우스)에 의해 강력한 슈반(Schwann) 세포 미토겐 뉴레굴린-1(NRG1)의 과발현이 유도되는 형질전환 마우스를 생성했습니다.21. 우리는 이전에 인간 신경섬유종, MPNST 및 MPNST 세포주가 NRG1 신호전달을 매개하는 erbB 수용체 티로신 키나아제(erbB2, erbB3 및 erbB4)와 함께 여러 NRG1 동형을 발현하고 이러한 erbB 수용체가 구성적으로 활성화됨을 보여주었습니다22. 또한 erbB 키나아제의 약리학적 억제제가 MPNST 증식22, 생존23 및 이동을 강력하게 억제한다는 것을 입증했다24. 인간에 대한 우리의 관찰에 따라, P 0-GGFβ3 마우스는 고주파 21,25에서 MPNST로 진행되는 망상형 신경섬유종(plexiform neurofibroma)25을 발달시킨다. P0-GGFβ3 MPNST는 인간과 마찬가지로 일반적으로 Trp53 및 Cdkn2a의 돌연변이뿐만 아니라 종양형성에 잠재적으로 기여할 수 있는 수많은 다른 유전체 이상을 발생시킨다는 것을 보여주었다25. P 0-GGFβ3 마우스에서 발생하는 MPNST는 비활성화 Nf1 돌연변이를 갖지 않습니다. 그러나, 유전자 보완을 이용하여, NRG1이 Nf1 손실에 의해 변경되는 동일한 신호전달 캐스케이드를 통해 주로 P 0-GGFβ3 마우스에서 종양형성을 촉진한다는 것을 보여주었다26; 이 결론은 Trp53 하플로인부전(haploinsufficiency)이 있는 상태에서 Nf1 손실을 NRG1 과발현으로 대체한다는 우리의 발견에 근거한다(P0-GGFβ3;Trp53+/- 마우스)는 cis-Nf1+/-에서 볼 수 있듯이 MPNST가 de novo로 발달하는 동물을 생산합니다. Trp53+/- 마우스27.
P 0-GGFβ3 마우스가 NF1을 가진 인간에서 볼 수 있는 신경섬유종 발병 및 신경섬유종-MPNST 진행 과정을 정확하게 모델링한다는 것을 입증하는 이 정보와 기타 정보를 얻기 위해 당사는 이러한 동물의 조직을 처리하고, 종양을 정확하게 진단하고, 이러한 마우스에서 발생하는 MPNST의 등급을 매기고, 초기 통과 P0-GGFβ3 및 P0-GGFβ3을 확립하고 특성화하는 특수 방법론을 개발했습니다. Trp53+/- MPNST 배양 및 P 0-GGFβ3 PN 및 MPNST와 P0-GGFβ3의 병리학을 비판적으로 비교; Trp53+/- MPNST를 인간과 비교합니다. 이러한 방법론 중 다수는 신경계 종양의 다른 GEM 모델로 일반화할 수 있습니다. 또한 이러한 방법론 중 일부는 다른 장기 부위에서 신생물이 발생하는 GEM 모델에 더 광범위하게 적용할 수 있습니다. 따라서 여기서는 이러한 방법론에 대한 자세한 설명을 제공합니다.

