Name: Manipulatie en analyse van celcyclusafhankelijke processen in ontluikende gist (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-09-26T14:10:00.000+00:00
Duration: 8 min 13 s
Description: Ontdek hoe je celcyclusafhankelijke processen in gist analyseert met behulp van alpha-factor-synchronisatie en fluorescentiemicroscopie. Deze methode onthult dynamische veranderingen in eiwitlokalisatie tijdens mitose.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

```html
<table>
 <tbody>
 <tr>
 <td>?-factor</td>
 <td>University of Utah Core Synthesis Facility</td>
 <td></td>
 <td>Sequence: WHWLQLKPGQPMY</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>1.5 mL Eppendorf Tubes</td>
 <td>Axygen</td>
 <td>MCT-175-C</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>10mM dNTP mix</td>
 <td>Thermo Scientific</td>
 <td>R0193</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>50 mL conical tubes</td>
 <td>greiner bio-one</td>
 <td>227 261</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>5x Phusion HF reaction buffer</td>
 <td>New England BioLabs</td>
 <td>B0518S</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Acetic Acid, Glacial</td>
 <td>Fisher Chemical</td>
 <td>BP2401C-212</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>adenine hemisulfate salt</td>
 <td>Sigma-Aldrich</td>
 <td>A9126-100G</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Agar, Granulated</td>
 <td>Apex Chemicals and Reagents</td>
 <td>20-275</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>agarose</td>
 <td>Apex Bioresearch Products</td>
 <td>20-102GP</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Autoclave Amsco Century Steam Sterilizer</td>
 <td>Steris</td>
 <td>SV-1262</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>autoclaved DI water</td>
 <td></td>
 <td></td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Auxin</td>
 <td>Sigma-Aldrich</td>
 <td>Cat#I3750-5G-A; CAS: 87-51-4</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Cargille Laser Liquid</td>
 <td>Cargille Laboratories</td>
 <td>20130</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>D-Sorbitol</td>
 <td>Sigma-Aldrich</td>
 <td>S1876-500G</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>DAPI (40,6-Diamidino-2-Phenylindole, Dihydrochloride)</td>
 <td>Molecular Probes</td>
 <td>Cat#D1306</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Deoxyribonucleic acid sodium salt from salmon testes</td>
 <td>Sigma-Aldrich</td>
 <td>D1626</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Dextrose</td>
 <td>Fisher Chemical</td>
 <td>D16-10</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Disodium Ethylenediamine Tetraacetate</td>
 <td>Fisher Chemical</td>
 <td>S811-10</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>DMSO</td>
 <td>Thermo Scientific</td>
 <td>20688</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>FIJI/ImageJ2 vs 2.14.0/1.54f</td>
 <td>ImageJ2</td>
 <td>https://imagej.net/software/fiji/</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Fixed Speed Vortex Mixer</td>
 <td>VWR</td>
 <td>https://dabos.com/product/vortex-mixers-vwr-fixed-speed-vortex-mixer-00001-24763?srsltid=AfmBOoo5TH0aoExvrrrphDaFt8XAsDqLvkjxtEUj1QWlFbWh7_gwzMObLT4&amp;gQT=2</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Fluorescent microscope DV Ultra</td>
 <td>Leica</td>
 <td>https://www.leica-microsystems.com/c/am/lsr-w/fluorescence-microscope-wf/?nlc=20250214-SFDC-022570&amp;utm_source=google&amp;utm_medium=cpc&amp;utm_campaign=25-AM-LSR-L3-LSPO-LSWF-SE-Google-Ads-WF-Thunder-Search&amp;utm_content=text_ad&amp;utm_term=fluorescence%20microscopes&amp;gad_source=1&amp;gad_campaignid=170130111&amp;gbraid=0AAAAADrbsAF-dGDbxzgT8m_cvXSlf4BB0&amp;gclid=CjwKCAjwmenCBhA4EiwAtVjzmkMJUGFksaHezZvlBUlbbS1tR8RqXP24dbSRzcRgTT8RmJy7nyeThBoC3yQQAvD_BwE</td>
 <td>Serial #: NV01063. No longer supported</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Formaldehyde</td>
 <td>Fisher Chemical</td>
 <td>Cat#F79-500</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>gel apparatus</td>
 <td>Thermo Scientific</td>
 <td>Owl EasyCast B1</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>GeneRuler DNA Ladder Mix</td>
 <td>Fermentas</td>
 <td>SM0333</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>glass beads</td>
 <td>Fisher Scientific</td>
 <td>11312A</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Glass Slides</td>
 <td>VWR</td>
 <td>48300-026</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Innova 2300 Platform Shaker</td>
 <td>New Brunswick</td>
 <td>NB-2300</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Kimwipes</td>
 <td>Kimtech</td>
 <td>06-666</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Laboratory centrifuge for 1.5 mL tubes</td>
 <td>Eppendorf</td>
 <td>2525</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Laboratory centrifuge for 50 mL tubes</td>
 <td>Eppendorf</td>
 <td>5804</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Lithium acetate dihydrate</td>
 <td>Sigma-Aldrich</td>
 <td>L4158-250G</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Master cycler nexus X2</td>
 <td>eppendorf</td>
 <td>https://www.eppendorf.com/us-en/Products/PCR/Thermocyclers/Mastercycler-nexus-X2-p-PF-82586</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Micro-pipettes p2, p20, p200 and p1000 and corresponding tips</td>
 <td>Rainin</td>
 <td>L-2XLS+R, L-20XLS-R, L-200XLS-R, L-1000XLS-R</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Microscope Cover Glass</td>
 <td>Fisher Scientific</td>
 <td>12541014</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Nocodazole</td>
 <td>Calbiochem</td>
 <td>Cat#487928; CAS: 31430-18-9; Lot#B35705</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Orange G</td>
 <td>Sigma-Aldrich</td>
 <td>O7252</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>PEG</td>
 <td>Hampton Research</td>
 <td>HR2-591</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Peptone granulated</td>
 <td>Fisher Bioreagents</td>
 <td>BP9725-5</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Phusion HF DNA Polymerase</td>
 <td>New England BioLabs</td>
 <td>M0530L</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Pipet-X</td>
 <td>Rainin</td>
 <td>PX-100R

manipulatie en analyse van celcyclusafhankelijke processen in ontluikende gist

Manipulation and Analysis of Cell Cycle-Dependent Processes in Budding Yeast

Manipulatie en analyse van celcyclusafhankelijke processen in ontluikende gist

Eukaryotic cells follow a conserved cell cycle that regulates diverse processes, including DNA maintenance and organelle homeostasis. Studying cellular ...

