Name: Iterative Bleaching Extends Multiplexity 접근법을 사용한 종양 함유 조직의 3차원 이미징 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-04-25T13:50:00.000+00:00
Duration: 7 min 16 s
Description: 배우세요 반복적 표백을 활용한 다중 면역형광 기법으로 복막 전이 종양의 3차원 구조를 분석하는 방법을. 이 프로토콜은 종양 미세환경의 공간적 분포를 시각화하여 면역요법 연구에 중요한 통찰을 제공합니다.

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</ol>

<table><tbody><tr><td>Alexa Fluor Plus 750 Phalloidin</td><td>Invitrogen</td><td>A30105</td><td>F-액틴 염료</td></tr><tr><td>Alexa Fluor 488 항인간 CD206 (MMR) 항체</td><td>BioLegend</td><td>321114</td><td>항체</td></tr><tr><td>Alexa Fluor 488 항인간 CD31 항체</td><td>BioLegend</td><td>303110</td><td>항체</td></tr><tr><td>Alexa Fluor 488 항인간 CD4 항체</td><td>BioLegend</td><td>300519</td><td>항체</td></tr><tr><td>Alexa Fluor 488 항인간 HLA-DR 항체</td><td>BioLegend</td><td>307656</td><td>항체</td></tr><tr><td>Alexa Fluor 488 항마우스/인간 CD44 항체</td><td>BioLegend</td><td>103016</td><td>항체</td></tr><tr><td>Alexa Fluor 594 항인간 CD45 항체</td><td>BioLegend</td><td>304060</td><td>항체</td></tr><tr><td>Alexa Fluor 647 항-칼레티닌 항체 [EP1798]</td><td>Abcam</td><td>ab214244</td><td>항체</td></tr><tr><td>Alexa Fluor 647 항-인간 CD3 항체</td><td>BioLegend</td><td>300416</td><td>항체</td></tr><tr><td>Alexa Fluor 647 항인간 CD8 항체</td><td>BioLegend</td><td>344726</td><td>항체</td></tr><tr><td>Alexa Fluor 647 항인간 포도플라닌 항체</td><td>BioLegend</td><td>337007</td><td>항체</td></tr><tr><td>Alexa Fluor 647 항-Vimentin 항체</td><td>BioLegend</td><td>677807</td><td>항체</td></tr><tr><td>Alexa Fluor 647 CD68 항체 (KP1)</td><td>Santa Cruz</td><td>sc-20060AF647</td><td>항체</td></tr><tr><td>Alexa Fluor 750 Cytokeratin, pan 항체 (AE-1/AE-3)</td><td>Novus</td><td>NBP2-33200AF750</td><td>항체</td></tr><tr><td>Alexa Fluor 750 Human alpha-Smooth Muscle Actin 항체</td><td>R& D</td><td>IC1420S</td><td>항체</td></tr><tr><td>Alexa Fluor 488 CD20 단클론 항체 (L26) eBioscience</td><td>Thermo Fisher</td><td>53-0202-82</td><td>항체</td></tr><tr><td>항생제-항진균제</td><td>Gibco</td><td>15240096</td><td>보충제 수확 배지</td></tr><tr><td>BioMed Clear Resin (Form 3)</td> <td>플랫폼 + 배양 플레이트에 사용되는</td> <td>FormLabs</td><td>RS-F2-BMCL-01</td> 수지</tr><tr><td>BSA</td><td>Sigma</td><td>A7906-500g</td><td>차단 솔루션 구성 요소</td></tr>슬<tr><td>라이더 CleanStation</td>DT3&nbsp 절단에 사용되는 캐<td>스트 아크릴 1/32" 두께</td><td></td><td></td> 재료</tr><tr><td>;</td><td>높이 조절기 및 외부 뚜껑 