Name: Toepassing van optische coherentietomografie op een muismodel van retinopathie (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2022-01-12T14:30:00.000+00:00
Duration: 8 min 22 s
Description: Leer optische coherentietomografie (OCT) toepassen voor niet-invasieve diagnose van retinopathie bij muismodellen. Deze methode biedt hoge-resolutie beeldvorming en kwantitatieve metingen van retinale dikte en laesies.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Projectbron: Natural Science Foundation van de provincie Guangdong (2018A0303130306). De auteurs willen het Ophthalmic Research Laboratory, Joint Shantou International Eye Center van Shantou University en de Chinese University of Hong Kong bedanken voor financiering en materialen.

De operaties werden uitgevoerd naar aanleiding van de Verklaring over het gebruik van dieren in oogheelkundig en visieonderzoek van de Association for Research in Vision and Ophthalmology. Het experimentele ontwerp werd goedgekeurd door de institutionele commissie voor dierethiek (Medisch-ethische commissie van JSIEC, EC 20171213(4)-P01). Twee maanden oude C57BL/6J muizen en Vldlr knock-out muizen werden gebruikt in deze studie. Er waren 7 muizen in elke groep, die allemaal vrouwelijk waren en 20 g tot 24 g wogen.
1. Experimentele omstandigheden
<ol><li>Wijs de muizen toe aan twee groepen: een experimentele groep bestaande uit Vldlr knock-out muizen en een controlegroep bestaande uit C57BL/6J muizen.</li>
	<li>Voed de muizen conventioneel met voedsel en water.</li>
	<li>Voed de muizen op in het dierenlaboratorium onder stabiele omstandigheden van kamertemperatuur (22 °C), vochtigheid (50-60%), licht-donkercyclus (12 h-12 h) en kamerlichtintensiteit (350-400 lux).</li>
	<li>Bereid de experimentele apparatuur voor: optische coherentietomografie met confocale scanninglaser oftalmoscoop (cSLO) voor kleine dieren (figuur 1A).</li>
	<li>Bereid alle materialen voor die nodig zijn voor het experiment voor (figuur 1B) en weeg de muizen (figuur 1C).</li>
</ol>2. Informatiedossiers
<ol><li>Noteer de informatie: groep, code, geboortedatum, leeftijd, geslacht, gewicht en verdovingsdosering.</li>
</ol>3. Instrument opstarten en testen
<ol><li>Schakel de computer in en start de software op.</li>
	<li>Klik op de knop Testprogramma om het testprogramma te voltooien.</li>
	<li>Zet de thermostaat aan en verwarm deze voor op de temperatuur van 37 °C.</li>
	<li>Start de OCT-moduleprocedure na het testen van het programma.</li>
	<li>Maak een nieuw onderwerp aan en vul de muisinformatie in.</li>
	<li>Verwarm de elektrische deken voor en bedek deze met chirurgische handdoeken.</li>
</ol>4. Anesthesie
<ol><li>Gebruik gelyofiliseerd anestheticumpoeder met Tiletamine en Zolazepam om het verdovingsmengsel te bereiden. OPMERKING: Volg de aanbevelingen van de lokale commissie voor dierethiek voor de keuze, dosering en route van anesthesietoediening. Verdoof het dier met een verdovingsmiddel dat gedurende ten minste 1 uur immobiliteit en verlies van pijnwaarneming zal veroorzaken, waarna het dier snel herstelt. Dosering moet gebaseerd zijn op de duur van de experimenteertijd, het gewicht van het dier en andere factoren.</li>
	<li>Verdoof het dier met behulp van het bereide verdovingsmengsel. Zorg ervoor dat het dier warm blijft tijdens de hele procedure tot herstel.</li>
</ol>5. Toepassing van mydriatische druppels
<ol><li>Bereik handmatige bevestiging van de muis door het nekvel, laat de oogbol iets uitsteken en draai de muiskop met één oog naar boven gericht.</li>
	<li>Breng de mydriatische druppels aan om de pupillen te verwijden (figuur 2A).</li>
	<li>Controleer na 10 min op pupilverwijding.</li>
</ol>6. Plaatsing van de muis
<ol><li>Plaats een muis op een elektrisch dekenplatform.</li>
	<li>Bedek beide ogen met medische natriumhyaluronaatgel (figuur 2B).</li>
	<li>Schroef een 60 D dubbele bolvormige lens (vooraf ingestelde lens) op het cSLO-apparaat (figuur 1A-5, 6).</li>
	<li>Plaats een 100 D-contactlens op het hoornvlies van de muis met de holle zijde die de natriumhyaluronaatgel op het hoornvliesoppervlak raakt (figuur 2C, D en figuur 3A-II).</li>
	<li>Plaats de muis op het kleine, constante temperatuur dierenplatform en houd het oog 1-2 mm uit de buurt van de lens van het cSLO-apparaat (figuur 3A).</li>
	<li>Pas de hoek van de contactlens aan met een tang om de pupil in het midden van de lens te houden.</li>
	<li>Verfijn de aanpassingen aan het hoofd om het oog recht vooruit te laten kijken.</li>
</ol>7. Confocale Scanning Laser Oftalmoscoop (cSLO)
<ol><li>Klik op de oct-knop , kies de muismodule en start het cSLO-programma (figuur 4B).</li>
	<li>Selecteer de IR-modus (lichtbron: rood licht) en pas de parameter aan (bereik: 2047, figuur 4D).</li>
	<li>Selecteer het oog dat u wilt onderzoeken (rechteroog: figuur 4C-1; linkeroog: figuur 4C-2).</li>
	<li>Bedien de hendel en beweeg de vooraf ingestelde lens langzaam naar de contactlens.</li>
	<li>Pas de dioptriewaarde aan totdat de beeldvorming van de achterste pool duidelijk is (figuur 4E).</li>
	<li>Breng verdere aanpassingen aan om het beeld van de retinale achterste pool uit te lijnen en centreer deze op de oogzenuwkop.</li>
</ol>8. Optische coherentietomografie (LGO)
<ol><li>Start het OCT-programma (figuur 4G).</li>
	<li>Klik op de voortgangsbalk omhoog en omlaag totdat de OCT-afbeelding verschijnt (afbeelding 4H).</li>
	<li>Parameters aanpassen: Bereik Min (Figuur 4I) = 0-20, Bereik Max (Figuur 4J) = 40-60.</li>