<table><tbody><tr><td>100mm 조직 배양 플레이트</td><td>Corning Falcon</td><td>353003</td><td></td></tr><tr><td>3, 3'- 디아미노벤시딘(DAB)</td><td>Vector Laboratories</td><td>SK-400</td><td></td></tr><tr><td>6웰 플레이트</td><td>Corning Costar</td><td>3516</td><td></td></tr><tr><td>아세트산</td><td>Fisher Scientific</td><td>A38-212</td><td></td></tr><tr><td>Alexa Fluor 488 Secondary (Goat Anti-Mouse)</td><td>Invitrogen</td><td>A11029</td><td></td></tr><tr><td>Alexa Fluor 568 Secondary(염소 안티-마우스)</td><td>Invitrogen</td><td>A21043 또는 A11004</td><td></td></tr><tr><td>Alexa Fluor 568 Secondary(염소 안티-토끼)</td><td>Invitrogen</td><td>A11036</td><td></td></tr><tr><td>염화암모늄(NH4Cl)</td><td>Fisher Scientific</td><td>A661-500</td><td></td></tr><tr><td>BCA 단백질 분석 키트</td><td>Thermo Scientific</td><td>23225</td><td></td></tr><tr><td>소 혈청 알부민</td><td>피셔 사이언티픽</td><td>BP1600-100</td><td></td></tr><tr><td>칼데스몬</td><td>ABCAM&nbsp;</td><td>E89, ab32330</td><td></td></tr><tr><td>CD117</td><td>셀 마르크</td><td>117R-18-ASR</td><td></td></tr><tr><td>CD163</td><td>라이카</td><td>NCL-L-CD163</td><td></td></tr><tr><td>CD31</td><td>ABCAM&nbsp;</td><td>ab29364</td><td></td></tr><tr><td>CD34</td><td>ABCAM&nbsp;</td><td>ab81289</td><td></td></tr><tr><td>CD86</td><td>ABCAM&nbsp;</td><td>ab53004</td><td></td></tr><tr><td>셀 스크레이퍼</td><td>Sarstedt</td><td>83.183</td><td></td></tr><tr><td>셀 스트리퍼</td><td>Corning</td><td>25-056-CI</td><td></td></tr><tr><td>Circle Coverslip</td><td>Fisher Scientific</td><td>12-545-100</td><td></td></tr><tr><td>Citrisolve Hybrid (d-limonene 기반 용매)</td> <td>Decon Laboratories</td><td>5989-27-5</td><td></td></tr><tr><td>Critic Acid</td><td>Fisher Scientific</td><td>A104-500</td><td></td></tr><tr><td>사이토케라틴</td><td>ABCAM&nbsp;</td><td>C-11, ab7753</td><td></td></tr><tr><td>데스민</td><td>애질런트 다코&nbsp;</td><td>클론 D33 (M0760)</td><td></td></tr><tr><td>디아미노벤시즈딘(DAB) 용액</td><td>Vector Laboratories</td><td>SK-4100</td><td></td></tr><tr><td>DMEM</td><td>Corning</td><td>15-013-CV</td><td></td></tr><tr><td>Eosin Y</td><td>Thermo Scientific</td><td>7111</td><td></td></tr><tr><td>에탄올(200 proof)</td><td>Decon Laboratories</td><td>2716</td><td></td></tr><tr><td>태아 송아지 혈청</td><td>Omega Scientific</td><td>FB-01</td><td></td></tr><tr><td>Forksolin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>F6886</td><td></td></tr><tr><td>글리세롤</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G6279</td><td></td></tr><tr><td>Hank's Balanced Salt Solution (HBSS)</td><td>Corning</td><td>21-022-CV</td><td></td></tr><tr><td>Harris Hematoxylin</td><td>Fisherbrand</td><td>245-677</td><td></td></tr><tr><td>Hemacyometer</td><td>Brightline-Hauser Scientific</td><td>1490</td><td></td></tr><tr><td>Hydrochloric Acid</td><td>Fisher Scientific</td><td>A144-212</td><td></td></tr><tr><td>과산화수소</td><td>Fisher Scientific</td><td>327-500</td><td></td></tr><tr><td>Iba1</td><td>Wako Chemicals</td><td>019-19741</td><td></td></tr><tr><td>ImmPRESS HRP (Peroxidase) 폴리머 키트, 마우스</td><td>벡터 연구소</td><td>MP-2400</td><td></td></tr><tr><td>ImmPRESS HRP (Peroxidase) 폴리머 키트, 말 안티 토끼</td><td>벡터 연구소</td><td>MP-7401</td><td></td></tr><tr><td>인큐베이터</td><td>Thermo Scientific</td><td>Heracell 240i CO2 인큐베이터</td><td></td></tr><tr><td>Isoflurane</td><td>Piramal</td><td>NDC 66794-017-25</td><td></td></tr><tr><td>이소프로판올</td><td>Fisher Scientific</td><td>A415</td><td></td></tr><tr><td>Ki-67</td><td>세포 신호&nbsp;</td><td>12202</td><td></td></tr><tr><td>Laminin</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>23017015</td><td></td></tr><tr><td>액체 질소</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>MART1</td><td>ABCAM&nbsp;</td><td>M2-9E3, ab187369</td><td></td></tr><tr><td>마이크로톰</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>네스틴</td><td>밀리포어&nbsp;</td><td>인간: MAD5236(10C2), 인간:MAB353(Rat-401)</td><td></td></tr><tr><td>Neuregulin 1 beta</td><td></td><td>S.L.C. 제작 사내(R&에서 396-HB-050/CF로도 사용 가능) D Systems)</td><td></td></tr><tr><td>뉴로파이브로민</td><td>산타크루즈 생명공학&nbsp;</td><td>SC-67</td><td></td></tr><tr><td>끄덕임. Cg-Prkdcscid Il2rgtm1Wjl/SzJ 마우스</td><td>Jackson Laboratory</td><td>5557</td><td></td></tr><tr><td>Nonfat Dry Milk</td><td>Walmart</td><td>Great Value Brand</td><td></td></tr><tr><td>P0-GGF&beta; 3</td><td></td><td></td><td></td>마우스 집</tr><tr><td>파라핀 왁스</td><td>Leica</td><td>Paraplast 39601006</td><td></td></tr><tr><td>Parafilm M</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>PM-999</td><td></td></tr><tr><td>파라 포름 알데히드 (4 %)</td><td>Thermo Scientific</td><td>J19943-K2</td><td></td></tr><tr><td>Permount (Xylene Mounting Medium)</td><td>Fisher Scientific</td><td>SP15-100</td><td></td></tr><tr><td>pH 측정기</td><td>Mettler Toldedo Seven</td><td> 우수성, 8603</td><td></td></tr><tr><td>인산염 완충 식염수(Dulbecco's)</td><td>Corning</td><td>20-031-CV</td><td></td></tr><tr><td>PMEL</td><td>ABCAM&nbsp;</td><td>EP4863(2), ab137078</td><td></td></tr><tr><td>Poly-L-Lysine Hydrobromide</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P5899-5MG</td><td></td></tr><tr><td>휴대용 Isoflurance 기계</td><td>VetEquip 흡입 마취 시스템</td><td></td><td></td></tr><tr><td>PVA-DABCO (수성 설치 매체)</td><td>Millipore Sigma</td><td>10981100ML</td><td></td></tr><tr><td>밥솥</td><td>비치 해밀턴</td><td></td><td></td></tr><tr><td>S100B</td><td>Agilent Dako&nbsp;</td><td>Z0311&nbsp; (현재 GA504)</td><td></td></tr><tr><td>SMA</td><td>벤타나 메디컬 시스템&nbsp;</td><td>클론 1A4</td><td></td></tr><tr><td>염화나트륨</td><td>Fisher Scientific</td><td>S640</td><td></td></tr><tr><td>시트르산나트륨 (디하이드레이트)</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP327-1</td><td></td></tr><tr><td>Sox10</td><td>ABCAM&nbsp;</td><td>ab212843</td><td></td></tr><tr><td>스틸 조직학 금형</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Superfrost Plus 현미경 슬라이드</td><td>Fisher Scientific</td><td>12-550-15</td><td></td></tr><tr><td>TCF4/TCFL2&nbsp;</td><td>세포 신호&nbsp;</td><td>(CH48H11) #2569</td><td></td></tr><tr><td>조직 카세트</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>톨루이딘 블루</td><td>ACROS 유기물</td><td>348600050</td><td></td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP151-500</td><td></td></tr><tr><td>TRIzol</td><td>Invitrogen</td><td>15596026</td><td></td></tr><tr><td>Trypsin</td><td>Corning</td><td>25-051-31</td><td></td></tr></tbody></table>