manipulation-analysis-cell-cycle-dependent-processes-budding

Research

JoVE Journal

Biology

Biologie

Gendeletie en eiwit overexpressie zijn gemeenschappelijke methoden voor het bestuderen van functies van eiwitten. In dit artikel beschrijven we een protocol voor de analyse van fenotype ontwikkeling als een functie van de proteïne concentratie op de bevolking en de single-cell niveau...

Analyse van de ontwikkeling van een morfologische fenotype als een functie van de eiwitconcentratie in gist

Het bepalen van de celcyclus positie van een populatie van cellen, of begrijpen hoe signalen proliferatie van invloed zijn, gemakkelijk kan worden gemeten door middel van flowcytometrie gebruik van dit protocol. We brengen verslag uit een eenvoudige experimentele benadering voor vlekken cellen en kwantificeren van hun positie in de cel cyclus.

Analyse van celcyclus Positie in zoogdiercellen

We presenteren een eenvoudig protocol voor fluorescentie microscopie films van groeiende gistcellen, en een GUI-gebaseerde software pakket om eencellige tijdreeks gegevens te extraheren verkrijgen. De analyse omvat geautomatiseerde afstamming en verdeeldheid tijd opdracht geïntegreerd met visuele inspectie en handmatige curatie van bijgehouden gegevens.

Het verwerven Fluorescentie Time-lapse films van Budding gist en analyseren van Single-cell Dynamics behulp enten

De kernsplijting gist, Schizosaccharomyces pombe is een uitstekend modelsysteem om cytokinese te studeren, het laatste stadium van de celdeling. Hier beschrijven we een microscopie benadering van verschillende cytokinetic gebeurtenissen in levende splijtingsproducten gistcellen te analyseren.

Spatiotemporele analyse van Cytokinetic Evenementen in Fission Yeast

Gist is een voordelige model voor het bestuderen van de dynamica van microtubuli in vivo vanwege de krachtige genetica en de eenvoud van het microtubule-cytoskelet. Het volgende protocol wordt beschreven hoe om te transformeren en cultuur gistcellen, verwerven confocale microscopie afbeeldingen en kwantitatief te analyseren dynamiek van microtubuli in levende gistcellen.

Hoge-resolutie beeldvorming en analyse van individuele Astral dynamiek van microtubuli in gist

De Inherent Dynamics Visualizer is een interactief visualisatiepakket dat verbinding maakt met een genregulerende netwerkinferentietool voor verbeterde, gestroomlijnde generatie van functionele netwerkmodellen. De visualizer kan worden gebruikt om beter geïnformeerde beslissingen te nemen voor het parametriseren van de inferentietool, waardoor het vertrouwen in de resulterende modellen toeneemt.

Inherent Dynamics Visualizer, een interactieve toepassing voor het evalueren en visualiseren van outputs van een gene regulatory network inference pipeline

Time-lapse microscopie is een waardevol hulpmiddel voor het bestuderen van meiose in ontluikende gist. Dit protocol beschrijft een methode die celcyclussynchronisatie, time-lapse-microscopie en voorwaardelijke uitputting van een doeleiwit combineert om aan te tonen hoe de functie van een specifiek eiwit tijdens meiotische chromosoomsegregatie kan worden bestudeerd.

Gebruik van time-lapse microscopie en stadiumspecifieke nucleaire uitputting van eiwitten om meiose in S. cerevisiae te bestuderen

Een uitdaging bij het analyseren van gesynchroniseerde tijdreeksexperimenten is dat de experimenten vaak verschillen in de duur van het herstel van synchronie en de celcyclusperiode. De metingen van verschillende experimenten kunnen dus niet in geaggregeerde vorm worden geanalyseerd of gemakkelijk worden vergeleken. Hier beschrijven we een methode voor het afstemmen van experimenten om fasespecifieke vergelijkingen mogelijk te maken.

Uitlijning van gesynchroniseerde tijdreeksgegevens met behulp van het karakteriserende Loss of Cell Cycle Synchrony Model voor vergelijkingen tussen experimenten

In dit artikel geven we een algemeen protocol voor het meten van de replicatieve levensduur van gist moeder cellen.

Het meten van replicatieve levensduur in de gist

Kwantitatieve Live Cell Fluorescentie-microscopie analyse van Fission Yeast

Ontdek hoe je celcyclusafhankelijke processen in gist analyseert met behulp van alpha-factor-synchronisatie en fluorescentiemicroscopie. Deze methode onthult dynamische veranderingen in eiwitlokalisatie tijdens mitose.

Manipulatie en analyse van celcyclusafhankelijke processen in ontluikende gist

Meer video's verkennen