Name: Analyse van interacties tussen Endobiotica en humane gut microbiota met behulp van in-vitro Bad fermentatiesystemen (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-08-23T14:00:00.000+00:00
Duration: 6 s
Description: Ontdek hoe je interacties tussen endobiotica en humane darmmicrobiota analyseert met behulp van in-vitro batchfermentatiesystemen. Deze methode biedt een kosteneffectief alternatief voor diagnostisch onderzoek.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Deze studie werd gefinancierd door de National Nature Science Foundation of China (nr. 31741109), de Hunan Natural Science Foundation (nr. 2018JJ3200), en het construct programma van toegepaste karakteristieke discipline in de Hunan University of Science and Engineering. Wij danken LetPub (www.letpub.com) voor haar taalkundige hulp bij de voorbereiding van dit manuscript.

Dit protocol volgt de richtlijnen van de ethische commissie van Hunan University of Science and Engineering (Hunan, China) en de Zhejiang Gongshang-Universiteit (Zhejiang, China).
1. bereiding van bacteriën
<ol><li>Voorbereiding van Bifidobacterium medium Bouillon<ol>
<li>Combineer de volgende componenten in 950 mL gedistilleerd water: vleesextract, 5 g/L; Gistextract, 5 g/L; caseïne peptone, 10 g/L; soja Toon, 5 g/L; glucose, 10 g/L; K2HPO4, 2,04 g/L; MgSO4· 7h2O, 0,22 g/L; MnSO4. H20, 0,05 g/L; NaCl, 5 g/L; Tween 80, 1 mL; zoutoplossing, 40 mL (CaCl2. 2H2O, 0,25 g/L; KH2po4, 1 g/L; NaHCO3, 10 g/L; NaCl, 2 g/L); en resazurin, 0,4 mL (2,5 mg/L). Stel de pH in op 6,8 met 2 M NaOH.</li>
<li>Autoclaaf bij 121 °C gedurende 15 minuten en laat de Bouillon afkoelen tot kamertemperatuur (RT) onder anaerobe condities (10% H2, 10% Co2, 80% N2). Voeg filter-gesteriliseerd cysteïne-HCl (0,5 g/L) en Mupirocin (5 mg/L) toe aan het medium.</li>
</ol>
</li>
<li>Voeg een aliquot (50 μL) van bevroren Bifidobacterium longum toe aan een cultuur buis met 5 ml Bifidobacterium medium Bouillon onder anaerobe condities, dan cultuur in een anaerobe incubator voor 24 uur bij 37 °c.</li>
</ol>2. bereiding van bifidobacteriële EPSs
<ol><li>Bereiding van de PYG agar medium<ol>
<li>Combineer het volgende: peptone, 20 g/L; Gistextract, 10 g/L; glucose, 5 g/L; NaCl, 0,08 g/L; CaCl2, 0,008 g/L; MgSO4· 7h2O, 0,008 g/L; K2HPO4, 0,04 g/L; KH2po4, 0,04 g/L; NaHCO3, 0,4 g/L; agar, 12 g/L. Stel de pH in op 7,2 met 10 M NaOH.</li>
<li>Autoclaaf de media bij 121 °C gedurende 15 minuten en koel tot ~ 50 °C. Voeg vervolgens per 1 liter medium 0,5 mL filter-gesteriliseerde vitamine K1 -oplossing (1 g vitamine k1 opgelost in 99 ml 99% ethanol), 5 ml haemin oplossing (0,5 g Haemin opgelost in 1 ml van 1 mol/L NaOH , vervolgens gebracht tot 100 mL met gedestilleerd water), en 0,5 g van cysteïne-HCl.</li>
<li>Voor het gieten van de PYG platen, Voeg filter-gesteriliseerd 5-broom-4-Chloro-3-indolyl β-D-galactopyranoside (X-gal, 0,06 g/L), LiCl · 3H2O (5,7 g/l) en Mupirocin (5 mg/l) op het medium. Opmerking: X-gal en LiCl. 3H2O toestaan de identificatie van B. longum kolonies op platen via kleurveranderingen.</li>
</ol>
</li>
<li>Inoculeren 20 μL van B. longum stammen (stap 1,2) op pyg platen en plaats in een anaerobe incubator bij 37 °c voor 72 h.</li>
<li>Verzamel mucoïde bacteriële kolonies van de PYG platen met behulp van een weeg Scoop, en vervolgens volledig respenderen in 10 mL fosfaat-gebufferde zoutoplossing (PBS) met behulp van een Vortex-oscillator. Opmerking: de bacteriële en EPS-mengsels moeten volledig worden geresuspendeerd door grondig of pipetteren herhaaldelijk omhoog en omlaag totdat de vezels volledig zijn opgelost in PBS.</li>
<li>Centrifugeer de suspensie gedurende 5 minuten bij 6.000 x g .</li>
<li>Breng de supernatanten voorzichtig over naar een nieuwe centrifugebuis en meng volledig met drie volumes koude 99% ethanol door herhaalde inversie en menging.</li>
<li>Centrifugeer het mengsel gedurende 5 minuten bij 6.000 x g en verwijder de supernatants volledig.</li>
<li>Verwijder de precipitaten van de centrifugebuizen door de EPS-extracten 's nachts te schrapen en te drogen met behulp van een snelheids vacuüm.</li>
</ol>3. bereiding van het fermentatie medium
<ol><li>Bereiding van basis kweekmedium VI<ol>
<li>Combineer het volgende: peptone, 3 g/L; Tryptone, 3 g/L; Gistextract, 4,5 g/L; mucin, 0,5 g/L; galzouten No. 3, 0,4 g/L; NaCl, 4,5 g/L; KCl, 2,5 g/L; MgCl2· 6h2O, 4,5 g/L; 1 mL-Tween 80; CaCl2. 6h2O, 0,2 g/L; KH2po4, 0,4 g/L; MgSO4· 7h2O, 3,0 g/L; MnCl2· 4h2O, 0,32 g/L; FeSO4· 7H2O, 0,1 g/L; CoSO4· 7h2O, 0,18 g/L; CaCl2· 2H2O, 0,1 g/L; ZnSO4· 7h2O, 0,18 g/L; CuSO4· 5H2O, 0,01 g/L; en NiCl2· 6h2O, 0,092 g/L. Stel de pH in op 6,5 met 1 M HCl.</li>
<li>Bereid haemin en cysteïne zoals gedaan in paragraaf 2,1 en voeg toe na Autoclaveren en koeling.</li>
</ol>
</li>
<li>Bereid cultuur media voor die verschillende koolstofbronnen bevatten met een VI-basismedia. Voeg vóór autoclaven 8 g/L BIF EPS-vezels toe aan medium VI, bestaande uit groep VI_Bif. Voeg bovendien 8 g/L zetmeel toe aan medium VI om groep VI_Starch te vertegenwoordigen. Ten slotte wordt medium VI zonder toevoeging van een koolstofbron gebruikt als controle (groep VI). Opmerking: BIF EPS en zetmeel worden voor het eerst opgelost in heet water met behulp van een magnetische agitator, vervolgens vermengd met bereid VI-medium.</li>
<li>Autoclaaf alle media bij 121 °C gedurende 15 minuten en laat afkoelen tot RT.</li>
