izolacja i wycięcie aorty mysiej; Wszechstronna technika w badaniu chorób sercowo-naczyniowych
November 24th, 2014
Patologia aorty może prowadzić do ciężkiej zachorowalności i śmiertelności, dlatego uzasadnione są badania nad progresją choroby i potencjalnymi terapiami. W tym miejscu przedstawiamy protokół izolacji i wycięcia mysiej aorty, aby pomóc naukowcom w badaniu chorób sercowo-naczyniowych.
Ogólnym celem tej procedury jest sterylne, wyizolowanie i wycięcie mysiej aorty. Osiąga się to poprzez uprzednie odsłonięcie klatki piersiowej i jamy brzusznej. Drugim krokiem jest perfuzja zimną, sterylną solą fizjologiczną.
Następnie usuwane są narządy klatki piersiowej i jamy brzusznej, pozostawiając serce przyczepione do aorty. Ostatnim krokiem jest wycięcie okołonaczyniowej tkanki tłuszczowej i tkanki adwencyjnej z aorty. Ostatecznie mikroskop preparacyjny służy do sprawdzenia, czy cała otaczająca tkanka została usunięta, a aorta może być używana do różnych analiz eksperymentalnych.
Tak więc ta technika jest pomocna w udzielaniu odpowiedzi na kluczowe pytania w dziedzinie badań sercowo-naczyniowych, takie jak rozwój tętniaka i tworzenie się blaszek miażdżycowych. Można się temu przyjrzeć, przyglądając się zmianom w biologii molekularnej, takim jak ekspresja genów i białek. Po eutanazji myszy zweryfikuj stan eutanazji poprzez uszczypnięcie palca u nogi.
Następnie wysterylizuj skórę, zwilżając sierść na brzuchu 70% etanolem. Następnie zabezpiecz mysz na desce chirurgicznej na wznak z wyciągniętymi wyrostkami. Rozpocznij operację od użycia kleszczy w celu zlokalizowania i odizolowania skóry brzucha tuż poniżej wyrostka mieczykowatego.
Następnie podnieś skórę do góry i odetnij ją nożyczkami. Powinno to odsłonić górną część otrzewnej i dolną jamę piersiową. Następnie za pomocą kleszczy i nożyczek podnieś wyrostek mieczykowaty i wykonaj boczne nacięcia tuż poniżej niego wzdłuż brzegów podżebrowych.
Aby wypreparować klatkę piersiową, wejdź przez przeponę, uważając, aby nie uszkodzić serca ani żadnych głównych naczyń w tym procesie. Teraz czaszka przedłuża boczne nacięcia wzdłuż brzegów podżebrowych. W ten sposób usuń przednią część klatki piersiowej
.wycięcie w celu usunięcia serca z przedniej ściany klatki piersiowej może być wymagane do wykonania tych nacięć. Teraz za pomocą gazy oczyść jamę klatki piersiowej z nadmiaru płynów, aby ułatwić dostęp do narządów. Następnie usuń płuca za pomocą kleszczy i nożyczek, płat po płacie.
Serce i aorta powinny być wtedy w pełni odsłonięte i łatwo dostępne w celu pobrania krwi poprzez nakłucie serca. Zrób to teraz przed przystąpieniem do perfuzji w celu perfuzji serca, napełnij strzykawkę o pojemności 10 ml 10 mililitrami sterylnego, lodowatego jednego XPBS. Następnie przymocuj igłę o rozmiarze 25.
Ostrożnie wprowadzić igłę do lewej komory. Następnie wykonaj nacięcie w prawym przedsionku, aby w kolejnym kroku nie wytworzyło się nadmierne ciśnienie w układzie krążenia. Teraz, w ciągu następnych dwóch do trzech minut, powoli wysuń PBS ze strzykawki do serca.