컨테이너,</td>시편을 위한 <td>Stratasys</td><td>DT3</td> 후처리</tr><tr><td>;</td><td>McKesson</td><td>870203</td><td>페레이팅 테이블에서 준비 테이블로 조직 이동</td></tr><tr><td>CorelDraw&nbsp;</td><td>레이저 절단을 위한 벡터 기반 설계 파일을 준비하기 위한</td> <td>CorelDRAW</td><td></td> 소프트웨어</tr><tr><td>Cytofix</td><td>BD Bioscience</td><td>554655</td><td>고정</td></tr><tr><td>접시 15cm</td><td>Falcon</td><td>353025</td><td>장착 시 사용 접시</td></tr><tr><td>35mm No. 1.5 커버슬립 14mm 유리 직경 코팅되지 않은</td><td>Matek</td><td>P35G-1.5-14-C</td><td>이미징 접시</td></tr><tr><td>DMEM(포도당 없음)</td><td>Gibco</td><td>11966025</td><td>수확 배지</td></tr><tr><td>Fc Block</td><td>BD Bioscience</td><td>564220</td><td>블로킹 용액 구성품</td></tr><tr><td>Form 3B+</td><td>Formlabs</td> <td>플랫폼 + 인큐베이션 플레이트에 사용되는</td><td>Form 3B+</td>프린터</tr><tr><td>Form Cure</td><td>Formlabs</td> 플랫폼 <td>+ 인큐베이션 플레이트용 FH-CU-01 후처리 플랫폼 + 인큐베이션 플레이트용</td><td></td></tr><tr><td>Form Wash</td><td>Formlabs</td><td>FH-WA-01</td><td>후처리 플랫폼 + 인큐베이션 플레이트용</td></tr><tr><td>GrabCAD 인쇄</td><td>GrabCAD</td><td>GrabCAD</td><td>Stratasys 프린터용 모델 준비 소프트웨어</td></tr><tr><td>Hoechst 33342 10 mg/mL</td><td>Biotium</td><td>40046</td><td>핵염료</td></tr><tr><td>J826 Prime 3D 프린터</td><td>높이 조절기 및 외부 뚜껑에 사용되는</td><td>Stratasys</td><td>J826</td> 프린터</tr><tr><td>LAS X</td><td>라이카</td><td>LAS X</td><td>공초점 소프트웨어</td></tr><tr><td>레이저 절단 시스템&nbsp;</td><td>Universal Laser Systems</td><td>ULS PLS6.150D</td><td>슬라이더에 사용되는 레이저 절단</td></tr> 수<tr><td>소화붕소리튬</td><td>STREM Chemicals</td><td>93-0397</td><td>표백 화학</td></tr><tr><td>물질 PBS, pH 7.4</td><td>Gibco</td><td>10010023</td><td>베이스 세척, 차단, 염색을 위한 버퍼</td></tr><tr><td>PreForm</td><td>FormLabs</td><td>PreForm</td><td>프린터용 모델 준비용</td></tr> 소프트웨어 실<tr><td>크 봉합사&nbsp; 2-0&nbsp;</td><td>에티콘</td><td>A305. O35</td><td>플랫폼에 조직 부착</td></tr><tr><td>Stellaris 8 WLL 공초점 현미경</td><td>Leica</td><td>STELLARIS 8</td><td>공초점 이미징&nbsp;</td></tr><tr><td>주사기 필터</td><td></td><td></td><td>필터 ab 용액</td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>American Bio</td><td>AB02025-00100</td><td>투과성 시약, 차단 용액 성분</td></tr><tr><td>Vero ContactClear</td><td>Stratasys</td><td>CTT610,</td><td>높이 조절기 및 외부 뚜껑에 사용되는 4KG 수지</td></tr><tr><td>온난화 트레이</td><td>스프링 USA</td><td>ST-1220</td><td>매체 및 조직 따뜻함 유지</td></tr><tr><td>물, 증류</td><td></td><td>LiBH4용</td> Gibco <td>15230-170</td> 희석제</tr></tbody></table>