	<li>Pas de vooraf ingestelde lensafstand en positierichting aan totdat een ideaal OCT-beeld is verkregen.</li>
	<li>Selecteer de scanpositie door de standaardregel in de cSLO (figuur 4M) te verplaatsen.</li>
	<li>Begin met scannen vanaf de oogzenuwkop.</li>
	<li>Verzamel afbeeldingen in dezelfde volgorde voor elk oog: horizontale lijn: oogzenuwkop → superieur → inferieur; verticale lijn: oogzenuwkop → nasale → temporale.</li>
	<li>Verzamel afbeeldingen uit vier richtingen.</li>
	<li>Klik op Gemiddelde om de cSLO- en OCT-afbeeldingssignalen te overlappen (figuur 4F en figuur 4O).</li>
	<li>Klik op de opnameknop om de SLO-OCT-afbeelding te verkrijgen (figuur 4P).</li>
	<li>Sla alle afbeeldingen op en exporteer ze (figuur 4Q, R).</li>
</ol>9. Het einde van het experiment (na het LGO-onderzoek)
<ol><li>Leg de muis op de elektrische deken om hem warm te houden totdat hij wakker wordt. OPMERKING: De muis moet worden gecontroleerd totdat hij weer voldoende bewustzijn heeft om sternale lighouding te behouden. Postoperatieve blootstelling aan fel licht moet worden geminimaliseerd.</li>
	<li>Verwijder de 100 D contactlens.</li>
	<li>Breng de levofloxacine ooggel aan om het hoornvlies te beschermen.</li>
	<li>Plaats de muis terug in de kooi nadat hij wakker is geworden. OPMERKING: Zorg ervoor dat de onderzochte muis niet wordt teruggebracht naar het gezelschap van andere muizen totdat deze volledig is hersteld.</li>
	<li>Schakel de software uit en schakel de computer uit.</li>
	<li>Reinig de 100 D contactlens met water; droog de lens.</li>
	<li>Reinig en desinfecteer de omgeving.</li>
</ol>10. Beeldanalyse
<ol><li>Vergelijk de OCT-beelden van Vldlr knock-out muizen met die van C57BL/6J muizen.</li>
	<li>Observeer meerdere posities: verticale en horizontale scans die door de optische papilla gaan; superieure, inferieure, nasale en temporale scans; en abnormale reflectieplaatsscans.</li>
	<li>Observeer de dikte, vorm, gelaagdheid en abnormale reflectielaesies van het netvlies in elk beeld, evenals de glasvochtinterface van het netvlies en het glasachtig lichaam.</li>
	<li>Noteer de locaties, kenmerken en aantallen laesies.</li>
</ol>11. Retinale stratificatie correctie
<ol><li>Klik op Load Examination (Bekijk de OCT-interface ) (figuur 5A).</li>
	<li>Roep de OCT-afbeeldingen van een muis op vanuit een pop-upvenster.</li>
	<li>Afbeeldingen selecteren: OCT-afbeeldingen scannen door de optische papilla, horizontaal of verticaal.</li>
	<li>Dubbelklik op de afbeelding in de mediacontainer om deze op het scherm weer te geven (afbeelding 5C).</li>
	<li>Klik op Laagdetectie om de automatische gelaagdheid op het netvlies te voltooien (figuur 5D).</li>
	<li>Selecteer de scheidslijnen aan beide zijden van de laag die zijn voorbereid voor analyse (figuur 6D-10).</li>
	<li>Selecteer een afzonderlijke scheidingslijn (figuur 6B-6) en klik op Laag bewerken (figuur 6A-1) om de lijn te activeren wanneer een rode cirkel verschijnt (figuur 6B-7).</li>
	<li>Pas de afstand (figuur 6A-4, bijvoorbeeld 50) en het limietbereik (figuur 6A-5, bijvoorbeeld 50) aan.</li>
	<li>Wijzig de deellijn door de rode cirkel te verplaatsen (vergelijk de groene scheidingslijn in figuur 6B en figuur 6C; Figuur 6C toont het gewijzigde resultaat).</li>
</ol>12. Retinale lamineerdikte
<ol><li>Klik op de knop Markering meten (Afbeelding 6D-9).</li>
	<li>Selecteer de scheidslijn van de te analyseren laag (selecteer bijvoorbeeld in de buitenste nucleaire laag de4e en5e deellijn in de lijst) om de grens van de laag op de OCT-afbeelding weer te geven (figuur 6D-10).</li>
	<li>Selecteer Verbinden met laag (afbeelding 6D-11) en Verbonden blijven tijdens beweging (figuur 6D-12).</li>
	<li>Selecteer het gebied om de resultaten weer te geven (de geselecteerde kolom is gekleurd, Figuur 6D-13).</li>
	<li>Klik op de positie die moet worden geanalyseerd op de OCT-afbeelding om de meetlijn te laten verschijnen (loodrecht op de horizontale as en consistent met de kleur van het resulterende gebied) (figuur 6D-14).</li>
	<li>Klik op de volgende kolom voor de volgende meting en onthul de vorige gegevens (figuur 6E-15).</li>
	<li>Lees de Vert-waarde (dikte van de gemeten positie) in de rij Lengte in μm (weefsel) (figuur 6E, rode rechthoek).</li>
	<li>Klik op Delete Marker (Figuur 6E-16) en New Marker (Figuur 6E-17) om opnieuw te testen, zodat de resultaten de oorspronkelijke gegevens dekken (als hermeting nodig is).</li>
	<li>Druk op Scr afdrukken op het toetsenbord om schermafbeeldingen op te slaan of klik op Onderzoek opslaan om rechtstreeks op te slaan (Figuur 5H).</li>
	<li>Voer de gegevens in een spreadsheet of statistische software in voor statistische analyse.</li>
</ol>13. Meting van de volledige dikte van het netvlies
<ol><li>Selecteer regel 1 (ILM, binnenbegrenzingsmembraan, figuur 7B) en lijn 7 (OS-RPE, OS: buitenste fotoreceptorsegmenten; RPE: retinale pigmentepitheellaag, figuur 7C) in de lijst in de rechterbovenhoek. OPMERKING: De volledige retinale dikte betekent de dikte van de retinale neurepitheliumlaag, het netvlies tussen ILM en OS-RPE op OCT).</li>
	<li>Meet de retinale dikte aan beide zijden van de optische papilla met een specifiek interval.<ol><li>Bijvoorbeeld: van het verschijnen van de retinale structuur aan de rand van de optische papilla, meet 4 waarden met een afstand van 200 μm van de horizontale liniaal (figuur 7G, H).</li>
	</ol></li>
	<li>Noteer alle gemeten waarden in een spreadsheet.</li>
	<li>Gebruik meerdere t-tests (één per rij) om de gemeten waarden van elke overeenkomstige positie in beide groepen te vergelijken.</li>
</ol>