Podczas wyrzutu PBS użyj sterylnej gazy, aby wchłonąć płyn, który wyleje się z przedsionka w miejscu nacięcia. Gdy cała ósemka PERFUSE zostanie wyrzucona, wchłonąć pozostały płyn za pomocą gazy, która zasłania czysty widok jamy klatki piersiowej. Aby odsłonić zawartość przewodu pokarmowego, przeciąć delikatnie ścianę brzucha, przedłużając nacięcie do obszaru nadłonowego.
Tam przeciąć obustronnie w kierunku kończyn dolnych, aby utworzyć płat skóry, który można przygwoździć lub wyciąć. Poruszając się dalej, usuwa kilka narządów, płaty wątroby, trzustkę, śledzionę, jelita i dolną część przełyku. To otwiera widok na aortę.
Zachowaj szczególną ostrożność podczas preparowania okolicy okołocznej, ponieważ w tym regionie znajdują się powierzchowne gałęzie od aorty do tętnic nerkowych. Wykonaj tę sekcję precyzyjnie i ostrożnie, ponieważ bakterie przewodu pokarmowego mogą zanieczyścić inne tkanki, przepłukać oczyszczony obszar jednym XPBS i wchłonąć nadmiar roztworu gazą, aorta powinna być łatwo dostępna. Tak więc za pomocą nożyczek i kleszczy oddziel aortę od kręgosłupa.
Odpowiednia jest sekcja i zdecydowanie zaleca się użycie mikroskopu preparacyjnego. Aortę można usunąć, zaczynając od kłębiastego lub czaszkowego. Liczy się uporządkowany proces oczyszczania i oddzielania tkanek w zakładzie.
Podczas preparowania okołonaczyniowej tkanki tłuszczowej należy ją usunąć za pomocą drobnych mikronożyczek, aby uniknąć uszkodzenia ściany aorty. Minimalizuje to ryzyko zanieczyszczenia fibroblastami podczas hodowli komórek mięśni gładkich aorty. Bardzo ważne jest staranne wycięcie tkanki okołonaczyniowej, tłuszczowej i przydanki.
Wszelkie resztki tkanki mogą spowodować zanieczyszczenie w hodowli komórkowej, ale także zniekształcić testy molekularne. Za pomocą tej procedury nienaruszona aorta pochodząca z serca schodzi do jamy piersiowej i brzusznej. Po uzyskaniu nadal przyczepionych tętnic nerkowych aortę można obrazować in situ w celu ilościowego określenia zmian morfometrycznych, które są diagnostyczne w badaniu tętniaków aorty brzusznej.
Następnie aortę można usunąć, utrwalić i wybarwić, aby przyjrzeć się zmianom histologicznym, takim jak barwienie hematem, toiną i eoiną, lub barwienie ver Hoff Van Geen, aby przyjrzeć się pasmom elastyny, a tym samym zobaczyć integralność strukturalną aorty. Komórki aorty mogą być również wykorzystywane do pierwotnej izolacji komórek oraz do badań in vitro, takich jak badania żywotności i lokalizacji białek. Po procedurze można użyć innych technik, takich jak izolacja białek i RNA, aby przyjrzeć się ekspresji białek, aktywności enzymów, a także ekspresji genów.
View the full transcript and gain access to thousands of scientific videos
Przegląd
Ten artykuł przedstawia protokół izolacji i wycięcia aorty u myszy, który jest niezbędny do badań nad chorobami układu krążenia. Zrozumienie patologii aorty jest niezwykle ważne ze względu na jej wpływ na morbidydy i umieralność.
Kluczowe elementy badania
Obszar nauki
- Choroby układu krążenia
- Modele mysie
- Badania patologiczne
Tło
- Patologia aorty może prowadzić do poważnych problemów zdrowotnych.
- Badania nad postępem choroby są kluczowe dla opracowywania terapii.
- Izolacja aorty pozwala na szczegółowe analizy eksperymentalne.
- Ten protokół pomaga badaczom w ich badaniach.
Cel badania
- Dostarczyć niezawodną metodę izolacji aorty u myszy.
- Ułatwić badania nad chorobami układu krążenia.