iterative bleaching extends multiplexity 접근법을 사용한 종양 함유 조직의 3차원 이미징

Three-Dimensional Imaging of Tumor-Bearing Tissue Using the Iterative Bleaching Extends Multiplexity Approach

복막은 두께가 1mm 미만인 막질 구조로 복벽 표면을 감싸고 복부 장기 표면과 인접합니다. 그것은 표면 중피와 그 밑에 있는 결합 조직으로 구성되어 있으며, 지방 세포, 림프구, 대식세포, 섬유아세포, 혈액 및 림프관이 산재해 있습니다. 복막 악성 종양은 복부 종양 전이(예: 난소암 또는 위암)에서 비롯되는 경우가 가장 많으며18 또는 드물게 복막의 원발성 종양(예: 중피종)일 수 있습니다19. 이러한 종종 작은(&lt;1cm) 종양 병변은 매우 복잡하지만 설명된 기술을 사용하여 3D 특성화에 적용할 수 있습니다. 플랫폼에 장착된 전체 샘플을 보기 위해 5개의 컨포칼 섹션의 최대 투영이 사용됩니다(그림 4, 왼쪽 상단 모서리에 삽입). 3개의 1차 접합 항체(AF488-CD44, AF594-CD45 및 AF647-Podoplanin)와 핵 염료 Hoechst를 IBEX의 첫 번째 라운드에 사용했습니다(IBEX1, 그림 4). 종양 병변은 CD44 및 Podoplanin에 대해 이중 양성인 장미와 같은 구조에 의해 분명해지고 유두 중피종의 특징적인 핵 배열을 보여줍니다.
항-포도플라닌(anti-Podoplanin)과 항-CD44(anti-CD44)는 모두 비종양세포를 인식하기 때문에 세포 형태학과 두 개의 항체를 사용하여 종양 세포를 식별했으며, 이는 항-포도플라닌(anti-Podoplanin)을 통한 림프관 검출 및 CD44 항체가 면역 세포의 하위 집합에 결합하는 것으로 입증되었습니다. 그런 다음 3D 프로젝션을 렌더링하기 위해 최적화된 Z-step 크기에서 더 높은 해상도의 타일 스캔 형식을 사용하여 더 작은 관심 영역(ROI)을 캡처합니다(그림 5A). 플랫폼은 반복적인 염색 절차를 통해 취해졌으며 IBEX 주기 1-6에서 동일한 ROI가 이미지화되었습니다. 종양(노란색 상자) 및 종양-3차 림프 구조(TLS) 인터페이스(파란색 상자)에 대한 대표 이미지는 그림 5B-M에 정리되어 있습니다. 
TLS의 존재와 CD3 양성 세포의 밀도는 상당한 면역 세포 침투20 및 면역 조절 약물에 대한 반응 가능성을 나타냅니다21. 참고로, 그림 6에서 서로 다른 광학 절편의 스택 투영을 비교하는 것에서 알 수 있듯이 TLS와 대부분의 종양 병변은 조직의 서로 다른 Z 깊이에 존재하며, 2D 이미징이 3D 구조에 적용될 때 3D 이미징의 이점과 잠재적인 생물학 누락을 강조합니다. 이러한 병변의 3D 특성은 그림 5의 개별 병변의 볼륨 렌더링을 묘사하는 동영상 파일(영화 1-12)에서 더 분명해집니다.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67869/67869fig01.jpg"> 
그림 1: 3D 프린팅에서 복막 종양의 3D 이미징까지의 작업 흐름. 이 프로토콜은 종양이 있는 복막 조직에서 3D 다중화 이미지를 준비하기 위한 5단계 시퀀스로 구성됩니다. (1) 조직 수용 플랫폼, 이미징 어댑터 부품 및 배양 플레이트의 인쇄. (2) 조직 조달 및 장착 절차. (3) 파라포름알데히드로 고정. (4) IBEX 염색 및 이미징 주기. (5) 이미징 소프트웨어를 사용한 3D 재구성. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67869/67869fig01large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67869/67869fig02.jpg"> 
그림 2: 3D 이미징을 위한 조직 인터페이스가 있는 하드웨어 구성 요소. (A) 이미징 어댑터 내 플랫폼 어셈블리의 개략도. (B) 9웰 배양 플레이트. (C) 조립품이 있는 이미지 어댑터 구성 요소의 사진. (D) 진단용 복강경 검사에서 관찰된 중피종 함유 복막. (E) 플랫폼에 조직 장착. (여,지) 플랫폼에 장착된 종양이 있는 복막. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67869/67869fig02large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67869/67869fig03.jpg"> 
그림 3: IBEX 사이클의 타임라인 개략도. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67869/67869fig03large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67869/67869fig04.jpg"> 
그림 4: IBEX1 패널을 사용한 배양 후 플랫폼 개요. IBEX1 패널(Hoechst, AF488-CD44, AF594-CD45 및 AF647-Podoplanin)로 배양 후 전체 플랫폼의 최대 투영. 파선 원은 종양을 강조 표시합니다. 삽입 사진: 이미징 플랫폼에 장착된 종양 보유 복막 사진. 눈금 막대: 1mm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67869/67869fig04large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67869/67869fig05.jpg"> 