<li>Breng een submonster (5 mL) van elk medium over naar kweek buizen in een anaerobe incubator en bewaar de overblijvende media op 4 °C.</li>
</ol>4. menselijke fecale monstervoorbereiding
<ol><li>Verzamel verse fecale monsters onmiddellijk na verse ontlasting van gezonde volwassen menselijke vrijwilligers met behulp van ontlasting containers, en vervolgens gebruiken voor slurry voorbereiding. Opmerking: voorafgaand aan de monsterverzameling, moeten alle vrijwilligers worden gescreend om te zorgen voor geen ontvangst van antibiotica, probiotica of prebiotische behandelingen gedurende ten minste 3 maanden voorafgaand aan het doneren van monsters. Bovendien moeten alle donoren geïnformeerde, schriftelijke toestemming geven.</li>
<li>Breng een vers fecaal monster (1 g) naar 10 mL van 0,1 M anaerobe PBS (pH 7,0) in glazen bekers en gebruik vervolgens glazen staven om een 10% (w/v) slurry te bereiden.</li>
<li>Gebruik een zeef van 0,4 mM om de fecale slurry te filteren. Gebruik vervolgens een submonster van de gefilterde slurry om batch cultuur fermentatie-experimenten te beënten en bewaar de rest bij-80 °C voor verdere analyses. Opmerking: stappen 4.2 – 4.3 worden uitgevoerd in een anaerobe kamer.</li>
</ol>5. in vitro batch gisting
<ol><li>Voeg gefilterde fecale slurry (500 μL) toe aan het fermentatie medium dat in stap 3,2 is bereid in een anaerobe kamer, en inbroed bij 37 °C.</li>
<li>Verzamel 2 mL gefermenteerde monsters bij 24 uur en 48 uur in de anaerobe kamer en centrifugeer vervolgens buiten de kamer bij 6.000 x g gedurende 3 minuten.</li>
<li>Breng de supernatanten voorzichtig over naar een nieuwe centrifugebuis die zal worden gebruikt voor de analyse van polysaccharide afbraak en korte-keten vetzuren (scfas) metingen.</li>
<li>Bewaar de centrifugeren pellets bij-80 °C en gebruik vervolgens voor bacteriële genomische DNA-extractie.</li>
</ol>6. EPS afbraak door menselijke fecale microbiota
<ol><li>Laad 0,2 μL gefermenteerde supernatanten op voorgecoate silica gel-60 TLC aluminium platen en droog ze vervolgens met een haardroger.</li>
<li>Ontwikkel de platen in 20 mL van een mierenzuur/n-butanol/water (6:4:1, v:v: v) oplossing en droog met een haardroger.</li>
<li>Week de platen in het orcinol-reagens om te verven en droog ze vervolgens met een haardroger.<ol>
<li>Bereid orcinol reagentia door het oplossen van 900 mg Lichenol in 25 mL gedestilleerd water en vervolgens 375 mL ethanol toe te voegen. Vervolgens moet geconcentreerd zwavelzuur langzaam worden toegevoegd en de oplossing grondig gemengd.</li>
</ol>
</li>
<li>Warmte platen bij 120 °C gedurende 3 minuten in een bakoven en evalueren de afbraak van EPS door het meten van TLC-bands.</li>
</ol>7. effecten van EPS op humane intestinale microbiota
<ol><li>Freeze-ontdooien de oorspronkelijke fecale monsters bereid in stap 4,3 en gefermenteerde monsters bereid in stap 5,4.</li>
<li>Extract bacteriële genomische DNA (gDNA) uit alle monsters met behulp van een ontlasting bacteriële genomische DNA-extractie Kit volgens de instructies van de fabrikant.</li>
<li>Bepaal DNA concentraties, integrities en grootte verdelingen met behulp van een micro-spectrofotometer en agar gel elektroforese.</li>
<li>PCR van bacteriële 16S rRNA genen uit de geëxtraheerde gDNA met behulp van de volgende eerder beschreven voorwaartse en omgekeerde primers12: -voorwaartse primer (Barcoded primer 338F): ACTCCTACGGGAGGCAGCA -omgekeerde primer (806R): GGACTACHVGGGTWTCTAAT Gebruik de volgende thermische cycler-condities:<ol>
<li>94 °C gedurende 5 min.</li>
<li>94 °C gedurende 30 sec.</li>
<li>55 °C gedurende 30 sec.</li>
<li>72 °C gedurende 1 minuut.</li>
<li>Herhaal 2 – 4 voor 35 cycli</li>
<li>72 °C gedurende 5 min.</li>
<li>4 °C vasthouden tot verwijdering uit thermische cycler.</li>
</ol>
</li>
<li>Gebruik een high-throughput sequencing van PCR-producten bij een DNA-sequencing bedrijf met behulp van ultra-hoge doorvoer van microbiële communityanalyse.</li>
<li>Verkrijg schone, hoge kwaliteit sequenties met behulp van de kwantitatieve inzichten in microbiële ecologie (QIIME) sequentieanalyse pipeline13.</li>
<li>Definieer operationele taxonomische eenheden (Otu's) voor 16S rRNA gensequenties met meer dan 97% nucleotide-gelijkenis met behulp van bio-informatica tools zoals de Mothur software suite14.</li>
<li>Kies een representatieve reeks van elke OTU en gebruik de RDP-classificatie samen met de SILVA taxonomische database om representatieve reeksen15te classificeren.</li>
<li>Bereken de dekking van goede, Alfa-diversiteits statistieken (inclusief Simpson en Shannon-index) en rijkdom (waargenomen aantal Otu's) met behulp van bioinformatica-tools16.</li>
</ol>8. effecten van EPS op SCFA-productie door humane intestinale microbiota
<ol><li>Voeg gefermenteerde supernatanten (1 ml) bereid in stap 5,3 tot 2 ml centrifugebuizen.</li>
<li>Voeg aan elk van de monsters 0,2 mL van 25% (g/v) metafosforzuur toe en meng de oplossingen grondig door vortexing.</li>
<li>Centrifugeer de mengsels gedurende 20 minuten bij 13.000 x g en breng de supernatanten over naar verse buizen.</li>
<li>Bereid tegelijkertijd oplossingen van 120 mm azijn, propionzuur, Butyric, Isobutyric, Valeriaan en isovalerische zuren. Voeg vervolgens 1 mL van elk bereid zuur toe aan 1,2 mL van 25% (g/v) metafosforzuur en gebruik dit als de standaard cocktails.</li>
<li>Filtreer de monsters met een 0,22 μM-membraan.</li>
