Name: Snelle magnetische microbead-methode voor efficiënte zuivering van neutrofielen met lage dichtheid (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-11-11T14:30:00.000+00:00
Duration: 8 min 14 s
Description: Leer een snelle magnetische microbead-methode voor efficiënte zuivering van neutrofielen met lage dichtheid uit menselijk bloed. Deze techniek levert zuivere, levensvatbare cellen voor immunologisch onderzoek.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<table><tbody><tr><td>&nbsp;Anti-Citrulline konijn polyklonaal antilichaam</td><td>AbCam</td><td>ab100932</td><td>1/50 verdunning</td></tr><tr><td>96-wells weefselkweekplaat</td><td>Costar; Corning, Inc.</td><td>3596</td><td></td></tr><tr><td>Alexa Fluor 488 anti-mens CD11b muis IgG1 antilichaam</td><td>BioLegend</td><td>301317</td><td>0,25 &mu;g/mL</td></tr><tr><td>Alexa Fluor 647 anti-mens CD66b muis IgM antilichaam</td><td>BioLegend</td><td>305109</td><td>0,05 &mu;g/mL</td></tr><tr><td>Anti-Muis IgG (H+L) geit antilichaam, Alexa Fluor 488</td><td>Invitrogen - Thermo Fisher Scientific</td><td>A-11001</td><td>1/50 verdunning</td></tr><tr><td>Anti-Neutrofiel Elastase muis monoklonaal IgG1 antilichaam</td><td>Santa Cruz Biotechnology</td><td>sc-55549</td><td>10 &micro;g/mL</td></tr><tr><td>Anti-Konijn IgG (H+L) ezel antilichaam, Alexa Fluor 555</td><td>Invitrogen - Thermo Fisher Scientific</td><td>A-31572</td><td>1/50 verdunning</td></tr><tr><td>APC anti-mens CD62L muis IgG1 antilichaam</td><td>BioLegend</td><td>304809</td><td>0,03 &mu;g/mL</td></tr><tr><td>APC/Cyanine7 anti-mens CD14 muis IgG1 antilichaam</td><td>BioLegend</td><td>367107</td><td>0,25 &mu;g/mL</td></tr><tr><td>Attune NxT flow cytometer&nbsp;</td><td>Thermo Fisher Scientific, Inc.</td><td>(blauwe/rode lasers)</td><td></td></tr><tr><td>Rundserum albumine (BSA) Fractie V</td><td>MP Biomedicals</td><td>810025</td><td></td></tr><tr><td>Brilliant Violet 510 anti-mens CD33 muis IgG1 antilichaam</td><td>BioLegend</td><td>366609</td><td>0,30 &mu;g/mL</td></tr><tr><td>DAPI</td><td>Calbiochem/EMD Millipore</td><td>268298</td><td></td></tr><tr><td>Dextran T500</td><td>Pharmacosmos A/C</td><td>5.51005E+11</td><td></td></tr><tr><td>Dihydrorhodamine-123</td><td>Anaspec, Inc.</td><td>AS-85711</td><td></td></tr><tr><td>FACS celsorter</td><td>Becton Dickinson&nbsp;</td><td>Model FACSAria</td><td></td></tr><tr><td>Fetaal rundserum (FBS)</td><td>Gibco</td><td>16000-044</td><td></td></tr><tr><td>Ficoll-Paque</td><td>Merck KG</td><td>GE 17-1440-03</td><td></td></tr><tr><td>FITC anti-mens CD98 muis IgG1 antilichaam</td><td>BioLegend</td><td>315603</td><td>0,30 &mu;g/mL</td></tr><tr><td>FlowJo Software</td><td>Becton Dickinson</td><td>Versie 10, 2019</td><td></td></tr><tr><td>Fluorescentie-inverteermicroscoop</td><td>Olympus</td><td>Model IX-70</td><td></td></tr><tr><td>Heparine</td><td>Inhepar - PiSA Farmaceutica</td><td>3660149</td><td>5000 UI/mL</td></tr><tr><td>Hepes</td><td>Sigma Aldrich</td><td>H7006</td><td></td></tr><tr><td>MACSprep Chimerism CD66b Microbeads</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-111-552</td><td></td></tr><tr><td>Magneet</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-042-102</td><td></td></tr><tr><td>Magnetische scheidingskolom</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-042-201</td><td></td></tr><tr><td>Microcentrifuge</td><td>Eppendorf</td><td>Model 5415C</td><td></td></tr><tr><td>Microplaatlezer</td><td>BioTek Instruments</td><td>Model Synergy HT</td><td></td></tr><tr><td>Paraformaldehyde</td><td>Sigma Aldrich</td><td>158127</td><td></td></tr><tr><td>PE anti-mens CD10 muis IgG1 antilichaam</td><td>BioLegend</td><td>312203</td><td>0,05 &mu;g/mL</td></tr><tr><td>PE anti-mens CD16b muis IgG2a antilichaam</td><td>BD Pharmingen</td><td>550868</td><td>1/40 verdunning</td></tr><tr><td>PE/Cyanine5 anti-mens CD15 muis IgG1 antilichaam</td><td>BioLegend</td><td>323013</td><td>0,25 &mu;g/mL</td></tr><tr><td>Phorbol 12-myristaat 13-acetaat (PMA)</td><td>Sigma Aldrich</td><td>P8139</td><td></td></tr><tr><td>poly-L-Lysine</td><td>Sigma Aldrich</td><td>P2658</td><td></td></tr><tr><td>Gekoelde centrifuge</td><td>Eppendorf</td><td>Model 5702R</td><td></td></tr><tr><td>RPMI-1640 weefselkweekmedium</td><td>Gibco</td><td>23400-021</td><td></td></tr><tr><td>SYTOX Green</td><td>Molecular Probes, Inc.</td><td>S-7020</td><td></td></tr><tr><td>Tween-20&nbsp;</td><td>Sigma Aldrich</td><td>P2287</td><td></td></tr><tr><td>Vectashield</td><td>Vector Laboratories</td><td>H-1000</td><td></td></tr></tbody></table>