그림 5: 선택한 플랫폼 영역의 고해상도 면역형광 이미지. (A) IBEX1 패널(Hoechst, AF488-CD44, AF594-CD45 및 AF647-Podoplanin)로 배양 후 획득한 병합된 56타일 Z-스택 이미지의 최대 투영. 노란색 직사각형: 패널에 표시된 종양 병변(B-G). 파란색 직사각형: (H-M)에 표시된 종양-삼차 림프 구조 인터페이스. (B-G) 볼륨 렌더링에서 IBEX 패널 1-6을 사용한 개별 종양 병변 1개. (B) IBEX1, 녹색: CD44, 빨간색: CD45, 시안: 포도플라닌. (C) IBEX2, 녹색 : CD20, 빨간색 : F- 액틴, 시안 : CD3. (D) IBEX3, 녹색: CD8, 빨간색: CD4, 시안: panCK. (E) IBEX4, 녹색: CD31, 시안: CD68. (F) IBEX5, 녹색: CD206, 시안: 칼레티닌. (G) IBEX6, 녹색: 비멘틴, 빨간색: HLADR. (음) 하나의 개별 종양-삼차 림프 구조가 볼륨 렌더링에서 IBEX 패널 1-6과 인터페이스합니다. (H) IBEX1, 녹색: CD44, 빨간색: CD45, 시안: 포도플라닌. (I) IBEX2, 녹색: CD20, 빨간색: F-액틴, 시안: CD3. (J) IBEX3, 녹색: CD4, 빨간색: panCK, 시안: CD8. (K) IBEX4, 녹색: CD31, 빨간색: SMA, 시안: CD68. (L) IBEX5, 녹색: CD206, 시안: 칼레티닌. (M) IBEX6, 녹색: HLADR, 시안: 비멘틴. 모든 패널, 파란색: Hoechst. 스케일 바 : (A, 1mm); (B-M, 250 μm). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67869/67869fig05large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>
<img alt="Figure 6" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67869/67869fig06.jpg"> 
그림 6: 시뮬레이션된 2D 이미징. 제한적(10개의 광학 섹션) 및 전체 스택(102개의 광학 섹션) 프로젝션을 비교하면 2D 시뮬레이션에서 조직 컨텍스트의 손실을 확인할 수 있습니다. (A) 섹션 30-40 (10 μm)의 최대 돌출부. (B) 섹션 85-95(10μm)의 최대 투영. (C) 섹션 1-102(~100μm)의 최대 투영. 모든 패널, IBEX2 (Hoechst, AF488-CD20, AF647-CD3, AF790-phalloidin). 눈금 막대 : 200 μm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67869/67869fig06large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>
표 1: 개별 IBEX 패널에 사용된 항체. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67869/Table%201_IBEX%20panels.xlsx" target="_blank">이 표를 다운로드하려면 여기를 클릭하십시오.</a>
동영상 1: IBEX 패널 1(파란색: Hoechst, 녹색: CD44, 빨간색: CD45, 청록색: Podoplanin)을 사용한 개별 병변의 애니메이션 볼륨 렌더링. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67869/Movie1_IBEX1.mp4" target="_blank">이 영화를 다운로드하려면 여기를 클릭하십시오.</a>
동영상 2: IBEX 패널 2(파란색: Hoechst, 녹색: CD20, 빨간색: F-actin, 청록색: CD3)를 사용한 개별 병변의 애니메이션 볼륨 렌더링. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67869/Movie2_IBEX2.mp4" target="_blank">이 영화를 다운로드하려면 여기를 클릭하십시오.</a>
동영상 3: IBEX 패널 3(파란색: Hoechst, 녹색: CD8, 빨간색: CD4, 청록색: panCK)을 사용한 개별 병변의 애니메이션 볼륨 렌더링. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67869/Movie3_IBEX3.mp4" target="_blank">이 영화를 다운로드하려면 여기를 클릭하십시오.</a>
동영상 4: IBEX 패널 4(파란색: Hoechst, 녹색: CD31, 청록색: CD68)를 사용한 개별 병변의 애니메이션 볼륨 렌더링. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67869/Movie4_IBEX4.mp4" target="_blank">이 영화를 다운로드하려면 여기를 클릭하십시오.</a>