<ol><li>Frombach, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Serine+protease-mediated+cutaneous+inflammation%3A+characterization+of+an+ex+vivo+skin+model+for+the+assessment+of+dexamethasone-loaded+core+multishell-nanocarriers%5BTitle%5D)+AND+%22Pharmaceutics%22%5BJournal%5D)">Serine protease-mediated cutaneous inflammation: characterization of an ex vivo skin model for the assessment of dexamethasone-loaded core multishell-nanocarriers.</a> Pharmaceutics. 12 (9), 862(2020).</li>
<li>Osiac, E., Săftoiu, A., Gheonea, D. I., Mandrila, I., Angelescu, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optical+coherence+tomography+and+Doppler+optical+coherence+tomography+in+the+gastrointestinal+tract%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">Optical coherence tomography and Doppler optical coherence tomography in the gastrointestinal tract.</a> Journal of Gastroenterology. 17 (1), 15-20 (2011).</li>
<li>Xiong, Y. Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Diagnostic+accuracy+of+optical+coherence+tomography+for+bladder+cancer%3A+A+systematic+review+and+meta-analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Photodiagnosis+and+Photodynamic+Therapy%22%5BJournal%5D)">Diagnostic accuracy of optical coherence tomography for bladder cancer: A systematic review and meta-analysis.</a> Photodiagnosis and Photodynamic Therapy. 27, 298-304 (2019).</li>
<li>Andrews, P. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optical+coherence+tomography+of+the+aging+kidney%5BTitle%5D)+AND+%22%26+Clinical+Transplantation%22%5BJournal%5D)">Optical coherence tomography of the aging kidney.</a> & Clinical Transplantation. 14 (6), 617-622 (2016).</li>
<li>Terashima, M., Kaneda, H., Suzuki, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+optical+coherence+tomography+in+coronary+intervention%5BTitle%5D)+AND+%22The+Korean+Journal+of+Internal+Medicine%22%5BJournal%5D)">The role of optical coherence tomography in coronary intervention.</a> The Korean Journal of Internal Medicine. 27 (1), 1-12 (2012).</li>
<li>Avital, Y., Madar, A., Arnon, S., Koifman, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+of+coronary+calcifications+in+optical+coherence+tomography+imaging+using+deep+learning%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">Identification of coronary calcifications in optical coherence tomography imaging using deep learning.</a> Scientific Reports. 11 (1), 11269(2021).</li>
<li>Huang, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optical+coherence+tomography%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Optical coherence tomography.</a> Science. 254 (5035), 1178-1181 (1991).</li>
<li>Tsai, T. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optical+coherence+tomography+in+gastroenterology%3A+a+review+and+future+outlook%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Biomedical+Optics%22%5BJournal%5D)">Optical coherence tomography in gastroenterology: a review and future outlook.</a> Journal of Biomedical Optics. 22 (12), 1-17 (2017).</li>
<li>Chen, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Relationship+between+optical+intensity+on+optical+coherence+tomography+and+retinal+ischemia+in+branch+retinal+vein+occlusion%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">Relationship between optical intensity on optical coherence tomography and retinal ischemia in branch retinal vein occlusion.</a> Scientific Reports. 8 (1), 9626(2018).</li>
<li>Chen, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+analysis+of+retinal+layer+optical+intensities+on+three-dimensional+optical+coherence+tomography%5BTitle%5D)+AND+%22Investigative+Opthalmology+%26+Visual+Science%22%5BJournal%5D)">Quantitative analysis of retinal layer optical intensities on three-dimensional optical coherence tomography.</a> Investigative Opthalmology & Visual Science. 54 (10), 6846-6851 (2013).</li>
<li>Cruz-Herranz, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Monitoring+retinal+changes+with+optical+coherence+tomography+predicts+neuronal+loss+in+experimental+autoimmune+encephalomyelitis%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroinflammation%22%5BJournal%5D)">Monitoring retinal changes with optical coherence tomography predicts neuronal loss in experimental autoimmune encephalomyelitis.</a> Journal of Neuroinflammation. 16 (1), 203(2019).</li>
<li>Podoleanu, A. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optical+coherence+tomography%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Microscopy%22%5BJournal%5D)">Optical coherence tomography.</a> Journal of Microscopy. 247 (3), 209-219 (2012).</li>
<li>Augustin, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optical+coherence+tomography+findings+in+the+retinas+of+SOD1+knockout+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Translational+Vision+Science+%26+Technology%22%5BJournal%5D)">Optical coherence tomography findings in the retinas of SOD1 knockout mice.</a> Translational Vision Science & Technology. 9 (4), 15(2020).</li>
<li>Berger, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spectral-domain+optical+coherence+tomography+of+the+rodent+eye%3A+highlighting+layers+of+the+outer+retina+using+signal+averaging+and+comparison+with+histology%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Spectral-domain optical coherence tomography of the rodent eye: highlighting layers of the outer retina using signal averaging and comparison with histology.</a> PLoS One. 9 (5), 96494(2014).</li>