snelle magnetische microbead-methode voor efficiënte zuivering van neutrofielen met lage dichtheid

Rapid Magnetic-microbead Method for Efficient Purification of Low-density Neutrophils

Neutrofielen met lage dichtheid (LDN) bij gezonde personen vertegenwoordigen ongeveer 5% van de PBMC (Figuur 2A). Het hier beschreven protocol levert doorgaans puur (&gt; 90%) LDN. Cellen worden ook efficiënt hersteld (opbrengst ongeveer 98%) met een hoge levensvatbaarheid (&gt; 95%; Figuur 2B). Ter vergelijking: LDN werd ook gezuiverd door fluorescerend-geactiveerde celsortering, zoals eerder beschreven22...

Snelle magnetische microbead-methode voor efficiënte zuivering van neutrofielen met lage dichtheid

Neutrophils, important leukocytes of innate immunity, have traditionally been considered a homogeneous cell population. Nevertheless, recent evidence has ...

rapid-magnetic-microbead-method-for-efficient-purification-low

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Immunologie en Infectie

Neutrofielen behoren tot de eerste cellen aan te komen op de site van inflammatoire immuunrespons, en hun functies en mechanismen zijn uitgebreid bestudeerd in vitro. Demonstreren we een standaard dichtheidsgradiënt scheidingsmethode voor de menselijke neutrofielen isoleren van volbloed met in de handel verkrijgbaar scheiding media.

Neutrofielen Isolatie Protocol

The video explains a way to purify B-cells by immunomagnetic targeting and separation from peripheral blood mononuclear cells suspension. The method involve labeling unwanted cell types with specific antibodies or ligands (linked to magnetic particles) targeting specific cell surface proteins, to be depleted from the heterogenous cell suspension by magnetic separation.

Negative Immunomagnetic Selection: A Method to Purify B-cells from Peripheral Blood Mononuclear Cells

In this video, we describe the procedure for isolating low-density neutrophils, or LDNs, from the peritoneal lavage fluid of a postoperative human patient. The LDNs thus obtained can be used in further downstream experiments to understand their role in tumor growth and progression.

Peritoneal Low-density Neutrophil Isolation: A Technique to Obtain Low-density Neutrophils from Peritoneal Lavage Fluid Using Magnetic Activated Cell Sorting

We beschrijven een protocol voor isolatie en zuivering van neutrofielen van muizen beenmerg door dichtheidsgradiënt centrifugatie en neutrofielen labeling met CellTracker kleurstoffen. Dit is een eenvoudige, snelle, reproduceerbare en economische methode voor het verkrijgen van grote aantallen neutrofielen voor downstream functionele studies of adoptieve overdracht en experimenten volgen.