동영상 5: IBEX 패널 5(파란색: Hoechst, 녹색: CD206, 청록색: 칼레티닌)를 사용한 개별 병변의 애니메이션 볼륨 렌더링. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67869/Movie5_IBEX5.mp4" target="_blank">이 영화를 다운로드하려면 여기를 클릭하십시오.</a>
동영상 6: IBEX 패널 6(파란색: Hoechst, 녹색: Vimentin, 빨간색: HLADR)을 사용한 개별 병변의 애니메이션 볼륨 렌더링. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67869/Movie6_IBEX6.mp4" target="_blank">이 영화를 다운로드하려면 여기를 클릭하십시오.</a>
동영상 7: IBEX 패널 1(파란색: Hoechst, 녹색: CD44, 빨간색: CD45, 청록색: Podoplanin)을 사용한 3차 림프 구조-병변 인터페이스의 애니메이션 볼륨 렌더링. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67869/Movie7_TLS_IBEX1.mp4" target="_blank">이 영화를 다운로드하려면 여기를 클릭하십시오.</a>
동영상 8: IBEX 패널 2(파란색: Hoechst, 녹색: CD20, 빨간색: F-actin, 청록색: CD3)를 사용한 3차 림프 구조-병변 인터페이스의 애니메이션 볼륨 렌더링. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67869/Movie8_TLS_IBEX2.mp4" target="_blank">이 영화를 다운로드하려면 여기를 클릭하십시오.</a>
동영상 9: IBEX 패널 3을 사용한 3차 림프 구조-병변 인터페이스의 애니메이션 볼륨 렌더링 (파란색: Hoechst, 녹색: CD8, 빨간색: CD4, 청록색: panCK). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67869/Movie9_TLS_IBEX3.mp4" target="_blank">이 영화를 다운로드하려면 여기를 클릭하십시오.</a>
동영상 10: IBEX 패널 4(파란색: Hoechst, 녹색: CD31, 빨간색: SMA, 청록색: CD68)를 사용한 3차 림프 구조-병변 인터페이스의 애니메이션 볼륨 렌더링. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67869/Movie10_TLS_IBEX4.mp4" target="_blank">이 영화를 다운로드하려면 여기를 클릭하십시오.</a>
동영상 11: IBEX 패널 5(파란색: Hoechst, 녹색: CD206, 청록색: 칼레티닌)를 사용한 3차 림프 구조-병변 인터페이스의 애니메이션 볼륨 렌더링. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67869/Movie11_TLS_IBEX5.mp4" target="_blank">이 영화를 다운로드하려면 여기를 클릭하십시오.</a>
동영상 12: IBEX 패널 6(파란색: Hoechst, 녹색: Vimentin, 빨간색: HLADR)을 사용한 3차 림프 구조-병변 인터페이스의 애니메이션 볼륨 렌더링. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67869/Movie12_TLS_IBEX6.mp4" target="_blank">이 영화를 다운로드하려면 여기를 클릭하십시오.</a>
보충 파일 1: 인큐베이션 플레이트용 인쇄 파일. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67869/incubation_plate.form" target="_blank">이 파일을 다운로드하려면 여기를 클릭하십시오.</a>
보충 파일 2: 36개의 개별 플랫폼에 대한 인쇄 파일. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67869/platform_x36.form" target="_blank">이 파일을 다운로드하려면 여기를 클릭하십시오.</a>
보충 파일 3: 높이 조정 링에 대한 파일을 인쇄합니다. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67869/SMART_imaging_heightAdjuster.STL" target="_blank">이 파일을 다운로드하려면 여기를 클릭하십시오.</a>
보충 파일 4: 외부 뚜껑에 대한 파일을 인쇄합니다. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67869/SMART_imaging_petriDishLid_35mm.STL" target="_blank">이 파일을 다운로드하려면 여기를 클릭하십시오.</a>
보충 파일 5: 슬라이더용 레이저 컷 파일. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67869/imaging_platform_slider.DWG" target="_blank">이 파일을 다운로드하려면 여기를 클릭하십시오.</a>