유전자 조작 마우스 모델에서 악성 말초 신경초 종양 식별, 진단 및 등급 지정

Identifying, Diagnosing, and Grading Malignant Peripheral Nerve Sheath Tumors in Genetically Engineered Mouse Models

상염색체 우성 종양 감수성 증후군인 신경섬유종증 1형(NF1) 환자는 일반적으로 망상신경섬유종(PN)이 발생하며, 이후 매우 공격적인 악성 말초 신경초초 종양(MPNST)으로 변합니다. PN이 MPNST로 전환되는 과정을 이해하는 것은 NF1이 있는 인간에게서 볼 수 있는 PN-MPNST 진행을 정확하게 복제하는 유전자 조작 마우스(GEM) 모델의 가용성에 의해 촉진될 것입니다. 불행히도 Nf1 절제가 있는 GEM 모델은 이 프로세스를 완전히 재현하지 못합니다. 이를 통해 슈반(Schwann) 세포에서 미토겐 뉴레굴린-1(NRG1)이 과발현되어 고주파의 MPNST로 발전하는 PN이 발생하는 GEM 모델인 P 0-GGFβ3 마우스를 개발하게 되었습니다. 그러나 P 0-GGFβ3 마우스의 종양형성 및 종양 진행이 NF1 환자에서 관찰되는 과정을 정확하게 모델링하는지 여부를 결정하기 위해서는 먼저 P0-GGFβ3 말초 신경초 종양의 병리학이 인간 종양의 병리를 재현한다는 것을 증명해야 했습니다.
여기에서는 P 0-GGFβ3 및 P0-GGFβ3을 사용하여 GEM 모델에서 말초 신경계 신생물을 정확하게 진단하고 등급을 매기는 데 사용되는 특수 방법론을 설명합니다. Trp53+/- 마우스를 예로 들 수 있습니다. PN 및 MPNST를 진단하는 데 사용되는 조직학적, 면역조직화학적, 조직화학적 방법, 이러한 신생물을 병리학을 모방하는 다른 종양 유형과 구별하는 방법 및 이러한 신생물의 등급을 매기는 방법에 대해 설명합니다. GEM MPNST의 초기 배양 확립, 면역세포화학을 사용하여 이러한 배양을 특성화하는 방법, 동종 이식편을 설정하여 종양원성을 검증하는 방법에 대해 논의합니다. 종합적으로 이러한 기술은 GEM 모델에서 발생하는 PN 및 MPNST의 병리를 특성화하고 이러한 쥐 종양의 병리학을 인간 종양과 비판적으로 비교합니다.