<li>Detecteer scfa concentraties met behulp van krachtige gaschromatografie volgens eerder beschreven protocollen11,17. Opmerking: een InertCap FFAP-kolom (0,25 mM x 30 m x 0,25 μM) wordt gebruikt voor gaschromatografie (GC). De SCFA concentraties worden vervolgens gekwantificeerd op basis van piek gebieden met behulp van de single-point interne standaardmethode in het GC Solution softwarepakket.</li>
</ol>

<ol><li>Maarten, V. D. G., Blottière Hervé, M., Doré, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Humans+as+holobionts%3A+implications+for+prevention+and+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Microbiome%22%5BJournal%5D)">Humans as holobionts: implications for prevention and therapy.</a> Microbiome. 6 (1), 81(2018).</li>
<li>Allen, A. P., Dinan, T. G., Clarke, G., Cryan, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+psychology+of+the+human+brain-gut-microbiome+axis%5BTitle%5D)+AND+%22Social+and+Personality+Psychology+Compass%22%5BJournal%5D)">A psychology of the human brain-gut-microbiome axis.</a> Social and Personality Psychology Compass. 11 (4), e12309(2017).</li>
<li>Arora, T., Bäckhed, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+gut+microbiota+and+metabolic+disease%3A+current+understanding+and+future+perspectives%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Internal+Medicine%22%5BJournal%5D)">The gut microbiota and metabolic disease: current understanding and future perspectives.</a> Journal of Internal Medicine. 280, 39-349 (2016).</li>
<li>Maurice, C., Haiser, H., Turnbaugh, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Xenobiotics+shape+the+physiology+and+gene+expression+of+the+active+human+gut+microbiome%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Xenobiotics shape the physiology and gene expression of the active human gut microbiome.</a> Cell. 152 (1-2), 39-50 (2013).</li>
<li>Carmody, R. N., Turnbaugh, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Host-microbial+interactions+in+the+metabolism+of+therapeutic+and+diet-derived+xenobiotics%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Investigation%22%5BJournal%5D)">Host-microbial interactions in the metabolism of therapeutic and diet-derived xenobiotics.</a> Journal of Clinical Investigation. 124 (10), 4173-4181 (2014).</li>
<li>Lu, K., Mahbub, R., Fox, J. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Xenobiotics%3A+interaction+with+the+intestinal+microflora%5BTitle%5D)+AND+%22ILAR+Journal%22%5BJournal%5D)">Xenobiotics: interaction with the intestinal microflora.</a> ILAR Journal. 56 (2), 218-227 (2015).</li>
<li>Taguer, M., Maurice, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+complex+interplay+of+diet%2C+xenobiotics%2C+and+microbial+metabolism+in+the+gut%3A+implications+for+clinical+outcomes%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+Pharmacology+%26+Therapeutics%22%5BJournal%5D)">The complex interplay of diet, xenobiotics, and microbial metabolism in the gut: implications for clinical outcomes.</a> Clinical Pharmacology & Therapeutics. 99 (6), 588-599 (2016).</li>
<li>Anubhav, D., Meenakshi, S., Shankar, G. T., Mande, S. S., Wilson, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Xenobiotic+metabolism+and+gut+microbiomes%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Xenobiotic metabolism and gut microbiomes.</a> PLoS One. 11 (10), e0163099(2016).</li>
<li>Koppel, N., Rekdal, V. M., Balskus, E. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chemical+transformation+of+xenobiotics+by+the+human+gut+microbiota%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Chemical transformation of xenobiotics by the human gut microbiota.</a> Science. 356 (6344), 1246-1257 (2017).</li>
<li>Hidalgo-Cantabrana, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genomic+overview+and+biological+functions+of+exopolysaccharide+biosynthesis+in+Bifidobacterium+spp%5BTitle%5D)+AND+%22Applied+and+Environmental+Microbiology%22%5BJournal%5D)">Genomic overview and biological functions of exopolysaccharide biosynthesis in Bifidobacterium spp.</a> Applied and Environmental Microbiology. 80 (1), 9-18 (2014).</li>
<li>Liu, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+bifidobacteria-produced+exopolysaccharides+on+human+gut+microbiota+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Applied+Microbiology+and+Biotechnology%22%5BJournal%5D)">Effects of bifidobacteria-produced exopolysaccharides on human gut microbiota in vitro.</a> Applied Microbiology and Biotechnology. , 1-10 (2018).</li>
<li>Tang, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gut+microbial+profile+is+altered+in+primary+biliary+cholangitis+and+partially+restored+after+UDCA+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Gut%22%5BJournal%5D)">Gut microbial profile is altered in primary biliary cholangitis and partially restored after UDCA therapy.</a> Gut. 67 (3), 534-541 (2018).</li>
<li>Kuczynski, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Using+QIIME+to+analyze+16S+rRNA+gene+sequences+from+microbial+communities%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Protocols+in+Microbiology%22%5BJournal%5D)">Using QIIME to analyze 16S rRNA gene sequences from microbial communities.</a> Current Protocols in Microbiology. 27 (1), 1-28 (2012).</li>
<li>Hiltemann, S. D., Boers, S. A., van der Spek, P. J., Jansen, R., Hays, J. P., Stubbs, A. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Galaxy+mothur+Toolset+%28GmT%29%3A+a+user-friendly+application+for+16S+rRNA+gene+sequencing+analysis+using+mothur%5BTitle%5D)+AND+%22GigaScience%22%5BJournal%5D)">Galaxy mothur Toolset (GmT): a user-friendly application for 16S rRNA gene sequencing analysis using mothur.</a> GigaScience. , giy166 (2018).</li>