<li>Burns, M. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((New+developments+in+murine+imaging+for+assessing+photoreceptor+degeneration+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Advances+in+Experimental+Medicine+%26+Biology%22%5BJournal%5D)">New developments in murine imaging for assessing photoreceptor degeneration in vivo.</a> Advances in Experimental Medicine & Biology. 854, 269-275 (2016).</li>
<li>Jagodzinska, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optical+coherence+tomography%3A+imaging+mouse+retinal+ganglion+cells+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%3A+Jove%22%5BJournal%5D)">Optical coherence tomography: imaging mouse retinal ganglion cells in vivo.</a> Journal of Visualized Experiments: Jove. (127), e55865(2017).</li>
<li>Kocaoglu, O. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Simultaneous+fundus+imaging+and+optical+coherence+tomography+of+the+mouse+retina%5BTitle%5D)+AND+%22Investigative+Opthalmology+%26+Visual+Science%22%5BJournal%5D)">Simultaneous fundus imaging and optical coherence tomography of the mouse retina.</a> Investigative Opthalmology & Visual Science. 48 (3), 1283-1289 (2007).</li>
<li>Tode, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Thermal+stimulation+of+the+retina+reduces+Bruch%27s+membrane+thickness+in+age+related+macular+degeneration+mouse+models%5BTitle%5D)+AND+%22Translational+Vision+Science+%26+Technology%22%5BJournal%5D)">Thermal stimulation of the retina reduces Bruch's membrane thickness in age related macular degeneration mouse models.</a> Translational Vision Science & Technology. 7 (3), 2(2018).</li>
<li>Wang, R., Jiang, C., Ma, J., Young, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Monitoring+morphological+changes+in+the+retina+of+rhodopsin-%2F-+mice+with+spectral+domain+optical+coherence+tomography%5BTitle%5D)+AND+%22Investigative+Ophthalmology+%26+Visual+Science%22%5BJournal%5D)">Monitoring morphological changes in the retina of rhodopsin-/- mice with spectral domain optical coherence tomography.</a> Investigative Ophthalmology & Visual Science. 53 (7), 3967-3972 (2012).</li>
<li>Xie, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+spectral-domain+optical+coherence+tomographic+analysis+of+Rdh5-%2F-+mice+retina%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+ONE%22%5BJournal%5D)">A spectral-domain optical coherence tomographic analysis of Rdh5-/- mice retina.</a> PLoS ONE. 15 (4), 0231220(2020).</li>
<li>Li, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Noninvasive+imaging+by+optical+coherence+tomography+to+monitor+retinal+degeneration+in+the+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Investigative+Ophthalmology+%26+Visual+Science%22%5BJournal%5D)">Noninvasive imaging by optical coherence tomography to monitor retinal degeneration in the mouse.</a> Investigative Ophthalmology & Visual Science. 42 (12), 2981-2989 (2001).</li>
<li>Horio, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Progressive+change+of+optical+coherence+tomography+scans+in+retinal+degeneration+slow+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Archives+of+Ophthalmology%22%5BJournal%5D)">Progressive change of optical coherence tomography scans in retinal degeneration slow mice.</a> Archives of Ophthalmology. 119 (9), 1329-1332 (2001).</li>
<li>Hu, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Expression+of+VLDLR+in+the+retina+and+evolution+of+subretinal+neovascularization+in+the+knockout+mouse+model%27s+retinal+angiomatous+proliferation%5BTitle%5D)+AND+%22Investigative+Opthalmology+%26+Visual+Science%22%5BJournal%5D)">Expression of VLDLR in the retina and evolution of subretinal neovascularization in the knockout mouse model's retinal angiomatous proliferation.</a> Investigative Opthalmology & Visual Science. 49 (1), 407-415 (2008).</li>
<li>Wyne, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Expression+of+the+VLDL+receptor+in+endothelial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Arteriosclerosis%2C+Thrombosis%2C+and+Vascular+Biology%22%5BJournal%5D)">Expression of the VLDL receptor in endothelial cells.</a> Arteriosclerosis, Thrombosis, and Vascular Biology. 16 (3), 407-415 (1996).</li>
<li>Augustin, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+characterization+of+spontaneous+retinal+neovascularization+in+the+mouse+eye+by+multifunctional+optical+coherence+tomography%5BTitle%5D)+AND+%22Investigative+Opthalmology+%26+Visual+Science%22%5BJournal%5D)">In vivo characterization of spontaneous retinal neovascularization in the mouse eye by multifunctional optical coherence tomography.</a> Investigative Opthalmology & Visual Science. 59 (5), 2054-2068 (2018).</li>
<li>Fang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fundus+autofluorescence%2C+spectral-domain+optical+coherence+tomography%2C+and+histology+correlations+in+a+Stargardt+disease+mouse+model%5BTitle%5D)+AND+%22The+FASEB+Journal%22%5BJournal%5D)">Fundus autofluorescence, spectral-domain optical coherence tomography, and histology correlations in a Stargardt disease mouse model.</a> The FASEB Journal. 34 (3), 3693-3714 (2020).</li>
</ol>