우리는 유전자 조작 쥐의 신경계 신생물이 인간 쥐의 병리를 정확하게 재현하는지 여부를 평가하는 방법론을 개발했습니다. 여기서는 이러한 조직학적 기술, 정의된 병리학적 기준 및 배양 방법론을 P 0-GGFβ3 마우스 모델에서 발생하는 신경섬유종 및 악성 말초 신경초 종양에 적용합니다.

Patients with the autosomal dominant tumor susceptibility syndrome neurofibromatosis type 1 (NF1) commonly develop plexiform neurofibromas (PNs) that ...

우리 그룹은 신경섬유종증 1형에 중점을 두고 있으며 질병과 관련된 암, 망상신경섬유종 및 악성 말초 신경초 종양의 병리를 이해하는 데 중점을 두고 있습니다. 이를 위해 우리는 유전자 조작 마우스 모델, P0GGF 베타 3, 우리 연구실 및 망상형 신경섬유종 및 악성 말초 신경초 종양을 연구하는 다른 연구실을 포함한 여러 기술을 사용하여 유사한 문제에 직면해 있습니다. 환자 유래 종양 샘플에 대한 제한된 접근은 우리의 작업에 방해가 됩니다.결과적으로, 유전자 조작 마우스 모델을 만들고 특성화하는 것은 질병 메커니즘과 치료법의 잠재적 개발에 대한 지속적인 연구에 매우 중요합니다. 말초 신경 종양을 식별하는 것은 까다로울 수 있으며 종종 다른 암으로 오진됩니다. 이를 방지하기 위해 우리는 조직학, 면역조직화학 및 등급을 사용하여 이러한 종양을 정확하게 식별하고 등급을 매기는 상세한 프로토콜을 개발했습니다.이를 통해 향후 연구 연구의 신뢰성을 높일 수 있습니다. 우리의 연구는 유전자 조작 마우스 모델 유래 종양을 조사하고 검증하여 인간의 질병을 적절하게 모방하는지 확인하는 프레임워크를 제공합니다. 우리는 현재의 유전자 조작 마우스 모델을 사용하여 종양 미세환경과 종양 변형에 필수적인 요인을 이해할 것입니다.망상신경섬유종이 악성 말초종양으로 진행되는 원인.

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Research

연구

JoVE Journal

Cancer Research

암 연구

우리는 유전자 조작 마우스 모델에서 발생하는 종양과 해당 인간 종양 유형에서 발생하는 종양의 치료 표적을 식별하고 비교하기 위해 게놈 분석 및 기능적 게놈 스크리닝을 활용하는 종간 비교 종양유전체학 접근 방식을 개발했습니다.

악성 말초 신경초 종양의 마우스 모델에서 치료 표적을 식별하기 위한 유전자 프로파일링 및 게놈 규모 드롭아웃 스크리닝

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유방암을 위한 전임상 모형으로 유방 종양의 정형소 이식

흑색 종은 다른 장기로 빠르게 퍼지는 매우 공격적인 질병입니다. 이 프로토콜은 전이성 흑색종의 Braf/Pten 마우스 모델에서 사타구니 림프절의 부피를 모니터링하기 위해 3D 렌더링과 결합된 초고주파 초음파 이미징의 적용을 설명합니다.

흑색종의 Braf/Pten 유전자 조작 마우스 모델에서 초고주파 초음파 이미징에 의한 림프절 부피 분석

여기에서, 우리는 유전자 조작된 마우스 모델 유래 종양 에서 생체내에서 배아 치사되는 유전자 녹아웃을 수행하기 위한 프로토콜을 제시하고, 이어서 녹아웃이 종양 성장, 증식, 생존, 이동, 침윤 및 시험 관내 및 생체내에서 전사체에 미치는 영향을 평가한다.

악성 말초 신경 시스 종양 세포에서 Floxed 대립 유전자의 Ex vivo 절제에 의한 종양 발생에서 유전자 기능 정의

이 방법 논문의 목표는 외과적으로 절제된 흉막 중피종으로부터 원발성 종양 세포주의 농축, 생성 및 확장을 위한 강력하고 재현 가능한 방법론을 입증하는 것이다.

원발성, 악성 흉막 중피종 종양 라인의 생성 및 확장

학습하세요 유전자 조작 마우스 모델 P0-GGF-beta-3를 활용한 말초 신경초 종양의 조직학적 식별 및 진단 방법을. 이 기법은 신경섬유종증 1형 관련 악성 종양 연구에 필수적입니다.

유전자 조작 마우스 모델에서 악성 말초 신경초 종양 식별, 진단 및 등급 지정

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