Name: 저밀도 호중구의 효율적인 정제를 위한 신속한 자기-마이크로비드 방법 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-11-11T14:30:00.000+00:00
Duration: 8 min 14 s
Description: 학습하세요 저밀도 호중구를 자기-마이크로비드 기법으로 효율적으로 정제하는 방법을. 밀도 구분 원심분리와 자기 분리를 활용하여 순도 높은 세포를 얻어 질병 연구에 활용할 수 있습니다.

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<table><tbody><tr><td>그리고 nbsp; 항시트룰린 토끼 다클론 항체</td><td>AbCam</td><td>AB100932</td><td>1/50 희석</td></tr><tr><td>96웰 조직 배양 플레이트</td><td>코스타; 코닝, Inc.</td><td>3596</td><td></td></tr><tr><td>Alexa Fluor 488 항인간 CD11b 마우스 IgG1 항체</td><td>바이오레전드</td><td>301317</td><td>0.25 & mu; g/mL</td></tr><tr><td>Alexa Fluor 647 항인간 CD66b 마우스 IgM 항체</td><td>바이오레전드</td><td>305109</td><td>0.05 & mu; g/mL</td></tr><tr><td>항생쥐 IgG (H+L) 염소 항체, Alexa Fluor 488</td><td>인비트로젠 - 써모피셔 사이언티브</td><td>A-11001</td><td>1/50 희석</td></tr><tr><td>항호중구 엘라스타제 마우스 단클론 IgG1 항체</td><td>산타크루즈 바이오테크놀로지</td><td>SC-55549</td><td>10 & 마이크로; g/mL</td></tr><tr><td>항토끼 IgG (H+L) 당나귀 항체, Alexa Fluor 555</td><td>인비트로젠 - 써모피셔 사이언티브</td><td>A-31572</td><td>1/50 희석</td></tr><tr><td>APC 항인간 CD62L 마우스 IgG1 항체</td><td>바이오레전드</td><td>304809</td><td>0.03 & mu; g/mL</td></tr><tr><td>APC/Cyanine7 항인간 CD14 마우스 IgG1 항체</td><td>바이오레전드</td><td>367107</td><td>0.25 & mu; g/mL</td></tr><tr><td>Attune NxT 유세포계&nbsp;</td><td>써모 피셔 사이언티픽, Inc.</td><td>(파랑/빨강 레이저)</td><td></td></tr><tr><td>소 혈청 알부민(BSA) 분획 V</td><td>MP 생의학</td><td>810025</td><td></td></tr><tr><td>브릴리언트 바이올렛 510 항인간 CD33 마우스 IgG1 항체</td><td>바이오레전드</td><td>366609</td><td>0.30 & mu; g/mL</td></tr><tr><td>다피</td><td>칼바이오케미/EMD 밀리포어</td><td>268298</td><td></td></tr><tr><td>덱턴 T500</td><td>파마코스모스 에어컨</td><td>5.51005E+11</td><td></td></tr><tr><td>디하이드로로다민-123</td><td>아나스펙 주식회사</td><td>AS-85711</td><td></td></tr><tr><td>FACS 셀 분류기</td><td>벡턴 딕킨슨 &nbsp;</td><td>모델 FACSAria</td><td></td></tr><tr><td>태아 소 혈청(FBS)</td><td>깁코</td><td>16000-044</td><td></td></tr><tr><td>피콜-파케</td><td>머크 KG</td><td>GE 17-1440-03</td><td></td></tr><tr><td>FITC 항인간 CD98 마우스 IgG1 항체</td><td>바이오레전드</td><td>315603</td><td>0.30 & mu; g/mL</td></tr><tr><td>플로우조 소프트웨어</td><td>벡턴 디킨슨</td><td>버전 10, 2019년</td><td></td></tr><tr><td>형광 역현미경</td><td>올림포스</td><td>모델 IX-70</td><td></td></tr><tr><td>헤파린</td><td>Inhepar - PiSA Farmaceutica</td><td>3660149</td><td>5000 UI/mL</td></tr><tr><td>헤페스</td><td>시그마 올드리치</td><td>H7006</td><td></td></tr><tr><td>MACSprep 키메리즘 CD66b 마이크로비즈</td><td>밀텐이 바이오텍</td><td>130-111-552</td><td></td></tr><tr><td>마그넷</td><td>밀텐이 바이오텍</td><td>130-042-102</td><td></td></tr><tr><td>자기 분리 컬럼</td><td>밀텐이 바이오텍</td><td>130-042-201</td><td></td></tr><tr><td>마이크로 원심분리기</td><td>에펜도르프</td><td>모델 5415C</td><td></td></tr><tr><td>마이크로플레이트 리더</td><td>바이오텍 인스트루먼츠</td><td>모델 시너지 HT</td><td></td></tr><tr><td>파라포름알데히드</td><td>시그마 올드리치</td><td>158127</td><td></td></tr><tr><td>PE 항인간 CD10 마우스 IgG1 항체</td><td>바이오레전드</td><td>312203</td><td>0.05 & mu; g/mL</td></tr><tr><td>PE 항인간 CD16b 마우스 IgG2a 항체</td><td>BD 파밍겐</td><td>550868</td><td>1/40 희석</td></tr><tr><td>PE/시아닌5 항인간 CD15 마우스 IgG1 항체</td><td>바이오레전드</td><td>323013</td><td>0.25 & mu; g/mL</td></tr><tr><td>포르볼 12-미리스테이트 13-아세테이트 (PMA)</td><td>시그마 올드리치</td><td>P8139</td><td></td></tr><tr><td>폴리-L-라이신</td><td>시그마 올드리치</td><td>P2658</td><td></td></tr><tr><td>냉장 원심분리기</td><td>에펜도르프</td><td>모델 5702R</td><td></td></tr><tr><td>RPMI-1640 조직 배양 배지</td><td>깁코</td><td>23400-021</td><td></td></tr><tr><td>시톡스 그린</td><td>분자 프로브스 주식회사</td><td>S-7020</td><td></td></tr><tr><td>트윈-20&nbsp;</td><td>시그마 올드리치</td><td>P2287</td><td></td></tr><tr><td>벡타쉴드</td><td>벡터 연구소</td><td>H-1000</td><td></td></tr></tbody></table>