<li>Wang, Q., Garrity, G. M., Tiedje, J. M., Cole, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Na%C3%AFve+Bayesian+classifier+for+rapid+assignment+of+rRNA+sequences+into+the+new+bacterial+taxonomy%5BTitle%5D)+AND+%22Applied+and+Environmental+Microbiology%22%5BJournal%5D)">Naïve Bayesian classifier for rapid assignment of rRNA sequences into the new bacterial taxonomy.</a> Applied and Environmental Microbiology. 73 (16), 5261-5267 (2007).</li>
<li>Schloss, P. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Introducing+mothur%3A+open-source%2C+platform-independent%2C+community-supported+software+for+describing+and+comparing+microbial+communities%5BTitle%5D)+AND+%22Applied+and+Environmental+Microbiology%22%5BJournal%5D)">Introducing mothur: open-source, platform-independent, community-supported software for describing and comparing microbial communities.</a> Applied and Environmental Microbiology. 75 (23), 7537-7541 (2009).</li>
<li>Bai, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparative+study+on+the+in+vitro+effects+of+pseudomonas+aeruginosa+and+seaweed+alginates+on+human+gut+microbiota%5BTitle%5D)+AND+%22Plos+One%22%5BJournal%5D)">Comparative study on the in vitro effects of pseudomonas aeruginosa and seaweed alginates on human gut microbiota.</a> Plos One. 12 (2), e0171576(2017).</li>
<li>Zhang, Z., Xie, J., Zhang, F., Linhardt, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Thin-layer+chromatography+for+the+analysis+of+glycosaminoglycan+oligosaccharides%5BTitle%5D)+AND+%22Analytical+Biochemistry%22%5BJournal%5D)">Thin-layer chromatography for the analysis of glycosaminoglycan oligosaccharides.</a> Analytical Biochemistry. 371, 118-120 (2007).</li>
<li>Simon, J. C., Marchesi, J. R., Mougel, C., Selosse, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Host-microbiota+interactions%3A+from+holobiont+theory+to+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Microbiome%22%5BJournal%5D)">Host-microbiota interactions: from holobiont theory to analysis.</a> Microbiome. 7 (5), (2019).</li>
<li>Postler, T. S., Ghosh, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Understanding+the+Holobiont%3A+how+microbial+metabolites+affect+human+health+and+shape+the+immune+system%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Metabolism%22%5BJournal%5D)">Understanding the Holobiont: how microbial metabolites affect human health and shape the immune system.</a> Cell Metabolism. 26 (1), 110-130 (2017).</li>
<li>Kramer, P., Bressan, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Humans+as+superorganisms%3A+how+microbes%2C+viruses%2C+imprinted+genes%2C+and+other+selfish+entities+shape+our+behavior%5BTitle%5D)+AND+%22Perspectives+on+Psychological+Science%22%5BJournal%5D)">Humans as superorganisms: how microbes, viruses, imprinted genes, and other selfish entities shape our behavior.</a> Perspectives on Psychological Science. 10 (4), 464-481 (2015).</li>
<li>Malfertheiner, P., Nardone, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gut+microbiota%3A+the+forgotten+organ%5BTitle%5D)+AND+%22Digestive+Diseases%22%5BJournal%5D)">Gut microbiota: the forgotten organ.</a> Digestive Diseases. 29 (6), (2011).</li>
<li>Andoh, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+gut+microbiota+is+a+new+organ+in+our+body%5BTitle%5D)+AND+%22The+Japanese+journal+of+Gastro-Enterology%22%5BJournal%5D)">The gut microbiota is a new organ in our body.</a> The Japanese journal of Gastro-Enterology. 112 (11), 1939-1946 (2015).</li>
<li>Mika, A., Van, W. T., González, A., Herrera, J. J., Knight, R., Fleshner, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Exercise+is+more+effective+at+altering+gut+microbial+composition+and+producing+stable+changes+in+lean+mass+in+juvenile+versus+adult+male+f344+rats%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Exercise is more effective at altering gut microbial composition and producing stable changes in lean mass in juvenile versus adult male f344 rats.</a> PLoS One. 10 (5), e0125889(2015).</li>
<li>Hugenholtz, F., de Vos, W. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+models+for+human+intestinal+microbiota+research%3A+a+critical+evaluation%5BTitle%5D)+AND+%22Cellular+and+Molecular+Life+Sciences%22%5BJournal%5D)">Mouse models for human intestinal microbiota research: a critical evaluation.</a> Cellular and Molecular Life Sciences. 75 (1), 149-160 (2018).</li>
<li>Takagi, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+single-batch+fermentation+system+to+simulate+human+colonic+microbiota+for+high-throughput+evaluation+of+prebiotics%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">A single-batch fermentation system to simulate human colonic microbiota for high-throughput evaluation of prebiotics.</a> PLoS One. 11 (8), e0160533(2016).</li>
<li>Ning, T., Gong, X., Xie, L., Ma, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gut+microbiota+analysis+in+rats+with+methamphetamine-induced+conditioned+place+preference%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Microbiology%22%5BJournal%5D)">Gut microbiota analysis in rats with methamphetamine-induced conditioned place preference.</a> Frontiers in Microbiology. 8 (1), 1620(2017).</li>
</ol>

De auteurs verklaren dat zij geen belangenconflicten hebben. De cijfers werden aangehaald in Yin et al. 11.

