izolacja i wycięcie aorty mysiej; Wszechstronna technika w badaniu chorób sercowo-naczyniowych

Ogólnym celem tej procedury jest sterylne, wyizolowanie i wycięcie mysiej aorty. Osiąga się to poprzez uprzednie odsłonięcie klatki piersiowej i jamy brzusznej. Drugim krokiem jest perfuzja zimną, sterylną solą fizjologiczną.

Następnie usuwane są narządy klatki piersiowej i jamy brzusznej, pozostawiając serce przyczepione do aorty. Ostatnim krokiem jest wycięcie okołonaczyniowej tkanki tłuszczowej i tkanki adwencyjnej z aorty. Ostatecznie mikroskop preparacyjny służy do sprawdzenia, czy cała otaczająca tkanka została usunięta, a aorta może być używana do różnych analiz eksperymentalnych.

Tak więc ta technika jest pomocna w udzielaniu odpowiedzi na kluczowe pytania w dziedzinie badań sercowo-naczyniowych, takie jak rozwój tętniaka i tworzenie się blaszek miażdżycowych. Można się temu przyjrzeć, przyglądając się zmianom w biologii molekularnej, takim jak ekspresja genów i białek. Po eutanazji myszy zweryfikuj stan eutanazji poprzez uszczypnięcie palca u nogi.

Następnie wysterylizuj skórę, zwilżając sierść na brzuchu 70% etanolem. Następnie zabezpiecz mysz na desce chirurgicznej na wznak z wyciągniętymi wyrostkami. Rozpocznij operację od użycia kleszczy w celu zlokalizowania i odizolowania skóry brzucha tuż poniżej wyrostka mieczykowatego.

Następnie podnieś skórę do góry i odetnij ją nożyczkami. Powinno to odsłonić górną część otrzewnej i dolną jamę piersiową. Następnie za pomocą kleszczy i nożyczek podnieś wyrostek mieczykowaty i wykonaj boczne nacięcia tuż poniżej niego wzdłuż brzegów podżebrowych.

Aby wypreparować klatkę piersiową, wejdź przez przeponę, uważając, aby nie uszkodzić serca ani żadnych głównych naczyń w tym procesie. Teraz czaszka przedłuża boczne nacięcia wzdłuż brzegów podżebrowych. W ten sposób usuń przednią część klatki piersiowej

wycięcie w celu usunięcia serca z przedniej ściany klatki piersiowej może być wymagane do wykonania tych nacięć. Teraz za pomocą gazy oczyść jamę klatki piersiowej z nadmiaru płynów, aby ułatwić dostęp do narządów. Następnie usuń płuca za pomocą kleszczy i nożyczek, płat po płacie.

Serce i aorta powinny być wtedy w pełni odsłonięte i łatwo dostępne w celu pobrania krwi poprzez nakłucie serca. Zrób to teraz przed przystąpieniem do perfuzji w celu perfuzji serca, napełnij strzykawkę o pojemności 10 ml 10 mililitrami sterylnego, lodowatego jednego XPBS. Następnie przymocuj igłę o rozmiarze 25.

Ostrożnie wprowadzić igłę do lewej komory. Następnie wykonaj nacięcie w prawym przedsionku, aby w kolejnym kroku nie wytworzyło się nadmierne ciśnienie w układzie krążenia. Teraz, w ciągu następnych dwóch do trzech minut, powoli wysuń PBS ze strzykawki do serca.

Podczas wyrzutu PBS użyj sterylnej gazy, aby wchłonąć płyn, który wyleje się z przedsionka w miejscu nacięcia. Gdy cała ósemka PERFUSE zostanie wyrzucona, wchłonąć pozostały płyn za pomocą gazy, która zasłania czysty widok jamy klatki piersiowej. Aby odsłonić zawartość przewodu pokarmowego, przeciąć delikatnie ścianę brzucha, przedłużając nacięcie do obszaru nadłonowego.

Tam przeciąć obustronnie w kierunku kończyn dolnych, aby utworzyć płat skóry, który można przygwoździć lub wyciąć. Poruszając się dalej, usuwa kilka narządów, płaty wątroby, trzustkę, śledzionę, jelita i dolną część przełyku. To otwiera widok na aortę.

Zachowaj szczególną ostrożność podczas preparowania okolicy okołocznej, ponieważ w tym regionie znajdują się powierzchowne gałęzie od aorty do tętnic nerkowych. Wykonaj tę sekcję precyzyjnie i ostrożnie, ponieważ bakterie przewodu pokarmowego mogą zanieczyścić inne tkanki, przepłukać oczyszczony obszar jednym XPBS i wchłonąć nadmiar roztworu gazą, aorta powinna być łatwo dostępna. Tak więc za pomocą nożyczek i kleszczy oddziel aortę od kręgosłupa.

Odpowiednia jest sekcja i zdecydowanie zaleca się użycie mikroskopu preparacyjnego. Aortę można usunąć, zaczynając od kłębiastego lub czaszkowego. Liczy się uporządkowany proces oczyszczania i oddzielania tkanek w zakładzie.

Podczas preparowania okołonaczyniowej tkanki tłuszczowej należy ją usunąć za pomocą drobnych mikronożyczek, aby uniknąć uszkodzenia ściany aorty. Minimalizuje to ryzyko zanieczyszczenia fibroblastami podczas hodowli komórek mięśni gładkich aorty. Bardzo ważne jest staranne wycięcie tkanki okołonaczyniowej, tłuszczowej i przydanki.

Wszelkie resztki tkanki mogą spowodować zanieczyszczenie w hodowli komórkowej, ale także zniekształcić testy molekularne. Za pomocą tej procedury nienaruszona aorta pochodząca z serca schodzi do jamy piersiowej i brzusznej. Po uzyskaniu nadal przyczepionych tętnic nerkowych aortę można obrazować in situ w celu ilościowego określenia zmian morfometrycznych, które są diagnostyczne w badaniu tętniaków aorty brzusznej.

Następnie aortę można usunąć, utrwalić i wybarwić, aby przyjrzeć się zmianom histologicznym, takim jak barwienie hematem, toiną i eoiną, lub barwienie ver Hoff Van Geen, aby przyjrzeć się pasmom elastyny, a tym samym zobaczyć integralność strukturalną aorty. Komórki aorty mogą być również wykorzystywane do pierwotnej izolacji komórek oraz do badań in vitro, takich jak badania żywotności i lokalizacji białek. Po procedurze można użyć innych technik, takich jak izolacja białek i RNA, aby przyjrzeć się ekspresji białek, aktywności enzymów, a także ekspresji genów.