Vaststelling en karakterisering van van patiënten afgeleide maagorganoïden uit biopsieën van goedaardig maaglichaam en antraal epitheel
January 26th, 2024
Organoïden die afkomstig zijn van maagpatiënten worden steeds vaker gebruikt in onderzoek, maar formele protocollen voor het genereren van menselijke maagorganoïden uit eencellige digesten met gestandaardiseerde zaaidichtheid ontbreken. Dit protocol presenteert een gedetailleerde methode voor het betrouwbaar maken van maagorganoïden uit biopsieweefsel dat is verkregen tijdens de bovenste endoscopie.
Ons onderzoek richt zich op erfelijke oorzaken van maagkanker. In het bijzonder zijn we geïnteresseerd in erfelijke diffuse maagkanker als gevolg van ziekteverwekkende varianten in het CDH1- of CTNNA1-gen. We onderzoeken ook de rol van BRCA1 en BRCA2 in het risico op maagkanker en carcinogenese.
Organoïden worden steeds vaker gebruikt in verschillende onderzoeksdomeinen en gastro-enterologie is daarop geen uitzondering, dus hiermee komt de behoefte aan standaardisatie van deze technieken om deze organoïden te genereren, in het bijzonder van patiënten afgeleide maagorganoïden. Ons protocol biedt een stapsgewijze methode om op betrouwbare wijze maagorganoïden van patiënten te genereren uit biopsieën van zowel de antrale als de lichaamsdelen van de maag. In het bijzonder gebruiken we een single-cell digest-benadering om gestandaardiseerde seeding van cellen mogelijk te maken in een poging om betrouwbare vergelijkingen te maken tussen organoïden die zijn gegenereerd door verschillende patiënten.
Onze bevindingen tonen aan dat in vergelijking met van patiënten afgeleide maagorganoïden uit het lichaamsgebied van de maag, die uit het antrale gebied in de loop van 20 dagen na het eerste zaaien talrijker en groter worden. Met deze bevindingen moet rekening worden gehouden door onderzoekers die maagorganoïden willen gebruiken die zijn afgeleid van verschillende delen van de maag.
Overzicht
Dit onderzoek onderzoekt de erfelijke oorzaken van maagkanker, met een focus op varianten in de CDH1 en CTNNA1 genen. De studie presenteert een betrouwbaar protocol voor het genereren van patiënt-afgeleide maagorganoïden uit biopsieweefsels verkregen tijdens een bovenendoscopie, waarbij verschillen in groeisnelheden tussen organoïden afkomstig uit de antrale en lichaamsregio's van de maag worden aangetoond.
Belangrijkste Onderzoekscomponenten
Onderzoeksgebied
- Erfelijke oorzaken van maagkanker
- Generatie van maagorganoïden
- Standaardisatie van biologische technieken
Achtergrond
- Erfelijke diffuse maagkanker en genetische varianten
- Gebruik van organoïden in gastro-enterologisch onderzoek
- Gestandaardiseerde protocollen voor de ontwikkeling van maagorganoïden
Gebruikte Methoden
- Isolatie van enkele cellen uit maagweefselbiopsies
- Patiënt-afgeleide maagorganoïden als het biologische model
- Celdigestie en uitzaaiingsprotocollen in cultuur
Belangrijkste Resultaten
- Organoïden uit antrale biopsieweefsels vertonen een grotere grootte en groeisnelheden in vergelijking met die uit lichaamsweefsel
- Significante variaties in organoïdmorfologie tussen verschillende patiënten
- Gestandaardiseerde methoden maken betrouwbare vergelijking van organoïdgroei mogelijk
Conclusies
- De studie stelt een betrouwbare methode vast voor het genereren van maagorganoïden, wat toekomstig onderzoek naar maagkanker ondersteunt.
- De bevindingen benadrukken de belangrijkheid van weefseloorsprong op organoïdgroei, wat cruciaal is voor experimentele reproduceerbaarheid.
Veelgestelde Vragen
Chapters in this video
0:00
Introduction
1:20
Isolating Single Cells from Upper Endoscopy Biopsies Derived from Gastric Patients for Organoid Generation
3:36
Embedding Gastric Biopsy‐Derived Single Cells in a Basement Membrane Matrix Dome for Organoid Generation
5:37
Routine Passaging of Patient‐Derived Gastric Organoids Through Fragmentation