저밀도 호중구의 효율적인 정제를 위한 신속한 자기-마이크로비드 방법

Rapid Magnetic-microbead Method for Efficient Purification of Low-density Neutrophils

건강한 개인의 저밀도 호중구(LDN)는 PBMC의 약 5%를 차지합니다(그림 2A). 여기에 설명된 프로토콜은 일반적으로 순수한(&gt; 90%) LDN을 제공합니다. 세포는 또한 높은 생존율(&gt; 95%로 효율적으로 회수됩니다(수율 약 98%); 그림 2B). 비교를 위해, LDN은 또한 앞서 기술한 바와 같이 형광 활성화 세포 분류에 의해 정제되었다22. 간단히 말해서, PBMC는 항-CD16b 항체로 표지되었고 형광 활성화 세포 분류기에서 분류되었습니다. LDN을 3시간 동안 분류하고 열 비활성화 FBS에서 회수했습니다(그림 2). 자기적으로(MACS) 정제된 LDN은 호중구와 유사한 막 분자(마커)를 나타내는 성숙한 세포입니다. 호중구는 막 마커 CD10, C...

Neutrophils, important leukocytes of innate immunity, have traditionally been considered a homogeneous cell population. Nevertheless, recent evidence has ...

rapid-magnetic-microbead-method-for-efficient-purification-low

Research

연구

JoVE Journal

Immunology and Infection

면역학 및 감염학

Neutrophils은 염증성 면역 반응의 사이트에 도착을 가장 먼저 세포 사이에하며, 그들의 기능과 메커니즘은 체외에서 광범위하게 연구되고있다. 우리는 상용 분리 미디어를 사용 전체 혈액에서 인간 neutrophils을 분리하기위한 기준 밀도 기울기 분리 방법을 보여줍니다.

호중구 격리 프로토콜

이 비디오는 면역자기 표적화 및 말초 혈액 단핵 세포 현탁액에서 분리하여 B 세포를 정제하는 방법을 설명합니다. 이 방법은 특정 세포 표면 단백질을 표적으로 하는 특정 항체 또는 리간드(자성 입자에 연결됨)로 원치 않는 세포 유형을 라벨링하여 자기 분리에 의해 이종 세포 현탁액에서 고갈시키는 것을 포함합니다.

음성 면역자기 선택: 말초 혈액 단핵 세포에서 B 세포를 정제하는 방법

이 비디오에서는 수술 후 인간 환자의 복막 세척액에서 저밀도 호중구(LDN)를 분리하는 절차를 설명합니다. 이렇게 얻은 LDN은 종양 성장 및 진행에 대한 LDN의 역할을 이해하기 위한 추가 다운스트림 실험에 사용할 수 있습니다.