Iterative Bleaching Extends Multiplexity 접근법을 사용한 종양 함유 조직의 3차원 이미징

The spatial heterogeneity of the tumor microenvironment (TME) is a critical determinant of therapeutic response, particularly for immune-oncology agents, ...

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표시 셀 다중 광자 현미경을 통해 혀를 이내 구강 암 종양 침략의 양적 모니터링 마우스 모델을 생성에 관련된 기술의 포괄적인 개요는 제공됩니다. 이 시스템은 침입 방지 화합물의 분자 평가 및 약물 효능을위한 유용한 플랫폼이 될 수 있습니다.

구강 편평 세포 암종의 Orthotopic 마우스 모델에서 종양 세포 침략의 다중 광자 이미징

복잡한 조직 대중은 장기에서 종양, 다양한 세포 요소로 구성되어있다. 우리는 세포의 기원뿐만 아니라 단백질 발현에 따라 세포의 특성을 해독 스펙트럼 unmixing 다음 다중 매개 면역 형광 염색과 함께 멀티 라벨 형광 형질 전환 마우스를 이용한 조직 내에서 세포의 표현형의 기여를 밝혀.

세포의 기원, 종류, 그리고 상호 작용의 시각화를위한 형광 조직 이식에 따라 정량 멀티 스펙트럼 분석

조혈 줄기 및 전구 세포의 표시 조합 5 형광 단백질은 재생 중에 골수 조혈 아키텍처에 대한 통찰력을 제공하는 공 초점과 두 광자 현미경을 통해 생체 클론 추적에 있습니다. 이 방법은 이식 다음 시간의 광범위한 기간에 대한 손상 조직의 스펙트럼으로 구분 HSPCs 유래 세포의 비 침습적 운명 매핑 할 수 있습니다.

공 초점 및 다중 광자 현미경을 사용하여 다섯 형광 단백질에 의해 표시됨 조혈 줄기 및 전구 세포의 생체 내 클론 추적에서

이 프로토콜은 단일 셀 해상도 생체 내에서 실시간으로 상호 작용 다세포 장시간 경과 이미징을 수행하는 다 광자 현미경의 사용을 설명한다.

종양 미세 환경에서 실시간 다세포 역학의 확장 시간 경과 생체 내에 영상

광학 일관성 단층 촬영 (10 월), 3 차원 영상 기술, 모니터링 하 고 다세포 종양 spheroids의 성장 활동 특성 사용 되었다. 접근, 및 내장 광 감쇠 대비에 따라 spheroids에서 레이블 없는 죽은 조직 검출 복을 사용 하 여 종양 spheroids의 정확한 체적 정량화 시연 했다.

경도 형태 및 생리 적인 광학 일관성 단층 촬영을 사용 하 여 3 차원 종양 Spheroids의 모니터링

여기에서 우리는 동일한 살아있는 동물 내의 침습적 외과 적 개입 (예를 들어, 생검) 전후 뇌 종양 세포의 고해상도 시간 경과 다광자 이미징을위한 방법을 설명합니다. 이 방법은 종양 세포의 철새, 침략적 인 행동에 대한 이러한 침습적 인 외과 적 절차의 영향을 단일 세포 수준에서 연구 할 수 있습니다.

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여기에서는 갑상선 구조 및 기능 정보의 동기식 시각화를 가능하게 하는 다중 평면 3D 재구성과 컬러 도플러 융합을 결합한 5D 초음파 기술을 제시합니다. 사각지대를 최소화함으로써 이 방법은 병변의 위치를 빠르고 정확하게 파악하여 진단 정확도를 향상시켜 특히 초보 의사에게 도움이 됩니다.

갑상선 병변의 정확하고 신속한 국소화를 위해 컬러 도플러 매핑과 통합된 동기식 삼면 재구성

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종양 저산소증 평가: 전자 상자성 공명을 통한 생체 내 3D 산소 이미징 

여기에서는 상업적으로 이용 가능한 자동 조직 염색기를 활용하는 IBEX(Iterative Bleaching Extends Multiplicity) 방법의 적용과 티라마이드 신호 증폭 기반 시약 사용에 대한 최적화 고려 사항을 설명합니다.

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반복적인 표백을 위해 최적화된 워크플로우는 고도의 자가형광 임상 샘플의 멀티플렉시티 이미징을 확장합니다.

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