De auteurs verklaren geen potentieel belangenconflict.

In deze studie werd OCT-beeldvorming met behulp van een retinaal beeldvormingssysteem voor kleine dieren toegepast om retinale veranderingen te evalueren bij Vldlr knock-out muizen, die onvolledige posterieure glasvochtloslating, subretinale neovascularisatie en dunner wordende retinale dikte vertonen. OCT is een niet-invasieve beeldvormingsmethode om de toestand van het netvlies in vivo te onderzoeken. De meeste OCT-apparaten zijn ontworpen voor menselijk oogonderzoek. De grootte van de hardware-appara...

Optische coherentietomografie (OCT) is een beeldvormingstechniek die in vivo hoge resolutie en crosssectieve beeldvorming kan bieden voor weefsel 1,2,3,4,5,6,7,8, vooral voor het niet-invasieve onderzoek in het netvlies 9,10,11,12 . Het kan ook worden gebruikt om enkele belangrijke biomarkers te kwantificeren, zoals retinale dikte en retinale zenuwvezellaagdikte. Het principe van OCT is optische coherentiereflectometrie, waarbij crosssectionale weefselinformatie wordt verkregen uit de samenhang van licht dat door een monster wordt gereflecteerd en via een computersysteem in een grafische of digitale vorm wordt omgezet7. OCT wordt veel gebruikt in oogheelkundige klinieken als een essentieel hulpmiddel voor diagnose, follow-up en management voor patiënten met retinale aandoeningen. Het kan ook inzicht geven in de pathogenese van netvliesaandoeningen.
Naast klinische toepassingen is OCT ook gebruikt in dierstudies. Hoewel pathologie de gouden standaard is voor morfologische karakterisering, heeft OCT het voordeel van niet-invasieve in vivo beeldvorming en longitudinale follow-up. Bovendien is aangetoond dat OCT goed gecorreleerd is met histopathologie in retinopathie diermodellen 11,13,14,15,16,17,18,19,20. De muis is het meest gebruikte dier in biomedische studies. De kleine oogbollen vormen echter een technische uitdaging voor het uitvoeren van OCT-beeldvorming bij muizen.
Vergeleken met de OCT die voor het eerst werd gebruikt voor retinale beeldvorming bij muizen 21,22, is OCT bij kleine dieren nu geoptimaliseerd met betrekking tot hardware- en softwaresystemen. Oct vermindert bijvoorbeeld, in combinatie met de tracker, de signaal-ruisverhouding aanzienlijk; Oct-softwaresysteemupgrades maken het mogelijk om automatisch meer retinale lagen te detecteren; en de geïntegreerde DLP-beamer helpt de bewegingsartefacten te verminderen.
Very-low-density lipoprotein receptor (Vldlr) is een transmembraaneiwit in endotheelcellen. Het wordt uitgedrukt op retinale vasculaire endotheelcellen, retinale pigmentepitheelcellen en rond het buitenste beperkende membraan23,24. Subretinale neovascularisatie is het fenotype van Vldlr knock-out muizen23. Daarom worden Vldlr knock-out muizen gebruikt om de pathogenese en potentiële therapie van subretinale neovascularisatie te onderzoeken. Dit artikel demonstreert de toepassing van OCT-beeldvorming om retinale laesies te detecteren bij Vldlr knock-out muizen, in de hoop een technische referentie te bieden voor retinopathie-onderzoek in modellen met kleine dieren.