Er is aanzienlijke vooruitgang geboekt op het gebied van de samenstelling en activiteiten van menselijke gut microbiota in het afgelopen decennium. Als gevolg van deze studies is het concept van holobiont ontstaan, dat de interacties tussen hosts en geassocieerde microbiële gemeenschappen vertegenwoordigt, zoals tussen mensen en hun gut microbiota19,20. Bovendien, mensen worden nu zelfs beschouwd als Super organismen21, waarbij de darm mic...

Gut microbiota spelen een belangrijke rol in de werking van de menselijke darmen en in de gezondheid van de gastheer. Bijgevolg, gut microbiota zijn onlangs uitgegroeid tot een belangrijk doelwit voor ziektepreventie en therapie1. Bovendien, gut bacteriën interactie met gastheer intestinale cellen en reguleren fundamentele gastheer processen, met inbegrip van metabole activiteiten, voedingsstoffen availabiliteiten, immuun systeem modulatie, en zelfs hersenfunctie en besluitvorming van2,3 . Endobiotica hebben aanzienlijke potentie om invloed op de bacteriële samenstelling en de diversiteit van gut microbiota. Zo, interacties tussen endobiotica en menselijke gut microbiota hebben aangetrokken toegenomen onderzoek aandacht4,5,6,7,8,9.
Het is moeilijk om de interacties tussen endobiotica en humane gut microbiota in vivo te evalueren als gevolg van bio-ethiek en economische beperkingen. Bijvoorbeeld, experimenten onderzoeken de interacties tussen endobiotica en menselijke gut microbiota kan niet worden uitgevoerd zonder toestemming van de Food and Drug Administration, en werving van vrijwilligers is duur. Daarom worden voor dergelijke onderzoeken vaak diermodellen gebruikt. Het gebruik van diermodellen is echter beperkt als gevolg van verschillende microbiota-composities en diversiteit in dier-vs. mensen-geassocieerde Gemeenschappen. Een alternatieve in vitro methode om de interacties tussen endobiotica en humane gut microbiota te onderzoeken is door het gebruik van batch cultuur experimenten.
Exopolysacchariden (EPSs) zijn prebiotica die significant bijdragen aan het behoud van de gezondheid van de mens10. Afzonderlijke EPSS die bestaan uit verschillende Monosacharide composities en structuren kunnen verschillende functies vertonen. Eerdere analyses hebben de samenstelling van BIF EPSs bepaald, de representatieve xenobiotische die in de huidige studie11is getarget. Echter, gastheer-geassocieerde metabole effecten zijn niet overwogen met betrekking tot EPS samenstelling en diversiteit.
Het hier beschreven protocol gebruikt de fecale microbiota van 12 vrijwilligers tot gisten BIF EPSS. Thin-layer chromatografie (TLC), 16S rRNA Gene High-throughput sequencing en gaschromatografie (GC) worden vervolgens gebruikt in combinatie om de interacties tussen EPSs en humane gut microbiota te onderzoeken. Duidelijke voordelen van dit protocol in vergelijking met in vivo experimenten zijn de lage kosten en het vermijden van storende effecten van de stofwisseling van de gastheer. Bovendien kan het beschreven protocol worden gebruikt in andere onderzoeken die interacties tussen endobiotica en humane gut microbiota onderzoeken.

```html
<table><tbody><tr><td>0.22 &micro;m membraanfilters</td><td>Millipore</td><td>SLGP033RB</td><td>Gebruik voor het filteren van monsters</td></tr><tr><td>0.4-mm Zeef</td><td>Thermo Fischer</td><td>308080-99-1</td><td>Gebruik voor het bereiden van menselijke fecale monsters</td></tr><tr><td>5-bromo-4-chloro-3-indolyl &beta;-D-galactopyranosid (X-Gal)</td><td>Solarbio</td><td>X1010</td><td>Gebruik voor het bereiden van kleurplaat</td></tr><tr><td>Azijnzuur</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>71251</td><td>Standaard monster voor SCFA</td></tr><tr><td>Agar</td><td>Solarbio</td><td>YZ-1012214</td><td>De component van het medium</td></tr><tr><td>Anaërobe kamer</td><td>Electrotek&nbsp;</td><td>AW 400SG</td><td>Bacteriëncultuur en fermentatie</td></tr><tr><td>Autoclaaf</td><td>SANYO</td><td>MLS-3750</td><td>Gebruik voor autoclaving</td></tr><tr><td>Bacto soytone</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>70178</td><td>De component van het medium</td></tr><tr><td>Bakoven</td><td>Shanghai Yiheng Scientific Instruments Co., Ltd</td><td>DHG-9240A</td><td>Gebruik voor verwarmen en bakken</td></tr><tr><td>Runderextract</td><td>Solarbio</td><td>G8270</td><td>De component van het medium</td></tr><tr><td>Bifidobacterium longum Reuter</td><td>ATCC</td><td>ATCC&reg; 51870&trade;</td><td>Bacterieën</td></tr><tr><td>Gallzouten</td><td>Solarbio</td><td>YZ-1071304</td><td>De component van het medium</td></tr><tr><td>Boterzuur</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>19215</td><td>Standaard monster voor SCFA</td></tr><tr><td>CaCl2</td><td>Solarbio</td><td>C7250</td><td>Zoutoplossing van het medium</td></tr><tr><td>Capillaire kolom</td><td>SHIMADZU-GL</td><td>InertCap FFAP (0.25 mm &times; 30 m &times; 0.25 &mu;m)</td><td>Gebruikt voor SCFA-detectie</td></tr><tr><td>Caseïne pepton</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>39396</td><td>De component van het medium</td></tr><tr><td>Centrifuge</td><td>Thermo Scientific</td><td>Sorvall ST 8</td><td>Gebruik voor centrifugeren</td></tr><tr><td>CoSO4.7H2O</td><td>Solarbio</td><td>C7490</td><td>De component van het medium</td></tr><tr><td>CuSO4.5H2O</td><td>Solarbio</td><td>203165</td><td>De component van het medium</td></tr><tr><td>Cysteïne-HCl</td><td>Solarbio</td><td>L1550</td><td>De component van het medium</td></tr><tr><td>Ethanol</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>E7023</td><td>Gebruik voor het bereiden van vitamine K1</td></tr><tr><td>FeSO4.7H2O</td><td>Solarbio</td><td>YZ-111614</td><td>De