Isolatie, zuivering en etikettering van de Muis Bone Marrow Neutrophils voor functionele studies en adoptieve overdracht Experimenten

Neutrofielen spelen niet alleen een belangrijke rol bij de verdediging van het gastheerlichaam tegen binnendringende micro-organismen, maar zijn ook betrokken bij de immuunbewaking van tumorcellen. Hier beschrijven we technieken met betrekking tot de isolatie van neutrofielen met anti-tumoreigenschappen en methoden voor het monitoren van anti-tumor neutrofielen functie in vitro en in vivo.

Isolatie en karakterisering van neutrofielen met Anti-Tumor Properties

Neutrofielen zijn het meest voorkomende type witte bloedcellen. Hier worden de isolatie van neutrofielen uit menselijk bloed door middel van dichtheidsgradiëntscheiding en de differentiatie van menselijke promyelocytische (HL60) cellen langs de granulocytische route beschreven; om hun rol in de gevoeligheid van lymfoomcellen voor anti-lymfoom middelen te testen.

Neutrofielen Isolatie en analyse van hun rol in de Lymphoma Cell Gevoeligheid voor therapeutische middelen te bepalen

Mutaties in het leucine rijke reinase 2 gen (LRRK2) veroorzaken erfelijke de ziekte van Parkinson. We hebben een eenvoudige en robuuste methode ontwikkeld voor het beoordelen van LRRK2-gecontroleerde fosforylatie van Rab10 bij menselijke perifere bloedneutrofielen. Dit kan helpen bij het identificeren van personen met een verhoogde LRRK2 kinase traject activiteit.

Menselijke perifere bloed neutrofiele isolatie voor het ondervragen van de Parkinson Geassocieerde LRRK2 Kinase Pathway door de beoordeling van Rab10 fosforylatie

Dit protocol beschrijft een methode voor de isolatie van neutrofielen uit volbloed, buffy coats of leukaferesemembranen, het bereiken van een goede opbrengst, hoge zuiverheid en minimale celactivering. We maken gebruik van gradiëntzuivering, rode bloedcel (RBC) sedimentatie en RBC-lysis om een hoogwaardig / zuiver neutrofielenpreparaat te verkrijgen.

Isolatie van menselijke neutrofielen van volbloed en buffy jassen

Dit onderzoek schetst twee technieken voor het isoleren van overvloedige neutrofiele extracellulaire vallen (NET's) uit het beenmerg van ratten. De ene methode combineert een commerciële neutrofielenisolatiekit met dichtheidsgradiëntcentrifugatie, terwijl de andere alleen dichtheidsgradiëntcentrifugatie gebruikt. Beide benaderingen leveren functionele NET's op die die van perifere bloedneutrofielen overtreffen.

Unieke aanpak voor het isoleren van beenmergneutrofielen bij ratten met vergelijkbare capaciteit

Dit protocol beschrijft een high-throughput automatisering-compatibele methode om menselijke perifere bloed mononucleaire cellen te isoleren voor biobanking en andere doeleinden.

Het isoleren van Menselijke Perifere Bloed Mononucleaire Cellen van Buffy Coats via de Scheiding van de Hoge Doorvoer Immunomagnetische Parel

Hier bieden we een betrouwbare benadering voor het isoleren van neutrofielen met een lage en normale dichtheid uit volbloed met behulp van magnetische isolatie (negatieve selectie) en een discontinu dichtheidsgradiëntmedium. Het zorgt voor ongerepte isolatie van cellen met een hoge zuiverheid (≥93%), waardoor een nauwkeurige stroomafwaartse analyse van neutrofielensubpopulaties mogelijk is, cruciaal voor het begrijpen van hun rol in gezondheid en ziekte.

De isolatie en karakterisering van neutrofielen met een lage en normale dichtheid uit volbloed

Leer een snelle magnetische microbead-methode voor efficiënte zuivering van neutrofielen met lage dichtheid uit menselijk bloed. Deze techniek levert zuivere, levensvatbare cellen voor immunologisch onderzoek.

Snelle magnetische microbead-methode voor efficiënte zuivering van neutrofielen met lage dichtheid

Meer video's verkennen