<table><tbody><tr><td>100-Dpt contact lens</td><td>Volk Optical,Inc, Mentor, OH</td><td></td><td>Accessoire behorend bij de RETImap</td></tr><tr><td>Double aspheric 60-Dpt glass lens</td><td>Volk Optical,Inc, Mentor, OH</td><td></td><td>Accessoire behorend bij de RETImap</td></tr><tr><td>Electric heating blanket</td><td>POPOCOLA</td><td>CW-DRT-01</td><td>50 x 35 cm</td></tr><tr><td>Injection syringe (1 mL)</td><td>Kaile</td><td></td><td>0.45 x 16RWLB</td></tr><tr><td>Levofloxacin Hydrochloride Eye Gel</td><td>EBE PHARMACEUTICAL Co.LTD</td><td></td><td>5 g: 0,015 g</td></tr><tr><td>Medical sodium hyaluronate gel</td><td>Alcon</td><td>16H01E</td><td></td></tr><tr><td>Microliter syringes</td><td>Shanghai high pigeon industry and trade co., LTD</td><td>Q31/0113000236C001-2017</td><td>50 &micro;L</td></tr><tr><td>Povidone iodine solution</td><td>Guangdong medihealth pharmaceutical Co.,LTD</td><td></td><td>100 mL</td></tr><tr><td>RETImap</td><td>ROLAND CONSULT</td><td>19-99_50-2.1_1.2E</td><td>cSLO/ERG/VEP/FA/OCT/GFP</td></tr><tr><td>Small animal ear studs</td><td>OSMO POCKET OT110</td><td>INS1005-1S</td><td></td></tr><tr><td>Tropicamide Phenylephrine Eye Drops</td><td>Santen Pharmaceutical Co.,LTD</td><td></td><td>5 mg/mL</td></tr><tr><td>Xylazin</td><td>Sigma</td><td>X1251-5G</td><td>5 g</td></tr><tr><td>Zoletil 50</td><td>Virbac.S.A</td><td>7FRPA</td><td>Tiletamine 125 mg + Zolazepam 125 mg</td></tr></tbody></table>

toepassing van optische coherentietomografie op een muismodel van retinopathie

Application of Optical Coherence Tomography to a Mouse Model of Retinopathy

Optische coherentietomografie (OCT) biedt een niet-invasieve methode voor de diagnose van retinopathie. De OCT-machine kan retinale crosssectiebeelden vastleggen waaruit de retinale dikte kan worden berekend. Hoewel OCT veel wordt gebruikt in de klinische praktijk, is de toepassing ervan in fundamenteel onderzoek niet zo gangbaar, vooral bij kleine dieren zoals muizen. Vanwege de kleine omvang van hun oogbollen is het een uitdaging om fundusbeeldvormingsonderzoeken uit te voeren bij muizen. Daarom is een gespecialiseerd retinaal beeldvormingssysteem vereist om OCT-beeldvorming bij kleine dieren mogelijk te maken. Dit artikel demonstreert een specifiek systeem voor kleine dieren voor LGO-onderzoeksprocedures en een gedetailleerde methode voor beeldanalyse. De resultaten van retinaal OCT-onderzoek van zeer low-density lipoproteïne receptor (Vldlr) knock-out muizen en C57BL / 6J muizen worden gepresenteerd. De OCT-beelden van C57BL / 6J-muizen toonden retinale lagen, terwijl die van Vldlr knock-out muizen subretinale neovascularisatie en retinale verdunning vertoonden. Kortom, OCT-onderzoek zou de niet-invasieve detectie en meting van retinopathie in muismodellen kunnen vergemakkelijken.

Dankzij de hoge resolutie scans van OCT kunnen de lagen van het netvlies van de muis worden waargenomen en kunnen abnormale reflecties en hun exacte locaties worden geïdentificeerd. De retinale OCT-beelden van Vldlr knock-out muizen en C57BL/6J muizen werden vergeleken in deze studie. De OCT-beelden van alle C57BL/6J-muizen toonden verschillende retinale lagen met verschillende reflectiviteit en de afbakening was duidelijk (figuur 8D). Daarentegen vertoonden alle Vldlr knoc...

Hier beschrijven we een in vivo beeldvormingstechniek met behulp van optische coherentietomografie om de diagnose en kwantitatieve meting van retinopathie bij muizen te vergemakkelijken.

Toepassing van optische coherentietomografie op een muismodel van retinopathie

Optical coherence tomography (OCT) offers a noninvasive method for the diagnosis of retinopathy. The OCT machine can capture retinal crosssectional images ...