component van het medium</td></tr><tr><td>Mierenzuur</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>399388</td><td>Gebruikt voor TLC</td></tr><tr><td>Gaschromatografie</td><td>Shimadzu Corporation</td><td>GC-2010 Plus</td><td>Gebruikt voor SCFA-detectie</td></tr><tr><td>Glasbeker</td><td>Fisher Scientific</td><td>FB10050</td><td>Gebruikt voor slurry-bereiding</td></tr><tr><td>Glucose</td><td>Solarbio</td><td>G8760</td><td>De component van het medium</td></tr><tr><td>Haemin</td><td>Solarbio</td><td>H8130</td><td>De component van het medium</td></tr><tr><td>HCl</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>30721</td><td>Basisoplossing gebruikt om de pH van de buffers aan te passen</td></tr><tr><td>Isobuterzuur</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>46935-U</td><td>Standaard monster voor SCFA</td></tr><tr><td>Isovaleriaanzuren</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>129542</td><td>Standaard monster voor SCFA</td></tr><tr><td>K2HPO4</td><td>Solarbio</td><td>D9880</td><td>Zoutoplossing van het medium</td></tr><tr><td>KCl</td><td>Solarbio</td><td>P9921</td><td>De component van het medium</td></tr><tr><td>KH2PO4</td><td>Solarbio</td><td>P7392</td><td>Zoutoplossing van het medium</td></tr><tr><td>LiCl.3H2O</td><td>Solarbio</td><td>C8380</td><td>Gebruik voor het bereiden van kleurplaat</td></tr><tr><td>Vleesextract</td><td>Sigma-Aldrich-Aldrich</td><td>70164</td><td>De component van het medium</td></tr><tr><td>Metafosforzuur</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>B7350</td><td>Standaard monster voor SCFA</td></tr><tr><td>MgCl2.6H2O</td><td>Solarbio</td><td>M8160</td><td>De component van het medium</td></tr><tr><td>MgSO4.7H2O</td><td>Solarbio</td><td>M8300</td><td>Zoutoplossing van het medium</td></tr><tr><td>MISEQ</td><td>Illumina</td><td>MiSeq 300PE systeem</td><td>DNA-sequencing</td></tr><tr><td>MnSO4.H20</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M8179</td><td>Zoutoplossing van het medium</td></tr><tr><td>Mupirocine</td><td>Solarbio</td><td>YZ-1448901</td><td>Antibioticum</td></tr><tr><td>NaCl</td><td>Solarbio</td><td>YZ-100376</td><td>Zoutoplossing van het medium</td></tr><tr><td>NaHCO3</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>792519</td><td>Zoutoplossing van het medium</td></tr><tr><td>NanoDrop ND-2000</td><td>NanoDrop Technologies</td><td>ND-2000</td><td>Bepaal DNA-concentraties</td></tr><tr><td>NaOH</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>30620</td><td>Basisoplossing gebruikt om de pH van de buffers aan te passen</td></tr><tr><td>n-butanol</td><td>ChemSpider</td><td>71-36-3</td><td>Gebruikt voor TLC</td></tr><tr><td>NiCl2</td><td>Solarbio</td><td>746460</td><td>De component van het medium</td></tr><tr><td>Orcinol</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>447420</td><td>Gebruikt voor het bereiden van orcinolreagentia</td></tr><tr><td>Propionzuur</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>94425</td><td>Standaard monster voor SCFA</td></tr><tr><td>QIAamp DNA Stool Mini Kit</td><td>QIAGEN</td><td>51504</td><td>Extractie van bacterieel genoom-DNA</td></tr><tr><td>Klaar-voor-gebruik PBS-poeder</td><td>Sangon Biotech (Shanghai) Co., Ltd.</td><td>A610100-0001</td><td>Gebruikt voor het bereiden van de lipidesuspensie</td></tr><tr><td>Resazurin</td><td>Solarbio</td><td>R8150</td><td>Anaërobe apparatuur</td></tr><tr><td>Speed Vacuum Concentrator</td><td>LABCONCO</td><td>CentriVap</td><td>Gebruik voor het bereiden van EPS'en</td></tr><tr><td>Stärke</td><td>Solarbio</td><td>YZ-140602</td><td>Gebruik voor de koolstofbron</td></tr><tr><td>Zwavelzuur</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>150692</td><td>Gebruikt voor het bereiden van or

analyse van interacties tussen endobiotica en humane gut microbiota met behulp van in-vitro bad fermentatiesystemen

Analysis of Interactions between Endobiotics and Human Gut Microbiota Using In Vitro Bath Fermentation Systems

Menselijke intestinale micro-organismen zijn onlangs uitgegroeid tot een belangrijk doelwit van onderzoek bij het bevorderen van de menselijke gezondheid en het voorkomen van ziekten. Bijgevolg zijn onderzoeken naar interacties tussen endobiotica (bijv. drugs en prebiotica) en gut microbiota een belangrijk onderzoeksonderwerp geworden. In vivo experimenten met menselijke vrijwilligers zijn echter niet ideaal voor dergelijke studies als gevolg van bio-ethiek en economische beperkingen. Als gevolg hiervan zijn diermodellen gebruikt om deze interacties in vivo te evalueren. Niettemin, diermodel studies zijn nog steeds beperkt door bio-ethiek overwegingen, naast de verschillende samenstellingen en diversiteit van microbiota bij dieren vs. mensen. Een alternatieve onderzoeksstrategie is het gebruik van batch fermentatie-experimenten die het mogelijk maken de interacties tussen endobiotica en gut microbiota in vitro te evalueren. Om deze strategie te evalueren, werden bifidobacteriële (BIF) exopolysacchariden (EPS) gebruikt als representatief xenobioticum. Vervolgens werden de interacties tussen BIF EPS en humane gut microbiota onderzocht met behulp van verschillende methoden zoals Thin-layer chromatografie (TLC), bacteriële compositorische analyse met 16S rRNA Gene High-throughput sequencing en gaschromatografie van korte-keten vetzuren (SCFAs). Hier gepresenteerd is een protocol om de interacties tussen endobiotica en menselijke gut microbiota met behulp van in vitro batch fermentatiesystemen te onderzoeken. Belangrijk is dat dit protocol ook kan worden aangepast om de algemene interacties tussen andere endobiotica en gut microbiota te onderzoeken.