- Zwiększyć zrozumienie patologii aorty.
Zastosowane metody
- Ekspozycja jamy piersiowej i jamy brzusznej.
- Perfuzja zimnym, sterylnym roztworem soli fizjologicznej.
- Usuwanie narządów z zachowaniem połączenia serca z aortą.
- Wycinanie tkanki tłuszczowej okołonaczyniowej i tkanki osłonki aorty.
Główne wyniki
- Skuteczna izolacja aorty u myszy.
- Weryfikacja całkowitego usunięcia tkanek otaczających za pomocą mikroskopu sekccyjnego.
- Przygotowanie aorty do różnych analiz eksperymentalnych.
Wnioski
- Protokół zapewnia systematyczne podejście do izolacji aorty.
- Ta metoda może znacznie wspomóc badania nad układem krążenia.
- Przyszłe badania mogą opierać się na tej podstawowej technice.
Często zadawane pytania
Executive Industry Relevance
Isolation of the murine aorta enables direct assessment of vascular pathology in preclinical models, supporting target validation and mechanistic de-risking in cardiovascular drug discovery. This technique provides quantitative morphometric and molecular readouts that improve predictive confidence in early-stage therapeutic evaluation. By facilitating reproducible tissue preparation, it strengthens translational continuity from discovery through preclinical validation.
Strategic Applications in Biopharma R&D
Early Discovery & Target Validation
- Scientific Value: Enables interrogation of aortic tissue to clarify disease mechanisms and validate therapeutic targets in atherosclerosis and aneurysm models.
- Operational Value: Supports functional target validation through molecular analysis of protein and gene expression in isolated tissue.
- Predictive Value: Enhances portfolio triage by providing direct readouts of target engagement and pathway modulation.
Screening & Assay Development
- Scientific Value: Prepares validated aortic tissue for downstream assays, including viability studies and protein localization.
- Operational Value: Enables standardization of tissue preparation for reproducible compound evaluation in in vitro systems.
- Scalability: Supports platform reuse across multiple experimental readouts such as histology, molecular profiling, and primary cell isolation.
Translational & Preclinical Research
- Scientific Value: Maintains disease relevance by preserving aortic structure for histologic and elastin band analysis.
- Operational Value: Ensures continuity from discovery through preclinical validation by enabling consistent tissue preparation.
- Risk Mitigation: Supports risk-adjusted advancement decisions via quantifiable morphometric changes diagnostic of abdominal aortic aneurysm.
Pipeline & Workflow Integration
The aorta isolation technique fits within the discovery continuum, supporting hypothesis testing in early discovery, assay readiness in screening, and quantitative analytics in preclinical evaluation.
- Discovery Biology: Facilitates hypothesis testing and pathway clarification through direct tissue analysis.
- Screening: Enables assay readiness via standardized tissue preparation and removal of confounding perivascular tissue.
- Analytics: Delivers quantitative morphometric and molecular measurements for comparative condition analysis.
- Translational Research: Connects to preclinical continuity through histologic staining and elastin band assessment.
- Enterprise Reuse: Functions as a reusable capability for cardiovascular pathology studies across multiple projects.
Operational & Enterprise Impact
- Scientific Value: Predictive confidence through direct assessment of aortic pathology and target modulation.
- Operational Value: Standardization and reproducibility in tissue preparation for molecular and histologic assays.
- Strategic Value: Improved go/no-go decisions via reduced biological uncertainty in cardiovascular models.
- Portfolio Impact: Risk-adjusted prioritization based on quantifiable aortic structural and functional readouts.
Implementation Considerations
- Requires expertise in murine dissection and sterile tissue handling.
- Dependent on dissection microscope and surgical instrumentation for precision tissue isolation.
- Necessitates cross-team standardization of perfusion and excision protocols.
- Involves adaptation considerations when applying to different disease models or strain backgrounds.
- Limited by terminal nature of the procedure, requiring animal sacrifice per sample.