Optische coherentietomografie wordt veel gebruikt bij de klinische diagnose van verschillende retinale ziekten, maar het is nog steeds een uitdaging om toe te passen in muismodellen. Dit protocol beschrijft hoe de OCT-techniek bij dieren moet worden beheerd. Deze technologie kan worden toegepast op dieren met verschillende oogbolgroottes.Het maakt niet-invasieve, hoge resoluties en real-time retinale cross-sectionele beeldvorming mogelijk, samen met kwantitatieve metingen van retinale dikte. OCT helpt bij de diagnose van retinopathie door de laesiekenmerken te identificeren, zoals locatie, bereik, vorm en grootte van de laesies, evenals alle vermoedelijke retinale afwijkingen zoals retinale neovascularisatie. Dit protocol is van toepassing op dierstudies of fundusziekten, waaronder en netvliesaandoeningen.Voordat u de procedure start, moet u voorbereid zijn en het protocol stap voor stap volgen. Voer het experiment uit wanneer het dier is verdoofd. Men moet in staat zijn om OCT-afbeeldingen van goede kwaliteit te verkrijgen na enige oefening.Schakel om te beginnen de computer in en start de software op. Klik op de knop testprogramma om het testprogramma te voltooien. Zet vervolgens de thermostaat aan en verwarm deze voor op 37 graden Celsius.Start na het testen van het programma de OCT-moduleprocedure. Maak een nieuw onderwerp aan en vul de muisinformatie in. Verwarm vervolgens de elektrische deken voor en bedek deze met chirurgische handdoeken.Plaats de verdoofde muis op het elektrische dekenplatform en bedek beide ogen onmiddellijk met medische natriumhyaluronaatgel. Plaats vervolgens een 100D-contactlens op het hoornvlies van de muis met de holle kant die de natriumhyaluronaatgel op het hoornvliesoppervlak raakt. Plaats de muis vervolgens op het kleine, constante temperatuur dierlijke platform van het cSLO-apparaat.Pas de hoek van de contactlens aan met een tang om de pupil in het midden van de lens te houden. Verfijn de aanpassingen aan het hoofd om het oog recht vooruit te laten kijken. Klik op de knop OCT, kies de muismodule en start het cSLO-programma.Gebruik vervolgens de bedieningshendel om de vooraf ingestelde lens langzaam naar de contactlens te bewegen. Breng verdere aanpassingen aan om het beeld van de voorste-achterste pool uit te lijnen en centreer deze op de oogzenuwkop. Start vervolgens het OCT-programma en klik op de voortgangsbalk omhoog en omlaag totdat de OCT-afbeelding verschijnt.Pas het minimumbereik aan tussen 0 en 20 en het maximale bereik tussen 40 en 60. Pas vervolgens de vooraf ingestelde lensafstand en positierichting aan totdat een ideaal OCT-beeld is verkregen. Selecteer de scanpositie door de standaardregel in de cSLO te verplaatsen.Klik vervolgens op gemiddelde om het cSLO- en OCT-afbeeldingssignaal te bedekken en klik op de opnameknop om de SLO OCT-afbeelding te verkrijgen. Verwijder na het experiment de 100D-contactlens en breng de levofloxacine-ooggel aan om het hoornvlies te beschermen. Voor retinale stratificatiecorrectie klikt u op belastingsonderzoek op de OCT-interface en roept u de OCT-afbeeldingen op vanuit een pop-upvenster.Dubbelklik vervolgens op de afbeelding in de mediacontainer om deze op het scherm weer te geven. Klik vervolgens op laagdetectie om automatische gelaagdheid op het netvlies te voltooien. Nadat u de scheidingslijn aan beide zijden van de laag hebt geselecteerd die is voorbereid voor analyse, klikt u op Laag bewerken om de afstand en het limietbereik aan te passen.Wijzig vervolgens de lijn door de rode cirkel te verplaatsen. Als u de dikte van het retinale lamineren wilt meten, klikt u op de knop metenmarkering en selecteert u de deellijn van de laag die moet worden geanalyseerd om de grens van de laag op de OCT-afbeelding weer te geven. Selecteer vervolgens Verbinden met laag en blijf onderweg verbonden.Selecteer vervolgens het gebied om de resultaten weer te geven en klik op de positie die moet worden geanalyseerd op de OCT-afbeelding om de meetlijn te laten verschijnen. Klik op de volgende kolom voor volgende metingen en om de vorige gegevens weer te geven. Als u de volledige dikte van het netvlies wilt meten, selecteert u lijn één en regel zeven in de lijst in de rechterbovenhoek.Meet vervolgens, vanaf het verschijnen van de retinale structuur aan de rand van de optische papilla, vier waarden met intervallen van 200 micrometer op de horizontale liniaal. OCT-beelden van C57BL/6-muizen toonden verschillende retinale lagen met duidelijke afbakening. Vldlr knock-out muizen daarentegen vertoonden abnormale hyperreflectieve laesies.De OCT-beelden toonden enkele middelste reflecterende banden op de retinale oppervlakken van de Vldlr knock-out muizen. Deze banden hechtten zich aan het retinale vat en waren consistent met de OCT-kenmerken van onvolledig glasvochtloslating. Eén hyperreflecterende laesie verscheen op de subretinale ruimte en verspreidde zich naar de buitenste nucleaire laag, maar brak niet door de buitenste plexiforme laag.Het OCT-uiterlijk van deze laesie was consistent met pathologische bevindingen. De pathologische sectie toonde aan dat neovascularisatie door de retinale pigmentepitheellaag, fotoreceptor binnen-buitenste segmenten en het externe beperkende membraan brak, waardoor de buitenste nucleaire laag werd binnengedrongen, maar niet de buitenste plexiforme laag. Een andere band van hyperreflectieve laesie, gelegen in de subretinale ruimte, betrof niet de buitenste nucleaire laag.In overeenstemming met pathologische bevindingen brak deze subretinale neovascularisatie niet door het externe beperkende membraan. Het vergelijken van de retinale dikte van het rechteroog in de temporale, nasale, superieure en inferieure richtingen van de achterste polaire tussen de twee groepen onthulde dat de retinale dikte van Vldlr knock-out muizen significant lager was dan die van de C57BL / 6J-muizen. Plaats bij het uitvoeren van het protocol een 100D-contactlens op het hoornvlies en pas vervolgens de beeldpositie aan.Selecteer de scanlocatie en leg de afbeelding over elkaar voordat u gaat fotograferen. Volgens deze procedure is anterieur segment OCT haalbaar, waarbij de afstand tussen de vooraf ingestelde lens en het hoornvlies moet worden gewijzigd. Het kan het hoornvlies, de voorste kamer, de iris, het ciliaire lichaam en de lens laten zien.Deze techniek biedt een belangrijk hulpmiddel voor retinopathieonderzoek in kleine diermodellen, waardoor niet-invasieve detectie en meting van retinopathie in fundamenteel onderzoek wordt bevorderd.