De productie van mucoïde EPS kan worden waargenomen in B. longum culturen op pyg platen na anaerobe incubatie voor 72 h (Figuur 1a). Centrifugeren van cultuur resten, gevolgd door ethanol precipitatie en drogen, resulteerde in de inzameling van cellulose-achtige EPS (Figuur 1b). Gedroogde EPS en oplosbare zetmeel werden vervolgens gebruikt als koolstofbronnen voor fermentatie culturen. TLC werd gebruikt voor oligosaccharide scheiding en zuiverheid analy...

Hier beschreven is een protocol om de interacties tussen endobiotica en menselijke gut microbiota met behulp van in vitro batch fermentatiesystemen te onderzoeken.

Analyse van interacties tussen Endobiotica en humane gut microbiota met behulp van in-vitro Bad fermentatiesystemen

Human intestinal microorganisms have recently become an important target of research in promoting human health and preventing diseases. Consequently, ...

Ons protocol kan op grote schaal worden gebruikt voor hoge doorvoer en snelle screening van de interacties tussen endobiotica en menselijke darmmicrobiota. Lage kosten en het vermijden van interferentie-effecten van het metabolisme van de gastheer. Deze procedure heeft het potentieel om te worden gebruikt bij de diagnose.Los eerst BIF EPS en zetmeel individueel op in heet water op een magnetische agitator om zowel de concentratie van acht gram per liter te maken. Voeg in het geprepareerde basiscultuurmedium VI 100 milliliter van de BIF EPS-oplossing toe om cultuur VI BIF-oplossing te maken. Voeg 100 milliliter van de zetmeeloplossing toe om cultuur VI zetmeeloplossing te maken.Autoclave de twee media met koolstofbron, en het medium zonder koolstofbron als een controle, op 121 graden Celsius gedurende 15 minuten. Laat ze afkoelen tot kamertemperatuur en voeg hooimannen en cysteïne toe. Breng een submonster van vijf milliliter van elk medium naar kweekbuizen over.En bewaar in een anaerobe couveuse. Bewaar de resterende media op vier graden Celsius. Om menselijk fecal monster voor te bereiden, breng je een gram vers fecale monster over in 10 milliliter anaërobe PBS bij pH zeven in een glazen bekerglas.Gebruik dan een glazen staaf om het te roeren om een drijfmest te bereiken. Voeg in een anaerobe kamer 500 microliter van de gefilterde fecale drijfmest individueel toe aan de drie bereide fermentatiemedia. Dan, incubeer bij 37 graden Celsius.Verzamel na 24 uur en 48 uur twee milliliter gefermenteerde monsters in de anaerobe kamer. En dan buiten de kamer centrifugeren op 6000 keer G, gedurende drie minuten. Breng de supernatants voorzichtig over op nieuwe centrifugebuizen die worden gebruikt voor polysaccharidedegradatieanalyse en korte-keten vetzuurmetingen.Bewaar de centrifugatiepellets op 80 graden Celsius. Laad 0,2 microliter van de gefermenteerde supernatants op elke voorgecoate silica gel 60 TLC aluminium plaat en wervel om te verspreiden. Gebruik dan een föhn met hete lucht te drogen.Dompel het ene uiteinde van de bemonsterde platen onder in 20 milliliter mierenzuur:n-butanol:wateroplossing gedurende enkele minuten, totdat de elektroforese zich bijna tot het andere uiteinde uitstrekt. Neem vervolgens de platen met tangen, en droog met een föhn. Vervolgens weken de platen in de orcinol reagens voor twee minuten te verven.En droog weer. Breng de platen op 120 graden Celsius naar een bakoven om drie minuten te verwarmen. Neem vervolgens foto's van de plaat om de afbraak van EPS te evalueren door TLC-banden te meten.Om de effecten van EPS op de productie van SCFA te bestuderen, voeg een milliliter van de gefermenteerde supernatants toe aan twee milliliter centrifugebuizen en voeg 0,2 milliliter van 25 gewicht/volumecentidruk aan elk monster toe. Vortex om de oplossingen grondig te mengen. Centrifugeren de mengsels op 13.000 keer G gedurende 20 minuten.In de tussentijd, oplossingen voor te bereiden van 120 millimolar azijn, propionische, butyrische, isobutyrische, valeriische en isovalerische zuren in buizen. Voeg vervolgens een milliliter van elk bereid zuur toe aan een buis met 1,2 milliliter 25 gewicht/volumecenter metaphosportzuur. En laad ze in de monsterfles van het gaschromatografie-instrument als de standaard cocktails.Haal de buizen uit de centrifuge en breng de supernatants over op verse buizen. Gebruik een spuit uitgerust met 0,22 micron filter om de supernatants te filteren in nieuwe buizen voor gaschromatografie analyse. In deze studie werd de productie van mucoid EPS waargenomen in bifidobacterium longum culturen op PYG-platen, na anaerobe incubatie gedurende 72 uur.Centrifugatie van cultuurschaafwonden, gevolgd door ethanolneerslag en drogen, resulteerde in de inzameling van cellulose-achtige EPS. Uit TLC-analyse bleek dat de afbraaksnelheid van zetmeel door menselijke fecale microbiota sneller was dan die van BIF EPS. Principal Coordinate Analysis toont cultuur VI BIF, en cultuur VI zetmeel groepen, afzonderlijk van elkaar geclusterd, wat aangeeft dat EPS en zetmeel beschikbaarheid differentieel vorm menselijke fecale bacteriële gemeenschappen.Lineaire discriminant Analyse op effectgrootte toont de genera collinsella, coprococcus, parabacteroides, en rhodopseudomonas waren aanzienlijk overvloediger in de cultuur VI BIF monsters dan in de cultuur VI zetmeel monsters. Bovendien, GC metingen tonen SCFAs die werden gemeten aan de hand van fermentatie culturen opgenomen azijn, propionische, isobutyrische, butyrische, isovalerische, en valeriaanzuren. Na gisting gedurende 24 uur en 48 uur, vijf van de zes SCFA concentraties waren vergelijkbaar en niet statistisch verschillend tussen de cultuur VI BIF, cultuur VI zetmeel, en cultuur VI groepen.Echter, propriche zuurconcentraties waren aanzienlijk hoger in de cultuur VI BIF groep dan in de cultuur VI zetmeel groep, na 48 uur van fermentatie. Doe dit experiment onder anaërobe omstandigheden en breng de vaste monsters zo snel mogelijk over in een anaerobe incubator. Sommige TLC-reagentia zijn gevaarlijk.Je moet voorzichtig zijn om ze te gebruiken.