Peritoneal Low-density Neutrophil Isolation: A Technique to Obtain Low-density Neutrophils from Peritoneal Lavage Fluid Using Magnetic Activated Cell Sorting(복막 저밀도 호중구 분리: 자기 활성화 세포 분류를 사용하여 복막 세척액에서 저밀도 호중구를 얻는 기술)

우리는 밀도 기울기 원심 분리하여 및 CellTracker 염료를 사용하여 호중구 라벨링 마우스 골수에서 호중구의 분리 및 정제를위한 프로토콜을 설명합니다. 이 스트림 기능 연구 또는 입양 전송 및 추적 실험 호중구의 큰 숫자를 얻기위한 간단하고 빠른 재생하고 경제적 인 방법을 나타냅니다.

분리, 정제 및 기능 연구 및 입양 전송 실험 쥐의 골수 호중구의 라벨링

호중구는 침입하는 미생물에 대한 숙주 방어뿐만 아니라 종양 세포의 면역 감시에도 중요한 역할을 합니다. 여기에서는 항종양 특성을 가진 호중구의 분리와 관련된 기술과 in vitro 및 in vivo에서 항종양 호중구 기능을 모니터링하는 방법에 대해 설명합니다.

항 종양 특성을 가진 분리 및 호중구의 특성

호중구는 백혈구 중 가장 풍부한 유형입니다. 밀도 구배 분리 방법에 의한 인간 혈액에서 호중구의 분리 및 과립구 경로를 따른 인간 전골수구(HL60) 세포의 분화가 여기에 설명되어 있습니다. 항림프종제에 대한 림프종 세포의 민감도에 대한 역할을 테스트합니다.

호중구의 분리 및 분석 치료제에 림프종 세포 감도에서 자신의 역할을 확인하는 방법

류신이 풍부한 반복 키나아제 2 유전자(LRRK2)의 돌연변이는 유전성 파킨슨병을 일으킨다. 우리는 인간 말초 혈액 호중구에서 Rab10의 LRRK2 대조 인산화를 평가하기위한 쉽고 강력한 방법을 개발했습니다. 이 증가 LRRK2 키 나 제 통로 활동을 가진 개인을 식별 하는 데 도움이 수 있습니다.

Rab10 인산화를 평가하여 파킨슨병 관련 LRRK2 키나아제 경로를 심문하기 위한 인간 말초 혈액 호중구 격리

이 프로토콜은 전혈, 버피 코트 또는 백혈구 막에서 호중구를 분리하여 좋은 수율, 높은 순도 및 최소한의 세포 활성화를 달성하는 방법을 자세히 설명합니다. 그라데이션 정제, 적혈구(RBC) 퇴적물 및 RBC 용액을 활용하여 고품질/순도 호중구 제제를 획득합니다.

전신 혈액과 버피 코트에서 인간의 호중구의 격리

이 연구는 쥐의 골수에서 풍부한 호중구 세포외 트랩(NET)을 분리하는 두 가지 기술을 간략하게 설명합니다. 한 가지 방법은 상용 호중구 분리 키트와 밀도 구배 원심분리를 결합하는 반면, 다른 방법은 밀도 구배 원심분리만 사용합니다. 두 접근법 모두 말초 혈액 호중구의 NET을 능가하는 기능적 NET을 산출합니다.

비슷한 용량의 쥐 골수 호중구를 분리하기 위한 독특한 접근법

이 프로토콜은 바이오뱅킹 및 기타 목적을 위해 인간 말초 혈액 단핵 세포를 분리하는 고처리량 자동화 호환 방법에 대해 자세히 설명합니다.

High Throughput Immunomagnetic Bead Separation을 통해 Buffy Coats에서 인간 말초 혈액 단핵 세포 분리

여기에서는 자기 분리(negative selection) 및 불연속 밀도 구배 매체를 사용하여 전혈에서 저밀도 및 정상 밀도 호중구를 분리하기 위한 신뢰할 수 있는 접근 방식을 제공합니다. 이는 고순도 세포(≥93%)의 손대지 않은 분리를 보장하여 건강과 질병에서 호중구 하위 집단의 역할을 이해하는 데 중요한 호중구 하위 집단의 정확한 다운스트림 분석을 용이하게 합니다.

전혈에서 저밀도 및 정상 밀도 호중구의 분리 및 특성화(The Isolation and Characterization of Low- and Normal- Density Neutrophils from Whole Blood)

학습하세요 저밀도 호중구를 자기-마이크로비드 기법으로 효율적으로 정제하는 방법을. 밀도 구분 원심분리와 자기 분리를 활용하여 순도 높은 세포를 얻어 질병 연구에 활용할 수 있습니다.

저밀도 호중구의 효율적인 정제를 위한 신속한 자기-마이크로비드 방법

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