application-optical-coherence-tomography-to-mouse-model

Research

JoVE Journal

Medicine

Geneeskunde

This video demonstrates an in vivo imaging technique for detecting and quantifying eye inflammation in a mouse model of post-infectious uveitis. The technique, known as optical coherence tomography (OCT), generates high-resolution cross-sectional images of the eye for assessing disease progression.

Optical Coherence Tomography Imaging for Assessing Uveitis in a Mouse Model

Source: Jagodzinska, J., et. al.,  Optical Coherence Tomography: Imaging Mouse Retinal Ganglion Cells In Vivo. J. Vis. Exp. (2017)  In this video, we demonstrate the use of spectral-domain optical coherence tomography (SD-OCT) to image retinal layers and assess structural changes in a genetically modified mouse model with optic neuropathy.

In Vivo Imaging of the Mouse Retina Using Optical Coherence Tomography

Dit manuscript wordt een protocol voor de beeldvorming in vivo van het netvlies van de muis met hoge resolutie spectrale domein optische coherentie tomografie (SD-OCT) beschreven. Het richt zich op netvlies peesknoopcellen (regering van Cambodja) in de peripapillary regio, met verschillende scannen en kwantificeren van de aanpak beschreven.

Optische coherentie tomografie: Beeldvorming muis retinale Ganglion cellen In Vivo

Hier tonen we een nieuwe benadering voor het gebruik van hoge resolutie spectrale domein optische coherentie tomografie (HR-SD-OCT) helpen levering van gen-therapie-agenten in de subretinal ruimte, beoordelen van haar areal dekking en karakteriseren fotoreceptor vitaliteit.

Met resolutie muis optische coherentie tomografie steun intraoculaire injectie in het netvlies gentherapie onderzoek

Dit protocol beschrijft hoe hoge resolutie beeldvormende technieken zoals spectrale domein optische coherentie tomografie en scannen van laser ophthalmoscopy kan worden gebruikt in kleine knaagdieren, met behulp van een oogheelkundige imaging platform systeem, om informatie te verkrijgen over netvlies dikte en microglial cel distributie, respectievelijk.

In Vivo Beeldvorming van Cx3cr1gfp/gfp Reporter muizen met spectrale domein optische coherentie tomografie en scannen Laser Ophthalmoscopy

Een gedetailleerd protocol voor de beoordeling van structurele en visuele uitlezingen bij knaagdieren door optische coherentie tomografie en optokinetic reactie wordt gepresenteerd. De resultaten bieden waardevolle inzichten voor oogcontrole, alsmede neurologische onderzoek.

Met behulp van optische coherentie tomografie en Optokinetic reactie als structurele en functionele visuele systeem uitlezingen in muizen en ratten

Hier beschrijven we het gebruik van spectrale optische coherentietomografie (SD-OCT) om retinale en oculaire structuren in vivo te visualiseren in modellen van retinale degeneratie, glaucoom, diabetische retinopathie en bijziendheid.

In vivo structurele beoordelingen van oogziekten in knaagdiermodellen met behulp van optische coherentietomografie

Hier beschrijven we een muismodel van retinale ischemie door voorbijgaande bilaterale gemeenschappelijke halsslagader occlusie met behulp van eenvoudige hechtingen en een klem. Dit model kan nuttig zijn voor het begrijpen van de pathologische mechanismen van retinale ischemie veroorzaakt door cardiovasculaire afwijkingen.

Een Murine-model van ischemisch netvliesletsel veroorzaakt door voorbijgaande bilaterale gemeenschappelijke halsslagader Occlusie

Hier beschrijven we een geoptimaliseerd protocol voor retinale ader occlusie met behulp van rose bengal en een lasergeleid retinaal beeldvormingscoopsysteem met aanbevelingen om de reproduceerbaarheid ervan in genetisch gemodificeerde stammen te maximaliseren.

Optimalisatie van het Retinal Vein Occlusion Mouse Model om variabiliteit te beperken

Het huidige protocol schetst de stappen voor het in vivo uitlijnen van optische coherentietomografie-vezelgrafiebeelden (vis-OCTF) in vivo met ex vivo confocale beelden van hetzelfde netvlies van muizen met het oog op het verifiëren van de waargenomen morfologie van de axonbundel van retinale ganglioncellen in de in vivo beelden.

Uitlijning van optische coherentietomografievezelgrammen in zichtbaar licht met confocale beelden van hetzelfde netvlies van de muis

Leer optische coherentietomografie (OCT) toepassen voor niet-invasieve diagnose van retinopathie bij muismodellen. Deze methode biedt hoge-resolutie beeldvorming en kwantitatieve metingen van retinale dikte en laesies.

Toepassing van optische coherentietomografie op een muismodel van retinopathie

Meer video's verkennen