analysis-interactions-between-endobiotics-human-gut-microbiota-using

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Immunologie en Infectie

Source: Ahmadi, S., et al. An In Vitro Batch-culture Model to Estimate the Effects of Interventional Regimens on Human Fecal Microbiota. J. Vis. Exp. (2019).This video demonstrates a method for modeling gut microbial fermentation by incubating fecal samples with dietary fermentable fiber under anaerobic conditions to study metabolite production by gut microbiota.

In Vitro Batch-Culture Model to Mimic Colonic Fermentation by Human Gut Microbiota

Source: Hu, Y., et al. Analysis of Interactions between Endobiotics and Human Gut Microbiota Using In Vitro Bath Fermentation Systems. J. Vis. Exp. (2019)This video demonstrates the use of thin-layer chromatography (TLC) to assess the degradation of exopolysaccharides (EPS) by human fecal microbiota. EPS fragments in fermentation supernatants are separated based on size and polarity using TLC, then visualized as colored bands following carbohydrate-specific staining.

Performing Thin-Layer Chromatography to Assess Bacterial Exopolysaccharide Degradation

Source: Hu, Y. et.al., Analysis of Interactions between Endobiotics and Human Gut Microbiota Using In Vitro Bath Fermentation Systems. J. Vis. Exp. (2019)This video demonstrates the analysis of short-chain fatty acid production by human gut microbiota in response to exopolysaccharides. This highlights microbial fermentation products separation and quantification using gas chromatography. The results reveal that exopolysaccharides modulate microbial metabolites that influence host-pathogen...

Investigating the Human Gut Microbial Activity on Exopolysaccharides

In this video, we describe the methodology for setting up an ex vivo gut organ culture system to study the interactions between mouse intestinal tissue fragments and specific gut bacteria. The device consists of two pairs of input-output ports, the first connecting the intestinal tissue lumen and supplying the specific bacterial suspension into it, and the second continuously supplying media to the device's wells to maintain ex vivo tissue viability.

An Ex Vivo Gut Organ Culture System to Study Host-Microbiota Interactions

We beschrijven een in vitro protocol co-cultuur darm microbioom en darmvlokken voor een langere periode met een menselijke darm-on-a-chip microphysiological systeem.

Co-cultuur van de levens- Microbiome met Microengineered Human darmvlokken in een Gut-on-a-Chip microfluïdische apparaat

Gut host-microbe interacties werden geschat aan de hand van een nieuwe benadering van het combineren van een synthetische mondelinge Gemeenschap, in vitro gastro-intestinale spijsvertering en een model van het epitheel van de dunne darm. Presenteren we een methode die aangepast worden kan voor de beoordeling van de cel invasie van ziekteverwekkers en multispecifieke biofilms, of zelfs om te testen op het overlevingsvermogen van probiotische formuleringen.

Beoordelen van de levensvatbaarheid van een synthetische bacteriële Consortium op de In Vitro -Interface van het Gut-Host-microbe

Hier presenteren we een protocol voor het kweken van de darmflora van de dikke darm in vitro, met behulp van een reeks van bioreactoren die de fysiologische omstandigheden van de gastro-intestinale tractus simuleren.

Toepassing van geavanceerde In Vitro kweken van technologie om te bestuderen van de menselijke darmflora

Dit protocol beschrijft een in vitro batch cultuur fermentatiesysteem van menselijke fecale microbiota, met behulp van inuline (een bekende prebiotisch en een van de meest bestudeerde microbiota modulatoren) om het gebruik van dit systeem te demonstreren bij het inschatten van de effecten van specifieke interventies op fecale microbiota samenstelling en metabole activiteiten.

Een in vitro batch cultuur model om de effecten van Interventionele regimes op menselijke fecale microbiota te schatten

Dit artikel presenteert een unieke methode voor het analyseren van gastheer-microbioom interacties met behulp van een nieuw darmorgaancultuursysteem voor ex vivo experimenten.

Een darmorgaankweeksysteem voor het analyseren van host-microbiota-interacties

Dit protocol beschrijft de assemblage van mini-bioreactorarrays die moeten worden gebruikt voor continue stroomcultuur van complexe fecale gemeenschappen onder anaërobe omstandigheden. We bespreken ook de methoden voor assemblage, inoculatie en bemonstering van de reactoren voor verdere analyse.

Bioreactorassemblage voor continue cultuur van complexe fecale gemeenschappen

De Minibioreactor Array (MBRA) is een high-throughput, aanpasbaar continuous-flow cultuursysteem dat de teelt van complexe microbiële gemeenschappen mogelijk maakt, ter ondersteuning van parallelle experimenten om de dynamiek van het microbioom, therapeutische interacties en microbiële reacties op omgevingsfactoren te bestuderen.

Bijgewerkt protocol voor de assemblage en het gebruik van de Minibioreactor Array (MBRA)

Ontdek hoe je interacties tussen endobiotica en humane darmmicrobiota analyseert met behulp van in-vitro batchfermentatiesystemen. Deze methode biedt een kosteneffectief alternatief voor diagnostisch onderzoek.

Analyse van interacties tussen Endobiotica en humane gut microbiota met behulp van in-vitro Bad fermentatiesystemen

Meer video's verkennen